接种点柄乳牛肝菌对樟子松枯梢病抗病性的影响
在高寒地区樟子松育苗中应用外生菌根真菌的效应
在高寒地区樟子松育苗中应用外生菌根真菌的效应
孟繁荣;邵景文;赵云喜;马继兰;邵桂顺
【期刊名称】《林业科学研究》
【年(卷),期】1991(000)005
【摘要】人工接种外生菌根真菌对高寒地区樟子松新播苗、移植苗的生长有明显的促进作用,苗高、地径、侧根数、干重和菌根化程度均比对照有较大提高。
随着苗木生长期的延长,这种积极作用越显著。
根据各项生长指标综合分析,筛选出的优良菌种为:臭红菇(Russula foetens)、牛肝菌(Boletus sp.)、血红铆钉菇(Gomphidius rutilus)。
【总页数】5页(P523-527)
【作者】孟繁荣;邵景文;赵云喜;马继兰;邵桂顺
【作者单位】东北林业大学;黑龙江省塔河林业局;黑龙江省塔河林业局
【正文语种】中文
【中图分类】S7
【相关文献】
1.在高寒地区落叶松育苗中应用外生菌根真菌的效应 [J], 孟繁荣;牟宝昌
2.外生菌根真菌在油松育苗中的应用 [J], 李雪林;马建龙
3.坝上高寒地区樟子松换床育苗技术与管理 [J], 王立军
4.坝上高寒地区樟子松容器育苗技术 [J], 韩占彪;赵铮;何占东
5.高寒地区樟子松育苗技术要点 [J], 杨凤霞
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一株樟子松-褐环乳牛肝菌菌根辅助细菌的筛选和鉴定
http : //D01:10.3969/j.issn.1000-1700.2020.06.006沈阳农业大学学报,2020,51(6)： 680-687Journal of Shenyang Agricultural University宋小双，邓 勋,遇文婧，等:一株樟子松-褐环乳牛肝菌菌根辅助细菌的筛选和鉴定[J].沈阳农业大学学报,2020,51(6):680-687.—株樟子松-褐环乳牛肝菌菌根辅助细菌的筛选和鉴定宋小双X邓 勋1,2袁遇文婧X闵 凯3袁周 琦1,2(1.黑龙江省森林保护研究所,哈尔滨150040；2.黑龙江省森林草原火灾及病虫害防控重点实验室，哈尔滨150040；3.大庆油田矿区服务事业部，黑龙江大庆163000)摘 要:菌根辅助细菌(mycorrhiza helper bacteria, MHB )可以促进菌根真菌在宿主植物根部定殖形成菌根共生结构，是外生菌根 菌际重要微生物类群。
为探讨菌根际有益微生物之间的互作对樟子松渊Pinus sylvestris var. mongolica)实生苗生长的影响,对分离 自樟子松-褐环乳牛肝菌渊Suillus luteus )菌根根际土壤的75株细菌，采用干皿对抗法、细菌胞外代谢产物促生法筛选MHB 潜力菌 株。
以MHB 潜力菌株对樟子松1年生苗的苗高、地径、菌根侵染率的影响为指标，筛选岀菌根辅助细菌。
通过细菌的形态、生理生 化指标、16S rRNA 基因序列鉴定细菌种类。
结果表明：菌株MHBZ039和MHBZ043处理在干皿对抗试验中，同对照相比，褐环乳 牛肝菌N94菌丝增长率分别为20.11%和18.63%，胞外代谢产物促生实验N94菌落直径增长率分别为91.89%和85.41%,菌丝生 物量的增长率分别达到42.11%和25.32%遥盆栽试验中，双接种处理褐环乳牛肝菌N94+MHBZ039和N94+MHBZ043,菌根侵染率 分别为57.77%和56.46%,苗高和地径同对照相比分别提高28.42%,40.32%和21.41%,34.86%遥确定MHBZ039为樟子松-褐环乳牛肝 菌菌根辅助细菌。
樟子松苗木促生长高效外生菌根菌的筛选
樟子松苗木促生长高效外生菌根菌的筛选作者：别格坚巴哈提，邓玉侠，尹大川等来源：《林业科技》 2017年第3期摘要：采用离体培养法制备的6种菌剂对1年生樟子松苗木进行接种，接种3个月后观察苗木的生长情况表明，褐环乳牛肝菌和厚环乳牛肝菌的菌根合成率最高，均达到65%以上，说明这2种菌对樟子松有良好的契合度。
褐环乳牛肝菌和厚环乳牛肝菌在促进樟子松苗木苗高和地径生长方面效果最为理想，在鲜重方面也是最高，说明褐环乳牛肝菌和厚环乳牛肝菌应为樟子松苗木的高效外生菌根菌。
关键词：樟子松；外生菌根菌；筛选外生菌根(Ectomycorrhiza)是由外生菌根真菌通过菌丝体包围并侵染树木的根形成的互惠共生体，是非常重要的一种菌根类型[ 1 ]，其主要的形成对象，也就是菌根菌的宿主植物多为针叶高大乔木。
外生菌根真菌(Ectomycorrhizal fungi ECM)是指能与宿主植物形成外生菌根的真菌，在自然界中广泛存在，是森林生态系统中最重要的菌类[ 2 - 3 ]。
樟子松（Pinus sylvestris var. mongolica）是我国北方主要的造林树种，是欧洲赤松(Pinus sylvestris)在蒙古地区的一个变种。
樟子松树形优美、四季常青，既是庭院观赏和街道绿化树种，也是我国“三北”地区主要用材树种之一。
本文通过野外采集，共分离出疑似樟子松外生菌根菌6种，通过离体培养法制备出菌剂，并对1年生樟子松苗木进行接种。
在生长季节过后观察苗木的生长情况，以期筛选出樟子松的高效外生菌根真菌。
. 1 试验材料的制备1. 1. 1 菌株的采集采用组织分离培养法，分离选用PDA斜面培养基。
具体操作如下：在野外对采集的子实体用75%酒精棉进行全面消毒。
消毒后取菌柄与菌伞交界处组织，迅速放到已经装好培养基的试管内，火焰下操作（相对无菌）。
菌株带回实验室后，每天观察，待长出菌落后，采用PDA平板培养基进行纯化得到纯菌株（表1）。
接种褐环乳牛肝菌对樟子松及油松根际土壤细菌群落的影响
ＢＡＯ Ｒｕｎ⁃ｚｅ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉｎｇ，ＹＡＯ Ｑｉｎｇ⁃ｚｈｉ （ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｏｈｈｏｔ，Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ
０１００１８）
Ａｂｓｔｒａｃｔ ［ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒ⁃ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｐｉｎｅｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｓ．ｌｕｔｅｕｓ．Ｔｈｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｇｅｎｕｓ ｃｈａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ Ｐｓｅｕｄａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｔｏ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ＲＢ４１．Ｔｈｅ ｇｅｎｕｓ ｏｆ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｂｕｎｄａｎｃｅ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｓ．ｌｕｔｅｕｓ ｗａｓ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｔｓ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｐＨ ｖａｌｕｅ．［ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］
文章编号 ０５１７－６６１１（２０２３）０６－０１４８－０４
ｄｏｉ：１０．３９６９ ／ ｊ．ｉｓｓｎ．０５１７－６６１１．２０２３．０６．０３６
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ ｏｎ Ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ Ｓｏｉｌ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｐｉｎｕｓ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ ｖａｒ．ｍｏｎｇｏｌｉｃａ ａｎｄ Ｐ．ｔａｂｕｌａｅ⁃
松枯梢病拮抗细菌的筛选、鉴定及拮抗活性的初步研究
松枯梢病拮抗细菌的筛选、鉴定及拮抗活性的初步研究王凤各;叶建仁【摘要】从江苏省林业科学研究院、南京市中山陵(水榭、灵谷寺)、南京林业大学(树木园、苗圃)等地采集,于南京林业大学二级学科国家重点学科森林保护学实验室分离得到1株对松枯梢病菌有明显抑制作用的拮抗细菌,将其命名为JS-JK8.经形态学、BIOLOG、分子生物学将其鉴定为芽孢杆菌属菌株.生长测试表明,JS-JK8在PDA培养基28C培养5h达到对数期生长.以松枯梢病为指示菌,抗菌活性物质产生条件为:1％转接种龄1d,28℃培养48 h.【期刊名称】《宜春学院学报》【年(卷),期】2016(038)003【总页数】7页(P88-93,123)【关键词】松枯梢病;分离;鉴定;抗菌【作者】王凤各;叶建仁【作者单位】皖南医学院药学院,安徽芜湖241002;南京林业大学林学院,南京210037【正文语种】中文【中图分类】X703.1松枯梢病(Sphaeropsis sapinea(Fr.)Dyko＆Sutton)引起的危害具有发病广、危害严重、病期久的等特征，分布在全世界二十多个国家，主要发生国为南非、美国、新西兰、中国、澳大利亚、荷兰、智利等国［1］。
病情严重者枝梢枯死，引起相当大的损失。
据研究，因病砍伐未成熟病树造成的木材损失达28%，潜在的木材损失达55%［2，3］。
在我国境内，已有湖南、湖北、广东、江苏、黑龙江、江西等地相继报道了松枯梢病等病情的蔓延［4］。
从1909年南非报道发现松枯梢病起，对该病的观察研究已达近100年历史，1937年前南非学者就观察到树木受伤后容易盛病，生长于潮湿和土坡贫府的立地条件下，树木容易感病［5］。
对此病害的防治目前仍以化学防治为主，但防治效果并不理想。
研究和利用松树自然生态系中以及枯梢病斑上的拮抗微生物，防治病害的发生，改善松体微生物环境，恶化病菌生境，对枯梢病的可持续控制有着重要意义［6］。
国外曾报道体外实验中，Trichodermna hazianum和壳聚糖对Sapstain的抑制效果［7，8］。
樟子松常见病虫害及防治
文章编号:1005-2690(2020)02-0068-01中图分类号:S763.7文献标志码:B樟子松常见病虫害及防治张卓（国有彰武县章古台林场，辽宁阜新123203）摘要:樟子松在生长过程中，病虫害严重为害樟子松的健康生长，主要探讨了樟子松常见病虫害及防治措施。
关键词:樟子松；病虫害；防治1樟子松常见病害及防治1.1樟子松红斑病樟子松红斑病主要是由真菌引起的，具有较强的传染性，主要传播途径包括雨水和风力。
红斑病严重威胁樟子松的正常生长，严重的会造成樟子松萎缩和死亡。
该病发生的位置在叶的边缘和尖端，发病初期呈褐色，随着病情变化变成红褐色，对于感病严重的针叶，发病从下部叶片开始，会出现枯萎变黄、脱落，并逐渐向上蔓延，使得樟子松完全成为一棵病树，生长逐渐衰弱直至枯死。
防治方法：可喷洒50%异菌脲可湿性粉剂1300倍液和50%多菌灵可湿性粉剂，对樟子松红斑病进行预防。
另外，喷洒时，要连续喷洒，间隔8d喷洒1次，一共喷洒3次。
同时喷洒时，还要选择合适的时间，如6：00～10：00AM、3：00～7：00PM，同时应选择在晴天进行喷洒，如果喷洒之后出现阴雨天气，则需要重新进行喷洒。
1.2樟子松松针锈病樟子松松针锈病主要由黄花鞘锈菌引起，主要为害松树针叶，一般发生在针叶两边，形状呈椭圆形，发病初期针叶绿色逐渐消退，形成丘疹状褐色小点，随着病情的变化，褐色小点逐渐变暗，并在其对侧出现黄白色孢囊，其破裂脱落后会造成松针干枯死亡。
防治方法：可以采用两种方法对樟子松松针锈病进行防治，一种是物理防治，即加强对樟子松的检疫，及时清除黄花、紫菀等转主寄主病害；另一种为化学防治，即采用20%国光三唑酮乳油1500倍液或者12.5%国光黑杀可湿性粉剂，在喷施时，应注意喷施的次数、时间以及药剂量。
另外，需要注意的是采用唑类药剂，应注意药剂量以及间隔时间，否则可能会造成苗木出现矮化等问题。
1.3樟子松立枯病樟子松立枯病主要是由丝核菌等真菌引起的，樟子松立枯病主要为害幼苗，一般以1年生幼苗居多。
樟子松主要病虫害的防治
由真菌和细菌引起，造成幼苗大量死亡。
要点二
详细描述
松苗立枯病是一种常见的苗期病害，主要由真菌和细 菌引起。这些病原微生物主要侵染幼苗的根系和茎基 部，造成幼苗枯萎、死亡。发病初期，幼苗的茎基部 会出现水渍状淡黄色病斑，随后逐渐变黑，最终导致 全株死亡。为了防治松苗立枯病，需要采取一系列措 施，如加强苗床管理、选用抗病品种、进行土壤消毒 等。
松毛虫分布
松毛虫是樟子松生长过程中的 常见害虫，主要分布在我国东
北、华北和西北地区。
危害症状
松毛虫对樟子松的针叶和幼树造成 严重危害，导致针叶枯黄、脱落， 甚至造成整株死亡。
防治方法
采用生物防治和化学防治相结合的 方法，如施用生物农药、化学农药 等，同时加强森林抚育，提高樟子 松的抗病能力。
案例二：樟子松松材线虫病的预防措施
目前，针对樟子松病虫害的防治措施主要包括化学防治、物理防治、生物防治等手段。然而，由于病 虫害种类繁多、传播途径复杂，防治工作仍然面临诸多挑战。同时，防治过程中可能会对环境造成一 定的影响，因此需要采取科学、合理的防治方法，确保防治效果和环境保护的双赢。
02
樟子松主要病害及其防治
松苗立枯病
要点一
松叶枯病
总结词
由真菌引起，造成针叶枯黄、脱落。
详细描述
松叶枯病是一种由真菌引起的病害，主要侵染松树的针叶，造成针叶枯黄、脱落。病原真菌在侵染针叶后，会在 针叶表面形成黑色斑点，随着病情的发展，斑点逐渐扩大，最终导致针叶枯死。为了防治松叶枯病，需要加强林 地管理，保持林地卫生，及时清除病落叶等。
松材线虫病
综合防治措施
针对樟子松生长过程中可能遭受的各种病虫 害，采取生物防治、化学防治、物理防治等 多种方法相结合的综合防治措施。
9种杀菌剂对樟子松枯梢病的室内毒力测定
9种杀菌剂对樟子松枯梢病的室内毒力测定摘要：利用菌丝生长速率法和孢子萌发抑制法，测定了9种杀菌剂对松球壳孢菌的毒力，筛选出有效控制松枯梢病的高效杀菌剂。
主要结果：抑制菌丝生长试验，25%苯醚甲环唑效果最好，对病原菌抑制的ec50值为0.0797mg·l-1，32.5%苯甲+醚菌酯次之；在抑制孢子萌发方面，32.5%苯甲+醚菌酯效果最好，对分生孢子萌发抑制的ec50值为0.0481mg·l-1，25%苯醚甲环唑次之。
综合分析，32.5%苯甲+醚菌酯和25%苯醚甲环唑不但可以抑菌菌丝生长，还可以有效抑制孢子萌发，同传统杀菌剂多菌灵、代森锰锌比较，苯醚甲环唑和醚菌酯等新型杀菌剂更具优势，可以作为防治樟子松枯稍病的备选药剂。
关键词：樟子松枯梢病；无公害杀菌剂；毒力测定中图分类号：s482.2 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-12-0038-2樟子松（pinus sylvestris var mongolica）因具有耐干旱、耐瘠薄、抗寒、速生等生物学特性，而且材质优良，用途广泛，成为用材林、防护林以及绿化的优良树种。
樟子松现已成为三北防护林工程和治沙工程建设的主要造林树种之一[1]。
樟子松枯梢病是由由松球壳孢菌（sphaeropsis sapinea（fr）dyko et sutton）引起的樟子松人工林主要病害[2-5]，在北方地区包括黑龙江、吉林、辽宁以及内蒙古均有发生，随着樟子松人工林面积的逐年扩大，樟子松枯梢病害日趋严重，造成了巨大的经济损失。
对樟子松枯梢病的有效持续控制是当前研究的重点，目前樟子松枯梢病主要以化学防治结合营林措施为主[6-7]，经过多年的研究，形成了有效的防控方法和技术，但是也存在一定的问题，农药品种老旧，病原产生抗药性，以及防治过程中造成的环境污染等一系列问题亟待解决。
本文的主要工作是对高效无公害农药品种进行筛选，以期筛选得到好的农药品种，为樟子松枯梢病的防治提供理论基础。
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接种点柄乳牛肝菌对樟子松枯梢病抗病性的影响陈洁;刘雪峰;郝昕;刘建荣【摘要】为了研究外生菌根菌提高寄主抗病性的机理,以3年生樟子松(Pinus sylvestris var.mongolica)实生苗为研究对象,测定了樟子松枯梢病原菌(Sphaeropsis sapinea)侵染对接种点柄乳牛肝菌(接SG×接菌组)与不接种点柄乳牛肝菌(接菌组)和单独接种点柄乳牛肝菌(接SG组)3个处理组的病情指数、叶绿素质量浓度、抗病相关酶(CAT、PPO、SOD)活性的影响.结果表明:在接种病原菌30d后,接菌组病情指数明显高于接SG×接菌组;叶绿素质量浓度由高到低依次为接SG组、接SG×接菌组、接菌组;PPO和SOD活性由高到低依次为接SG组、接SG×接菌组、接菌组,且变化趋势不随时间改变;CAT活性由高到低依次为接菌组、接SG×接菌组、接SG组.综上,在枯梢病病原胁迫下,点柄乳牛肝菌根可以有效提高樟子松叶绿素质量浓度、PPO和SOD活性,降低樟子松枯梢病的病情指数及CAT 活性,且大部分指标差异显著(P＜0.05).在枯梢病病原菌的作用下,点柄乳牛肝菌根能够正向调节樟子松的生理生化指标,进而提高樟子松对枯梢病的抗病性.【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2019(047)003【总页数】7页(P94-99,110)【关键词】点柄乳牛肝菌;樟子松枯梢病;抗病性;外生菌根菌【作者】陈洁;刘雪峰;郝昕;刘建荣【作者单位】东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】S791.253;S763.1樟子松(Pinus sylvestnis var. mongolica Litv.)是我国东北地区的重要树种，具有速生丰产等特点。
辽宁省章古台镇是我国最早进行沙地樟子松引种的地区。
松枯梢病(Sphaeropsis sapinea)是世界范围内针叶树上最常见和分布最广的重要病害之一。
自1991年起，樟子松枯梢病在东北地区发生后，该病在各地危害逐年加重，现发病面积已达1 300 hm2，发病率100%，感病指数44.8。
从幼苗到成林都能发病，但以树势衰弱植株发病最重[1]。
在病部、枯叶、枯梢上可见圆形突起的黑色小点，即病菌分生孢子器。
樟子松枯梢病是一种典型的潜伏侵染的弱寄生病害[2]。
点柄乳牛肝菌(Suillus granulatus O. Kurttee)是自然界中常见的外生菌根(ECM)真菌，其具有突出的抗旱性和抗贫瘠能力[3]。
外生菌根的主要功能有改善植物生理功能、增强宿主植物抗逆性、增强宿主植物抗病性以及促进生物修复等[4]。
许多研究证明，外生菌根能够防治或减轻某些植物病害、特别是根部病害[5]。
用于ECM真菌生物防治试验的病原菌主要为土传性病原真菌，包括立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)、毁灭柱盘孢菌(Cylindrocarpon destructans)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、大丽轮枝菌(Verticillium dahlie)和疫霉属(Phytophthora)的一些种类等[6]。
ECM真菌与土传病原菌侵染部位基本相同，同时还参与了植物许多生理生化代谢过程，因此，外生菌根菌可能对植物病害有直接或间接的影响[7]。
张文泉等研究表明，接种点柄乳牛肝可与樟子松组培苗形成菌根，菌根化率大于95%，菌根侵染率大于70%，各项生长指标与对照存在显著性差异，说明外生菌根真菌能促进樟子松抗病性[8]。
现阶段，已经有研究对于外生菌根菌提高植株的抗病性的研究，但集中于根部病害，地上部分病害未见报道。
研究植物抗病性对提高植物的产量有着重要影响。
光合作用作为植物产生有机物的重要途径，在植物生长代谢及物质合成功能中起着重要作用。
叶绿素作为植物光合作用的主要色素，在植物体内主要分为叶绿素a和叶绿素b两种。
目前已有很多报道指出叶绿素a、b的含量可在一定程度上与植物抗病性呈正相关。
顾振芳等[9]对9个黄瓜品系的霜霉病(Pseudomonas cubensis)抗病性进行了鉴定，并测定了叶绿素含量，结果表明，叶片内叶绿素的含量与霜霉病的抗性呈正相关。
胥爱玲等[10]对黄瓜抗病性与叶绿素含量关系的研究认为，叶片内叶绿素含量与黄瓜霜霉病的抗性呈正相关。
刘会宁等[11]对葡萄霜霉病(Plasmopara viticola)的研究结果也表明，叶绿素含量与葡萄霜霉病的病情指数之间存在着极显著的负相关。
近30年，研究者已开始从樟子松枯梢病病原菌、侵染循环等方面开展了病生理研究，并取得了一些进展，但有关叶绿素方面的研究未见报道。
多酚氧化酶(PPO)是氧化酚类物质的酶，将酚类化合物氧化为醌类物质(咖啡酸、绿原酸等)，醌类物质对病原微生物具有更高的致毒性[12]，同时可以催化酚类物质促进植物木质素的合成，并且通过促进细胞壁的木质化和结构蛋白的聚合形成最初的防卫屏障[13]。
超氧化物歧化酶(SOD)作为植物体内防御活性氧毒性的保护酶，能催化超氧化物阴离子发生歧化作用，生成H2O2和O2，在提高植物抗逆性、抗氧化方面具有重要作用。
过氧化氢酶(CAT)的功能是清除病原物侵染引起的活性氧(主要是H2O2)积累，将H2O2降解为对植物无毒害的H2O和O2。
研究表明，在植物抗病作用方面，SOD、CAT、PPO等保护酶活性以及可溶性蛋白含量等的变化起着重要作用[14-15]。
目前，这些酶类的变化量可以作为评价植物抗病性强弱的生理指标[16-17]。
樟子松枯梢病的防治极大程度上还是依赖于化学防治，这虽然给林业生产带来了很高的效益，但是环境污染、生态系统自然平衡的破坏等诸多弊端也随之而来。
提高樟子松自身的抗病性是一种有害生物的防治方法，具有绿色环保，无污染等特点。
作为外生菌根菌，点柄乳牛肝菌对樟子松健康生长、生态维护具有重要意义。
它能够通过与樟子松根部形成菌根结构，提高樟子松逆境的耐受能力，具有良好的促生长作用。
目前国内外对樟子松进行菌根合成试验已经有小部分报道研究[18]，但对提高樟子松抗病性的研究尚未明确。
本研究分析测定了樟子松枯梢病侵染对接种点柄乳牛肝菌与不接种点柄乳牛肝菌和单独接种点柄乳牛肝菌3个处理组的病情指数及叶绿素质量浓度、抗病相关酶PPO、SOD、CAT活性等指标的影响，为提高樟子松枯梢病的抗病性提供参考，同时也为外生菌根菌提高寄主抗病性提供依据。
1 材料与方法1.1 樟子松枯梢病病原菌采集及鉴定在黑龙江省齐齐哈尔市泰来县采集樟子松枯梢病病梢，将病针叶放在解剖镜下，用解剖刀轻轻划开子实体做纵切片，将切片移入载玻片后盖上盖玻片，放置在显微镜下进行观察。
在显微镜下将病原菌的单个孢子移入PDA培养基内，放入培养箱中，26 ℃进行避光培养。
病原菌菌丝球经冷冻液氮研磨后，用TianGen试剂盒进行DNA提取。
用真菌的通用引物对ITS1/ITS4对病原菌进行PCR扩增，对获得的扩增产物进行DNA测序(上海生工有限公司)。
将所得序列输入NCBI网站，用Blast程序与Genbank中已有的序列进行比对。
将分离得到的纯菌种，取直径0.75 cm的菌丝圆片，针刺法接种至松针伤口上，用无菌水浸湿纱布包裹。
将20个分枝接种，在装有浸水棉绒的无菌玻璃容器中培养，温度26 ℃，相对湿度75%(模拟黑龙江省春季的大陆气候条件)。
基于柯赫氏法则，从有症状的分枝上重新分离病原菌并使用形态学比较法来鉴定。
1.2 樟子松实生苗菌根合成1.2.1 菌剂制备将点柄乳牛肝菌株在固体培养基上活化后，参照郭渊等[19]的方法制成菌剂备用。
1.2.2 试验处理在樟子松3年生实生苗根部接种点柄乳牛肝菌或无菌PD培养液，在针叶上接种病菌菌丝圆片或无菌圆片。
处理1，接种点柄乳牛肝菌及无菌圆片(接SG组)；处理2，接种点柄乳牛肝菌及菌丝圆片(接SG×接菌组)；处理3，接种无菌PD培养液及菌丝圆片(接菌组)。
1.2.3 点柄乳牛肝侵染樟子松实生苗供试樟子松3年生实生苗(由加格达奇林业局提供)进行截根处理，移栽入装有2/3灭菌的供试土壤的花盆(30 cm×30 cm)中。
用浇注法对试验组进行液体菌剂接种。
液体菌剂使用量为每植株50 mL，菌液必须浇在苗根上，浇注后覆盖灭菌的供试土壤，以接种无菌培养液作为对照，每个处理10个重复。
1.2.4 樟子松枯梢病接种30 d后，确定菌根合成后接种枯梢病病菌，用消毒的昆虫针在3个处理组的每棵苗木的针叶上选出10组，每组5束10针，每针叶针刺10孔。
在培养好的病原菌平板菌落边缘，取直径0.75 cm的菌丝圆片，接种至松针伤口上，对照组做同处理，接种同大小无菌的圆片。
套袋保湿48 h后拆袋。
接种后苗木置于光照培养室中培养，温度22 ℃，光照12 h·d-1。
苗木适时浇水且每隔1周浇1次Hoagland营养液。
1.3 生物测定接种病原菌30 d后，每5 d取一次样，分别在每个处理组每棵苗取1组5束混合后完全随机选取松针。
1.3.1 病情指数测定参照邬琰等[20]的方法并加以改进。
根据针叶变色长度占针叶长度的比例(x)将病情指数分为1～5级(表1)。
病情指数=∑(该级代表数值×该病级株数)/(调查总株数×最高级的代表数值)×100。
表1 樟子松枯梢病病害分级标准病害分级分级标准(x)代表数值Ⅰ0<x≤1/50Ⅱ1/5<x≤1/31Ⅲ1/3<x≤1/22Ⅳ1/2<x≤2/33Ⅴ2/3<x≤141.3.2 叶绿素质量浓度的测定参照邹林有的方法[21]，将采集的样本洗净，用滤纸吸干，剪碎。
采用万分之一天平，称取样品0.100 0 g，放入比色管中，加入10 mL体积比为1∶2的丙酮与无水乙醇混合溶剂，在室温下避光浸泡24 h，将提取溶液过滤。
准确移取滤液，置于光径为1.0 cm的比色皿中，以丙酮与无水乙醇混合溶剂为参比，在可见分光光度计中测定吸光度，再根据提取溶液在645、663 nm处的吸光度，由Amon公式计算叶绿素a和叶绿素b的质量浓度。
Ca=(12.7×A663-2.69×A645)×V/(1 000ω)。
Cb=(22.7×A645-4.68×A663)×V/(1 000ω)。
C总=Ca+Cb。
式中：A645和A663分别为波长在645和663 nm处的吸光度；Ca和Cb分别为叶绿素a和叶绿素b的质量浓度；C总为叶绿素的总质量浓度；V为提取溶液的体积；ω为叶片样品的质量。