胰蛋白酶抑制剂对Wnt信号通路的作用
Wnt信号通路调控角膜缘干细胞治疗角膜缘干细胞缺乏症
文题释义： Wnt 信号通路：Wnt 信号通路是一条高度保守的信号通路，在干细胞调控中发挥重要作用。当细胞外 Wnts 与细胞膜上特异性受体 Frizzled 蛋白结合导致 GSK3β 失活，β-catenin 在胞质中积累继而向胞核转位，标志 着 Wnt 通路被激活。β-catenin 在细胞核中与转录因子 Tcf /LEF 结合启动下游基因而发挥功能。 角膜缘干细胞：角膜缘为角膜和结膜、巩膜交界部分，角膜缘干细胞存在于角膜缘的 Vogt 栅栏结构中，属于 单能干细胞，在角膜损伤修复中发挥重要作用。角膜缘干细胞缺乏是由于眼表各类损伤(化学伤、严重的感染 等)或者基质微环境异常(先天性无虹膜、放射线所致角膜病)导致角膜上皮被结膜上皮侵犯和替代。
Corresponding author: Han Bo, Department of Ophthalmology, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022, Hubei Province, China
Abstract BACKGROUND: Wnt signaling pathway plays an important role in the regulation of stem cells, but its regulatory effect on limbal stem cells is not well defined. OBJECTIVE: To investigate the regulation of limbal stem cells via Wnt signaling pathway and its function in the treatment of limbal stem cell deficiency. METHODS: Rat limbal segments were digested with Dispase and trypsin/EDTA and then single limbal stem cells were seeded in 3D-Matrigel. In experimental group LiCl (500 μmol/L) was added to the culture system. Control group received no LiCl. The expression levels of p63α, CK12, CEBPδ and Ki67 in limbal stem cells were detected by qRT-PCR on the 7th day of culture. The expression level of β-catenin in limbal stem cells was detected by immunofluorescence staining. The rat model of limbal stem cell deficiency was made by alkali burn method. Rats in treatment group were treated with Wnt-activated limbal stem cells by subconjunctival injection. Rats in control group were treated with PBS. Rats were checked by slit lamp every day. On the 4th day after treatment, the immunofluorescence staining and hematoxylin-eosin staining were applied to evaluate the repair of limbus. RESULTS AND CONCLUSION: (1) The limbal stem cells aggregated in 3D-Matrigel. β-Catenin was negative in the control group. β-Catenin was found in the cytoplasm and nucleus of the limbal stem cells in the experimental group. (2) qRT-PCR results showed there was no significant difference in the levels of p63α, CK12 or CEBPδ between control and experimental groups (P > 0.05). The Ki67 level in the experimental group was significantly higher than that in the control group (P < 0.05). (3) The rat models of limbal stem cell deficiency were established. The degree of corneal opacity in the treatment group was significantly lower than that in the control group (P < 0.05). Hematoxylin-eosin staining results observed that the corneal epithelial cells in the treatment group were neatly arranged, the cell size was uniform, and repair was good. Immunofluorescence staining showed that β-catenin was found in the cytoplasm and nucleus of most corneal epithelial cells in the treatment group. While β-catenin was only weakly positive in the control group, and was invisible in the cytoplasm or nucleus. (4) These results indicate that activation of Wnt signaling pathway in limbal stem cells enhances their proliferation and keeps them in an undifferentiated self-renewal state. Wnt-activated limbal stem cells can promote the regeneration of corneal epithelium and reduce the degree of corneal opacity in the treatment of limbal stem cell deficiency. The regulation of limbal stem cells via Wnt signaling pathway is expected to provide new ideas for the treatment of limbal stem cell deficiency. Key words: Wnt signaling pathway; limbal stem cells; limbal stem cell deficiency; self-renewal Funding: the National Natural Science Foundation of China, No. 81400378 (to HB)
wnt信号通路检测指标
wnt信号通路检测指标
Wnt信号通路检测指标主要包括以下几个方面：
1. β-catenin蛋白表达水平：Wnt信号通路激活后，β-catenin 蛋白的稳定性增加，其在细胞内的表达水平也会相应升高。
因此，通过检测β-catenin蛋白的表达水平可以反映Wnt信号通路的活性状态。
2. LRP6蛋白表达水平：LRP6是Wnt信号通路中的关键受体之一，其表达水平也会受到Wnt信号通路的影响。
因此，通过检测LRP6蛋白的表达水平也可以反映Wnt信号通路的活性状态。
3. GSK-3β磷酸化水平：GSK-3β是Wnt信号通路中的关键酶之一，其磷酸化水平会受到Wnt信号通路的影响。
因此，通过检测GSK-3β磷酸化水平也可以反映Wnt信号通路的活性状态。
4. TCF/LEF转录因子活性：TCF/LEF转录因子是Wnt信号通路中的下游效应分子，其活性会受到Wnt信号通路的影响。
因此，通过检测TCF/LEF转录因子活性也可以反映Wnt信号通路的活性状态。
以上是Wnt信号通路检测指标的主要方面，通过对这些指标的检测可以了解Wnt信号通路的活性状态，进而研究其在生物体内的功能和作用机制。
验证wnt信号通路的方法
验证wnt信号通路的方法验证Wnt信号通路的方法包括以下步骤：1. 构建报告基因质粒：TOPFlash质粒是一种常用的报告基因质粒，可用于检测Wnt信号通路中β-catenin介导的TCF/LEF转录活性水平。
TOPFlash质粒是以pGL6-TA为模板，在其多克隆位点插入两组TCF/LEF结合位点序列，每组有三个重复序列，一组为正向序列，另一组是它的反向互补序列。
这些序列可以高灵敏度地检测TCF/LEF的转录活性水平。
2. 观察细胞凋亡：可以通过药物处理或基因敲除等方法来影响Wnt通路的活性，然后观察细胞凋亡情况。
如果药物激活了Wnt通路，导致细胞凋亡，可以通过RNAi下调β-catenin的表达或使用deltaN TCF4（TCF4的dominant negative）或其他能阻断Wnt信号通路的活性的方法，观察细胞凋亡情况是否下降。
如果下调Wnt活性后，细胞凋亡能力下降，则说明药物是通过激活Wnt通路导致凋亡的。
相反，如果药物抑制了Wnt通路，导致细胞凋亡，可以通过表达不被降解的β-catenin或其他活化Wnt信号通路的活性的方法，观察细胞凋亡情况是否下降。
如果上调Wnt活性后，细胞凋亡能力下降，则说明药物是通过抑制Wnt通路导致凋亡的。
3. 研究具体靶基因：为了进一步了解Wnt信号通路的作用机制，可以研究具体的Wnt靶基因。
这些靶基因包括与细胞增殖、分化、迁移等相关的基因，例如c-myc、cyclin D1等。
通过检测这些基因的表达水平或使用相关抑制剂等方法，可以进一步验证Wnt信号通路的作用机制。
总之，验证Wnt信号通路的方法需要综合考虑多种因素，包括报告基因质粒的构建、细胞凋亡的观察和具体靶基因的研究等。
通过这些方法，可以深入了解Wnt信号通路的作用机制，为相关疾病的治疗提供新的思路和策略。
wnt通路转录因子
wnt通路转录因子
Wnt通路转录因子是一类在Wnt信号传导通路中发挥重要作用的蛋白质。
Wnt通路是一种参与细胞增殖、分化和体轴形成的信号传导通路，对于胚胎发育和成人组织再生都具有重要作用。
Wnt通路转录因子通过调控基因的转录来影响细胞命运和组织发育。
Wnt通路转录因子的代表性成员包括β-catenin、TCF/LEF（T-cell factor/lymphoid enhancer factor）、以及其他辅助转录因子。
其中，β-catenin是Wnt信号传导通路中的核心分子，它在没有Wnt信号时被特定的蛋白质复合物标记并降解，而在Wnt信号激活时，β-catenin得以稳定并进入细胞核，与TCF/LEF等转录因子结合，从而调节靶基因的转录。
Wnt通路转录因子在胚胎发育、干细胞命运决定、肿瘤发生等生物学过程中发挥着重要作用。
在胚胎发育中，Wnt通路转录因子参与了胚胎体轴的形成和器官的分化。
在成人组织中，Wnt通路转录因子也参与了组织的再生和修复过程。
此外，异常的Wnt通路转录因子活性与多种肿瘤的发生和发展密切相关，如乳腺癌、结肠癌等。
总的来说，Wnt通路转录因子作为Wnt信号传导通路的关键调节因子，对于细胞命运的决定、组织发育和疾病发生都具有重要作用，因此对其功能和调控机制的研究具有重要的理论和临床意义。
某大学生物工程学院《细胞生物学》考试试卷(1363)
某大学生物工程学院《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（50分，每题5分）1. 甾类激素在胞内受体的同一部位取代抑制物，与胞内受体结合，从而激活受体。
（）答案：错误解析：抑制物覆盖受体的DNA结合位点使受体处于失活状态，该结合位点位于受体的中部，激素与受体结合的部位位于受体蛋白的C端。
2. 有丝分裂前期，核纤层蛋白去磷酸化使核膜破裂。
（）[上海交通大学2007研]答案：错误解析：现有观点认为有丝分裂前期，核纤层蛋白磷酸化而解聚并最终导致核膜崩解。
3. 细胞内的生物大分子是指蛋白质、脂类和DNA等。
（）[中科院中科大2007研]答案：错误解析：脂类不是生物大分子。
4. G蛋白偶联受体被激活后，使相应的G蛋白解离成α、β、γ三个亚基，以进行信号传递。
（）答案：错误解析：在细胞中G蛋白由α、β、γ三个亚基构成，β、γ以异二聚体的形式存在，Gα和Gβγ分别通过共价键锚定在膜上，当配体与受体结合，G蛋白的三聚体解离，并发生GDP与GTP的交换，游离的GαGTP处于活化的开启状态。
5. 不同生物及同一生物的不同细胞的细胞周期时间是不同的，其中G1期持续时间的差异最大。
（）[中科院中科大2005研]答案：错误解析：细胞周期时间长短主要差别在G1期，而S、G2、M总时间是相对恒定的。
6. 构成溶质跨膜的电化学梯度净驱动力来自溶质的浓度梯度和跨膜电位差。
（）答案：正确解析：细胞通过溶质浓度梯度或电化学梯度产生的主动运输，维持了高钾低钠的内环境。
7. 动物细胞胞质中一般具有中间丝蛋白库。
（）答案：错误解析：中间丝蛋白位于细胞核内。
8. 体外培养时，癌细胞通过分裂增殖并铺满培养器皿的表面形成单层后即停止分裂。
（）答案：错误解析：正常细胞通过分裂增殖并铺满培养器皿的表面形成单层后即停止分裂，而癌细胞由于对密度依赖性生长抑制失去敏感性，即失去了接触抑制，因而不会在形成单层时停止生长。
Wnt／β-catenin信号通路与发育和疾病研究进展
Wnt／β-catenin信号通路与发育和疾病研究进展Wnt信号通路是参与发育过程的关键信号网络，能够参与组织特化和细胞迁移等的发育过程。
Wnt信号通路在成体动物组织内稳态的维持过程中同样发挥着重要的作用，异常的Wnt信号常与多种癌症的发生密切相关。
本文概述了近两年来Wnt信号通路的激活机制、与其他功能蛋白和通路间的交互影响及其在发育和疾病方面的最新进展。
1Wnt/β-catenin信号通路概述β-catenin是一个多功能蛋白分子。
细胞未激活时，细胞质中的β-catenin与细胞粘附分子相互结合，共同定位在细胞连接处，起维持细胞连接的作用，其余大部分自由β-catenin被降解。
当有特殊刺激诱导时，β-catenin降解受到抑制，并转移到细胞核中与转录因子TCF和LEF家族相互作用调节基因表达。
由Wnt 配体触发依赖于β-catenin的信号通路被称为canonical Wnt/β-catenin信号通路。
然而另一些Wnt配体能够通过不依赖β-catenin的机制引发Wnt信号通路的激活。
哺乳动物中，Wnt家族包括19个成员，其配体家族有10个，共受体有LRP5和6、Ryk和Ror2。
不同Wnt与配体的组合能够触发细胞特异性复合体的形成以及特异信号通路的激活并产生不同的效应[1]。
研究表明其它受体和配体同样能够影响Wnt或β-catenin信号通路，例如R-spondins信号通路能够通过孤儿G蛋白偶联的受体促进Wnt/β-catenin信号通路的活性[2]；此外，粘附分子NCAM诱发的信号亦能促进β-catenin的转录活性[3]。
Luckert等[4]通过两种蛋白组学的方法研究一条通路中的多个蛋白，发现了一种特定肝癌细胞系是如何响应canonicalWnt配体Wnt3a，稳定β-catenin，并同时响应noncanonical Wnt配体Wnt5a。
然而在某些特定情况下，两种配体对蛋白量或是蛋白磷酸化的状态起到的作用是截然相反的。
Wnt信号通路在胚胎发育中的作用
Wnt信号通路在胚胎发育中的作用胚胎发育是一个既精彩又神秘的过程。
在胚胎发育过程中，各种细胞类型按照特定的时序和程序被产生，并最终形成一个完整的、有机体形态良好的个体。
而在这一发育过程中，Wnt信号通路起着重要的作用。
Wnt是一类蛋白质，包括约19种既可以促进细胞分裂、增殖、分化，又可以影响胚胎轴向、细胞极性、细胞命运的信号分子。
Wnt信号通路是Wnt蛋白质介导的一类信号转导通路，在胚胎发育、组织分化、细胞再生等方面，均发挥着极为重要的作用。
在胚胎发育中，Wnt信号通路在调控器官的形成和细胞命运的决定等方面都有着很大的作用。
Wnt信号通路可以形成一个非常复杂的调控系统，它与其他信号通路相互协同，共同控制着胚胎发育中的多个关键环节。
在早期的胚胎发育过程中，Wnt信号通路参与了很多重要的过程。
例如，在胚胎分类过程中，Wnt信号通路可以通过调节N-cadherin突出以及细胞聚合蛋白的表达来帮助细胞克服表面张力，从而实现胚胎分类过程。
同时，Wnt信号通路也可以参与到细胞极性的形成过程中，Wnt7a可以引导细胞向一个特定的方向分化，最终促使组织的形成过程能够依据胚胎的次序进行。
在骨骼及牙齿发育中，Wnt信号通路同样也很重要。
Wnt信号通路可以调节沉积于牙齿和骨骼中的分子，如糖原酶和干细胞标志物的表达，从而控制细胞命运的决定。
它还可以调节骨骼细胞的分化和成骨作用，细胞在环境刺激下表达特定的骨骼细胞基因，通过Wnt信号通路调控骨骼细胞的形成和增殖。
总的来说，Wnt信号通路在胚胎发育中的作用是至关重要的。
它对细胞命运（包括细胞分化、增殖等）的决定同时也对器官的形态、组织化等有举足轻重的作用。
Wnt信号通路参与了胚胎发育过程中的多个环节，同时也可以共同发挥作用，协同癌症、畸形和其他疾病的治疗。
今后Wnt信号通路的发现和应用也将会推动更多关于胚胎发育的研究，进而帮助我们更好地理解身体的起源，探索人类的奥秘。
肿瘤干细胞的生物学特性
Hedgehog信号通路的异常 激活会导致肿瘤干细胞的耐 药性增强，从而降低肿瘤对
治疗的敏感性。
针对Hedgehog信号通路的 抑制剂已在临床试验中取得 了一定的疗效，为肿瘤治疗 提供了新的策略。
Notch信号通路
01
02
03
Notch信号通路是肿瘤干细胞维 持自我更新和多能性的关键途径 之一，通过调控NOTCH等转录 因子的表达，影响干细胞的分化 与增殖。
肿瘤干细胞的研究意义
01
肿瘤干细胞的研究有助于深入 了解癌症的发生机制和进展机 制，为癌症治疗提供新的思路 和靶点。
02
通过研究肿瘤干细胞的生物学 特性，可以开发针对肿瘤干细 胞的特异性药物，提高癌症治 疗的疗效和降低复发率。
03
肿瘤干细胞的研究还有助于发 现癌症的早期诊断和预后评估 的生物标志物，为癌症的预防 和治疗提供科学依据。
耐药性的产生与细胞内药物代谢酶、DNA修复能力和细胞凋 亡调节等机制有关。
迁移和侵袭能力
肿瘤干细胞具有迁移和侵袭的能力，能够通过血液或淋巴 系统扩散到远处器官，形成转移灶。
迁移和侵袭的过程涉及到细胞黏附、基质降解、运动和新 生血管形成等多个环节。
03
肿瘤干细胞的信号转导通 路
Wnt信号通路
Wnt信号通路是肿瘤干细胞自我更新和多能性的重要调控途径，通过βcatenin等关键蛋白的磷酸化与去磷酸化，调控干细胞的增殖与分化。
02
肿瘤干细胞的特性
自我更新能力
肿瘤干细胞具有自我更新的能力，能 够持续产生新的肿瘤干细胞和分化细 胞，维持肿瘤的生长和扩散。
自我更新能力的调控机制涉及到多种 信号通路和转录因子的作用，如Wnt、 β-catenin、Bmi-1等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
万方数据
万方数据
万方数据
万方数据
胰蛋白酶抑制剂对Wnt信号通路的作用
作者：伊凤双， YI Feng-shuang
作者单位：山西大学生物技术研究所,太原,030006
刊名：
国际肿瘤学杂志
英文刊名：JOURNAL OF INTERNATIONAL ONCOLOGY
年，卷(期)：2010,37(5)
1.Fogarty MP;KesslerJD;Wechsler-Reya RJ Morphing into cancer:the role of developmental signaling pathway in brain tumor formation 2005(04)
2.Moon KC;Cho SY;Lee HS Distinct expression pattems of E-Cadherinand beta-cateninin signetring cell carcinoma components of primary pulmonary adcnoesrcinoma 2006(09)
3.Khor TO;Gul YA;Ithnin H A comparative study of the expression of Wnt-1.WISP-1 sundvin and cyclin-D1 in colorectal carcinomas[外文期刊] 2006(04)
4.Luo W;Zou H;Jin L Axin contains three separable domains that confer intramolecular,homodimeric,and heterodimeric interactions involved in distinct fuctions 2005(06)
5.Krieghoff E;Behrens J;Mayr B Nucleo-cytoplasmic distribution of beta-catenin is regulated by retention[外文期刊] 2006(Pt7)
6.Li YY;Zhang Z;Wang ZH rBTI induces apoptosis in human solidtumor cell lines by loss in mitoehondrial transmembrane potential and caspase activation[外文期刊] 2009(02)
7.Kennedy AR;Billings PC;Wan XS Effects of Bowman-Birk inhibitor on rat colon carcinogenesis[外文期刊] 2002(02)
8.李卓玉;袁静明肿瘤抑制蛋白APC的结构与功能[期刊论文]-生命的化学 2006(02)
9.While SR;Williams P;Wojcik KR Initiation of apoptosis by actin cytoskeletal derangement in human airway epithelial cells[外文期刊] 2001(03)
10.Avizienyte E;Wyke AW;Jones RJ Scr-induced deregulation of E-cadherin in colon cancer cdlls requires integrin signaling[外文期刊] 2002(08)
11.Kim PJ;Plescia j;Clevers H Survivin and molecular patho-genesis of colorectal cancer[外文期刊] 2003(9379)
12.Zhang T;Otevrel T;Gao Z Evidence that APC regulates survivin expression:a possible mechanism contributing to the stem cell origin of colon[外文期刊] 2001(24)
13.Hoffman WH;Biade S;Zilfou JT Transcriptional repression of the anti-apoptotic survivin gene by wild type p53 2002(05)
14.Masur K;Lang K;Niggemann B High PKC alpha and low E -cadherin expression contribute to high migratory activity of colon carcinoma cells 2001(07)
15.Le TL;Joseph SR;Yap AS Protein kinase C regulates endocytosis and recycling of E-cadherin
2002(02)
16.Chen CL;Chen HC Functional suppression of E-cadherin by protein kinase Cdelta 2009(Pt 4)
17.Kobayashi H;Suzuki M;Tanaka Y Suppression of urokinase expression and invasiveness by urinary trypsin inhibitor is mediated through inhibition of protein kinase C-and MEK/ERK/c-Jun-dependent
signaling pathway[外文期刊] 2001(03)
18.李芳;李玉英;白崇智重组养麦胰蛋白酶抑制剂对人肝癌细胞凋亡及半胱氨酸天冬酶活性的影响 2009(02)
19.高丽;李玉英;张政重组养麦胰蛋白酶抑制剂对HL60细胞的促凋亡作用[期刊论文]-中国实验血液学杂志
2007(01)
20.杜惠芬;李克生;郭红云胰蛋白酶抑制剂体外抑制肿瘤细胞降解细胞外基质的研究[期刊论文]-中国预防医学杂志 2004(02)
21.Saegusa M;Okayasu I Frequent nuclear β-catenin accumulation and associated mutations in endometrioid-type endometrial and ovarian carcinomas with squamous differentiation[外文期刊]
2001(01)
本文链接：/Periodical_gwyx-zlxfc201005006.aspx。