温州医学院《细胞工程学》考试重点
细胞工程 考试复习资料
细胞全能性：一个生活细胞所具有的产生完整生物个体的潜在能力称之为细胞的全能性。
植物脱毒：利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中浸染的病毒，生产健康的繁殖材料。
原生质体：指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露细胞。
亚原生质体：在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体就叫做亚原生质体。
它可以具有细胞核或没有细胞核。
核质体：由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体。
也称为微小原生质体。
原生质球：制备微生物原生质体时，如果有残存的细胞壁但仍是圆球形常称为原生质球。
胞质体：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。
花粉培养：将处于一定发育阶段的花粉从花药中分离出来，再加以离体培养。
有时花粉培养也称为小孢子培养。
细胞工程学: 是应用细胞生物学和分子生物学方法，在细胞水平上研究改造生物遗传特性，以获得新的有用性状的细胞系或生物体的有关理论和技术方法的学科。
细胞全能性: 一个细胞所具有的产生完整生物个体的潜在能力。
植物组织培养：利用植物离体器官、组织或细胞(包括原生质体)，在适宜的人工培养基上和无菌条件下进行培养，使其生长、增殖、进而发育形成小植株的方法。
外植体：取自生物体用于组织培养的活的生物细胞或组织切段、或用于继代培养的组织培养物均称之为外植体。
愈伤组织：愈伤组织原是指生物在受伤以后于伤口表面形成的一团薄壁细胞。
在组织培养中，则是指外植体在人工培养基上诱导产生的无序生长的薄壁细胞团。
继代培养：对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代的培养，就称为继代培养。
脱分化：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程。
生长素感应：生物细胞由生长素受体感受生长素信号与其相结合，进而使生长素受体被活化的过程。
细胞分化：是指导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。
再分化：在离体条件下，细胞脱分化以后，无序生长的细胞及其愈伤组织重新进入有序生长即分化状态的过程。
细胞工程学复习题
细胞工程学复习题细胞工程学是一门综合性学科，涉及到细胞生物学、生物工程学和材料科学等多个领域的知识。
通过利用工程原理和技术手段，细胞工程学致力于研究和应用细胞的生物功能以及与之相关的工程应用。
以下是一些关于细胞工程学的复习题，希望能帮助你回顾和巩固相关知识。
1. 什么是细胞工程学？2. 细胞工程学的研究对象主要是哪些细胞类型？3. 请列举细胞工程学的主要应用领域。
4. 细胞工程学中常用的细胞培养技术有哪些？5. 什么是细胞培养基？它对细胞的生长和分化有什么影响？6. 细胞工程学中常用的细胞筛选技术有哪些？7. 请简要介绍细胞工程学中常用的细胞培养槽和生物反应器。
8. 什么是细胞培养的规模化生产？有哪些常用的规模化生产方法？9. 细胞工程学在组织工程和再生医学中的应用有哪些？10. 细胞工程学在药物筛选和药物递送系统中的应用有哪些？11. 请简要介绍细胞工程学在生物传感和生物芯片领域的应用。
12. 细胞工程学中常用的细胞植入技术有哪些？它们在治疗方面有何作用？13. 请简要介绍细胞工程学中常用的干细胞技术和基因工程技术。
14. 细胞工程学中的质量控制和质量保证措施有哪些？15. 细胞工程学的发展趋势和前景如何？以上是关于细胞工程学的一些复习题，希望能够帮助你进行知识回顾和巩固。
细胞工程学作为一门新兴的学科，其在医学、生物技术和生物工程领域的应用前景广阔，相信随着科学技术的不断进步，细胞工程学将会取得更加重要的突破和进展，为人类健康和福祉做出更大的贡献。
希望大家能够认真复习，掌握细胞工程学的基本理论和技术方法，为将来的学习和科研打下坚实的基础。
细胞工程考试复习重点
绪论生物技术：生物技术是以生物科学为基础，利用生物个体或生物器官、组织、细胞的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系（包括细胞系），以及与工程原理相结合进行产品加工生产的综合性技术体系。
细胞工程：应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。
生物技术的主要范畴：基因工程，发酵工程，生化工程，蛋白质工程，酶工程，细胞工程第二章：实验室设置及一般技术培养基的组成和配制：组成：无机盐（不同植物生长发育所需无机盐在数量上可能存在一定的差异，但从无机盐的类型上看，所有植物是一致的。
一种类型的离子可以由一种以上的无机盐提供。
避免由单一化合物提供某一营养元素时，在培养中因培养物对不同离子的吸收差异而产生的培养基pH的剧烈变化。
），有机化合物（糖类：C源，维持培养基渗透压。
植物组培常用蔗糖。
维生素：参与酶的形成，与植物蛋白、脂肪代谢相关。
肌醇：本身不促进生长，但它在糖类的相互转化、维生素、激素的利用等方面具有重要的促进作用。
腺嘌呤：合成细胞分裂素的前体之一，外源添加腺嘌呤有利于细胞协调自身合成细胞分裂素，有利于细胞的分裂和分化，促进芽的形成和生长。
氨基酸：蛋白质的组成成分。
），生长调节物质(生长素类:生理作用：促进细胞分裂和生长，有利于细胞脱分化并启动细胞分裂，有利于形成愈伤组织。
在离体培养的分化调节中，生长素促进不定根的形成而抑制不定芽的发生。
常用生长素：有IAA(吲哆乙酸)、NAA (奈乙酸 )、2,4-D(二氯苯氧乙酸)和IBA(吲哆丁酸)等。
使用2,4-D时，须严格控制使用浓度和培养时期，高浓度的2,4-D常常抑制器官的发生。
细胞分裂素类:作用：促进细胞分裂，调节器官分化，延迟组织衰老，增强蛋白质合成等。
离体培养中，细胞分裂素能促进不定芽的发生。
常用细胞分裂素：KT (激动素)、BA(6-卞基腺嘌呤)、2-ip(异戊烯氨基嘌呤)玉米素等。
大学《细胞工程》期末考试复习重点、考点总结
细胞工程期末复习（必考）细胞工程：研究真核细胞的核—质关系以及细胞器、细胞质基因转移的技术。
组织工程：研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的生物活性替代物的一门科学。
染色体工程：是按照一定的设计，有计划的消减添加或替换同种或异种染色体从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。
细胞连接：使细胞间的联系结构。
细胞表面的特化结构或特化区域，是细胞间建立长期组织上联系的结构基础。
涉及细胞外基质蛋白、跨膜蛋白、胞质溶胶蛋白、细胞骨架蛋白等。
细胞全能性：指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体成长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。
细胞分化：指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程。
包括时间和空间上的分化。
脱分化：又称去分化，指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。
即分化的细胞在适当条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过程。
再分化：是指在离体条件下，无序生长的脱分化细胞在适当条件下重新进入有序生长和分化状态的过程。
细胞培养：指从体内组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌适当的条件使其生长繁殖的技术。
人工种子：又称合成种子或体细胞种子，指将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒。
植物胚胎培养：指对植物的胚及胚器官进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。
试管受精：指在无菌条件下离体培养未受精子房或胚珠和花粉萌发产生的花粉管进入胚珠从而完成受精过程。
细胞核移植：一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术。
体外受精：指使哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。
胚胎移植:指将受精卵或发育到一定阶段的胚胎移植到与供体同时发情排卵但为配种的受体母畜输卵管或子宫的技术。
人工受精：指将采集的精子注入人发情处理的母体内完成受精过程。
试管婴儿：指将卵子与精子取出在体外受精，培养发育成早期胚胎，再植回母体子宫内发育出生的婴儿，也就是采用体外受惊联合胚胎移植技术培育的婴儿。
《细胞工程》考试大纲共10页word资料
《细胞工程》考试大纲第一章绪论一、名词高技术、生物技术、细胞工程、生化工程.二、知识点现代生物技术是一项高技术；生物技术的基本内容；细胞工程在整个生物工程中的地位；细胞工程主要的技术领域；细胞工程的主要应用。
第二章细胞工程理论基础一、名词细胞、细胞周期、细胞凋亡、细胞分化、奢侈基因、管家基因.二、知识点细胞共性。
第三章细胞工程基本技术一、名词生物安全、p1级实验室、清洁液、干热灭菌、湿热灭菌、无菌操作技术、细胞贴壁率、细胞计数、MTT法、活体染色、成集落试验、污染。
二、知识点细胞工程实验室主要的仪器设备；细胞培养室的基本要求；p1级实验室的基本要求；细胞培养室常见的消毒方法；玻璃器皿的清洗方法；判断清洁液失效的方法及延长其寿命的方法；无菌操作的技术要领与要求；培养细胞的观察技术；培养细胞的主要污染与排除；细胞计数应注意的问题；细胞冻存与复苏的技术要点及注意事项。
第四章细胞培养与代谢调控一、名词分批式培养、流加式培养、半连续式培养、连续式培养、灌流式培养。
二、知识点分批式培养、连续式培养、灌流式培养的特点。
第五章植物人工繁殖一、名词植物细胞工程、植物组织培养、外植体、脱分化、再分化、愈伤组织、胚状体、大量元素、微量元素、器官发生途径、胚状体发生途径、植物快速无性繁殖、植物脱毒、胚培养、胚乳培养、人工种子、体细胞胚。
二、知识点植物细胞工程的主要内容；植物组织培养的理论基础；植物细胞工程的技术手段；植物组织再分化的两条途径；植物组织培养的主要步骤与技术要点；影响植物细胞脱分化和再分化因素；愈伤组织有的特点及其在细胞工程中的重要性；愈伤组织再生植株的途径；植物组织与动物细胞的超低温保存原理及方法的不同；植物细胞的几种大规模培养系统的特点及其影响因素；生长素、细胞分裂素的生理作用及其在组织培养中的意义。
成熟胚培养与幼胚培养在技术上的异同；植物胚乳培养的类型；植物胚胎培养的意义及影响因素；愈伤组织的形成的三个阶段及主要特征；人工种子的组成、构建与应用；体细胞胚胎发生的同步控制；植物脱毒的方法；植物快繁技术的主要步骤；微繁殖中芽的增殖方式；植物脱毒时外植体的预处理途径。
细胞工程考试复习资料
细胞工程考试复习资料细胞全能性：是指多细胞生物中每个体细胞的细胞核具有个体发育的全部基因，就有发育成完整个体的潜力。
愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞分裂产生无组织结构，无明显极性的松散的细胞团。
外植体：植物体上切取下来进行培养的部分组织或器官。
体细胞胚又叫胚状体，是指立体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。
原生质体：是去除细胞壁后裸露的球形细胞。
玻璃化：是指组织培养过程中特有的一种生理失调或生理病变，试管苗呈半透明状，外观形态异常的现象。
褐变：可分为酶促褐变和非酶促褐变，酶促褐变是由酚酶催化酚类物质形成醌及其聚合物的结果。
人工种子：是指将植物离体培养的胚状体或牙包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中的类似种子的颗粒。
同核体：基因型相同的细胞融合成的融合细胞。
异核体：来自不同基因型的融合细胞。
体细胞杂交：将不同来源的体细胞融合并使之分化再生、形成新品种的技术。
原代培养：在首次传代前的培养。
传代培养：是指将原代培养的细胞继续转接培养的过程。
杂交瘤技术：将骨髓瘤细胞与免疫的动物皮细胞融合得到即能够分泌抗体又能在体外长期繁殖的杂交瘤细胞，经过克隆化培养得到可以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。
转基因动物：是指在基因组内稳定的整合外源基因，并且外源基因可以稳定地遗传给后代的基因工程动物。
乳腺生物反应器：是将外源基因置于乳腺特异性调节序列之下，使之在乳腺中表达，然后通过回收乳汁获得重要价值的生物活性蛋白。
组织工程：是利用生命科学、医学、工程学原理与技术，单独或组合地利用细胞生物材料、细胞因子实现组织修复或器官再生的一门技术。
胚胎工程：是指对动物早期胚胎或配子进行工程技术操作，获得所需要的成体动物的技术。
体外受精：是指将哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境找那个完成受精过程。
体外受精动物也称试管动物，是指将供体的精子和卵子在体外受精，在体外培养胚胎发育到一定阶段通过胚胎移植移入受体完成发育出生发育阻滞：体外受精的早期胚胎在体外发育中往往会停止在某一阶段不再发育。
细胞工程生物易考知识点记忆答案.doc
(1)过程: 在无菌和人工控制的条件下将离体的植物器官、组织、细胞，培养(2)用途: 微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工(3)地位:是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。
3 .植物体细胞杂交技术 （1）过程:植物醐甲-缨卜原生质体甲 植物硼乙-理卜原生质体乙酬蠢缨毗愈伤组织靴持脚原生质体A（2）诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。
化学法一般是用聚乙二醇（PEG ）作为诱导（-）植物细胞工程1 .理论基础（原理）：细胞全能性全能性表达的难易程度：受精卵＞生殖细胞〉干细胞＞体细胞;植物细胞＞动 物细胞2. 植物组织培养技术在人工配置的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其脱分化产生 愈伤组织，再分化出丛芽，最终形成完整的植株。
厂化生产。
剂。
（3）意义:克服了远缘杂交了亲和的障碍。
（二）动物细胞工程1. 动物细胞培养专题2细胞工程新嬲生植物fw 耙A植物徊胞B杂种初史©摩生废秩B杂种植株(1)概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。
(2)动物细胞培养的流程：取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织) 一剪碎一用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞一制成细胞悬液一转入培养瓶中进行匣代培养一贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
(3)细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。
细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。
(4)动物细胞培养需要满足以下条件%1无菌、无毒的环境:培养液应进行无菌处理。
通常还要在培养液中添加一定量的抗生素,以防培养过程中的污染。
此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危止。
%1营养:合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。
细胞工程考试题及答案
细胞工程考试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 细胞工程中常用的细胞培养技术是：A. 组织培养B. 动物细胞培养C. 植物细胞培养D. 所有上述选项答案：D2. 细胞融合技术主要应用于：A. 制备单克隆抗体B. 制备杂交瘤细胞C. 制备基因工程疫苗D. 所有上述选项答案：D3. 下列哪项不是细胞工程的优点？A. 可以大规模生产B. 可以快速繁殖C. 可以保持遗传稳定性D. 无法进行基因改造答案：D4. 植物组织培养中，脱分化过程通常发生在：A. 愈伤组织阶段B. 胚状体阶段C. 根状体阶段D. 芽状体阶段答案：A5. 动物细胞培养中，细胞贴壁现象是由于：A. 细胞表面具有粘附因子B. 培养基中含有血清C. 培养皿表面光滑D. 细胞生长速度过快答案：A6. 细胞工程中，细胞核移植技术主要用于：A. 克隆动物B. 制备转基因动物C. 制备干细胞D. 制备杂交细胞答案：A7. 植物细胞工程中，体细胞杂交技术可以用于：A. 克服远缘杂交障碍B. 提高植物抗病性C. 增加植物产量D. 所有上述选项答案：D8. 动物细胞培养中，细胞传代是指：A. 将细胞从原代培养基转移到新的培养基B. 将细胞从原代培养基转移到次级培养基C. 将细胞从次级培养基转移到新的培养基D. 将细胞从次级培养基转移到次级培养基答案：A9. 细胞工程中，基因枪技术主要用于：A. 植物基因转移B. 动物基因转移C. 微生物基因转移D. 所有上述选项答案：D10. 细胞工程中，细胞凋亡与细胞坏死的主要区别在于：A. 细胞凋亡是程序性死亡，细胞坏死是非程序性死亡B. 细胞凋亡是非程序性死亡，细胞坏死是程序性死亡C. 细胞凋亡和细胞坏死都是程序性死亡D. 细胞凋亡和细胞坏死都是非程序性死亡答案：A二、填空题（每空1分，共20分）1. 细胞工程是指利用_______手段，按照人们的意愿，对细胞进行_______、_______和_______等操作，以改变生物的遗传性状或获得细胞产品的一门综合科学技术。
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第四章细胞培养1、体外培养细胞有哪些类型？（1）按生长方式：2种类型粘附型(贴壁型)细胞：附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
悬浮型细胞：不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。
（2）根据粘附生长时形态的不同，主要分为4类：上皮细胞型、成纤维细胞型、游走细胞型、多形型细胞。
2、细胞系的生长过程包括哪些主要阶段？每一生长阶段各有什么特征？组织培养细胞生命期(Life Span of Culture Cells)所谓培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间，包括原代培养期、传代培养期及衰退期三个阶段。
（1）原代培养期(Primary Culture)也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。
特点：1、细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。
2、与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。
3、细胞群是异质的，各细胞的遗传性状互不相同，细胞相互依存性强，即细胞独立生存性差。
4、初代培养的细胞多呈二倍体核型。
（2）传代期传代：体内细胞生长在动态平衡环境中，而组织培养细胞的生存环境是培养瓶、皿或其它容器，生存空间和营养是有限的。
当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代。
初代培养的细胞一经传代后便改称做细胞系（Cell Line）。
特点：在整个生命期中此期的持续时间最长，整个培养过程的主要时期。
细胞增殖旺盛，细胞生长活跃，并能维持二倍体核型。
（3）衰退期特点：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，最后衰退凋亡。
3. 每代细胞的生长曲线包括哪几个主要时期？各期细胞有何特点？所谓“一代”是指从细胞接种到分离再培养的一段时间。
包括潜伏期、指数增生期、停滞期。
（1）潜伏期➢细胞对传代操作所致损伤的恢复期和对新的生长环境的适应期，一般为期6~24h。
也是原代培养开始时细胞必须经历的时期。
➢接种到培养器皿内以后，细胞开始经历黏附、贴壁和铺展等过程。
➢修复损伤，熟悉环境，恢复生长，但很少分裂。
➢接种的细胞密度越大，数量越多，细胞群体越容易适应体外环境，潜伏期就短。
（2）指数生长期⏹又叫对数生长期（logarithmic growth phase），是细胞增生最活跃、活力最旺盛的阶段，培养物中的细胞数量呈指数增长。
细胞群体均一，理想的实验用细胞。
⏹细胞分裂活动（即增殖活性）的衡量指标：有丝分裂指数（mitotic index, MI）细胞群体倍增时间：培养物中细胞数量翻倍的平均时间⏹MTT法、标记核苷酸（H3-TdR）掺入法、BrdU标记法注：有丝分裂指数(MI)指培养物中分裂相数量占全部细胞数量的百分比，统计时，每瓶至少需计数1000个细胞。
一般细胞的MI约为0.1－0.5%。
原代培养物的MI比继代培养物低。
连续细胞系和肿瘤细胞高，可达3%－5%。
⏹在接种细胞数量适宜情况下，指数增生期持续3～5天后，随细胞数量不断增多，生长空间渐趋减少，最后细胞相互接触汇合成片。
细胞相互接触后，如培养的是正常细胞，发生接触抑制。
发生接触抑制以后，虽然运动受到限制，但只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。
⏹但当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度依赖性细胞生长抑制，导致细胞分裂停止，细胞数量即不再增加，进入平台期（停滞期）。
（3）停滞期⏹也叫平台期（plateau phase），意即细胞不再分裂增殖，细胞数量维持在某一水平上，生长活动停滞。
停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累，pH降低。
此时需做分离培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变，重则脱落死亡，故传代应越早越好。
传代过晚（已有中毒迹象）能影响下一代细胞的机能状态。
在这种情况下，虽进行了传代，因细胞已受损，需要恢复，至少还要再传1～2两代，通过换液淘汰死细胞和使受损轻微的细胞得以恢复后，才能再用。
4、体外培养的细胞应满足哪些营养成分？（1）糖（2）氨基酸（3）维生素（4）促生长因子（5）其它物质5、培养液中为何要添加一定量的血清？（血清的主要作用）（1）提供基本营养物质（2）提供激素和各种生长因子（3）提供结合蛋白（4）提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。
（5）对培养中的细胞起到某些保护作用：血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。
这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。
6、细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。
再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群，亦可称之为亚株（Substrain）。
7、细胞系：正常细胞培养的世代数有限，只有癌细胞和发生转化的细胞才能无限生长下去。
所谓转化即是指正常细胞在某种因子的作用下发生突变而具有癌性的细胞。
目前世界上许多实验室所广泛传用的HeLa细胞系就是1951年从一位名叫Henrietta Lacks的妇女身上取下的宫颈癌细胞培养而成（宫颈癌上皮细胞）。
此细胞系一直延用至今。
8、原代培养：9、传代培养：当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。
此时就需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养。
这个过程就称为传代（passage）或者再培养（subculture）。
对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。
10、克隆培养法：指单细胞培养，使之无性繁殖获得克隆细胞株的方法。
有采用在每一毛细管内滴一滴培养液，各自放入一个细胞进行培养的方法；但一般是在培养皿中使细胞相互间维持一定的间隔，培养极少量的细胞以使各个细胞得以增殖。
11、冻存和复苏的原则：慢冻快融当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。
复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
第五章细胞融合与单克隆抗体1、细胞融合：细胞融合一般是指用人工的方法，即利用电流或各种融合剂如：仙台病毒或聚乙二醇(PEG)等，把两个邻接的细胞界膜溶解掉，使二个或二个以上的细胞合并成一个细胞，最初两个细胞只有胞浆合在一起，核各自独立，这种细胞叫异型核合胞体。
经过培养，通过有丝分裂两种亲细胞的染色体才彼此混合在一起，分到两个子细胞核里去，再经过胞浆的分裂，变成两个单核杂交细胞。
2、单克隆抗体：是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的与单一抗原决定簇结合的抗体。
3、杂交瘤：4、简述单克隆抗体的制备过程5、HAT选择原理/骨髓瘤细胞选择➢骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖，但不能分泌特异性抗体；而抗原免疫的B 淋巴细胞能产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖。
将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞，继承了两个亲代细胞的特性，既具有骨髓瘤细胞能无限制增殖的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。
➢经在HAT培养基[含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)]中进行选择性培养：➢未融合的脾细胞因不能在体外长期存活而死亡；➢未融合的骨髓瘤细胞合成DNA的主要途径被培养基中的氨基蝶呤阻断，又因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶（HGPRT），不能利用培养基中的次黄嘌呤完成DNA的合成过程而死亡。
➢只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，因此能在HA T培养基中存活和增殖。
➢经过克隆选择，可筛选出能产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，在体内或体外培养，即可无限制地大量制备单克隆抗体。
第六章胚胎工程1、顶体反应：当获能的精子与卵子相遇时，覆盖于精子顶体表面的细胞膜与顶体外膜融合，并释放出多种酶系，这一过程称为顶体反应。
2、发育阻滞：体外受精的早期胚胎在体外发育过程中，往往会停滞在某一阶段不再发育，此现象称之为发育阻滞。
3、简述超数排卵的基本方法及其意义？4、同步发情的处理？第七章干细胞与组织工程1、干细胞：是具有自我更新(Self-renewal)和分化潜能(Potency)的细胞。
2、干细胞的分类：按来源分类：胚胎干细胞、成体干细胞。
按分化潜能分类：全能干细胞、多能干细胞、专能干细胞。
3、如何调控ES细胞的分化？4、简述ES细胞建系的主要操作步骤？（胚胎干细胞的建系过程）5、如何鉴定ES细胞？（胚胎干细胞的鉴定）（1）细胞形态特征、取材部位（2）细胞表面的特殊标志（3）细胞内干细胞标志基因的表达（4）端粒酶（5）核型分析体内分化（6）分化潜能体外分化嵌合体：小鼠胚胎干细胞已经制备嵌合体6、追踪了解ES细胞的研究进展，分析讨论其应用前景及其面临的问题？第八章核移植技术与动物克隆1、“多莉”羊产生的学术意义？2、简述细胞核移植的类型及其主要操作技术？3、核移植技术的应用现状及其发展前景？❖制备转基因克隆动物，进行药物生产❖培育优良品种，扩大良种种群❖异种克隆，拯救濒危动物❖治疗性克隆❖培育各种实验动物❖基础理论研究展望：虽然核移植技术有着广阔的应用前景，并且已取得了一些进展如体细胞核移植等，但也存在着一些问题。
主要包括核移植效率低，动物畸形。
这要求研究人员进一步了解核质作用机理，改进培养方式。
4、治疗性克隆：第九章转基因动物与动物生物反应器1、转基因动物（transgenic animal）：是指借助基因工程技术将外源基因导入受体动物染色体内，外源基因与动物基因整合后随细胞的分裂而扩增，在体内表达并能稳定地遗传给后代的动物。
2、简述转基因哺乳动物的制备方法？➢显微注射法➢逆转录病毒载体感染➢精子载体介导法➢胚胎干细胞介导法➢细胞核移植技术➢YAC介导的基因转移（1）显微注射法操作程序如下：首先，向供体母鼠注射孕马血清，48小时后再注射人绒毛膜促性腺激素，使其超排卵（排卵数可达25枚）。
然后，将此鼠与雄鼠交配获取受精卵，随后将构建的外源基因在体外用显微注射器注射到受精卵的卵原核中。
显微注射完成后，将受精卵移植到假孕母鼠输卵管内，大约3周后，代孕母鼠产下转基因鼠。
（2）逆转录病毒载体感染法原理：利用携带外源基因的逆转录病毒感染胚胎是最早使用的动物转基因方法之一。
其基本原理足当逆转录病毒的RNA 进入细胞后，逆转录成DNA (DNA前病毒)，依靠逆转录病毒的整合酶及其末端特异的核苷酸序列，DNA前病毒可整合到染色体上，从而将其所携带的外源基因插入到染色体上。