激活剂和抑制剂对酶活性的影响(修)
实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响
六、思考题：(Questions)
什么叫酶的竞争性抑制作用？举例说明在医 学上的应用。
七.注意事项：(Notices)
1．注意密切观察颜色变化。 2．加入各种试剂要注意看清标签，不能 混用滴管
• 反应模式
竞争性抑制作用
+
I
EI [S]>>[I]：高浓度的底物可解除抑制
竞争性抑制作用特点 1、I结构常与S结构类似 2、I/S与酶的结合部位相同:酶的活性中心 3、[S]↑可以降低甚至消除抑制作用 4、(表观）Km值增大，Vm值不变
1/V
抑制剂↑
1/[S]
• 丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶
二、实验原理(Experimental Principles)：
影响酶活性的因素：
温度 pH值 激活剂 抑制剂
对酶活性的抑制作用分类
不可逆性抑制作用
竞争性抑制作用 可逆性抑制作用 非竞争行抑制作用 反竞争性抑制作用
抑制剂(I)与底物(S)的结构相似，能与底 物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复 合物的形成，使酶的活性降低。这种抑制 作用称为竞争性抑制作用。 E+S ES E+P
四、操作步骤（Operating Procedure）
1 酶的提取液的制备：将兔子处死，取出肝 脏，切成碎片后，放入乳钵中，每组取8g 左右，加入1/15mol/L的Na2 HPO4溶液 5ml研成糊状后，再加入10 ml1/15mol/L 的Na2 HPO4溶液，混匀后，倒入离心管中， 2000转/分钟离心4分钟，取上清液转入其 它试管备用。
COOH CH2 CH2
琥珀酸脱氢酶
琥珀酸
FAD
COOH CH2 COOH
丙二酸
酶特性检验实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的通过本实验，了解酶的催化作用特性，包括酶的专一性、高效性、温度和pH值对酶活力的影响，以及酶的激活剂和抑制剂对酶活力的作用。
通过对酶特性的研究，进一步掌握酶在生物体内的作用及其调控机制。
二、实验材料1. 实验材料：- 酶提取液（如唾液淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等）- 底物溶液（如淀粉溶液、蛋白质溶液、脂肪溶液等）- pH缓冲液（不同pH值的缓冲液）- 温度控制装置（恒温水浴）- pH计- 显微镜- 试管、试管架、滴管、移液器等2. 试剂：- 碘液- 斐林试剂- 班氏试剂- 激活剂（如金属离子）- 抑制剂（如竞争性抑制剂、非竞争性抑制剂）三、实验方法1. 酶的专一性检验：- 将酶提取液与底物溶液混合，观察酶催化底物反应的现象。
- 使用不同底物进行对比实验，验证酶的专一性。
2. 酶的高效性检验：- 将酶提取液与底物溶液混合，观察酶催化底物反应的现象。
- 使用相同底物，将酶提取液与无机催化剂（如FeCl3）进行对比实验，验证酶的高效性。
3. 温度对酶活力的影响：- 将酶提取液与底物溶液混合，在不同温度下进行反应。
- 观察酶催化底物反应的现象，分析温度对酶活力的影响。
4. pH值对酶活力的影响：- 将酶提取液与底物溶液混合，在不同pH值下进行反应。
- 观察酶催化底物反应的现象，分析pH值对酶活力的影响。
5. 激活剂和抑制剂对酶活力的影响：- 在酶提取液和底物溶液中分别加入激活剂和抑制剂。
- 观察酶催化底物反应的现象，分析激活剂和抑制剂对酶活力的影响。
四、实验结果与分析1. 酶的专一性检验：- 通过实验观察，酶提取液在特定底物存在下表现出催化作用，而在其他底物上无催化作用，证明酶具有专一性。
2. 酶的高效性检验：- 通过实验观察，酶提取液在催化底物反应时，反应速度明显快于无机催化剂，证明酶具有高效性。
3. 温度对酶活力的影响：- 通过实验观察，酶催化底物反应的速度随温度升高而加快，在一定温度范围内，酶活力达到最大值，超过此温度，酶活力逐渐降低。
激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告
激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告
影响酶作用的因素：影响酶促反应的因素常有酶的浓度、底物浓度、pH值、温度、抑制剂、激活剂等。
其变化规律有以下特点：
1、酶浓度对酶促反应的影响：在底物足够，其它条件固定的条件下，反应系统中不含有抑制酶活性的物质及其它不利于酶发挥作用的因素时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。
2、底物浓度对酶促反应的影响：在底物浓度较低时，反应速度随底物浓度增加而加快，反应速度与底物浓度近乎成正比，在底物浓度较高时，底物浓度增加，反应速度也随之加快，但不显著，当底物浓度很大且达到一定限度时，反应速度就达到一个最大值，此时即使再增加底物浓度，反应也几乎不再改变。
3、酶的活性受激活剂或抑制剂的影响。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂，激活剂使酶的活性升高，抑制剂使酶活性降低。
注意事项：
激活剂和抑制剂对于酶活性的影响，常常分不清激活剂，因为加入蒸馏水、NaCl、Na2SO4这3支试管的颜色一致，都是黄色。
出现这种现象的原因是酶活性太高了，需要稀释唾液，唾液稀释至加入蒸馏水的试管呈浅红色即可。
这样一来，这3支试管的颜色分别是浅红、黄、浅红，就可以断定Cl-是激活剂。
偶尔也有分不清抑制剂的就是加入蒸馏水、CuSO4、
Na2SO4这三支试管的颜色一致，都是蓝色。
因为酶活性太低，需要提高酶活性，只要重新制备唾液淀粉酶就行（但是新酶的活性不可太高，否则又分不清激活剂）。
最后3支试管的颜色应该是浅红、蓝、浅红，可以断定Cu2+是抑制剂。
浙江大学生物化学实验甲酶的基本性质激活剂与抑制剂对酶活力的影响
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
常见的酶的抑制剂：重金属离子（Ag+，Hg2+等）， CO，氰化物，有机磷农药等。
少量的激活剂或抑制剂就能影响酶的活性，而且 它常具有特异性。
一种物质对某种酶是激活剂，对另一种酶则可能 是抑制剂。
有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，在高浓 度时则可能为该酶的抑制剂。
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
1.2、原理
• 本试验利用淀粉水解不同阶段产物与碘有不同颜 色反应的特点，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应 中激活或抑制的现象。
淀粉酶
淀粉酶
淀粉酶
淀粉酶
淀粉酶
淀粉
紫色糊精
红色糊精
无色糊精
麦芽糖
葡萄糖
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
I2
I2
I2
I2
I2
I2
蓝色
紫色
红色
不显色（碘色） （金黄色）
不显色 （碘色）
不显色 （碘色）
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
1.3、操作方法
• 操作过程及注意事项参P99。
1.4、实验结果及处理
• 仔细观察并纪录各管颜色，对试验现象进行简要说 明并判断激活剂和抑制剂。
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
1.1、激活剂和抑制剂简介
激活剂：凡能使酶活性增加的物质。 抑制剂：凡能使酶活性降低但并不引起酶蛋白变性
的物质。 常见的酶的激活剂： ⑴、无机离子：常为阳离子，如Mg2+，Na+等，但也
有阴离子，如Cl-。 ⑵、中等大小的有机分子：如抗 坏血酸，谷胱苷肽 ⑶、某些蛋白分子：指对某些无活性的酶原起激活作
温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
[目的] 1.掌握温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性影响 的基本原理； 2.熟悉唾液淀粉酶所催化的酶促反应过程；
[原理] 1. 温度：对酶的活性的影响为双效性，当酶促反应 的温度为最适温度时，最有利于酶促反应的进行。 温度过低，酶的活性减弱，温度太高，会使酶变性、 失活； 2.pH ：酶活性最大时的环境 pH 为最适 pH 。 pH 不仅 会影响酶的活性，还会影响底物的解离状态，从而 影响酶与底物的结合。过酸或过碱性的环境可使酶 变性、失活。
3、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
C．激活剂、 抑制剂组 1%淀粉 试剂 （2滴） 唾液
C1管
1ml 1%NaCl 10d
C2管
1ml 1%CuSO4 10d
C3管
1ml
C4管
1ml
1%Na2SO4 蒸馏水 10d 10d
摇匀， 37℃保温,每隔30秒从1号管中吸取溶液1d加到白瓷 盘小池中（小池预先加好0.1%碘液） 。当碘液不变色时， 分别向4管中加入1%碘液2滴，观察颜色变化。
收集唾液 ( 自来水漱口、收集唾液约 2-3ml 于小烧杯 中，蒸馏水稀释10倍,备用) 1、温度对酶活性的影响 A．温度组 唾液 （2ml） 1%淀粉 （1ml） 1%碘液 A1管 冰水浴 5分钟 冰水浴 15分钟 2d A2管 37 ℃水 浴5分钟 37℃水浴 15分钟 2d A3管 沸水浴 5分钟 沸水浴 15分钟 2d
2、pH对酶活性的影响 B．PH值组 B1管 PH5.0 2ml 10d B2管 PH6.8 2ml 10d B3管 PH8.6 2ml 10d
磷酸盐缓冲液 （2ml） 1%淀粉 唾液
摇匀，立即置37℃保温，每隔30秒从2号管中吸取溶液1滴 加到白瓷盘小池中（小池预先加好0.1%碘液）。当碘液不 变色时，分别向3管中加入1%碘液2滴，观察颜色变化。
生物化学实验
温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响一、实验目的酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。
通过本实验了解酶催化的特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。
二、实验原理酶的化学本质是蛋白质。
凡是能够引起蛋白质变性的因素，都可以使酶丧失活性。
此外，温度、pH和抑制剂、激活剂对酶的活性都有显著的影响。
酶的活性通常是用测定酶作用基质在酶作用前后的变化来进行观察的。
本实验用唾液淀粉酶作用的基质—淀粉，被唾液淀粉酶分解成各种糊精、麦芽糖等水解产物的变化来观察该酶在各种环境条件下的活性。
淀粉被酶水解的变化，可以借遇碘呈不同颜色来观察。
淀粉遇碘呈蓝色;糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色;最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色反应。
三、试剂1.0.5%淀粉溶液称取可溶性淀粉0.5g加蒸馏水少许搅拌成糊状，然后用煮沸的;1%氯化钠溶液稀释至1Ooml。
2.碘化钾一碘溶液取碘化钾2g及碘1.27g溶解于2OOml蒸馏水中，使用前用蒸馏水稀释5倍。
3.1%尿素溶液。
4.奈斯勒试剂(见实验二十二)5.1%CuSO4溶液台秤称取CuSO4•5H2O， 1g用蒸馏水溶解至1OOml。
6.磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液pH5.0-8.0:A. 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液称35.62gNa2HPO4·2H2O用蒸馏水溶解后，定容至10OOml。
B. O.lmol/L柠檬酸溶液称取19.21g无水柠檬酸，用蒸馏水溶解后定容10OOml。
用A、B两液，按附录五，配制pH5.O、pH6.2、pH6.8、pH7.4、pH8.0各lOml。
7.0.5%NaCl溶液。
8.唾液淀粉酶制备每人用自来水漱口3次，然后取20m1蒸馏水含于口中，半分钟后吐入烧杯中，纱布过滤，取滤液lOml，稀释至2Oml为稀释唾液，供实验用。
9.脲酶提取液取黄豆粉6g，加30%乙醇250ml，振摇lOmin，过滤，滤液供实验用。
激活剂与抑制剂对淀粉酶
加完摇匀，40℃水浴，同时保温。每隔2min，取1滴置在白瓷板上，用碘 液检验，观察那只试管内液体最先不呈蓝色反应，哪只次之，并解释原因。
六、思考题
1、试说明可逆抑制剂与不可逆抑制剂的作用特点。 2、三种可逆抑制剂的抑制程度与底物浓度有何关系？
1％淀粉溶液、新鲜唾液稀释液、5％氯化钠溶 液、0.1％硫酸铜溶液、稀碘溶液
四、器材
只试管， 取三只试管，按照下表操作 ： 试剂 ml 0.1%淀粉 管号 1 2 3 2.0 2.0 2.0 1%NaCl 1.0 —— —— 1% CuSO4 蒸馏水 —— 1.0 —— —— —— 1.0 1:30唾液 1.0 1.0 1.0
激活剂与抑制剂对淀粉酶 活力的影响
一、实验目的
了解激活剂和抑制剂对酶活力的影响。
二、实验原理
酶的活性受某些物质的影响，能使酶活性增加的 称为激活剂，能使酶活性降低的称为抑制剂。很 少量的激活剂和抑制剂就会影响酶的活性，而且 常具有特异性。本实验中氯离子为唾液淀粉酶的 活化剂，铜离子为其抑制剂。
三、实验试剂
激活剂与抑制剂对酶的影响实验目的
KI-I2溶液（mL） 记录观察结果
2滴
2滴
2滴
从1号试管中用玻棒取出1滴溶液，置于白磁板上用碘液检查淀粉的水解程度。待 1号试管内的溶液遇碘不再变色后，立即取出所有的试管，各加碘液2滴，观察溶 液颜色的变化。
操作步骤
1. 取3支试管，各加2mL 含0.3％氯化钠的0.5％ 淀粉溶液。 2. 另取3支试管，各加1mL淀粉酶液。 3. 将此 6 支试管分为 3 组，每组中盛淀粉溶液与 淀粉酶液的试管各1支。 4. 三组试管分别置入 0℃ 、 37℃ 与 100℃ 的水浴 中。 5. 等 5min 后，将各组中的淀粉溶液倒入淀粉酶 液中，继续维持原温度条件5min后，立即滴加2 滴碘液，观察溶液颜色的变化。
操作步骤
1、唾液淀粉酶液的准备
实验者用蒸馏水嗽口，除去食物残渣。然后含一口蒸馏 水于口中，轻嗽一分钟，吐入小烧杯中。将其稀释一倍。
2、检查试剂
试剂处理
（取2只试管，按下表操作）
试管编号 #1 3 — 2 #2 － 3 2
含0.3％NaCl的淀粉溶液（mL） 2% 蔗糖溶液（mL） Benedict试剂（mL） 摇匀，沸水浴煮沸3min 记录观察结果
3. 淀粉酶的专一性实验
试管编号
（取2只试管，按下表操作）
#1 1 3
#2 1 －
试剂处理
已稀释的唾液溶液（mL） 含0.3％NaCl的0.5%淀粉溶液 （mL） 2%蔗糖溶液（mL） Benedict试剂（mL） 记录观察结果
—
2
3
2
摇匀，置37℃水浴保温15min 摇匀，沸水浴煮沸2min
二、pH对淀粉酶活性的影响
三、温度对淀粉酶活性的影响
实验目的 了解温度对酶活性的影响及最适温度的定义。 实验原理
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六、思考题
1.什么是激活剂和抑制剂？ 本实验中的激活剂和抑制剂分 别是什么？
2.四支试管中加入1％ Na2SO4的目的是什么？
下次实验： P76页
血糖测定
实验报告明天交，请组长负起责 任。谢谢同学们配合！
实验现象分析
试管1遇碘呈无色，证明Cl-离子对唾液淀粉酶有激活作 用。 试管2遇碘呈红色，证明唾液淀粉酶也能催化淀粉水解， 但比加入激活剂Cl-离子水解慢。 试管3遇碘呈蓝色，证明Cu2+离子对唾液淀粉酶有抑制 作用，使酶活性丧失，淀粉不能水解。 试管4遇碘呈紫色，唾液淀粉酶催化淀粉水解比试管2更 慢扰抑，；制证同剂明时。也Na证+ 、明了SON4a2-+离离子子对不唾是液激淀活粉剂酶、的S催O4化2-离活子性不有是干
等。 必需激活剂 如：己糖激酶必需
激活剂
由Mg2+激活
非必需激活剂 如：Cl-是唾
液淀粉酶的激活剂
加激活剂Cl- (1％NaCl)
淀粉酶催化淀粉逐步水解 加碘呈色
淀粉
蓝色
紫糊精
紫色
红糊精
红色
无色糊精
无色
麦芽糖 还原糖
无色
(二)抑制剂对酶活性影响的原理 能够有选择地使酶的活性降低或 丧失，但不能使酶蛋白变性的物质 称为酶的抑制剂。 抑制剂多与酶活性必需基团结合， 直接或间接的影响酶的活性中心，从 而抑制酶的活性。 根据抑制剂与酶结合的紧密程度不 同，又分可逆性抑制和不可逆抑制剂。
一、实验目的
1.掌握激活剂及抑制剂对酶活 性影响的原理。
2.熟悉实验内容及操作步骤。
3.了解温度对酶活性理
使酶由无活性变为有活性或使酶
活性增加的物质称为酶的激活剂。 激活剂是指无机离子，如金属离子
Mg2+、Zn2+ … 、酸根离子 Cl- 、
PO43- …和小分子有机物胆汁酸盐、VC
激活剂及抑制剂对酶活性影响的意义
很多药物是酶的抑制剂，通过对 病原体内某些酶的抑制作用或改变体 内某些酶的活性而发挥其治疗功效， 了解酶的抑制作用是阐明药物作用机 制和设计研究新药的重要途径。
1. Cl-对唾液淀粉酶具有激活作用。
2.重金属离子，例如Cu2+对唾液淀 粉酶有抑制作用，
三、实验仪器与试剂 1.仪器
综上所述，证明唾液淀粉酶的激活剂是Cl-离 子，抑制剂是Cu2+离子。
四支试管反应速度： 1 > 2 > 4 > 3
放映结束 感谢各位观看！
谢 谢！
让我们共同进步
可逆性抑制剂
抑制剂通过非共价键或酶-底物复
合物可逆性结合，使酶活性降低或
抑制剂
丧失。采用透析或超滤等物理方法 将抑制剂除去，恢复酶活性。
不可逆性抑制剂
抑制剂通常与酶活性中心上的必需基团形成共 价键，使酶失去活性。不能用透析、超滤等方法 将其除去，只能靠某药物才能解除，恢复酶活性。
重金属离子Cu2+对唾液淀粉酶有抑制作用
烧杯、试管、点滴板、滴管、漏 斗、刻度吸量管、洗耳球、水浴箱 等。
2.试剂 1％淀粉液、 1％ NaCl溶液、
1％CuSO4溶液、 1％NaSO4溶液、 稀碘液、唾液。
四、实验内容及操作步骤
1.收集唾液
用少量（约3～5ml）冷水 漱口约1min，收集唾液至漏 斗中，过滤，备用。
2.加样
试剂（ ml ） 试管1 蒸馏水 1 ml
当点滴板上有一孔呈现无色时， 取出水浴中的4支试管，各管加碘
液1～3滴，摇匀。
观察4支试管的颜色，比较反应速 度。
五、注意事项 1.刻度吸量管不能交叉使用，否则污染 试剂，影响反应现象。 2.实验所用试管冲洗干净；编号1、2、 3、4的烧杯及滴管取淀粉水解液时不能交 叉使用，否则污染试剂，影响反应现象。 3. 做完实验所有试剂摆放好，取淀粉 的刻度吸量管冲洗干净，桌面擦干净，登 记签名。 4.值日生听老师安排，认真打扫，经老 师批准才能离开实验室。
1%NaCl 1 ml
试管2 2 ml
试管3 1 ml
1%CuSO4
1 ml
1%淀粉 1 ml 1 ml 1 ml
1%Na2SO4
唾液
2滴 2滴 2滴
加碘现象
观察、记录实验现象。
试管4 1 ml
1 ml 1 ml 2滴
3. 振荡混匀，同时置于37℃水 浴中，每2min取出一滴，在点滴 板上做碘的呈色反应。