肝纤维化的动物模型制备研究
cde小鼠模型肝损伤原理
cde小鼠模型肝损伤原理
CDE小鼠模型是一种常用的实验动物模型，用于研究肝损伤和
肝纤维化。
CDE模型的原理主要是通过饮食操纵来诱导小鼠发生肝
损伤。
CDE模型中的C代表胆固醇（cholesterol）、D代表二乙基
二硫代碳酸酯（diethyldithiocarbamate），E代表乙醇（ethanol）。
这种饮食操纵可以导致小鼠发生脂肪肝、肝细胞损伤、肝纤维化等肝病变化。
具体来说，CDE模型通过高脂饮食（高胆固醇）、二乙基二硫
代碳酸酯（一种抗氧化剂）和乙醇（酒精）的摄入来诱导小鼠发生
肝损伤。
这些因素会引起肝细胞脂质代谢紊乱、氧化应激、炎症反
应和纤维化等病理生理过程。
高脂饮食可以导致脂肪在肝脏内沉积，形成脂肪肝，而二乙基二硫代碳酸酯和乙醇则可以加剧肝脏损伤和
纤维化的发展。
CDE模型肝损伤的原理涉及多个方面，包括脂质代谢、氧化应激、炎症反应、纤维化等生物学过程。
研究人员可以利用这个模型
来探究肝损伤的发生机制，以及寻找潜在的治疗方法。
在研究肝病
理生理过程和开发新的治疗策略方面，CDE小鼠模型都发挥着重要
的作用。
肝纤维化动物模型造模方法的研究进展
肝纤维化动物模型造模方法的研究进展I. 综述肝纤维化是一种严重的肝脏疾病，其病理特征为肝实质中大量纤维组织增生，导致肝脏功能受损。
肝纤维化的发生和发展受到多种因素的影响，如病毒感染、药物毒性、酒精性肝病等。
因此建立有效的动物模型对于研究肝纤维化的发病机制和治疗方法具有重要意义。
本文将对近年来关于肝纤维化动物模型造模方法的研究进展进行综述。
在构建肝纤维化动物模型时，首先需要选择合适的动物种类。
常用的动物模型包括CRISPRCas9基因敲除小鼠、自发性肝纤维化大鼠、四氯化碳(CCl诱导的肝纤维化大鼠等。
其中CRISPRCas9基因敲除小鼠是目前最为理想的肝纤维化动物模型之一，因为它可以精确地靶向特定基因进行敲除，从而有效地模拟人类肝纤维化的病理过程。
目前主要采用CRISPRCas9技术进行基因敲除。
通过构建特定的sgRNA序列，可以特异性地靶向目标基因，实现对其表达水平的抑制。
这种方法的优点是操作简便、高效，且可以精确地控制基因敲除的范围和程度。
然而CRISPRCas9技术仍存在一定的局限性，如可能导致非特异性敲除、影响其他基因的表达等。
因此未来还需要进一步优化该技术，以提高其在肝纤维化动物模型构建中的应用效果。
另一种常用的肝纤维化动物模型构建方法是通过化学物质的直接或间接作用诱导肝纤维化。
常用的化学物质包括四氯化碳(CCl、二甲基亚硝胺(DMN)、苯并芘等。
这些化学物质可以通过不同途径进入肝脏，引起肝细胞损伤和坏死，进而导致肝纤维化的发生。
然而这种方法存在一定的毒副作用，如长期暴露于高浓度的CCl4可能会导致肝癌的发生。
因此在使用化学物质诱导法构建动物模型时，需要严格控制剂量和时间，以降低实验风险。
A. 肝纤维化的定义和重要性肝纤维化是一种严重的肝脏疾病，其特征是正常肝细胞被大量的胶原纤维所替代，导致肝脏结构和功能的严重改变。
这种病变过程被称为纤维化，最终可能导致肝硬化，甚至肝癌。
因此对肝纤维化的早期诊断和治疗具有重要的临床意义。
二甲基亚硝胺致肝纤维化动物模型研究进展
・
综述 与 讲座 ・
二 甲基 亚 硝 胺致 肝 纤 维 化 动 物模 型 研 究 进 展
梁晋 川 。 学附属 医院 ， 成都 ６ １ ０ ０ ７ ２ ； ２四川省 中医药科 学院 药理 毒理研 究所 ）
的损 伤 表现为 严重 的炎性 反应 Ｊ 。 注射 Ｄ Ｍ Ｎ后 ２～ ５周 ， 肝 组 织 学检 查 显 示 肝 纤 维 化评 分逐渐 增 加 ， 胶原 染 色 显 示 大 鼠纤 维 间隔 扩 展； 与 对照组 比较 ， Ｄ ＭＮ大 鼠肝 脏 一 Ｓ Ｍ Ａ 蛋 白和 总
Ｇ Ｔ ） 、 总胆 红素 （ Ｔ Ｂ Ｉ Ｌ ） 、 直 接 胆 红素 （ Ｄ — Ｂ Ｉ Ｌ ） 及 间接 胆红 素 （ Ｉ Ｂ Ｉ Ｌ ） 显 著 升高 。
１ 造模 动 物及方 法
２ ． ２ 肝 纤维 化指标
动物体 质量减 轻 ， 肝 脏绝 对质
量及 肝脏质 量 与体 质量 的 比值 均显 著 降低 ， 显 微 镜
下可 见 明显 的桥 接及 隔膜 式 的纤 维 化形 成 ， 严 重 者 可见 明显 的假小 叶形 成 。肝脏 羟脯氨 酸含量 及胶 原 含量 显著增 加 。血 清前 胶 原 Ｉ型蛋 白 、 前 胶 原 Ⅲ型 蛋白、 纤维 连接 蛋 白（ Ｆ Ｎ） 及 层 黏 蛋 白（ Ｌ Ｎ） 含 量 显 著增 加 ； 星状 细胞 （ Ｈ Ｓ Ｃ ） 活化 明显 。
关键词 ： 肝纤 维化 ； 二 甲基亚硝胺 ； 动物模型
ｄ ｏ ｉ ：１ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ２ — ２ ６ ６ Ｘ ． ２ ０ １ ３ ． ４ ４ ． ０ ３ １
中 图分 类 号 ： Ｒ ５ ７ ５ ． ２
肝纤维化实验动物模型造模方法及应用研究进展
肝纤维化实验动物模型造模方法及应用研究进展冯英巧;杨元生;崔淑兰;陈垦;王晖【摘要】肝纤维化是肝脏对持续损伤作出的以细胞外基质过度累积为主要特点的一种常见的免疫应答.目前尚无理想的治疗药物或方法,因此研究肝纤维化的发生机制对寻找有效的治疗药物及其方法有重要意义,理想的动物实验模型是上述研究的关键所在.尽管目前有四氯化碳造模法、乙醇造模法及免疫造模法等肝硬化动物模型制备方法,但各法均有其利弊,而理想的、重复性好且适合广泛推广应用的标准模型仍需继续探索.本文对肝纤维化动物模型的研究和应用进展作一综述.【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2013(029)005【总页数】5页(P570-574)【关键词】肝纤维化;肝硬化;动物模型;机制;治疗【作者】冯英巧;杨元生;崔淑兰;陈垦;王晖【作者单位】广东药学院临床医学院,广东广州510006;广东药学院附属第二医院,广东广州510006;广东药学院护理学院,广东广州510006;广东药学院临床医学院,广东广州510006;广东药学院中药学院,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】R-332肝纤维化(liver fibrosis，LF)是肝脏遭受反复或慢性损伤后的一种损伤与修复过程，主要与慢性炎症和引起慢性肝脏损伤的化学因素相关，现已成为一个发病率和死亡率都很高的世界医学难题(非酒精性脂肪性肝病平均累及世界人口的10%～24%，在我国高达15.35%)，各种肝病多数经肝纤维化最后发展为晚期的肝硬化成为肝病死亡的主要原因[1]。
目前除了在肝硬化晚期进行肝移植尚无其他有效的治疗策略，因此，构建能够模拟人体肝纤维化甚至肝硬化过程的理想动物模型成了探索早期诊断、寻找肝纤维化有效治疗策略、改善肝硬化病情和预后的关键。
本文就近几年有关肝纤维化的建模及其应用进展作一综述。
1 化学造模法1.1 四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型CCl4可引起肝脏损伤及纤维化而被广泛用于诱导肝纤维化动物模型。
HF模型
肝纤维化动物模型的建立方法主要包括：化学药物或毒物所致肝纤维化实验动物模型，如:四氯化碳；胆管阻塞性肝纤维化模型(BCM)、慢性酒精中毒性,肝纤维化动物模型、实验性免疫法建立肝纤维化模型、致癌物致肝纤维化动物模型等。
高脂造HF模型：●高糖高脂诱导新西兰兔肝纤维化模型的建立：原理：本模型采用高糖、高饱和脂肪饲料喂养新西兰兔5个月，形成高糖血症、高甘油三酯血症肝纤维化模型。
）方法：体重2 kg左右的雄性新西兰兔20只，按体重水平随机分为2组，10只饲以基础饲料作为对照组；10只饲以高糖高脂饲料(37％蔗糖、10％猪油混合53％基础饲料)作为模型组。
单笼饲养，每只动物每天约喂食100g颗粒饲料，自由饮水，室温18℃～25℃。
实验期为5个月。
文献：罗洁，许辉，刘毅。
高糖高脂诱导新西兰兔肝纤维化的实验研究。
实用预防医学2007年4月第14卷第2期●大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型：原理：NHSH发病机制目前大多学者认为是“二次打击”引起的脂质过氧化，而脂质过氧化程度与脂肪肝的严重程度密切相关，脂质过氧化的增强，可产生更多的反应性和细胞毒性介质，并诱导肝脏发生炎症。
本实验采用高脂饮食喂养大鼠12周后，大鼠体重、肝湿重明显升高，病理形态上形成脂肪性肝炎，成功复制了实验性大鼠NHSH模型。
方法：24只雄性SD大鼠随机分为正常饮食对照组(8只)、高脂饮食模型组(16只)，实验时间16周。
健康雄性sD大鼠24只，体重200±20 g。
高脂饮食组16只，予88％普通饮食+10％猪油+2％胆固醇喂养，对照组8只，普通饮食喂养。
连续16周文献：王旭霞，闻勤生，王景杰，赵曙光，秦明，雷巧玲。
高脂饮食实验性大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)进展过程TIMP表达与肝纤维化的关系。
肝胆外科杂志2007年10月第15卷第5期。
●非酒精性脂肪性肝炎(NASH)动物模型建立：原理：同上方法：健康雄性SD大鼠20只，体重190±lOg，SPF级。
小型动物实验性肝纤维及肝硬化动物模型的研究进展
小型动物实验性肝纤维及肝硬化动物模型的研究进展肝纤维化是由于慢性肝病所致的持续或反复的肝实质炎症坏死而引起纤维结缔组织大量增生，其降解失衡导致肝内过多胶原沉积形成肝纤维化，肝纤维化为肝硬化早期阶段。
因此，慢性肝损伤动物模型的制备具有重要的研究意义。
肝纤维化的防治是国内外研究的热点，国内外对该模型的研究较多，为此笔者对几种常用的肝纤维化模型复制方法、机制及该模型的优缺点加以综述。
1 化学性肝损伤动物模型1.1 四氯化碳中毒模型该模型是国内外最广泛应用的肝纤维化和肝损伤模型。
将其溶于橄榄油、花生油等油溶液中，用浓度40% CCl4 ，按2ml/kg体重给予大鼠腹腔注射，2次/w，共8w～4个月不等。
单纯CCl4，一般采用30%～60%CCl4油剂皮下注射，剂量因动物种类而不同。
小鼠采用1～3ml/kg体重，2次/w，肝硬化可在12～15w形成。
该实验病理学改变8w出现早期纤维化症状，12w时肝小叶结构破坏，间质纤维组织增生，有明显肝纤维化症状明显增多，出现由再生肝细胞形成的假小叶。
但皮下注射过快，吸收入全身循环系统，脑肾毒性大，注射位置易发生浸润性脓肿和溃疡，故死亡率可高达30%～40%，降低CCl4浓度可降低死亡率，赵秋等[1]采用20%的CCl4死亡率为11%。
亦用腹腔注射、灌胃、蒸汽吸入或拌于食物中快速口服的方法。
吕明德等[2]采用饮食控制下，腹腔注射CCl4的方法制备犬肝硬变模型，也取得了满意的结果。
灌胃法优点在CCl4直接经门静脉到达肝脏，1.5h后肝内即可达最高水平，采用此法者较多，皮下注射CCl4形成时间比较慢，不如灌胃法好，灌胃的缺点仍然是死亡率较高，有的高达到52.9%。
许建明等[3]也采用CCl4和花生油混合液皮下注射，诱发小鼠肝纤维化模型，对不同期肝组织病理变化分析和肝脏生化指标的分析，结果发现，随造模时间延长，肝纤维化程度有逐渐增加的趋势。
至造模后期，模型组动物的血清白蛋白比例明显下降，可能系肝纤维化进行发展的后果，亦说明该模型后期可导致肝功能失代偿。
基于小鼠模型的肝纤维化和原发性肝癌研究
基于小鼠模型的肝纤维化和原发性肝癌研究肝纤维化和原发性肝癌是两种疾病，它们都与肝脏健康密切相关。
肝纤维化是一种进程性疾病，它的发生是由于各种因素导致的肝细胞受损，细胞死亡后，会形成纤维组织。
这个过程是逐渐发展的，细胞死亡和纤维组织增加，对肝脏的正常功能造成严重影响，最终进展成肝硬化。
原发性肝癌是一种恶性肿瘤，它发生在肝细胞或肝内纤维组织细胞。
这种疾病常常是由于慢性肝病引起的，如乙型肝炎、丙型肝炎和酒精性肝病等。
总的来说，研究肝纤维化和原发性肝癌，可以从肝脏健康和疾病预防角度出发，为肝脏及其他相关疾病的治疗奠定基础。
作为一种重要的动物模型，小鼠模型已被广泛应用于肝纤维化和原发性肝癌的研究。
从肝纤维化的角度来看，小鼠模型可以被用来研究诸如非酒精性脂肪性肝病（NASH）和肝炎病毒感染等因素对肝纤维化的作用。
例如，在 NASH 模型中，小鼠被喂养高脂饮食使其体内脂肪积聚，模拟人类的肥胖症，这种情况下，肝细胞会被困扰并逐渐受损，这些变化直接促进了肝纤维化和肝硬化的发展。
而在肝炎病毒感染模型中，科学家会给小鼠注射肝炎病毒，导致小鼠患上肝炎，随着肝脏细胞被破坏，纤维组织也会开始聚集形成，从而造成肝纤维化和肝硬化的发展。
这些模型的使用，可以模拟人类的病理过程，并有助于科学家理解人类肝疾病发生的机制，提供治疗方案。
肝癌是一种严重的恶性肿瘤，它的研究也使用了小鼠模型。
小鼠模型可以模拟人类肝癌的发展，例如带有特定基因突变的小鼠特别容易发生肝癌，这与人类的基因突变一样。
利用CRISPR-Cas9技术可以在小鼠体内改变某些基因的序列，从而形成肝癌。
在小鼠体内研究肝癌发展及肿瘤治疗的线索，可以为人类的治疗提供宝贵的信息和启示。
此外，研究人员还可以使用小鼠模型研究化疗、放疗和免疫治疗等方法，发现最佳治疗方案，提高治疗效果。
总之，小鼠模型已成为肝纤维化和原发性肝癌研究中不可或缺的工具，其使用大大推动了这个领域的发展。
但我们也要注意，在使用小鼠模型的过程中，必须严格控制伦理道德，保证实验的科学性，并尽量追求缩小和预测小鼠模型与人类疾病之间的差异，帮助人类的预防和治疗。
肝硬化的动物模型建立和实验技术
肝硬化的动物模型建立和实验技术肝硬化是一种严重的肝脏疾病，其特征是正常的肝组织逐渐被纤维组织所代替，导致肝脏结构和功能的丧失。
为了深入研究肝硬化的病理机制以及寻找有效的治疗方法，建立动物模型并进行实验研究是不可或缺的。
一、动物模型的选择在肝硬化的研究中，常用的动物模型包括大鼠、小鼠、猪等。
其中，大鼠模型是最常用的，因其具有较高的肝再生能力和相似的肝脏结构与功能。
通过不同的方法，如化学诱导、手术切除和基因改变等，可以建立不同类型和程度的肝硬化动物模型。
二、化学诱导模型化学诱导模型是建立肝硬化动物模型的常用方法之一。
通过给予动物一定剂量的化学物质，如四氯化碳、二乙二硫、酒精等，可以引起肝脏损伤和纤维化反应，最终形成肝硬化。
这种方法操作简单、成本低廉，适用于大规模的实验研究。
三、手术切除模型手术切除模型是通过手术切除部分肝脏来诱导肝硬化的动物模型。
这种方法可以模拟肝脏创伤和再生过程，使肝脏发生纤维化和肝硬化的变化。
尽管手术切除模型的操作较为复杂，但其能更好地模拟肝脏病理变化，有助于深入研究肝硬化的发展机制。
四、基因改变模型基因改变模型是通过改变特定基因的表达或功能来诱导肝硬化的动物模型。
例如，利用转基因技术或基因敲除技术，可以使动物缺乏某些重要的代谢酶或细胞因子，从而导致肝脏损伤和纤维化。
这种模型可以模拟人类遗传性肝硬化的发展过程，对疾病的机制研究和治疗策略的探索具有重要意义。
五、实验技术在肝硬化的实验研究中，常用的技术包括组织病理学分析、分子生物学方法、影像学技术等。
组织病理学分析可以通过染色和显微镜观察肝脏组织的病理变化，如纤维化程度、炎症反应等。
分子生物学方法可以用来检测相关基因的表达水平和蛋白质的变化，以揭示肝硬化的发生机制。
影像学技术，如超声、CT、MRI等，可以非侵入性地观察肝脏的形态和功能变化，为肝硬化的诊断和治疗提供重要依据。
总结起来，肝硬化的动物模型建立和实验技术是深入研究该疾病的重要手段。
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山 丽 Ｚ 压 亏院 亏 搪 ２ ０ １ ３ 年 第２ ３卷 第２ 期
ｍｉ ｅ ｅ ［ Ｊ ］ ．Ｉ ｎ Ｖ ｉ ｖ ｏ ， ２ ０ ０ ３， １ ７ （ １ ） ： ５ — １ １ ． ［ １ ６］ 童伯 瑛 ． 拔 罐 刺 激 量 的研 究 ［ Ｄ］ ． 河南 中 医学 院 ， ２ ０ ０ ８ ．
能 。因此 ， 把在 动物 模 型观 察 到 的结 果应 用 到 临床 上
时必 须格 外小 心 。
虽然 动物 模型 对理解 病 理生理 过程 具有 巨大 的价
动物模 型 可进 行 的研 究包 括 ： ａ ）在 人类 研究 中不
值， 但他们 是模 型 的本质 没有 发生 改变 ， 他们 不 能重 复 再 现真 正 的人 类 疾 病 。所 以说 ， 每一个模 型 （ 包含 目
标、 设计 、 株系和物种） 显 示 纤 维 化 的发 病 机 制 、 局 部
能被 解决 的问题而 需要 复杂 而全 面 的研 究 ； ｂ ）在疾 病
演化 与 回归 的关键 时刻 进行 多次 采样 ； ｅ ）实验 测试 的
变量 数 可 以保 证科 学试 验要 求 的最低 限度 。与体 外模 型 相反 ， 整个 器 官 是 完 整 的 （ 不 同类 型 的 细胞 和基 质 之 间 的相互 作 用 ） ， 也 是 一 个 活体 的 一 部 分 ， 神经 、 内 分泌 、 神经 内分 泌 、 循 环 系统 、 饮食 、 肠源性等等 ， 这 些 因素 的影 响也能 得 到兼顾 Ｊ 。 动物模 型 的缺 点是 在 动 物 身 上 复制 人 类 疾病 ， 他 们在 免疫 反应 、 基 因表达／ 调控 、 代谢 、 药 理或 组织反 应
效地 对肝 纤 维化发 病机 制进行 深入研 究 ， 同 时 也 可 以作 为 一 个很 好 的 手 段 实施 高 通 量 筛 选 抗 肝 纤 维 化 药 物 。 本
文 就 如 何 制 备 肝 纤 维 化 的 动 物 模 型 分 别 从 体 内动 物 模 型 与 体 外 细 胞 离体 培 养 模 型 两 个 方 面 作 阐 述 。 ［ 关 键词 ］ 肝 纤 维化 ； 体 内研 究模 型 ； 体 外研 究模 型 ； 肝 星状 细胞
要 机制 和纤 维化 相关 胞 内信号 通 路 的识 别 ， 基 质 重 塑
和纤维 化可 逆性 的 概念 和 机 制 …… ） 的 重大 进 展 都来 自动 物模 型的研 究 ， 来 自实验结 果与 临床 资料 的对 比 。
１ 肝 纤维 化 的体 内研究模 型
体相 同 的结 果 ， 这对于任何动物模 型而言 ， 几 乎 不 可
中 国针 灸 ， ２ ０ ０ ２， ２ ２ （ ９ ） ： ６ ３ １ ． ６ ３ ２ ．
［ １ ３］ 张
英． 不 同灸治时程对红细胞免疫 功能影 响的 比较 ［ Ｊ ］ ． 中国
［ １ ８ ］ 贺妮 娜 ， 樊小农， 王 舒 ， 等． 正交 设 计 法 在针 灸研 究 中的应
用［ Ｊ ］ ． 针 灸 临床 杂 志 ， ２ ０ １ １ ， ２ ７（ １ ） ： ６ ３ ＿ ６ ５ ．
针灸 ， ２ ０ ０ ０， ２ ０ （ １ ０ ） ： ６ １ ３ ￣１ ４ ．
［ １ ４］ 赵天平 ， 口锁堂 ， 马晓芄 ， 等． 正交设计研究艾灸对 溃疡性结肠炎
大 鼠穴 区 温 度 和 Ｃ ｘ ４ ３表 达 的作 用 ［ Ｊ ］ ． 上海针 灸杂志 ， ２ ０ １ ０ ， ２ ９
［ 中图分 类号 ］ Ｒ ５ ７ ５ ． ２
［ 文献 标识 码 ］ ｃ
［ 文章 编号 ］ １ ６ ７ １ － － ０１ ２ ６（ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ － ０ ０ ６ ２ ０３ －
肝 纤维 化是 许多 无关损 伤病 因的慢性 肝病 的一个 典 型 的结果 。它来 自生理 伤 口愈合反 应 的连续 轮 回或 长期 激活 ， 从 而维持 了持 久性纤 维形 成 ， 最终导 致器 官 的渐 进纤 维化 ¨ Ｊ 。为研 究肝 纤 维 化 ， 评 估 治疗 方 法 和 策 略 的抗 肝纤 维化 效 果 ， 几 十 年来 动 物 模 型一 直 都 在 被使 用 Ｊ 。该 领域 （ 纤维 化 动 力学 ， 基 质 生 成 细胞 、 主
Hale Waihona Puke 纤维 化诱 导刺激 的选 择 根 据 的 是 研究 者 的想 法 ， 期 望 与动 物反 应相联 系起 来 的发病 机制 能够 类似 于那 些发 生在 人类 相关疾 病 的机制 。这 种想 法 在某种 情况 下可 能 是 自欺 欺人 、 一 厢 情愿 的 。为人 类 疾 病 提 供 一 个 完 美 的模 拟 、 涉 及 相 同 的致 病 因素 和 病 理 生 物 学 过 程 （ 包括免 疫／ 炎 症 反应 ） ， 病 理 和疾 病 重 现 性 达 到 与 人
肝 纤 维 化 的 动 物 模 型 制 备 研 究
王 晓 丽
（ 临汾职业技术学院 ， 山西 临 汾 ０ ４ １ ０ ０ ０ ）
［ 摘
要］ 肝 纤 维化 是 肝 损 伤 后 不 断 进 行 愈 合 修 复 反 应 的 结 果 ， 其 发 病 机 制 复 杂 。 选 择 合 适 的 研 究 模 型 可 以 有