磁珠法提取核酸的3种样本处理方法
核酸提取磁珠法原理
核酸提取磁珠法原理
核酸提取磁珠法是一种利用磁珠上的亲和基团与核酸靶分子特异性结合的原理来纯化和提取核酸的方法。
该方法基于磁珠具有磁性的特性，使其能够通过磁力吸附和分离。
核酸提取磁珠法的原理如下：
1. 表面修饰：磁珠表面通常会修饰上与核酸分子相互吸附的功能性基团，如亲和基团、融合蛋白或短链引物。
这些亲和基团具有特异性和高亲和力，可以与目标核酸的特定序列或结构相结合。
2. 样品处理：将待提取的核酸样品加入到磁珠悬浮液中，样品中的核酸分子会与磁珠表面的亲和基团发生特异性结合。
同时，通过调节条件（如pH、盐浓度和温度），可以优化核酸与磁
珠之间的结合效果。
3. 磁性分离：使用外部磁场或磁力装置，将磁珠定位于管壁或底部，使其与其余液相分离。
磁珠的磁性能够快速地在磁力作用下聚集，使得磁珠能够被方便地沉淀在容器的底部，而上清液相中残余的杂质则会被分离。
4. 洗脱和回收：通过改变溶液条件，如改变pH或盐浓度，可
以解离核酸与磁珠的结合。
这样，纯化的核酸分子可以从磁珠上洗脱下来，从而得到目标核酸的纯度较高的样品。
核酸提取磁珠法具有高度的选择性和特异性，能够有效去除样
品中的杂质，并获取较高纯度的核酸样本。
此外，磁珠法还具有操作简单、高通量和自动化的优点，因此在分子生物学、遗传学和临床诊断等领域广泛应用。
一种去除rna样本中rrna的方法
一种去除rna样本中rrna的方法去除RNA样本中rRNA的方法引言：rRNA（ribosomal RNA）是细胞内核糖体的主要组成部分，其存在会对RNA测序和分析实验的结果产生干扰。
因此，在进行RNA 测序和分析之前，需要对样本中的rRNA进行去除。
本文将介绍几种常用的去除RNA样本中rRNA的方法。
一、磁珠富集法磁珠富集法是一种常用的去除rRNA的方法。
该方法利用具有靶向作用的磁珠，通过与rRNA特异性结合，将其富集起来，从而实现对rRNA的去除。
具体步骤如下：1. 准备靶向rRNA的寡核苷酸序列，并与磁珠连接。
2. 将样本中的总RNA与连接了靶向寡核苷酸的磁珠进行混合反应，使其结合。
3. 使用磁力将结合了rRNA的磁珠分离出来，去除非结合的RNA。
4. 将分离得到的非rRNA的RNA用于后续的RNA测序和分析。
磁珠富集法具有高度特异性和高效率的优点，能够有效去除rRNA，提高RNA测序和分析的准确性。
二、RNase H消化法RNase H消化法是一种利用RNase H酶对rRNA进行特异性降解的方法。
RNase H酶能够识别DNA/RNA杂交分子，并在RNA链上的DNA/RNA杂交部位引发剪切。
具体步骤如下：1. 准备一段与rRNA特异性的DNA寡核苷酸序列。
2. 将该DNA寡核苷酸序列与样本中的总RNA进行杂交反应，使其与rRNA结合。
3. 加入RNase H酶，使其识别DNA/RNA杂交分子并引发剪切，将rRNA降解。
4. 使用RNA纯化试剂将非rRNA的RNA分离出来，用于后续的RNA测序和分析。
RNase H消化法的优点是操作简单，可以针对特定的rRNA进行选择性去除，但对于rRNA结合较强的样本可能效果不佳。
三、使用rRNA去除试剂盒除了上述的自制方法，市面上也有一些商业化的rRNA去除试剂盒可供选择。
这些试剂盒通常包含了特异性靶向rRNA的探针或寡核苷酸，通过与rRNA结合，将其去除。
磁珠法核酸提取
磁珠法核酸提取磁珠法核酸提取是一种常用的分子生物学技术，它能够高效且快速地从样本中提取出目标核酸。
所谓磁珠法即利用磁性微珠来实现核酸提取的方法。
该方法具有操作简便、提取效果好、适用性广等优点，在临床诊断、实验室研究和生物医药领域具有广泛的应用。
磁珠法核酸提取的基本原理是利用磁性微珠与目标核酸的特异性结合来实现分离、提取的目的。
磁性微珠上通常包裹着一层亲和基团，可以与目标核酸特异性结合。
一般而言，核酸提取分为以下几个步骤：1. 样本溶解和裂解：将待提取的样本进行溶解和裂解，使细胞膜破裂，释放出细胞内的核酸。
2. 样本预处理：将裂解后的样本进行预处理，如去除蛋白质、RNA酶等干扰物质，以保证提取的核酸质量和纯度。
3. 磁珠结合：将经过预处理的样本与包裹有亲和基团的磁性微珠混匀，在一定条件下，使目标核酸与磁珠上的亲和基团发生特异性结合。
4. 磁珠分离：利用磁场的作用力将含有磁珠-目标核酸复合物的溶液吸附至管壁或底部，然后将上清液去除，实现磁珠与目标核酸的分离。
5. 重复洗涤：将分离得到的磁珠-核酸复合物进行反复洗涤，以去除杂质和离子。
6. 磁珠解吸：通过改变溶剂性质或温度，使磁珠上的核酸与磁珠分离，得到纯化的目标核酸。
7. 质量检测：对提取得到的核酸进行质量检测，如测定浓度、纯度等。
磁珠法核酸提取的关键在于选择合适的磁珠和亲和基团。
常用的磁珠有硅磁珠、氧化铁磁珠等，亲和基团可以是特异性引物、亲和抗体等。
根据不同的实验要求，还可以进行改进和优化，如引入自动化仪器和试剂盒，提高样本处理的效率和一致性。
总而言之，磁珠法核酸提取是一种重要的分子生物学技术，它在生物医药领域具有广泛的应用前景。
随着技术的不断进步和改进，相信磁珠法核酸提取将在科研和临床中发挥更重要的作用。
磁珠法核酸提取原理
磁珠法核酸提取原理
1磁珠法核酸提取
磁珠法核酸提取（Magnetic Bead Nucleic Acid Extraction）是一种有效的快速核酸提取法，该方法使用水溶性磁珠特殊的溶胀特性来实现高效、高质量核酸提取。
磁珠法核酸提取主要分为三个步骤：第一步，细胞破碎及消化，破碎微生物或细胞，以获得大量体细胞内核酸；第二步，核酸结合磁珠，使磁珠能够与核酸结合，形成核酸-磁珠复合体；第三步，复合物离心吸附，通过离心的方式将核酸-磁珠复合体从溶液中分离。
较常见的磁珠技术目前有三种：磁性珠法、磁法电泳及定向流式细胞仪技术。
磁性珠法是最常用的技术。
它以抗体或其他特异性对核糖核酸结合体为捕获单位，通过磁珠、离心力及结合反应，实现核酸的快速有效提取。
磁门电泳技术是一种分析性能好的磁珠法技术，它能够分离出不同长度或结构的核酸，提供细胞内核酸的精细特征。
定向流式细胞仪技术则主要用于检测不同微生物内的核酸，对核酸的实验结果大大提高了准确性。
磁珠法核酸提取的优点是操作简便、提取效率高，因此在基因检测等检测工作中有广泛的应用。
本技术可以快速有效地提取各种病原体的细胞内及检测物核酸，核酸提取组装可以满足一般诊断、实验室检测、临床应用以及研究分析等的需要。
磁珠法核酸片段筛选
磁珠法核酸片段筛选
磁珠法核酸片段筛选是一种常用的分离和纯化核酸片段的方法。
该方法利用特定的磁性珠子，通过其与特定的核酸片段的亲和性，将目标核酸片段选择性地吸附到磁珠上，然后利用磁场将磁珠与其他非目标核酸片段分离，最终实现目标核酸片段的纯化和富集。
具体的步骤通常包括以下几个方面：
1. 选择合适的磁珠：根据目标核酸片段的特异性，选择具有相应亲和基团的磁珠，例如，可以选择具有亲和性标记（如生物素或抗体）的磁性珠子。
2. 将磁珠与亲和配对物结合：将具有特定亲和性的配对物（如生物素亲和剂或抗体）与磁珠进行结合，以便与目标核酸片段特异性结合。
3. 样品处理：将待处理的样品（如总DNA或RNA提取物）
与磁珠/亲和配对物复合物进行混合，目标核酸片段与磁珠上
的配对物发生相互作用并结合到磁珠上。
4. 分离与洗涤：通过施加磁场，将含有目标核酸片段的磁珠/
核酸复合物聚集起来，然后将非目标核酸片段溶液去除，进行洗涤步骤以去除杂质。
5. 脱附与洗脱：用适当的缓冲液使目标核酸片段与磁珠脱离，并以高纯度的核酸片段形式洗脱。
磁珠法核酸片段筛选具有选择性高、操作简便、高通量等优点，广泛应用于基因组学研究、基因诊断、药物开发等领域。
一种采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法[发明专利]
![一种采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/8b9241336f1aff00bfd51e6d.png)
专利名称：一种采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法专利类型：发明专利
发明人：戴立忠,熊晓燕
申请号：CN200910307632.1
申请日：20090924
公开号：CN101665785A
公开日：
20100310
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法，其包括以下步骤：(1)磁珠处理：以肽－寡核苷酸修饰磁珠；(2)细胞裂解：将含有靶核酸的待分离样品加入离心管中，再加入裂解液裂解细胞；
(3)核酸吸附：向溶液中加入经肽－寡核苷酸修饰的磁珠，核酸被磁珠表面吸附；将离心管置于磁性分离器，磁珠吸附于试管壁；(4)去除杂质：加入水相缓冲液，对表面吸附有核酸并附着于试管壁的磁珠进行洗涤，将磁珠上的其他杂质冲洗分离；(5)核酸回收：吸附在磁珠表面的核酸直接作为PCR扩增的模板，或者加入洗脱缓冲液，使吸附在磁珠表面的核酸分子释放进入缓冲液，用于下游实验。
本发明方法所用磁珠可置于4℃或－20℃保存，且运输方便，吸附效率高，价格较低。
使用本发明方法提取并纯化的核酸，应用范围广泛。
申请人：戴立忠
地址：410205 湖南省长沙市岳麓区桐梓坡西路198号
国籍：CN
代理机构：长沙星耀专利事务所
代理人：宁星耀
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磁珠法提取核酸的3种样本处理方法
磁珠法提取核酸的3种样本处理方法磁珠法提取核酸的3种样本处理方法转自：洛阳吉恩特生物科技有限公司磁珠法核酸提取实验室以生物磁珠为载体提取核酸，所有反应是在液体体系中进行的，但生物样本多种多样，有液体也有固体，或者固液混合体，大多数生物样本在进行核酸提取纯化之前需要进行一定的前处理，液化、富集、除杂等都是常见的前处理方式。
一、液化将固体样本转化为液体样本是最重要的样本前处理方法，固体样本是很难直接在试剂盒的作用下用于提取核酸的。
固体样本跟杂质一样，会严重阻碍磁珠吸附核酸，并且耗损大量的磁珠位点，很难取得良好的提取效果。
常见的固体样本如植物组织、动物组织、泥土、浓痰等。
植物组织和动物组织，可剪取适量的样本，在研钵内快速研磨。
研磨时如果需要保护RNA，可以采用液氮研磨的方式。
如果不需要提取RNA，也可以加入裂解液或者生理盐水帮助研磨成匀浆状态。
泥土的处理方式主要是通过浸泡。
因为从泥土中提取核酸，并非提取泥土本身，而是提取泥土中存在的微生物的核酸。
使用生理盐水或者其他适当缓冲液体浸泡泥土，如果是较为干硬致密的泥土，浸泡前可以先碾碎成小颗粒，浸泡过程中可用小棒搅动帮助泥土分散。
浸泡一段时间后，将泥浆用三层滤纸过滤，过滤所得的液体，即可用于磁珠法提取。
如浓痰、脓液等固液混合又较为黏腻的生物样本，可以先使用氢氧化钠液体进行碱解液化，再酸中和后，作为液体样本进行磁珠法提取。
以上方法处理固体样本，所得的液体，可能并不完全清澈透明，杂质还是相对较多的，如果必要，使用离心的方式，可以除去更多的杂质，但相对应该控制离心速度在10000r/min以下，否则核酸也会一起随杂质被离心下去。
二、富集很多时候，用磁珠法提取的核酸都是微量或者痕量的样本，直接使用样本进行操作，所能得到的核酸很少，这就要求下游的检测试剂灵敏度很高，如果检测试剂灵敏度不足，在样本痕量的情况下，很可能检测不出，出现假阴性。
所以对于微量样本和痕量样本，可以进行富集前处理。
磁珠法核酸提取原理
磁珠法核酸提取原理
磁珠法核酸提取是一种以磁珠为介质的提取方法，其原理是利用磁珠表面的特殊结构和化学性质，能够与核酸分子特异性结合。
其步骤主要包括样品裂解、磁珠处理、洗涤和洗脱等。
首先，将待提取的样品裂解，释放出其中的核酸分子。
裂解方法可以采用物理方法（如高温、超声波）或化学方法（如酶的作用）。
然后，在核酸样品中加入特定的磁性珠子。
这些磁性珠子通常是通过在微米尺寸的磁性球表面修饰上亲和性分子而获得特异性结合能力。
这些亲和性分子可以是寡核苷酸、抗体或表面修饰的核酸分子，根据提取的目标核酸的性质和特点选择。
接下来，通过外加磁场，将含有目标核酸的磁性珠子与其他杂质分离。
磁性珠子会受到磁场的吸引，而其他杂质则会被留在上清液中。
通过去除上清液，可以进一步减少杂质对目标核酸的干扰，提高提取的纯度。
然后，进行洗涤步骤以去除与磁珠表面非特异性结合的杂质。
通常通过在洗涤缓冲液中加入高浓度盐溶液、有机溶剂或酒精等来实现洗涤。
最后，目标核酸被洗脱离开磁性珠子。
这一步骤通常通过改变溶液的pH值或离子强度，从而破坏核酸与磁珠之间的结合力，使目标核酸从磁性珠子表面溶解出来。
磁珠法核酸提取具有操作简单、提取效率高、纯度好等优点，广泛应用于分子生物学、医学诊断和基因组学等研究领域中。
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磁珠法提取核酸的3种样本处理方法
转自：洛阳吉恩特生物科技有限公司磁珠法核酸提取实验室以生物磁珠为载体提取核酸，所有反应是在液体体系中进行的，但生物样本多种多样，有液体也有固体，或者固液混合体，大多数生物样本在进行核酸提取纯化之前需要进行一定的前处理，液化、富集、除杂等都是常见的前处理方式。
一、液化
将固体样本转化为液体样本是最重要的样本前处理方法，固体样本是很难直接在试剂盒的作用下用于提取核酸的。
固体样本跟杂质一样，会严重阻碍磁珠吸附核酸，并且耗损大量的磁珠位点，很难取得良好的提取效果。
常见的固体样本如植物组织、动物组织、泥土、浓痰等。
植物组织和动物组织，可剪取适量的样本，在研钵内快速研磨。
研磨时如果需要保护RNA，可以采用液氮研磨的方式。
如果不需要提取RNA，也可以加入裂解液或者生理盐水帮助研磨成匀浆状态。
泥土的处理方式主要是通过浸泡。
因为从泥土中提取核酸，并非提取泥土本身，而是提取泥土中存在的微生物的核酸。
使用生理盐水或者其他适当缓冲液体浸泡泥土，如果是较为干硬致密的泥土，浸泡前可以先碾碎成小颗粒，浸泡过程中可用小棒搅动帮助泥土分散。
浸泡一段时间后，将泥浆用三层滤纸过滤，过滤所得的液体，即可用于磁珠法提取。
如浓痰、脓液等固液混合又较为黏腻的生物样本，可以先使用氢氧化钠液体进行碱解液化，再酸中和后，作为液体样本进行磁珠法提取。
以上方法处理固体样本，所得的液体，可能并不完全清澈透明，杂质还是相对较多的，如果必要，使用离心的方式，可以除去更多的杂质，但相对应该控制离心速度在10000r/min以下，否则核酸也会一起随杂质被离心下去。
二、富集
很多时候，用磁珠法提取的核酸都是微量或者痕量的样本，直接使用样本进行操作，所能得到的核酸很少，这就要求下游的检测试剂灵敏度很高，如果检测试剂灵敏度不足，在样本痕量的情况下，很可能检测不出，出现假阴性。
所以对于微量样本和痕量样本，可以进行富集前处理。
有些时候，样本属于常量样本，但下游实验需求核酸量大，也需要对样本进
行富集，以便每个提取都能获得更多的核酸。
或者样本量巨大，无法直接使用试剂盒进行提取，也需要进行富集操作。
常见的富集方法包括蒸发和离心。
以土壤浸润水样本为例，浸泡大量的土壤样本，获得了500ml浸润水，显然无法将500ml浸润水作为样本直接提取。
可以先将样本分装在两个30ml离心管内进行，12000r/min离心十分钟，弃去上清液后，用适量生理盐水重悬沉淀后，移入小离心管内，在80℃温度下蒸发液体至液体量少于300ul，即可用于磁珠法进行核酸提取。
三、除杂
很多生物样本中都含有大量的杂质，这些杂质有的可以在试剂盒核酸提取的过程中被洗涤液除去，但有些，很难通过后续的试剂盒洗涤直接除去，这就要求我们在样本前处理的时候，就直接先做初步的除杂。
以大量血液样本为例，常规定量血液样本（200ul以下），通常是不需要提前除杂的。
但如果血液样本的量很大，如4-5ml/提取，就很难直接进行了，不仅样本的量超过常规试剂盒的容纳范围，杂质也非常多。
通常的做法是，提前加入红细胞裂解液，离心，弃去上层液体，裂解液重悬样本。
各种各样的样本前处理方法是很灵活多样的，根据下游需求不同，样本特性不同，通常是多种前处理方式组合应用，以达到最佳效果。
四、结语
总之，在磁珠法核酸提取的过程中，样本的前处理工作对整个提取结果会有至关重要的影响。
当然，选取合适的磁珠，更能使提取结果事半功倍，吉恩特生物的01系列磁珠，半沉降时间可达15min以上，磁吸时间仅为15s左右，可为操作者带来不一样的磁珠操作体验。
详情可参考文章《4个参数教你鉴别DNA 提取磁珠》。