免疫分析法ppt
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临床检验中的发光免疫分析讲解课件
对甲低的诊断价值依次为：FT4=TSH＞TT4＞FT3＞TT3
但FT3 、 FT4灵敏度要求高，且易受干扰 发光法提高了灵敏度，使得其临床应用普遍性超过TT4和TT3
第一代（放免）
第二代
第三代
两步法 操作时间长
灵敏度差 准确性差
类似物法 操作时间短 灵敏度较好 准确性较好
反向竞争法 （标记抗体） 操作时间短 灵敏度更好 准确性更好
发光强度（X）
单光子计数式发光检测仪
单光子计数器
样品运动/定位装置 原位注射泵
计数/贮存器 打 印 机
程控高压
计
算
控制器
机
程控自动门锁及检测装置 发光仪执行模块
发光仪控制模块
光生物学技术的应用范围
军事侦测 公安稽查 卫生检疫 药物筛查 医学诊断 环境检测 航天遥感 生命科学
……
第三代 TSH检测试剂盒
第四代 TSH检测试剂盒
以TSH(促甲状腺素)为例
目前商品化发光免疫分析产品的几个特点
大多采用全自动工作方式，部分采用微孔板半自动方式 多采用磁性或非磁性微粒包被，以增加表面积，使反应时间缩短 使用内建标准曲线加校正的办法产生工作曲线 部分产品采用流动池测定方式(适合于闪光型发光或电化学发光)
发光时间在数十分钟以上，如： HRP-Luminol系统 AP-AMPPD系统 黄嘌呤氧化酶系统
无须原位进样、 以速率法测量。
闪光与辉光及其测量方式的差别
闪光尖峰 发光信号
积分法测量
辉光坪区
原位进样
速率法测量
时间
商业化产品中常见的化学发光系统（一）
鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统
O
H2O2+
化学发光免疫分析技术【检验科】--ppt课件
是目前世界公认先进的标记免疫测定技术，化学发光
免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，成为检验方法 中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病 诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾病 、内分泌功能、肿瘤标志物、性激素、甲状腺功能等方面 的体外诊断实验中。
化学发光免疫分析的优势
• 灵敏度高
• 参考范围： FT3：2.3—4.0pg/mL FT4：0.6—1.2ng/dL
• 临床意义：
血清FT3和FT4升高：⑴甲亢；⑵低T3综合征，由于5’脱碘酶受抑制，T4外 周脱碘作用障碍使FT4升高；⑶甲状腺素不敏感综合征， FT3和FT4升 高，而无甲亢表现；⑷某些药物，胺碘酮、肝素等可使FT4升高；FT3 适合于甲亢和左旋甲状腺素治疗中药物是否过量的判断。
电化学发光免疫分析示意图
电化学发光免疫测定示意图
标记磁颗粒在电场中发光工作示意图
目前我院最新引进的迈瑞CL-2000i 全自动化学发光免疫分析系统 主要以化学发光酶免疫分析为主。拥有国内完全自主知识产权，它的 酶促化学发光是目前免疫诊断中最灵敏的化学发光体系之一，其核心 性能达到了国际同类产品先进水平。
• 化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清内待测物质从而 对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清 和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不 透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结 合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的 游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液 ，利用化 学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能 量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通 过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔 的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学 模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床诊 断。
免疫检测法PPT课件
质。
缺点
01
02
03
04
交叉反应
有时会出现交叉反应，导致假 阳性结果。
抗体依赖
免疫检测法依赖于抗体的质量 和特异性，因此抗体制备的难
度和成本较高。
样品处理要求高
对于某些生物样品，需要进行 复杂的预处理才能进行检测。
检测时间较长
相对于一些快速检测方法，免 疫检测法可能需要更长时间才
能获得结果。
改进方向
分类
根据检测原理和应用领域，免疫 检测法可分为酶联免疫吸附试验 、放射免疫分析、荧光免疫分析 、化学发光免疫分析等。
免疫检测法的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测人体内的肿瘤标 志物、激素、病毒抗原、 药物残留等，辅助医生进 行疾病诊断和病情监测。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留、毒素等有 害物质，保障食品安全。
情监测。
激素水平检测
性激素检测
通过检测性激素水平，有助于评估男性和女性的生殖健康状况，如 睾酮、雌二醇、孕酮等激素的检测。
甲状腺激素检测
甲状腺激素对人体的新陈代谢和生长发育具有重要作用，通过检测 甲状腺激素水平，有助于甲状腺功能亢进和减退的诊断和治疗。
肾上腺激素检测
肾上腺激素与人体应激反应、免疫功能等方面密切相关，通过检测肾 上腺激素水平，有助于相关疾病的诊断和治疗。Fra bibliotek传染病检测
结核病检测
性病检测
通过检测结核病抗体，有助于早期发 现和诊断结核病，为预防和治疗提供 依据。
免疫检测法在性病检测中发挥着重要 作用，如梅毒、淋病、尖锐湿疣等， 通过检测相关抗体和抗原，及时发现 和治疗性病。
肝炎检测
缺点
01
02
03
04
交叉反应
有时会出现交叉反应，导致假 阳性结果。
抗体依赖
免疫检测法依赖于抗体的质量 和特异性，因此抗体制备的难
度和成本较高。
样品处理要求高
对于某些生物样品，需要进行 复杂的预处理才能进行检测。
检测时间较长
相对于一些快速检测方法，免 疫检测法可能需要更长时间才
能获得结果。
改进方向
分类
根据检测原理和应用领域，免疫 检测法可分为酶联免疫吸附试验 、放射免疫分析、荧光免疫分析 、化学发光免疫分析等。
免疫检测法的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测人体内的肿瘤标 志物、激素、病毒抗原、 药物残留等，辅助医生进 行疾病诊断和病情监测。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留、毒素等有 害物质，保障食品安全。
情监测。
激素水平检测
性激素检测
通过检测性激素水平，有助于评估男性和女性的生殖健康状况，如 睾酮、雌二醇、孕酮等激素的检测。
甲状腺激素检测
甲状腺激素对人体的新陈代谢和生长发育具有重要作用，通过检测 甲状腺激素水平，有助于甲状腺功能亢进和减退的诊断和治疗。
肾上腺激素检测
肾上腺激素与人体应激反应、免疫功能等方面密切相关，通过检测肾 上腺激素水平，有助于相关疾病的诊断和治疗。Fra bibliotek传染病检测
结核病检测
性病检测
通过检测结核病抗体，有助于早期发 现和诊断结核病，为预防和治疗提供 依据。
免疫检测法在性病检测中发挥着重要 作用，如梅毒、淋病、尖锐湿疣等， 通过检测相关抗体和抗原，及时发现 和治疗性病。
肝炎检测
免疫分析法ppt
酶联免疫分析法——应用2
2、放射免疫分析法(RIA)
• 简介
1959 年美国的 Yalow 和 Berson 首先使用放射性核 素标记胰岛素从而创立了放射免疫分析法 (radioimmunoassay，RIA)。
• 定义:把放射性核素测定与抗原、抗体间的免疫
化学反应两种方法巧妙地结合起来所形成的一种 超微量物质的测定方法。
兴奋剂检测的主要方法有气相色谱、高
效液相色谱、气相色谱－质谱联用、液相 色谱－质谱联用、免疫分析法、流动注射 电化学发光、高效毛细管电泳、毛细管电 泳－离子阱质谱等方法。
二、免疫分析法
免疫分析法是利用抗原与抗体的特异 性免疫反应来实现对禁用药物的检测的 方法。
特点：快速、高灵敏度、高特异性。 应用：主要被应用于类固醇类兴奋剂 和激素类兴奋剂的检测。
免疫分析法ppt
兴奋剂的检测方法
之免疫分析法
一、兴奋剂的概念 二、免疫分析法
（1）酶联免疫分析法 （2）放射64年，国际运动医学会的国际兴奋剂 会议将兴奋剂的概念定义为: 参加竞赛的 运动员使用任何异体物质，或以不正常的 量和不正常的进入机体的途径使用生理物 质，试图人为地以不正当方式提高其竞赛 成绩的行为。
抽干。
4、结果
γ一记数 仪记数， 并自动计 算尿中MA
浓度 (ng·ml-1)
3、化学发光免疫分析法（CLIA）
1977年Halman将化学反应系统与免疫系统相 结合，创建了化学发光免疫测定法(CLIA )，以检 测抗原或抗体。CLIA是建立放射免疫分析技术 (RIA)基础上的免疫分析技术，既有免疫反应的 特异性，更兼有发光反应的高敏感。
1、酶联免疫分析法(ELISA)
酶联免疫分析法——原理
免疫算法介绍PPT课件
离散和连续的优化问题。
应用领域
免疫算法在多个领域得到广泛应用，如组 合优化、机器学习、数据挖掘、电力系统、 生产调度等。
研究现状
目前，免疫算法的研究已经取得了一定的 成果，但仍存在一些挑战和问题，如算法 的收敛速度和稳定性等。
研究展望
理论完善
未来研究将进一步完善免疫 算法的理论基础，包括免疫 系统的数学模型、算法的收 敛性和稳定性分析等。
缺点分析
计算量大
参数设置复杂
免疫算法需要进行大量的迭代和计算，尤 其在处理大规模优化问题时，计算量会变 得非常大，导致算法的运行时间较长。
免疫算法涉及的参数较多，参数设置对算 法的性能影响较大，如果参数设置不当， 可能导致算法的性能下降甚至无法收敛。
对初始解敏感
适用性问题
免疫算法对初始解有较强的依赖性，如果 初始解的质量较差，可能会导致算法陷入 局部最优解或无法收敛。
新方法探索
跨领域应用
针对免疫算法的改进和变种， 未来研究将探索新的免疫算 法，如基于免疫遗传算法、 免疫粒子群算法等。
随着大数据、人工智能等技 术的快速发展，免疫算法有 望在更多领域得到应用，如 医疗诊断、金融风控等。
与其他算法融合
未来研究将探索免疫算法与 其他优化算法的融合，如混 合算法、协同进化等，以提 高算法的性能和适应性。
控制系统
优化控制系统的参数，提高系 统的性能和稳定性。
02
免疫算法的基本原理
生物免疫系统概述
生物免疫系统是生物体内一套复杂的防御机制，用于识别和清除外来物质，维持内 环境稳定。
免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成，具有高度的组织结构和功能分化。
免疫应答是免疫系统对外来抗原的识别、记忆和清除过程，分为非特异性免疫和特 异性免疫两类。
应用领域
免疫算法在多个领域得到广泛应用，如组 合优化、机器学习、数据挖掘、电力系统、 生产调度等。
研究现状
目前，免疫算法的研究已经取得了一定的 成果，但仍存在一些挑战和问题，如算法 的收敛速度和稳定性等。
研究展望
理论完善
未来研究将进一步完善免疫 算法的理论基础，包括免疫 系统的数学模型、算法的收 敛性和稳定性分析等。
缺点分析
计算量大
参数设置复杂
免疫算法需要进行大量的迭代和计算，尤 其在处理大规模优化问题时，计算量会变 得非常大，导致算法的运行时间较长。
免疫算法涉及的参数较多，参数设置对算 法的性能影响较大，如果参数设置不当， 可能导致算法的性能下降甚至无法收敛。
对初始解敏感
适用性问题
免疫算法对初始解有较强的依赖性，如果 初始解的质量较差，可能会导致算法陷入 局部最优解或无法收敛。
新方法探索
跨领域应用
针对免疫算法的改进和变种， 未来研究将探索新的免疫算 法，如基于免疫遗传算法、 免疫粒子群算法等。
随着大数据、人工智能等技 术的快速发展，免疫算法有 望在更多领域得到应用，如 医疗诊断、金融风控等。
与其他算法融合
未来研究将探索免疫算法与 其他优化算法的融合，如混 合算法、协同进化等，以提 高算法的性能和适应性。
控制系统
优化控制系统的参数，提高系 统的性能和稳定性。
02
免疫算法的基本原理
生物免疫系统概述
生物免疫系统是生物体内一套复杂的防御机制，用于识别和清除外来物质，维持内 环境稳定。
免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成，具有高度的组织结构和功能分化。
免疫应答是免疫系统对外来抗原的识别、记忆和清除过程，分为非特异性免疫和特 异性免疫两类。
免疫分析法
（一）半抗原和载体结合的化学反应 1、多肽类激素
（1）活化蛋白质或多肽的游离羧基形成肽键的结合剂 碳化二亚胺类（EDC） 异唑盐类 烷基氯甲酸类
（一）半抗原和载体结合的化学反应
（2）连接氨基的结合剂 二异腈酸类 二亚胺酯 卤代硝基苯
（一）半抗原和载体结合的化学反应
2、甾体
甾体激素不能直接和载体蛋白形成有效的共 价键，因此需要先制备甾体的衍生物（含游离的 羧基），然后再与载体蛋白连接，制成全抗原。 （1）甾体衍生物的制备 琥珀酸衍生物 肟衍生物 （2）甾体衍生物和蛋白质的结合反应
腹水制备法：常规是先腹腔注射0.5ml 液体石蜡（主要是 为了防止动物的排斥反应）于小鼠，1～2周后腹腔注射 1×106个杂交瘤细胞，接种细胞7～10天后可产生腹水， 密切观察动物的健康状况与腹水征象，待腹水尽可能多， 而小鼠死亡之前，处死小鼠，用滴管或注射器将腹水吸入 试管中，一般一只小鼠可获5～10mL腹水。腹水中单克隆 抗体含量可达到0.5～5mg/mL，这是目前最常用的方法。
去掉福氏完全佐剂中的卡介苗即为不完全佐剂。
一、全抗原和半抗原
3、药物分子的抗原特异性
1）实践中，当药物分子和蛋白质载体结合后，诱导 机体产生的抗体通常为不均一抗体。即：有多个 不同的抗体，各抗体的特异性略不相同；
2）和蛋白质的结合还可能导致药物分子原有抗原特 异性的改变—抗原决定簇改变。
二、人工抗原的合成
抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答 的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
四、抗体的制备
免疫分析中，常用到的两类抗体为抗血清 （多克隆抗体）和单克隆抗体。 1、抗血清 抗血清，通常指由抗原直接免疫动物后所制成 的多克隆抗体，它是免疫分析中的重要工具。 抗血清也称免疫血清，要获得一种质量好的抗 血清，主要有免疫原的制备、动物免疫、放血、 抗血清分离及抗血清的分析鉴定等步骤。
（1）活化蛋白质或多肽的游离羧基形成肽键的结合剂 碳化二亚胺类（EDC） 异唑盐类 烷基氯甲酸类
（一）半抗原和载体结合的化学反应
（2）连接氨基的结合剂 二异腈酸类 二亚胺酯 卤代硝基苯
（一）半抗原和载体结合的化学反应
2、甾体
甾体激素不能直接和载体蛋白形成有效的共 价键，因此需要先制备甾体的衍生物（含游离的 羧基），然后再与载体蛋白连接，制成全抗原。 （1）甾体衍生物的制备 琥珀酸衍生物 肟衍生物 （2）甾体衍生物和蛋白质的结合反应
腹水制备法：常规是先腹腔注射0.5ml 液体石蜡（主要是 为了防止动物的排斥反应）于小鼠，1～2周后腹腔注射 1×106个杂交瘤细胞，接种细胞7～10天后可产生腹水， 密切观察动物的健康状况与腹水征象，待腹水尽可能多， 而小鼠死亡之前，处死小鼠，用滴管或注射器将腹水吸入 试管中，一般一只小鼠可获5～10mL腹水。腹水中单克隆 抗体含量可达到0.5～5mg/mL，这是目前最常用的方法。
去掉福氏完全佐剂中的卡介苗即为不完全佐剂。
一、全抗原和半抗原
3、药物分子的抗原特异性
1）实践中，当药物分子和蛋白质载体结合后，诱导 机体产生的抗体通常为不均一抗体。即：有多个 不同的抗体，各抗体的特异性略不相同；
2）和蛋白质的结合还可能导致药物分子原有抗原特 异性的改变—抗原决定簇改变。
二、人工抗原的合成
抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答 的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
四、抗体的制备
免疫分析中，常用到的两类抗体为抗血清 （多克隆抗体）和单克隆抗体。 1、抗血清 抗血清，通常指由抗原直接免疫动物后所制成 的多克隆抗体，它是免疫分析中的重要工具。 抗血清也称免疫血清，要获得一种质量好的抗 血清，主要有免疫原的制备、动物免疫、放血、 抗血清分离及抗血清的分析鉴定等步骤。
临床免疫学检验课件第11章固相膜免疫分析技术ppt
收峰波长增长， A680/A519比值增大。 肉眼观察胶体金颜色或测定其吸收峰波长的变化粗
略预估胶体金直径大小
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
不同直径金颗粒的呈色性和光吸收性
胶体金颗粒 （nm）
?斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold
filtration assay, DIGFA) ?斑点金免疫层析试验（dot immunogold
胶体金免 疫技术
chromatography assay, DICA)
?斑点酶免疫吸附试验(dot enzyme linked immunospot assay
（2）保存 ： ? 洁净的玻璃容器；室温避光无灰尘环境中保 存3个月，4℃保存半年 ? 避免冻存：导致胶体金聚集。 ? 20天内标记：胶体金的不稳定性
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
（三）免疫金的制备(P53)
,Dot-ELISA)
?免疫印迹法(immunoblotting test, IBT)
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
第一节 胶体金免疫技术
colloidal gold immunoassay 1.原理：
胶体金特性 ? 胶体特性 ? 呈色性和光吸收性 ? 稳定性 ? 聚沉现象
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
略预估胶体金直径大小
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
不同直径金颗粒的呈色性和光吸收性
胶体金颗粒 （nm）
?斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold
filtration assay, DIGFA) ?斑点金免疫层析试验（dot immunogold
胶体金免 疫技术
chromatography assay, DICA)
?斑点酶免疫吸附试验(dot enzyme linked immunospot assay
（2）保存 ： ? 洁净的玻璃容器；室温避光无灰尘环境中保 存3个月，4℃保存半年 ? 避免冻存：导致胶体金聚集。 ? 20天内标记：胶体金的不稳定性
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
（三）免疫金的制备(P53)
,Dot-ELISA)
?免疫印迹法(immunoblotting test, IBT)
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
第一节 胶体金免疫技术
colloidal gold immunoassay 1.原理：
胶体金特性 ? 胶体特性 ? 呈色性和光吸收性 ? 稳定性 ? 聚沉现象
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
《酶联免疫分析法》课件
酶联免疫分析法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。
酶联免疫分析法广泛应用于医学、生物学、环境科学等领域。
分类：直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法等 应用：临床诊断、药物研发、食品安全检测、环境监测等领域 优点：灵敏度高、特异性强、操作简便、成本低等 局限性：存在假阳性和假阴性结果，需要标准化操作和严格的质量控制
汇报人：PPT
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CONTENTS
PART ONE
PART TWO
酶联免疫分析法（ELISA）是一种免疫学检测方法，用于检测样品中的抗原或抗体。
原理：利用抗原-抗体特异性结合的原理，通过酶催化底物产生颜色反应，从而定量或定性检测样品中的抗原或 抗体。
优点：灵敏度高，特异性强，检测速度快，操作简便 缺点：成本较高，需要专业人员操作，容易受到环境因素影响
PART THREE
抗原选择：选择合适的抗原，如蛋 白质、多肽等
抗原标记：将抗原与酶或荧光素等 标记物结合
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
抗原纯化：通过离心、层析等方法 纯化抗原
抗原保存：将标记好的抗原保存在 适当的条件下，如低温、避光等
检测水中有机污染物：如农药、多 环芳烃等
检测土壤中的污染物：如重金属、 有机氯农药等
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
检测空气中的污染物：如二氧化硫、 氮氧化物等
检测生物体内的污染物：如农药残 留、重金属等
蛋白质定量分析：通过酶联免疫分析法检测蛋白质的浓度 抗体检测：通过酶联免疫分析法检测抗体的存在和浓度 细胞因子检测：通过酶联免疫分析法检测细胞因子的存在和浓度 基因表达分析：通过酶联免疫分析法检测基因的表达水平和调控机制
酶联免疫分析法广泛应用于医学、生物学、环境科学等领域。
分类：直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法等 应用：临床诊断、药物研发、食品安全检测、环境监测等领域 优点：灵敏度高、特异性强、操作简便、成本低等 局限性：存在假阳性和假阴性结果，需要标准化操作和严格的质量控制
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CONTENTS
PART ONE
PART TWO
酶联免疫分析法（ELISA）是一种免疫学检测方法，用于检测样品中的抗原或抗体。
原理：利用抗原-抗体特异性结合的原理，通过酶催化底物产生颜色反应，从而定量或定性检测样品中的抗原或 抗体。
优点：灵敏度高，特异性强，检测速度快，操作简便 缺点：成本较高，需要专业人员操作，容易受到环境因素影响
PART THREE
抗原选择：选择合适的抗原，如蛋 白质、多肽等
抗原标记：将抗原与酶或荧光素等 标记物结合
添加标题
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添加标题
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抗原纯化：通过离心、层析等方法 纯化抗原
抗原保存：将标记好的抗原保存在 适当的条件下，如低温、避光等
检测水中有机污染物：如农药、多 环芳烃等
检测土壤中的污染物：如重金属、 有机氯农药等
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
检测空气中的污染物：如二氧化硫、 氮氧化物等
检测生物体内的污染物：如农药残 留、重金属等
蛋白质定量分析：通过酶联免疫分析法检测蛋白质的浓度 抗体检测：通过酶联免疫分析法检测抗体的存在和浓度 细胞因子检测：通过酶联免疫分析法检测细胞因子的存在和浓度 基因表达分析：通过酶联免疫分析法检测基因的表达水平和调控机制
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剂检测的主要方法有气相色谱、高 效液相色谱、气相色谱－质谱联用、液相 色谱－质谱联用、免疫分析法、流动注射 电化学发光、高效毛细管电泳、毛细管电 泳－离子阱质谱等方法。
2018/10/31
二、免疫分析法
免疫分析法是利用抗原与抗体的特异 性免疫反应来实现对禁用药物的检测的 方法。 特点：快速、高灵敏度、高特异性。 应用：主要被应用于类固醇类兴奋剂 和激素类兴奋剂的检测。
2018/10/31
酶联免疫分析法——应用2
• Eva M 等将牛血清白蛋白多克隆抗体与孕三烯酮3 - 羧甲基羟胺耦合，创建了两种高灵敏度、特异 的检测孕三烯酮的酶联免疫分析法。实验A，半抗 原蛋白涂层条件下的检测限为0.09±0.03ng.L-1。 实验B，在共轭蛋白涂层的条件下，检测限可达到 0.14±0.05 ng.L-1。两个免疫测试都具有高特异 性，与其他合成代谢类固醇没有任何交叉反应。 一般条件下的可运用于未预处理的尿液样本中类 固醇的检测，回收率可达到76~122%。
放射免疫分析法——特点
• 缺点： 1.检测中有放射性污染，对操作人员有一定的 辐射损害； 2.放射性废物处理上的困难和对环境有一定的 污染；
放射免疫分析法——应用
（尿液中苯丙胺类兴奋剂的检测）
甲基苯丙胺(MA)属于苯丙胺类兴奋剂，作 用于中枢神经系统，具有药物依赖性及毒理 学特性，是我国最为严重的滥用毒品之一。 甲基苯丙胺(MA)及其代谢物自尿排出体外， 可以通过检测尿液中的苯丙胺类兴奋剂及其 代谢物来认定吸毒者。通过建立甲基苯丙胺 放射免疫分析法 ，采用碳化二亚胺法制备甲 基苯丙胺半抗原，免疫兔使其产生相应的抗 体与Na125I标记抗原组成试剂盒，检测人体体 液中的甲基苯丙胺(MA)。
2018/10/31
酶联免疫分析法——应用2
2018/10/31
2、放射免疫分析法(RIA)
• 简介
1959 年美国的 Yalow 和 Berson 首先使用放射性核 素标记胰岛素从而创立了放射免疫分析法 (radioimmunoassay，RIA)。
• 定义:把放射性核素测定与抗原、抗体间的免疫
产物与显色成正比，因此可通过酶标仪来测定， 从而确定是否存在未知抗原及其含量。
2018/10/31
酶联免疫分析法——原理
2018/10/31
酶联免疫分析法——特点
优点：快速 特异性强 分析容量大 安全可靠 应用：适用在现场筛选和大量样本的快速检测
2018/10/31
酶联免疫分析法——应用1
• Daniel 等用酶联免疫分析法多项检测，定性、定
标准曲线
放射免疫分析法——特点
• 优点： 1.灵敏度高，其最小检测值可达ng至pg水平; 2.特异性强:由于抗原抗体反应的高度特异性， 该方法具有很强的特异性不需要对样品进行提纯 即可直接测定; 3.重复性好、准确性佳、快速简便，免除了烦 琐的化学提纯步骤； 4. 药盒种类多、标本和试剂用量少，测定方法 易于规范化和自动化等。
放射免疫分析法——应用
1、采样 2、样品前处理
3、检测
取50μL样品、 100μL 1:600抗 血清和100μL 125I-MA;37℃孵 育45min，加 分离剂500μL， 放置15min， 以3000r·min1离心15min， 抽干。
4、结果
1天分8个时 间段，上、 下午各采四 次，每组间 隔45min； 收集的尿液 在-20℃保存 待检验
化学反应两种方法巧妙地结合起来所形成的一种 超微量物质的测定方法。
2、放射免疫分析法(RIA)
2018/10/31
放射免疫分析法——原理
• 建立在标记抗原(*Ag)和非标记抗原(Ag)对限量的特异性抗体 （Ab）的竞争性结合反应。 • *Ag与 Ag 具有等同的与Ab结合能力。 • 竞争结合反应可用下式表示： *Ag + Ab↔*Ag-Ab + Ag ↕ Ag-Ab
2018/10/31
二、免疫分析法
分类： （1）酶联免疫分析( enzyme－ linkedimmunosorbent assay，ELISA) （2）化学发光免疫分析 ( chemiluminescence immunoassay，CIA) （3）放射免疫分析( radioimmunoassay， RIA)
量检测了蛋白同化激素。这个方案结合不同的交
叉反应性与分布多元数据分析技术的多元竞争 ELISA实验。用新型k-最近邻分类法分析了主成分。 这个方案可以同时检测四种浓度范围为0.1 316.2nmol/L不同的类固醇，甚至在交叉反应的前
提下总的检测正确率也可达90.6%。
2018/10/31
酶联免疫分析法——应用1
兴奋剂的检测方法
之免疫分析法
小组成员：鲁梦霞、熊晴、闫晓玉、潘存丽
2018/10/31
兴奋剂的检测方法
之免疫分析法
一、兴奋剂的概念 二、免疫分析法 （1）酶联免疫分析法 （2）放射免疫分析法 （3）化学发光分析法
2018/10/31
一、兴奋剂的概念
1964年，国际运动医学会的国际兴奋剂 会议将兴奋剂的概念定义为: 参加竞赛的 运动员使用任何异体物质，或以不正常的 量和不正常的进入机体的途径使用生理物 质，试图人为地以不正当方式提高其竞赛 成绩的行为。
放射免疫分析法——原理
用已知不同浓度 的标准物Ag和一 定量的*Ag及限 量的Ab反应，随 着Ag增加， *Ag 与Ab结合的少， 二者变化如右图 所示。游离的 *Ag为F, *Ag-Ab为 B。
RIA反应示意图
放射免疫分析法——原理
B／(B+F)与Ag的量存在 着函数关系，绘制得标 准曲线。将未知浓度 样品按同样条件操作， 所得结合率(％)与标准 曲线相比，即可得出样 品中待测抗原的浓度。 注：T=B+F
2018/10/31
1、酶联免疫分析法(ELISA)
2018/10/31
1、酶联免疫分析法(ELISA)
2018/10/31
酶联免疫分析法——原理
通过在合适的载体上酶标一定量的抗原与未知抗
原竞争固相抗体结合位点，形成抗体复合物。在
一定底物参与下，复合物上的酶催化底物使其水
解氧化或还原成另一种带色物质，由于酶的降解
2018/10/31
二、免疫分析法
免疫分析法是利用抗原与抗体的特异 性免疫反应来实现对禁用药物的检测的 方法。 特点：快速、高灵敏度、高特异性。 应用：主要被应用于类固醇类兴奋剂 和激素类兴奋剂的检测。
2018/10/31
酶联免疫分析法——应用2
• Eva M 等将牛血清白蛋白多克隆抗体与孕三烯酮3 - 羧甲基羟胺耦合，创建了两种高灵敏度、特异 的检测孕三烯酮的酶联免疫分析法。实验A，半抗 原蛋白涂层条件下的检测限为0.09±0.03ng.L-1。 实验B，在共轭蛋白涂层的条件下，检测限可达到 0.14±0.05 ng.L-1。两个免疫测试都具有高特异 性，与其他合成代谢类固醇没有任何交叉反应。 一般条件下的可运用于未预处理的尿液样本中类 固醇的检测，回收率可达到76~122%。
放射免疫分析法——特点
• 缺点： 1.检测中有放射性污染，对操作人员有一定的 辐射损害； 2.放射性废物处理上的困难和对环境有一定的 污染；
放射免疫分析法——应用
（尿液中苯丙胺类兴奋剂的检测）
甲基苯丙胺(MA)属于苯丙胺类兴奋剂，作 用于中枢神经系统，具有药物依赖性及毒理 学特性，是我国最为严重的滥用毒品之一。 甲基苯丙胺(MA)及其代谢物自尿排出体外， 可以通过检测尿液中的苯丙胺类兴奋剂及其 代谢物来认定吸毒者。通过建立甲基苯丙胺 放射免疫分析法 ，采用碳化二亚胺法制备甲 基苯丙胺半抗原，免疫兔使其产生相应的抗 体与Na125I标记抗原组成试剂盒，检测人体体 液中的甲基苯丙胺(MA)。
2018/10/31
酶联免疫分析法——应用2
2018/10/31
2、放射免疫分析法(RIA)
• 简介
1959 年美国的 Yalow 和 Berson 首先使用放射性核 素标记胰岛素从而创立了放射免疫分析法 (radioimmunoassay，RIA)。
• 定义:把放射性核素测定与抗原、抗体间的免疫
产物与显色成正比，因此可通过酶标仪来测定， 从而确定是否存在未知抗原及其含量。
2018/10/31
酶联免疫分析法——原理
2018/10/31
酶联免疫分析法——特点
优点：快速 特异性强 分析容量大 安全可靠 应用：适用在现场筛选和大量样本的快速检测
2018/10/31
酶联免疫分析法——应用1
• Daniel 等用酶联免疫分析法多项检测，定性、定
标准曲线
放射免疫分析法——特点
• 优点： 1.灵敏度高，其最小检测值可达ng至pg水平; 2.特异性强:由于抗原抗体反应的高度特异性， 该方法具有很强的特异性不需要对样品进行提纯 即可直接测定; 3.重复性好、准确性佳、快速简便，免除了烦 琐的化学提纯步骤； 4. 药盒种类多、标本和试剂用量少，测定方法 易于规范化和自动化等。
放射免疫分析法——应用
1、采样 2、样品前处理
3、检测
取50μL样品、 100μL 1:600抗 血清和100μL 125I-MA;37℃孵 育45min，加 分离剂500μL， 放置15min， 以3000r·min1离心15min， 抽干。
4、结果
1天分8个时 间段，上、 下午各采四 次，每组间 隔45min； 收集的尿液 在-20℃保存 待检验
化学反应两种方法巧妙地结合起来所形成的一种 超微量物质的测定方法。
2、放射免疫分析法(RIA)
2018/10/31
放射免疫分析法——原理
• 建立在标记抗原(*Ag)和非标记抗原(Ag)对限量的特异性抗体 （Ab）的竞争性结合反应。 • *Ag与 Ag 具有等同的与Ab结合能力。 • 竞争结合反应可用下式表示： *Ag + Ab↔*Ag-Ab + Ag ↕ Ag-Ab
2018/10/31
二、免疫分析法
分类： （1）酶联免疫分析( enzyme－ linkedimmunosorbent assay，ELISA) （2）化学发光免疫分析 ( chemiluminescence immunoassay，CIA) （3）放射免疫分析( radioimmunoassay， RIA)
量检测了蛋白同化激素。这个方案结合不同的交
叉反应性与分布多元数据分析技术的多元竞争 ELISA实验。用新型k-最近邻分类法分析了主成分。 这个方案可以同时检测四种浓度范围为0.1 316.2nmol/L不同的类固醇，甚至在交叉反应的前
提下总的检测正确率也可达90.6%。
2018/10/31
酶联免疫分析法——应用1
兴奋剂的检测方法
之免疫分析法
小组成员：鲁梦霞、熊晴、闫晓玉、潘存丽
2018/10/31
兴奋剂的检测方法
之免疫分析法
一、兴奋剂的概念 二、免疫分析法 （1）酶联免疫分析法 （2）放射免疫分析法 （3）化学发光分析法
2018/10/31
一、兴奋剂的概念
1964年，国际运动医学会的国际兴奋剂 会议将兴奋剂的概念定义为: 参加竞赛的 运动员使用任何异体物质，或以不正常的 量和不正常的进入机体的途径使用生理物 质，试图人为地以不正当方式提高其竞赛 成绩的行为。
放射免疫分析法——原理
用已知不同浓度 的标准物Ag和一 定量的*Ag及限 量的Ab反应，随 着Ag增加， *Ag 与Ab结合的少， 二者变化如右图 所示。游离的 *Ag为F, *Ag-Ab为 B。
RIA反应示意图
放射免疫分析法——原理
B／(B+F)与Ag的量存在 着函数关系，绘制得标 准曲线。将未知浓度 样品按同样条件操作， 所得结合率(％)与标准 曲线相比，即可得出样 品中待测抗原的浓度。 注：T=B+F
2018/10/31
1、酶联免疫分析法(ELISA)
2018/10/31
1、酶联免疫分析法(ELISA)
2018/10/31
酶联免疫分析法——原理
通过在合适的载体上酶标一定量的抗原与未知抗
原竞争固相抗体结合位点，形成抗体复合物。在
一定底物参与下，复合物上的酶催化底物使其水
解氧化或还原成另一种带色物质，由于酶的降解