甘露聚糖酶活测定
饲料用β-甘露聚糖酶活力的测定
乙酸钠缓冲溶液混合溶解， 待完全溶解后， 加
乙 酸-乙 酸 钠 缓 冲 溶 液 定 容 ， 得 到 1.0mg/mL 的
D-甘露糖溶液。 然后， 用乙酸-乙酸钠缓冲溶液
分 别 稀 释 ， 配 制 浓 度 为 0.100mg/mL、 0.200mg/
mL、
0.300mg/mL、0.400mg/mL、0.500mg/mL、
关 键 词 ：β-甘 露 聚 糖 酶 ；活 力 测 定
β-甘露聚糖酶能够把豆粕、 玉米中高含量 的甘露聚糖分解为甘露寡糖及单糖。 甘露寡糖 能很好的调理肠道微生物， 有助于提升机体免 疫力； 单糖可被动物机体直接利用。 市场上饲 料用 β-甘露聚糖酶产品有逐年增加的趋势,广大 饲料质检实验室迫切需要相应的国家检验标准 或行业检验标准。 国家标准 《GB/T36861 饲料添 加 剂 β- 甘 露 聚 糖 酶 活 力 的 测 定 》 于 2019 年 4 月 1 日开始实施， 为行业提供了测定 β-甘露聚 糖酶活力的标准方法。 我们第一时间依照该方 法开展了实践。
2019 年第 5 期
健康养殖
角 豆 胶 完 全 溶 解 ， 停 止 加 热 ， 继 续 搅 拌 10 分
钟 。 转 入 100mL 容 量 瓶 中 ， 待 冷 却 至 室 温 后 ，
用乙酸-乙酸钠缓冲溶液定容。 使用前摇匀。
D-甘露糖标准溶液： 精密称取 D-甘露糖
0.100g 至 100mL 容 量 瓶 中 ， 加 入 约 50mL 乙 酸-
于棕色瓶中， 避光， 室温保存 7 天后可以使用。
1.3 待测样品
湖南省内抽取的样品。 产地有湖南省岳阳
市、 汨罗市、 黑龙江省齐齐哈尔市等。
2 方法
2.1 标曲绘制 取 8 支 25mL 刻 度 试 管 , 分 别 加 入 空 白 溶 液 （ 乙 酸 - 乙 酸 钠 缓 冲 溶 液 ） 、 0.100mg/mL、 0.200mg/mL、 0.300mg/mL、 0.400mg/mL、 0.500mg/mL、 0.600mg/mL、 0.700mg/mL 的 D- 甘 露糖标准溶液各 2.00mL,后再加入 2.00mL 乙酸乙酸钠缓冲溶液和 5.00mL DNS 试剂,充分摇匀， 置 沸 水 浴 中 反 应 5min， 迅 速 冷 却 至 室 温 ， 定 容 至 25.0mL， 以 试 剂 空 白 溶 液 调 零 ， 测 各 试 管 试
饲用β- 甘露聚糖酶酶活力的测定方法及影响因素
养殖与饲料2017年第12期摘要β-甘露聚糖酶属于半纤维素酶类，在动物生产、饲料行业中应用广泛。
本文综述了β-甘露聚糖酶的酶学性质、酶活力测定方法及影响因素等方面的研究进展，提出了统一的国家级检测方法和掌握影响酶制剂测定过程中各因素的关键点将成为今后研究的重点，为β-甘露聚糖酶的深入研究提供参考。
关键词β-甘露聚糖酶；酶学性质；酶活力；检测方法；影响因素饲用β-甘露聚糖酶酶活力的测定方法及影响因素张玮强莉宫玲玲农业部饲料质量监督检验测试中心，济南250022收稿日期：2017-09-19张玮，女，1984年生，硕士，畜牧师。
β-甘露聚糖是一类具有特殊结构的半纤维素多糖，在自然界中广泛存在，但由于其自身性质很难发生水解。
β-甘露聚糖进入单胃动物体内后，不利于营养物质的消化和吸收，影响其生长和饲料的利用率；而β-甘露聚糖酶是作用于主链β-1，4-糖苷键的重要内切酶，可将β-甘露聚糖水解为甘露二糖、甘露三糖等。
畜禽的消化体系中缺少β-甘露聚糖酶，因此需要人为添加β-甘露聚糖酶来降解玉米-豆粕型日粮中的β-甘露聚糖[1]，从而进一步提高日粮的饲用价值。
鉴于此，β-甘露聚糖酶的理化性质、酶活检测方法及影响因素等方面的研究仍是当前研究的重点。
1β-甘露聚糖酶的理化及酶学性质β-甘露聚糖酶的来源非常广泛，包括微生物、动植物和基因克隆等。
据统计[2]已发现100多种产酶的微生物，包括细菌、真菌和放线菌等。
动物来源的β-甘露聚糖酶主要是低等动物的肠道分泌液，许多植物萌发的种子以及番茄果实和种子中也都含有β-甘露聚糖酶。
随着β-甘露聚糖酶分子生物学研究的开展，可通过基因克隆的方式，对天然来源的β-甘露聚糖酶进行基因表达，人工合成性能更好的β-甘露聚糖酶。
β-甘露聚糖酶属于糖苷水解酶（GH ）5、26或113家族[3]，目前已经报道的β-甘露聚糖酶序列共有232个，其中有22个β-甘露聚糖酶开展了蛋白质晶体结构解析研究。
_甘露聚糖酶产生菌的分离_鉴定及产_甘露聚糖酶最适条件的研究
enzyme ac tiv ity of 50. 37 U /m lwas obta ined a fter the enzyme activ ity assay . T he stra in was identified as P seudo m onas sp. by m orpho log ica l and physio log ica l character istics ana lysis and 16S r DNA BLAST. T he opti m a l conditions fo r producing the ac tiv ity of h ighest acid ic m annanase w as up to 185. 37 U /m , l 3. 68 ti m es as before . The stra in which rapid ly produced stra in we re deter m ined 1 g / l00 m lm a izena , 2 g /100 m l kon jak powder , pH 6 . 0 and the opti m a l temperature w as 32 mannanase activ ity after cu lturing fo r 12 h. T he study of the enzyma tic character of the
收稿日期 : 2008 12 26 基金项目 : 重庆市科技计划项目 ( 2007AC 1060 ), 重庆大学重点实验室对本科生开放创新基金 作者简介 : 黄俊丽 ( 1974 ) , 女 , 副教授 , 主要从事微生物分子学研究 ; E m ai: l huang_ jun l@ i 126 . com, Te: l 023 65120497
黑曲霉β-甘露聚糖酶的纯化和活力测定试验指导
黑曲霉β-甘露聚糖酶的纯化和活力测定实验指导（综设实验）一．实验目的及要求1、掌握黑曲霉ASP.Niger的固体发酵工艺2、掌握粗酶浸提、硫酸铵分级沉淀的原理和操作3、掌握透析原理、脱盐及透析袋的处理方法和使用4、掌握β-甘露聚糖水解各种甘露聚糖之间β-糖苷键的机制和理论5、掌握以魔芋精粉为底物DNS光度法（3,5－二硝基水杨酸法）测定发酵制品中β-甘露聚糖酶活力的操作方法二．实验原理1、微生物的β-甘露聚糖酶都是诱导酶，只有在培养基中含有β-甘露聚糖时才进行β-甘露聚糖酶的合成，产酶最适培养基除需要一定的碳氮源，还加入一定诱导物魔芋粉。
2、硫酸铵分级沉淀（盐析）原理中性盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化层逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析出。
3、透析原理、脱盐：酸性β-甘露聚糖酶相对分子质量为39000和40000，选择MWCO（切割分子量或截留分子量）14000的透析袋，透过掉分子量小于10000的蛋白质；并借助分子扩散脱盐。
4、DNS光度法测定还原糖：β-甘露聚糖酶能水解含β-1，4甘露糖苷键的甘露多糖（包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡萄甘露聚糖等），以魔芋精粉为底物主要得到含还原性端基的甘露寡糖，还原性端基与DNS试剂共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈棕（桔）红色，在520nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量，由此测定出酶的活力。
三．实验试剂和器材菌种：黑曲霉(Aspergillus niger)JXW12-1，生物工程发酵实验室保藏。
斜面培养基:马铃薯20.0%，蔗糖2.0%，琼脂 2.0%，pH自然，此培养基用于菌种保藏、斜面种子和平板分离。
二级种子培养基：250 mL三角瓶装麸皮10g，水12mL，121℃灭菌30 min；接种一菌耳斜面种子，32±1℃静置培养96h，其间翻曲2～3次。
甘露聚糖酶的酶学性质研究
酶活 力测 定
．
甘露 聚糖溶液 同
pH
．
酶样 品用 蒸馏 水 稀 释 50 倍后 再 以 不
。
1． 1 3
酶活测 定 方 法
值 的缓 冲 液 作 适 当稀 释 进 行 酶 活 测 定
，
以最高
酶 活 为 10 0 ％
范 志 恒 山 东康 地 恩 集 团 2 6 6 0 6 1 山 东青 岛
， ，
，
在 其 它 条 件 的 酶 活 占最 高 酶 活 的 百 分
5 00
．
能 与 消 化 酶 充 分 接 触 提 高 内源 酶 的 活 性 改 善 肠 道
， ，
液 电磁 振 荡 3
， ，
s
恒温 反应 30
in
。
。
加人
m
l DNS
m
微 生 物 菌群 和 提高肠 粘 膜 的完整 性 等 功 能
。
试 剂 电磁 振荡 以 终止 酶解反 应
，
沸水浴 加热
，
5
in
，
本 文 旨在 通 过 对 甘 露 聚 糖 酶 的 酶 学 性 质 研 究 掌 握有关数据 为实 际 应 用 提供 理 论 依据 和 指 导
pH
数 即 为该 酶 在 此
。
值 条件 下 的相 对 酶 活
。
1 4 2
． ．
酶反 应 的最 适 温 度
调节恒温水浴锅
，
收 稿 日 期 ：2 0 0 8 0 65
、
、
维普资讯
范志恒 ： 甘露聚糖 酶的酶 学性质研 究
、 、
入 2 00
m
l
．
蒸馏 水和
m
5 00
利用凝胶扩散法测定刺萼龙葵种子中β-甘露聚糖酶的活性
利用凝胶扩散法测定刺萼龙葵种子中β-甘露聚糖酶的活性β-甘露聚糖酶是一种重要的水解酶，广泛存在于植物、微生物和动物组织中，是一种能够水解β-甘露聚糖的酶类。
β-甘露聚糖酶在许多生物学过程中起着重要作用，比如在植物的生长发育、细胞壁代谢、应激响应等方面都发挥着重要的作用。
研究β-甘露聚糖酶的活性对于理解植物生长发育和抗逆性有着重要的意义。
刺萼龙葵（Solanum aculeatissimum Jacq.）是茄科植物中的一种，广泛分布于南美洲和亚洲热带地区，又名刺浆果茄，具有较高的经济价值和药用价值。
刺萼龙葵的种子中富含β-甘露聚糖酶，因此利用凝胶扩散法测定刺萼龙葵种子中β-甘露聚糖酶的活性，可以为深入研究刺萼龙葵的生物学特性提供重要依据。
本文将介绍利用凝胶扩散法测定刺萼龙葵种子中β-甘露聚糖酶活性的方法和步骤，并对测定结果进行初步分析和讨论，旨在为该领域的研究工作提供理论和实验基础。
一、实验材料与方法1. 实验材料（1）刺萼龙葵种子：新鲜采集的刺萼龙葵种子；（2）β-甘露聚糖酶提取液：含有一定浓度的β-甘露聚糖酶的提取液；（3）琼脂：用于制备凝胶；（4）碘液：用于染色检测。
2. 实验方法（1）β-甘露聚糖酶提取将刺萼龙葵种子磨碎并加入适量的缓冲液进行提取，通过离心等操作获得β-甘露聚糖酶提取液。
（2）制备琼脂凝胶将琼脂按照说明书中的方法配制成适当浓度的琼脂溶液，并倒入培养皿中，待凝固后在表面钻孔。
（3）凝胶扩散反应在琼脂凝胶上均匀涂布一定浓度的β-甘露聚糖酶提取液，再在固定位置上钻孔注入碘液，观察并测定孔周围的清晰圈和直径。
二、实验结果与分析通过上述实验方法，我们成功利用凝胶扩散法测定了刺萼龙葵种子中β-甘露聚糖酶的活性。
观察结果显示，在琼脂凝胶表面形成了一定大小的清晰圈，且直径随着β-甘露聚糖酶提取液中酶活性的增加而增大。
这表明刺萼龙葵种子中存在一定浓度的β-甘露聚糖酶，并且具有一定的活性。
从实验结果可以初步推断，刺萼龙葵种子中β-甘露聚糖酶的活性较高，这与刺萼龙葵种子中富含β-甘露聚糖酶的特点相吻合。
甘露聚糖酶Man23的化学修饰及活性必需基团测定
・基础研究・甘露聚糖酶Man23的化学修饰及活性必需基团测定3周海燕a,董 蕾a,田 梅b,饶力群c,吴永尧a3(湖南农业大学 a.生化与发酵工程实验室;b.实验室管理中心;c.生物科学技术学院,湖南长沙410128)摘 要:用化学修饰剂NE M、二甲基溴化锍、E DC、DEPC、T NM、对硝基苯乙二醛、P M SF、T NBS对芽孢杆菌B23产生的甘露聚糖酶M an23进行化学修饰,并测定修饰反应的动力学参数关系。
结果显示半胱氨酸、色氨酸(1个)和谷氨酸(或天冬氨酸)残基(2个)是酶活性的必需基团;组氨酸、酪氨酸、精氨酸、丝氨酸和赖氨酸残基均为非必需基团。
双向电泳结果显示酶蛋白分子具有一个链内二硫键(Cys902Cys110)。
荧光光谱测定结果显示该酶最大吸收峰为336nm。
底物作用导致酶的发射光谱发生蓝移,说明色氨酸残基位于酶蛋白分子内部的疏水区。
关键词:甘露聚糖酶;化学修饰;必需基团中图分类号:Q78文献标识码:A文章编号:100727146(2007)0620717205The Stud i es on Chem i ca l M od i f i ca tionand Essen ti a l Residues of M annana se M an23ZHOU Ha i2yan a,DON G L ei a,T I AN M ei b,RAO L i2qun c,WU Yong2yao a3 (Hunan Agriculture University a.B i ochem istry and Fer mentati on Engineering Lab;b M anagement Center;c.College of B i oscience and B i otechnol ogy,Changsha410108,Hunan,China)Abstract:The mannanase M an23p r oduced fr om B acillus subtilis B23was modified by NE M,D i m ethyl2(22hydr oxy252 nitr obenzyl)2sulf onium br om ide,EDC,DEPC,T NM,42nitr ophenylglyoxal,P M SF and T NBS.M an23could be sup2 p ressed by NE M,D i m ethyl2sulf onium br om ide and EDC and the kinetic parameters were deter m ined.The data indicated that cysteine residues,one tryp t ophan residue and t w o carboxyl residues m ight be the essential gr oup s of M an23.The t w o2di m ensi onal electr ophoresis p r oved that there was a disulfide bond bet w een Cys90and Cys110on the single chain.I n the p resence of ligands2binding,theλmax em issi on fluorescence s pectrum of the M an23changed fr om336nm t o330nm.It appeared that tryp t ophan residues were involved in a hydr ophobic m icr o2envir onment of mannanase M an23mole2 cule.Key words:mannanase;chem ical modificati on;essential residues β2甘露聚糖酶是一类可降解含β2甘露糖苷键的重要半纤维素酶[1],目前被广泛应用在食品、医药、造纸、纺织印染、饲料工业及石油开采等领域[225]。
实验三 盐析β-D甘露聚糖酶活力测定
实验三盐析β-D甘露聚糖酶活力测定一．实验目的1、掌握β-D甘露聚糖水解各种甘露聚糖之间β糖苷键的机制和理论。
2、掌握以魔芋精粉为底物测定发酵制品中β-D甘露聚糖活力的操作方法。
二．基本原理水解含B一1，4甘露糖苷键的甘露多糖(包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡萄甘露聚糖等)的内切水解酶，属于半纤维素酶类。
B一甘露聚糖酶能将广泛存在于豆类籽实中的甘露聚糖降解为甘露低聚糖，不仅消除了甘露聚糖对单胃动物的抗营养作用，同时生成的甘露低聚糖在动物肠道中起着重要的调节作用。
三、实验试剂和器材721型分光光度计、恒温水浴锅、秒表。
pH5.6的醋酸缓冲液四、实验步骤1、倾去部分上清液，立即将沉淀部分在8000rpm，离心10min。
收集沉淀，加约20毫升蒸馏水溶解，倒入事先准备好的透析袋中。
（透析袋处理：剪成15㎝长度，沸水浴中煮10min，捞起、扯开，在一端1㎝处用细绳扎紧口，用水试一下是否有漏，若有漏需重新绑扎，直至不漏为止。
处理过程中需戴手套！）2、酶液倒入透析袋后，另一端1㎝处也用细绳（应用长一点的！）扎紧口，浸于4～5℃的蒸馏水中（250ml烧杯），持续时间1.0h，并不时搅拌，期间每隔20min更换1次4～5℃的新鲜蒸馏水，以利迅速达到平衡，每次用水量约150毫升。
注：1、上端口切不可浸于水中，以免水进入袋中胀破透析袋！2、透析同时可准备2支50ml的比色管，各加0.25g魔芋精粉，加25mlpH5.6的醋酸缓冲液溶解。
操作顺序：先量取25mlpH5.6的醋酸缓冲液加入比色管，在55℃水浴预热，再分次、少量将0.25g魔芋精粉加入，待先加的溶解后再加剩下的！可用竹筷帮助溶解，为免捅破比色管底，切忌用玻棒！溶解完毕，将2支溶有魔芋精粉的50ml比色管始终置于55℃水浴中预热待酶解。
3、将透析好的酶液透析袋置于玻璃漏斗上，剪去上端口一部分，但不要使酶液流出！4、2支溶有魔芋精粉的50ml 比色管1支加透析好的酶液2ml ；另1支加灭活的透析酶液2ml （用做对照），将2管同时置于55℃水浴下反应10 min ，取出，放入4～5℃的蒸馏水中（250ml 烧杯）冷却，再进行下面操作：（酶液灭活：取5毫升透析酶液置于10 ml 的比色管，沸水浴15 min 。
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溶液
溶菌酶混合液：2mg/mL溶菌酶、50µg/mL RNase、0.3mol/L蔗糖、25mmol/L Tris-HCI（PH8.0）、25mmol/L EDTA（PH8.0）；
氨苄青霉素（Ampicillin，Amp）母液：配成50mg/ml水溶液，-20℃保存备用。
甘露糖溶液，c（C6H12O6）为10.0mg/ml：称取无水D-甘露糖1.000g，加水溶解，定容至100ml。
乙酸溶液，c（CH3COOH）为0.1mol/L：吸取冰乙酸0.60ml。
加水溶解，定容至100ml。
乙酸钠溶液，c（CH3COONa）为0.1mol/L：称取三水乙酸钠1.36g。
加水溶解，定容至100ml。
氢氧化钠溶液，c（NaOH）为200g/L：称取氢氧化钠20.0g。
加水溶解，定容至100ml。
乙酸-乙酸钠缓冲溶液，c（CH3COOH—CH3COONa）为0.1mol/L，pH值为5.5：称取三水乙酸钠23.14g，加入冰乙酸1.70ml。
再加水溶解，定容至2000ml。
测定溶液的pH值。
如果pH值偏离5.5，再用乙酸溶液或乙酸钠溶液调节至5.5。
0.5%魔芋精粉底物：称取0.5g魔芋精粉加入80ml乙酸—乙酸钠缓冲溶液。
磁力搅拌，同时缓慢加热，直至魔芋精粉完全溶解（注：在搅拌加热的过程中可以补加适量的缓冲液，但是溶液的总体积不能超过100ml。
）。
然后停止加热，继续搅拌30min，用乙酸—乙酸钠缓冲溶液定容至100ml，使用前适当摇匀。
4℃避光保存，有效期为3天。
DNS试剂：称取3,5-二硝基水杨酸3.15g，溶于500mL蒸馏水，水浴至45℃，搅拌，然后逐步加入100mL氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，直到溶液澄清透明（加入氢氧化钠过程中温度不要超过48℃），再逐步加入酒石酸钾钠91g，苯酚2.5g，亚硫酸钠2.5g，维持45℃，同时补水300mL，不断搅拌直到完全溶解。
冷却后，定容至1000 mL。
避光保存，静置一周，待用。
10×微量元素溶液（PTMl）：CuSO4·5H2O 6g/L,，NaI 0.08g/L，MnSO4·H2O 3g/L，NaMnO4·2H2O 0.2 g/L，H3BO30.2 g/L，ZnCl220 g/L，CoCl20.5 g/L，FeSO4·7H2O 65g/L，生物素0.2 g/L，浓硫酸2 mL/L。
过滤除菌，保存于4℃，用于补加到基础盐培养基和其它补料成分之中。
基础培养基添加量为4.8‰，补料使用时添加量为12‰。
染色液：考马斯亮兰R-250 2.5g，甲醇454 mL，冰醋酸92mL，水454 mL。
脱色液：甲醇456 mL，冰醋酸72 mL，水472 mL。
酶活测定（参照国际标准）
2.2.10.1 甘露聚糖酶活力单位定义
在37℃、pH值为5.5的条件下，每分钟从浓度为3mg/ml的甘露聚糖（Sigma G0753）溶液中降解释放1umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。
2.2.10.2 测定原理
甘露聚糖酶能将甘露聚糖降解成寡糖和单糖。
具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应。
反应液颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中甘露聚糖酶的活力成正比。
因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中甘露聚糖酶的活力。
2.2.10.3 标准曲线的绘制
吸取乙酸-乙酸钠缓冲液4.0ml，加入DNS试剂5.0ml，沸水浴加热5min。
用自来水冷却至室温，用水定容至25.0ml，制成标准空白样。
分别吸取甘露糖溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00和7.00ml，分别用乙酸-乙酸钠缓冲液定容至100ml，配制成浓度为0.10-0.70mg/ml D-甘露糖标准溶液。
分别吸取上述浓度系列的甘露糖标准溶液各2.00ml（两个平行），分别加入到刻度试管中，再分别加入2ml水和5mlDNS试剂。
电磁振荡3s，沸水浴加热5min。
然后用自来水冷却到室温，再用水定容至25ml。
以标准空白样为对照调零，在540nm处测定吸光度OD值。
以甘露糖浓度为Y轴、吸光度OD值为X轴，绘制标准曲线。
每次新配制DNS试剂均需要重新绘制标准曲线。
2.2.10.4 试样溶液的制备
粗酶液直接用乙酸-乙酸钠缓冲溶液进行稀释、定容（稀释后的酶液中甘露聚糖酶活力最好能控制在0.04-0.08 u/ml之间）。
如果稀释后酶液的pH值偏离5.5，需要用乙酸溶液或乙酸钠溶液调节、校正至5.5，然后再用缓冲溶液做适当定容。
2.2.10.5 测定步骤
(1)将上述稀释后的酶液和0.5%魔芋精粉底物分别放入50℃水浴锅，平衡10min。
(2)吸取2.00ml稀释后的酶液，加入到25mL比色管中，再加入5mlDNS试剂，电磁振荡3s。
然后加入2.0ml甘露聚糖溶液，50℃保温30min，沸水浴加热5min。
用自来水冷却至室温，加水定容至25ml，电磁振荡3s。
以标准空白样为空白对照，在540nm处测定吸光度A B。
(3)吸取2.0ml经过适当稀释的酶液，加入到刻度试管中，再加入2.0ml甘露聚糖溶液，电磁振荡3s，50℃精确保温30min。
加入5.0mlDNS试剂，电磁振荡3s，酶解反应。
沸水浴加热5min，用自来水冷却至室温，加水定容至25ml，电磁振荡3s。
以标准空白样为空白对照，在540nm处测定吸光度A E。
2.2.10.6 酶活的计算
利用一下公式对酶活力进行计算：
[（A E - A B）×K + C O]
X D = × 1000 （1）
M×t
式（1）中：
X D—试样稀释液中的甘露糖聚酶活，u/ml；
A E—酶反应液的吸光度；
A B—酶空白样的吸光度；
K —标准曲线的斜率；
C O—标准曲线的截距；
M —甘露糖的分子量（180.2）；
t —酶解反应时间，min；
1000 —转化因子，1mmol = 1000 umol。
X D值应在0.04-0.08 u/ml之间。
如果不在这个范围内，应重新选择酶液的稀释度，再进行分析测定。
X=X D·D f（2）式（2）中：
X —试样甘露聚糖酶的酶活，U/mL；
D f—试样的总稀释倍数。
酶活的计算值保留三位有效数字。
分别用2mL浓度为0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70mg/ml D-甘露糖标准溶液和5mlDNS试剂沸水浴加热5min。
然后用自来水冷却到室温，再用水定容至25ml。
以标准空白样为对照调零，在540nm处测定吸光度OD值（表4-1）。
以甘露糖浓度为Y轴、吸光度OD值为X轴，绘制标准曲线（图4-4）。
表4-1 标准曲线的绘制
重组酵母酶活测定
重组酵母Man和syn-Man分别进行100mL摇瓶产酶发酵，每12h添加甲醇至终浓度为1﹪，每24小时取粗酶液测一次酶活。
结果如下表4-2：
表4-2 不同发酵时间段酶活力的测定。