方法检测猪瘟病毒的 比较及应用
非洲猪瘟的检测技术
非洲猪瘟的检测技术非洲猪瘟是一种高度致死性、急性传染病，主要通过直接接触、飞沫传播和病毒污染引起猪类的感染。
这种病毒传染能力极强，而且在猪类社群中极易传播，给养殖业、经济和社会带来严重的困扰。
因此，研究非洲猪瘟的检测技术对于疾病控制和防范具有重要的意义。
非洲猪瘟的传播与发病过程比较复杂，因此应采用多种技术进行综合检测。
常用的检测技术包括病毒分离法、酶联免疫吸附试验（ELISA）、PCR技术等。
病毒分离法是一种直接检测非洲猪瘟病毒的方法，通过对检测样品进行病毒分离和纯化，进而用于检测病毒感染的存在和数量。
病毒分离法的优点在于可以检测出非洲猪瘟病毒，并具有较高的特异性和敏感性。
但该方法操作繁琐，需要具有较高的实验技能和专业知识才能得到准确的结果。
ELISA是一种间接检测非洲猪瘟病毒抗体的方法，通过检测猪体内的非洲猪瘟病毒特异性抗体，判断猪是否被感染。
ELISA方法具有快速、准确和经济的优点，适合用于检测大量猪的群体免疫情况。
但该方法有可能产生假阳性或假阴性结果，操作时需要千丝万缕遵循操作规范。
PCR技术是研究非洲猪瘟检测技术的大热门，该技术基于特定的引物，选择性扩增非洲猪瘟病毒的核酸片段，通过检测PCR扩增产物的存在和数量，判断猪是否被感染。
PCR技术适用于各种非洲猪瘟病毒的分型、溯源和变异分析，以及对复杂样品的检测和快速获得结果。
但需要特定的设备和配套试剂，并且对样本的操作和提取过程要求非常苛刻，容易出现污染和假阳性等问题。
总的来说，非洲猪瘟的检测技术发展日新月异，涉及的技术和人力资源也越来越丰富。
检测技术的选择应根据检测目的、检测样品类型和可用资源等方面来确定。
虽然每种方法都具有其特定的优缺点，但应根据实际需要选择最适合的技术方法来进行研究。
猪猪瘟病的检测与预防
猪猪瘟病的检测与预防猪瘟，又被称为猪猪瘟病，是一种高度传染性的猪类疾病，给养殖业带来了严重的经济损失。
为了保护猪群健康，减少疫情发生，猪猪瘟病的检测与预防显得尤为重要。
本文将介绍猪猪瘟病的检测方法和预防措施，并提供一些有效的建议。
一、猪猪瘟病的检测方法1. 临床症状观察法临床症状观察法是最直观的猪猪瘟病检测方法之一。
当猪出现咳嗽、发热、皮肤发紫、呕吐和腹泻等症状时，很可能是猪瘟的病征。
养殖人员应及时隔离病猪，防止病情扩散。
2. 病毒学检测方法病毒学检测方法是确诊猪猪瘟病的关键。
目前常用的病毒学检测方法包括免疫荧光法、PCR法和病毒分离法。
这些方法可以对猪猪瘟病的病原体进行准确快速的检测，为后续的防控工作提供科学依据。
3. 血清学检测方法血清学检测方法主要通过检测猪血液中的抗体来判断是否感染猪瘟病毒。
常用的血清学检测方法包括酶联免疫吸附检测法（ELISA）和血凝法。
这些方法可以检测猪瘟病毒的感染情况及猪群的免疫水平，有助于制定针对性的防控策略。
二、猪猪瘟病的预防措施1. 加强养殖环境与卫生管理加强养殖环境与卫生管理是预防猪瘟病的基本措施之一。
保持猪舍清洁，经常进行消毒，减少病原菌的滋生和传播。
同时，要加强场地的隔离防护措施，避免与其他养殖场接触，减少疫情传播的风险。
2. 严格的入场检疫制度建立严格的入场检疫制度对于防止猪瘟病毒的传入至关重要。
新引进的猪只应进行疫苗接种和常规检测，确保其健康状态。
同时，要加强运输车辆的消毒工作，防止病原体的传播和扩散。
3. 合理使用疫苗疫苗接种是防控猪瘟病的重要手段之一。
养殖户可以依据当地的疫情情况和养殖规模，选择适当的疫苗进行预防接种。
同时，要充分了解疫苗的使用方法和注意事项，确保接种的效果和安全性。
4. 健康管理与监测健康管理与监测是预防猪猪瘟病的重要环节。
定期进行猪群的健康检查，观察猪只是否有异常症状，并及时采取措施进行防控。
此外，要加强与兽医部门的合作与沟通，及时获取疫情信息，做好防疫工作。
猪瘟实验室检测与预防免疫
猪瘟实验室检测与预防免疫猪瘟，也叫猪繁殖与呼吸综合征，是由猪瘟病毒引起的一种严重传染病，对猪的生产造成了巨大的经济损失。
为了及时发现、控制和预防猪瘟的传播，需要进行猪瘟实验室检测与预防免疫。
以下是关于猪瘟实验室检测与预防免疫的介绍。
猪瘟实验室检测是通过检测样品中的猪瘟病毒来确定是否感染了猪瘟。
常用的检测方法有病毒分离、酶联免疫吸附试验（ELISA）、聚合酶链式反应（PCR）等。
病毒分离是最常用的方法，通过将疑似感染的样品接种到细胞培养物中，观察细胞是否出现病变，进而确定是否存在猪瘟病毒。
ELISA和PCR则是通过检测样品中的病毒抗原或基因来快速确认猪瘟病毒的存在。
这些检测方法可以迅速、准确地确定猪瘟的感染情况，有助于及早采取控制措施，阻断病毒的传播。
猪瘟的预防免疫是通过疫苗接种来提高猪的免疫力，减少感染猪瘟的风险。
猪瘟疫苗主要有活体疫苗和灭活疫苗两种。
活体疫苗是用病毒培养液制备的，接种后可以在猪体内复制繁殖，产生免疫效果。
而灭活疫苗是用猪瘟病毒灭活后制备的，虽然不能在体内复制繁殖，但可以激发猪的免疫力，起到预防效果。
在猪病毒感染高风险地区，猪瘟的预防免疫是非常重要的一项工作。
定期接种疫苗，能够有效降低猪感染猪瘟的风险，减少经济损失。
除了实验室检测和预防免疫，还有其他预防控制措施可以帮助防止猪瘟的传播。
首先是加强猪场的卫生管理，保持猪舍清洁，并定期消毒。
其次是加强猪场的综合治理，合理分组，避免不同年龄猪只接触，减少疾病的传播。
还应加强猪场的动物交通控制，限制外来动物进入，避免感染猪瘟病毒。
对于发现疑似感染猪瘟的猪只，应立即隔离，并采取相应的治疗措施，防止病毒扩散。
猪瘟实验室检测和预防免疫是控制和预防猪瘟传播的重要方法。
通过及时检测和接种疫苗，可以在疾病发生前发现并阻断病毒传播，减少经济损失。
加强病毒传播的预防控制措施也是非常重要的，能够有效保护猪的健康。
猪瘟的预防工作需要全社会的共同努力，确保猪业的良好发展。
非洲猪瘟的监测与诊断技术
非洲猪瘟的监测与诊断技术非洲猪瘟（African Swine Fever, 简称ASF）是一种由非洲猪瘟病毒引起的高度传染性疾病，对猪的养殖业造成了巨大的经济损失。
为了及时监测和准确诊断非洲猪瘟，科学家们开发出了一系列的监测与诊断技术。
本文将介绍非洲猪瘟的监测与诊断技术，并探讨其在防控非洲猪瘟中的作用。
一、病毒检测技术1. PCR技术聚合酶链反应（PCR）是一种常用的病毒检测技术，它通过特异性引物和酶的催化作用，扩增样本中的病毒核酸。
PCR技术能够快速、准确地检测非洲猪瘟病毒的存在，且对病毒精确度高，检测时间短，是非洲猪瘟监测中的重要工具。
2. ELISA技术酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的病毒抗体检测技术。
ELISA技术利用酶与病毒抗原或抗体结合的特异性反应，通过比色反应或荧光反应判断样品中是否存在非洲猪瘟病毒抗体。
ELISA技术具有简单、快速、灵敏度高的特点，在非洲猪瘟的早期监测和诊断中起到了重要的作用。
二、病理学检测技术1. 组织病理学检测组织病理学检测是通过对猪体组织进行病理学检查，确定是否存在非洲猪瘟的一种技术。
该技术可通过显微镜观察病变组织的形态学改变，如出血、水肿、坏死等，进一步确定非洲猪瘟的病情。
2. 免疫组织化学检测免疫组织化学检测是利用特异性抗体与组织中的抗原结合来检测非洲猪瘟病毒的存在。
该技术具有高度特异性和灵敏度，可以帮助鉴定非洲猪瘟的病毒类型和分布范围。
三、流行病学调查技术1. 临床症状观察通过对猪群的临床症状进行观察，可以初步判断是否存在非洲猪瘟的流行。
非洲猪瘟的临床症状包括发热、食欲减退、呕吐、腹泻、呼吸急促等。
准确观察和记录症状，能够帮助科学家对非洲猪瘟进行快速且准确的流行病学调查。
2. 血清学调查血清学调查通过对猪群的血清标本进行病毒抗体或病毒核酸的检测，了解猪群中非洲猪瘟的感染率和传播情况。
血清学调查是非洲猪瘟监测的重要手段之一，可以帮助科学家及时采取控制措施，防止病毒的扩散。
非洲猪瘟的实验室检测技术与质量控制
非洲猪瘟的实验室检测技术与质量控制非洲猪瘟是一种高度传染性的猪病，对猪养殖业造成了巨大的经济损失。
为了及早发现和控制非洲猪瘟的传播，实验室检测技术和质量控制在疾病监测和病毒鉴定中起着至关重要的作用。
本文将重点介绍非洲猪瘟的实验室检测技术，并探讨质量控制在检测中的重要性。
一、实验室检测技术1. PCR技术聚合酶链反应（PCR）是非洲猪瘟病毒检测中最常用的技术之一。
它能够从动物组织或血液样本中快速检出病毒的核酸。
PCR技术具有高灵敏度和高特异性，可以在感染初期就进行检测。
此外，PCR技术还可以区分非洲猪瘟病毒与其他相关病毒的差异，提高了检测的准确性。
2. ELISA技术酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种常用的检测非洲猪瘟病毒抗体的技术。
ELISA技术通过检测动物血清中的特定抗体水平来确定是否有非洲猪瘟病毒感染。
ELISA技术具有高效、准确、简便的特点，并可以进行大量样本的快速筛查。
3. 病毒分离与鉴定病毒分离与鉴定是为确定病原体是否存在以及其类型、亚型和基因组序列等信息提供关键数据的技术。
通过将实验室动物感染或组织样本接种到适当的细胞培养物中，可以成功分离非洲猪瘟病毒。
然后，通过电镜观察和核酸测序等方法，可以鉴定病毒的特征和亚型。
二、质量控制在非洲猪瘟实验室检测中，质量控制起着至关重要的作用，可以保证检测结果的准确性和可靠性。
以下是一些常用的质量控制措施：1. 内部质控实验室应建立内部质控计划，包括使用已知标准样本进行日常质控，以确保实验的稳定性和准确性。
这些标准样本应包括阳性对照、阴性对照和质量控制样本，用于验证实验室的操作流程和仪器设备的性能。
2. 外部质控参与外部质控项目有助于实验室评估其检测结果的准确性和可靠性。
外部质控项目由国家或国际组织组织，实验室需按要求参加，接受其他实验室的盲样品检测，并比对结果评估自身实验室的准确性。
3. 人员培训和认证实验室工作人员需要进行相关培训，包括病毒检测技术的理论和实践，操作规范以及质量控制流程。
生猪屠宰检疫中猪瘟检验检疫方式与处理方法
生猪屠宰检疫中猪瘟检验检疫方式与处理方法1. 引言1.1 猪瘟病毒简介猪瘟病毒，又称非洲猪瘟病毒，是一种由非洲猪瘟病毒引起的高度传染性疾病。
这种病毒主要影响猪类动物，具有较高的传染性和致死性，严重危害猪类养殖业。
猪瘟病毒主要通过直接接触感染、气溶胶传播和污染性食物传播等途径传播。
病毒进入猪体后，会在短时间内迅速扩散，造成多系统损害，引起严重的胃肠道症状和呼吸系统症状。
猪瘟病毒具有较高的变异性和抗药性，使得其对传统疫苗治疗和控制手段产生一定的挑战。
在世界范围内，猪瘟病毒一直是畜牧业面临的头等重大危机之一。
对猪瘟病毒的检验和检疫工作显得尤为重要，只有及时准确地检测和防控猪瘟病毒，才能有效地遏制疫情蔓延，保障猪类养殖业的健康发展。
【2000字】1.2 猪瘟检验的重要性猪瘟是一种严重危害猪类的传染病，猪病毒性病害，有着发病快、传播快、死亡率高等特点。
由于猪瘟高度传染性和致死性，一旦发生疫情很容易造成重大经济损失，甚至引起社会动荡。
猪瘟检验的重要性不言而喻。
猪瘟检验可以及时发现患有猪瘟的猪只，从而阻止其传播。
通过对潜在感染猪只进行检测，可以及时隔离和治疗，减少疫情的蔓延范围，降低疫情的危害程度，保护养猪业的积极健康发展。
猪瘟检验可以保障生猪产品的质量安全。
只有确保生猪没有患猪瘟，才能保证生猪及其产品的卫生安全，保障消费者的健康。
通过严格的检验制度和流程，可以有效降低猪瘟病毒进入人类食物链的风险。
猪瘟检验的重要性不仅在于防控猪瘟疫情，更在于保障食品安全和公共健康。
加强猪瘟检验工作，有助于提升养猪业的健康水平，促进畜牧业的可持续发展。
2. 正文2.1 猪瘟检疫的方式1. 临床观察：通过仔细观察猪只的体温、行为、食欲等情况来判断是否存在猪瘟病症。
病猪通常会出现发热、食欲下降、呕吐、腹泻等症状。
2. 实验室检测：利用PCR技术检测猪只体液中的猪瘟病毒DNA，以确认是否感染猪瘟。
还可以进行血清学检测，检测猪只体液中是否含有猪瘟病毒抗体。
猪瘟的诊断与治疗
猪瘟的诊断与治疗
猪瘟，又称猪繁殖与呼吸综合症（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS），是一种高度传染的猪类疾病，主要通过病毒和空气传播。
猪瘟的诊断主要通过临床观察、病毒分离和检测、抗体检测等方法进行。
1. 临床观察：猪瘟的临床症状主要表现为咳嗽、呼吸困难、发热、流鼻涕、倒地、
流产、新生猪仔死亡等。
典型的临床症状可作为初步诊断的依据。
2. 病毒分离和检测：通过采集病死猪或病猪的血液、组织等样本，进行病毒的分离
和检测。
常用的方法包括病毒培养、PCR（聚合酶链反应）等。
3. 抗体检测：通过采集猪的血清样本，利用酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法进行
抗体检测，判断猪是否感染了猪瘟病毒。
猪瘟的治疗目前尚无特效药物，主要是通过提高免疫力和预防疫情的蔓延来控制病
情。
1. 免疫增强：给猪注射猪瘟疫苗可以提高猪的免疫力，减轻病情。
疫苗接种应该在
猪舍消毒后进行，采取弱毒苗接种的方法。
2. 病毒抑制剂：目前已有一些抗猪瘟病毒的药物在临床实践中使用，如金刚烷胺、
阿托伐他汀等。
不过，这些药物的疗效尚有争议，需要更多的研究来确定其治疗效果。
3. 防控措施：采取严格的生物安全措施，加强猪舍的消毒与隔离，控制病情的扩散。
注意病毒的传播途径，减少猪之间的接触，避免交叉感染。
猪瘟的诊断主要依靠临床观察和病毒检测，而治疗则主要通过疫苗接种、免疫增强和
生物安全措施来控制病情。
尚需进一步研究和探索更有效的治疗方法。
猪瘟的诊断与治疗
猪瘟的诊断与治疗
猪瘟是一种严重的传染病，由猪瘟病毒引起，主要影响猪的呼吸道系统。
猪瘟的早期症状包括发热、咳嗽、流涕、眼部炎症和食欲不振。
当病情恶化时，病猪可能出现呼吸急促、肺部感染和严重的全身性病症。
如果不及时进行诊断和治疗，猪瘟可能导致猪群内大规模的死亡。
猪瘟的诊断通常采用临床症状观察和实验室检测相结合的方法。
在早期阶段，猪瘟的临床症状往往与其他呼吸道疾病相似，这就需要通过实验室检测来确定猪是否感染了猪瘟病毒。
常见的实验室检测方法包括鼻腔和淋巴结样本的PCR检测、血清学检测和病毒分离等。
通过这些方法可以快速、准确地确定猪是否感染了猪瘟病毒，从而及时采取有效的治疗措施。
猪瘟的治疗主要包括对病猪进行隔离、对症治疗和疫苗接种。
在猪瘟疫情爆发时，需要对疑似感染猪进行隔离，防止病毒传播给其他健康猪。
对于确诊感染猪，需要进行对症治疗，包括给予抗生素治疗和支持治疗，以帮助病猪度过疾病的高峰期。
为了预防猪瘟的再次爆发，需要对猪群进行猪瘟疫苗接种，提高猪群的免疫力，减少猪瘟病毒在群体内的传播。
猪瘟是一种严重的传染病，一旦爆发会带来严重的经济损失。
在日常养猪生产中，需要加强对猪瘟的预防和控制，密切观察猪群的健康状况，及时进行诊断和治疗，有效遏制猪瘟的传播，确保猪群的健康。
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中国动物传染病学报 2010,18(3):66-72Chinese Journal of Ani m al I nfecti ous D iseases・简报・两种荧光定量PCR 方法检测猪瘟病毒的比较及应用袁雪梅1,2,陈 宁2,陈 宇3,王 萍1,童 超2,李得江2,万 婧2,李肖梁2,方维焕2(1.江西农业大学动物科学技术学院,南昌330045;2.浙江大学动物预防医学研究所浙江省动物预防医学重点实验室,杭州310029;3.农标普瑞纳(嘉兴)饲料有限公司,嘉兴314002)摘 要:根据猪瘟病毒(Classical s wine fever virus,CSF V )5θ端非编码区保守区域,设计猪瘟病毒特异性的引物和探针,建立了基于SY BR Green 和Taq M an 探针的两种荧光定量PCR 检测方法。
灵敏性和特异性试验结果表明,两种方法能够特异性地检测出不同型的猪瘟病毒,而对同属的牛病毒性腹泻病病毒以及其它一些主要猪病病原检测结果均为阴性。
两种方法对猪瘟病毒C 株的检测下限均为101T C I D 50,均高于常规的套式PCR 。
用携带该基因片段的重组质粒为模板进行检测,SY BR Green 方法的检测下限为3×100cop ies,比Taq Man 探针方法更加灵敏(3×101cop ies )。
应用建立的SY BR Green 方法对2009年采集于浙江地区不同猪场的20份病猪样品进行CSF V 检测,有8份样品为阳性,与套式PCR 方法检测结果一致。
进一步应用SY BR Green 方法对不同感染阶段细胞内病毒RNA 复制水平进行检测,与病毒滴度的结果基本一致。
因此,本研究建立的SY BRGreen 荧光定量PCR 检测方法能够应用于组织和培养细胞中猪瘟病毒的检测。
关键词:猪瘟病毒;5θ非编码区;荧光定量PCR 中图分类号:S852.659.6 文献标识码:A文章编号:1674-6422(2010)03-0066-07收稿日期:2010204222基金项目:杭州市科技创新服务平台项目(20082332Y03)作者简介:袁雪梅,女,硕士研究生,预防兽医学专业通讯作者:方维焕,E 2mail:whfang@zju .edu .onCOM PAR I S O N AND APPL I CAT I O N O F S Y BR GREEN AN D TAQ M ANBASED REAL 2T IM E PCR ASSAY S FO R D ETECT I O N O FCLASS I CAL S W INE FEVER V I RUSYUAN X ue 2m ei1,2,CH EN N ing 2,CH EN Yu 3,W AN G Ping 1,TON G C hao 2,L I D e 2jiang 2,W AN J ing 2,L I X iao 2liang 2,FAN G W ei 2huan2(1.College of A ni m al Science,J iangxi A gricultural U niversity,N anchang 330045,China; 2.Zhejiang Provincial KeyL aboratory of Preventive V eterinary M edicine,Institute of Preventive V eterinary M edcine,Zhejiang U niversity,Hangzhou 310029,China; 3.A gribrands Purina Feedm ill Co .,L td,J iaxing 314002,China )Abstract:SY BR Green and Taq Man p r obe based quantitative real 2ti m e PCR (qRT 2PCR )assays targeting the conserved 5θ2UTR regi on were established for detecti on of classical s wine fever virus (CSF V ).The t w o assays were capable of s pecifically detecting different gr oup s of CSF V,whereas bovine viral diarrhea virus and a nu mber of other porcine viruses were tested negative .The detecti on li m it was 101TC I D 50f or both assays on the vaccine C 2strain,more sensitive than that of conventi onal RT 2nested PCR.U sing the recombinant p las m id containing the 5θ2UT R gene as te mp late,the detecti on li m it was 3.0×100and 3.0×101cop ies for SY BR Green and Taq Man based qRT 2PCR,res pectively .Out of 20sa mp les of diseased p igs collected fr om Zhejiang p r ovince in 2009,8sa mp les were positive f or CSF V by SY BR Green based qRT 2PCR,which was consistent with those using RT 2nested PCR.The SY BR Green based qRT 2PCR was further app lied t o detecti on of viral RNA in PK 215cells infected with CSF V.The curve of accu mulated viral RNA was in agree ment with the infectivity titer at different ti m es post 2infecti on .Theref ore,the SY BR第18卷第3期 袁雪梅:两种荧光定量PCR方法检测猪瘟病毒的比较及应用・67 ・Green based qRT2PCR is s pecific and sensitive f or detecti on of CSF V in tissue and cultured cells.Key words:Classical s wine fever virus;5θ2UT R;real2ti m e PCR 猪瘟(classical s wine fever,CSF)是猪的一种高度接触性传染病[1],其病原为黄病毒科、瘟病毒属的猪瘟病毒(Classical s wine fever virus, CSF V)[2]。
由于各国对猪瘟的防治工作非常重视,一些国家和地区已先后消灭猪瘟。
但随着目前养猪业的集约化和生猪贸易的全球化,猪瘟对全球养猪业仍构成严重威胁。
近年来,我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化,流行形式以地方性散发流行为主,症状由典型转变为非典型温和型猪瘟,表现为亚临床症状,如:母猪繁殖障碍,新生仔猪先天性感染造成免疫抑制、成年猪隐性带毒等[3-5]。
这些新的流行和发病特点对快速、及时和准确检测该病提出了更高的要求。
国内外对CSF V的常规检测方法有病毒分离鉴定、免疫荧光、血清学检测和RT2PCR等。
但这些方法在时效性、灵敏性和特异性等方面均存在一些不足[6-7]。
近年来发展起来的荧光定量PCR技术以其灵敏度高、速度快、特异性强等优点,在病原检测、基因差异表达以及病毒感染的定量检测等方面得到广泛应用。
本研究首先建立了基于SY BR Green和Taq Man探针的荧光定量PCR检测猪瘟病毒的方法,并比较了其特异性、灵敏性和重复性,进而应用SY BR Green荧光定量PCR方法对组织病料和培养细胞中的猪瘟病毒进行了检测。
1 材料与方法1.1 病毒、细胞与菌种 猪瘟病毒包括基因1型的C株和Shi m en株以及基因2型的HZ208和QZ2 07毒株。
猪圆环病毒2型(Porcine circoviruses ty pe 2virus,PC V2)SY4毒株、猪蓝耳病病毒(Porcine rep r oductive and res p irat ory syndr ome virus,PRRS V) JX07毒株、牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)O reg on毒株、PCV阴性PK2 15细胞、宿主菌DH5α均由本室保存。
1.2 主要仪器与试剂 i Q T M5荧光定量PCR仪购自B i o2Rad公司;ME M培养基购自GI B CO公司;胎牛血清购自四季青公司;小量病毒RNA抽提试剂盒购自上海生物工程技术服务有限公司;连接试剂盒、pMD218T载体和Taq Man探针荧光定量试剂盒均购自TaKaRa大连宝生物公司; SY BR Green荧光定量试剂盒购自T OY OBO东洋纺公司。
1.3 引物和探针的设计与合成 根据Gen Bank 中CSF V5θ端非编码区保守序列的分析,结合其他研究者的结果,用Pri m er exp ress5.0设计引物和探针(见表1),引物由上海I nvitr ogen公司合成,探针由TaKaRa大连宝生物工程公司合成。
表1 CSFV荧光定量PCR的引物和探针序列Table1 Pr i m ers and probe used i n the CSFV rea l2ti m e PCR a ss ays引物名称Pri m ers序列Sequences位置Locati on长度(bp)Length52UT R2U15θ2AGCTCCCTGGGTGGT CT AAGTC1472168a2252UT R2L5θ2CT CCCAGC ACGTGGTGTG ATTT C2832305a2352UT R2U25θ2TGGGTGGTCT AAGTCCTG AGT A1542175a22Pri m er2p r obe2U5θ2CT CCCTGGGTGGTCT AAGT1492167a19Pri m er2p r obe2L5θ2GCT AGGGTT AAGGTGTGT CTT2472267a21Pr obe5θ2F AM2CTG AGT ACAGG AC AGTCGTCAGT AGTTC2BHQ11692196a28β2actin2U5θ2CT CG ATC ATG AAGTGCG AC4742492b21β2actin2L5θ2GTG ATCTCCTTCTGC ATCCTGTC5652587b23 注:a引物及探针在疫苗C株全基因组中的位置;“b”引物在β2actin基因组中的位置 Note:a Locati ons are derived fr om the genome of C2strain(Gen Bank Z46258);“b”Locati ons are derived fr omβ2actin gene (Gen Bank U07786)・68 ・ 中国动物传染病学报2010年5月1.4 标准品的制备 提取疫苗C株的病毒基因组RNA,用引物52UTR2L反转录基因组52UTR片段。