抑制剂和激活剂对酶活性的研究
实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响
六、思考题：(Questions)
什么叫酶的竞争性抑制作用？举例说明在医 学上的应用。
七.注意事项：(Notices)
1．注意密切观察颜色变化。 2．加入各种试剂要注意看清标签，不能 混用滴管
• 反应模式
竞争性抑制作用
+
I
EI [S]>>[I]：高浓度的底物可解除抑制
竞争性抑制作用特点 1、I结构常与S结构类似 2、I/S与酶的结合部位相同:酶的活性中心 3、[S]↑可以降低甚至消除抑制作用 4、(表观）Km值增大，Vm值不变
1/V
抑制剂↑
1/[S]
• 丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶
二、实验原理(Experimental Principles)：
影响酶活性的因素：
温度 pH值 激活剂 抑制剂
对酶活性的抑制作用分类
不可逆性抑制作用
竞争性抑制作用 可逆性抑制作用 非竞争行抑制作用 反竞争性抑制作用
抑制剂(I)与底物(S)的结构相似，能与底 物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复 合物的形成，使酶的活性降低。这种抑制 作用称为竞争性抑制作用。 E+S ES E+P
四、操作步骤（Operating Procedure）
1 酶的提取液的制备：将兔子处死，取出肝 脏，切成碎片后，放入乳钵中，每组取8g 左右，加入1/15mol/L的Na2 HPO4溶液 5ml研成糊状后，再加入10 ml1/15mol/L 的Na2 HPO4溶液，混匀后，倒入离心管中， 2000转/分钟离心4分钟，取上清液转入其 它试管备用。
COOH CH2 CH2
琥珀酸脱氢酶
琥珀酸
FAD
COOH CH2 COOH
丙二酸
激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告
激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告
影响酶作用的因素：影响酶促反应的因素常有酶的浓度、底物浓度、pH值、温度、抑制剂、激活剂等。
其变化规律有以下特点：
1、酶浓度对酶促反应的影响：在底物足够，其它条件固定的条件下，反应系统中不含有抑制酶活性的物质及其它不利于酶发挥作用的因素时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。
2、底物浓度对酶促反应的影响：在底物浓度较低时，反应速度随底物浓度增加而加快，反应速度与底物浓度近乎成正比，在底物浓度较高时，底物浓度增加，反应速度也随之加快，但不显著，当底物浓度很大且达到一定限度时，反应速度就达到一个最大值，此时即使再增加底物浓度，反应也几乎不再改变。
3、酶的活性受激活剂或抑制剂的影响。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂，激活剂使酶的活性升高，抑制剂使酶活性降低。
注意事项：
激活剂和抑制剂对于酶活性的影响，常常分不清激活剂，因为加入蒸馏水、NaCl、Na2SO4这3支试管的颜色一致，都是黄色。
出现这种现象的原因是酶活性太高了，需要稀释唾液，唾液稀释至加入蒸馏水的试管呈浅红色即可。
这样一来，这3支试管的颜色分别是浅红、黄、浅红，就可以断定Cl-是激活剂。
偶尔也有分不清抑制剂的就是加入蒸馏水、CuSO4、
Na2SO4这三支试管的颜色一致，都是蓝色。
因为酶活性太低，需要提高酶活性，只要重新制备唾液淀粉酶就行（但是新酶的活性不可太高，否则又分不清激活剂）。
最后3支试管的颜色应该是浅红、蓝、浅红，可以断定Cu2+是抑制剂。
酶抑制剂与激活剂
酶抑制剂与激活剂酶抑制剂和激活剂是生物化学领域中重要的研究课题。
酶抑制剂可以通过阻止酶催化反应的发生或减缓其速率来发挥作用，而激活剂则可以提高酶催化反应的速率。
这两种化合物在许多领域中都有重要的应用，包括药物研发、农业生产以及食品加工等。
一、酶抑制剂酶抑制剂是一类能够与酶结合并减慢酶催化反应速率的化合物。
酶抑制剂可以通过以下几种方式来实现对酶的抑制作用：1. 竞争性抑制剂：竞争性抑制剂与酶底物结合的活性位点竞争，从而减慢底物与酶结合的速率。
竞争性抑制剂通常具有与底物类似的结构，从而与酶底物结合的位点相似。
2. 非竞争性抑制剂：非竞争性抑制剂与酶结合的非活性位点互相竞争，从而改变酶的构象并减慢酶催化反应的速率。
3. 不可逆性抑制剂：不可逆性抑制剂与酶结合后，形成永久性的复合物，从而完全抑制酶的活性。
不可逆性抑制剂通常与酶的功能位点结合，破坏酶的结构或功能。
酶抑制剂在医药领域中有重要的应用。
例如，抗生素就是一类特定的酶抑制剂，通过抑制细菌细胞内的酶活性来杀死细菌。
此外，许多药物都是通过与特定酶结合来实现治疗效果，如抑制病毒复制或减慢肿瘤生长等。
二、酶激活剂酶激活剂是一类能够提高酶催化反应速率的化合物。
酶激活剂可以通过以下几种方式来实现对酶的激活作用：1. 温度激活：酶催化反应速率通常随着温度的升高而增加。
适当提高反应温度可以增加酶的催化效率，从而加快反应速率。
2. 辅酶激活：许多酶催化反应需要辅酶的参与。
辅酶作为酶的辅助因子，可以提供必要的化学基团或电子从而加速酶的催化反应。
3. 金属离子激活：某些酶的活性需要特定的金属离子的参与。
金属离子可以改变酶的构象或提供化学催化位点，从而激活酶催化反应。
酶激活剂在许多领域中都有应用。
例如，在食品加工过程中，酶激活剂可以用于增强酶的催化效率，从而提高食品生产的效率和品质。
此外，在农业生产中，酶激活剂也被用于增加植物对养分的吸收效率。
结论酶抑制剂和激活剂在生物化学领域中发挥着重要作用。
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识，了解测定α-淀粉酶活力的方法。
二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。
酶催化的反应称为酶促反应。
生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等特点。
能提高酶活力的物质，称为激活剂。
激活剂对酶的作用有一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。
使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。
应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。
如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。
酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。
温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。
同样，反应中某一PH范围内酶活力可达最高，在最适PH的两侧活性骤然下降，其变化趋势呈钟形曲线变化。
食品级α-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。
但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。
α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。
α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。
本实验通过淀粉遇碘显蓝色，糊精按其分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色，较小的糊精（少于6个葡萄糖单位）遇碘不显色的呈色反应，来追踪α-淀粉酶作用于淀粉基质的水解过程，从而了解酶的性质以及动力学参数。
浙江大学生物化学实验甲酶的基本性质激活剂与抑制剂对酶活力的影响
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
常见的酶的抑制剂：重金属离子（Ag+，Hg2+等）， CO，氰化物，有机磷农药等。
少量的激活剂或抑制剂就能影响酶的活性，而且 它常具有特异性。
一种物质对某种酶是激活剂，对另一种酶则可能 是抑制剂。
有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，在高浓 度时则可能为该酶的抑制剂。
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
1.2、原理
• 本试验利用淀粉水解不同阶段产物与碘有不同颜 色反应的特点，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应 中激活或抑制的现象。
淀粉酶
淀粉酶
淀粉酶
淀粉酶
淀粉酶
淀粉
紫色糊精
红色糊精
无色糊精
麦芽糖
葡萄糖
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
I2
I2
I2
I2
I2
I2
蓝色
紫色
红色
不显色（碘色） （金黄色）
不显色 （碘色）
不显色 （碘色）
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
1.3、操作方法
• 操作过程及注意事项参P99。
1.4、实验结果及处理
• 仔细观察并纪录各管颜色，对试验现象进行简要说 明并判断激活剂和抑制剂。
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
1.1、激活剂和抑制剂简介
激活剂：凡能使酶活性增加的物质。 抑制剂：凡能使酶活性降低但并不引起酶蛋白变性
的物质。 常见的酶的激活剂： ⑴、无机离子：常为阳离子，如Mg2+，Na+等，但也
有阴离子，如Cl-。 ⑵、中等大小的有机分子：如抗 坏血酸，谷胱苷肽 ⑶、某些蛋白分子：指对某些无活性的酶原起激活作
温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
[目的] 1.掌握温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性影响 的基本原理； 2.熟悉唾液淀粉酶所催化的酶促反应过程；
[原理] 1. 温度：对酶的活性的影响为双效性，当酶促反应 的温度为最适温度时，最有利于酶促反应的进行。 温度过低，酶的活性减弱，温度太高，会使酶变性、 失活； 2.pH ：酶活性最大时的环境 pH 为最适 pH 。 pH 不仅 会影响酶的活性，还会影响底物的解离状态，从而 影响酶与底物的结合。过酸或过碱性的环境可使酶 变性、失活。
3、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
C．激活剂、 抑制剂组 1%淀粉 试剂 （2滴） 唾液
C1管
1ml 1%NaCl 10d
C2管
1ml 1%CuSO4 10d
C3管
1ml
C4管
1ml
1%Na2SO4 蒸馏水 10d 10d
摇匀， 37℃保温,每隔30秒从1号管中吸取溶液1d加到白瓷 盘小池中（小池预先加好0.1%碘液） 。当碘液不变色时， 分别向4管中加入1%碘液2滴，观察颜色变化。
收集唾液 ( 自来水漱口、收集唾液约 2-3ml 于小烧杯 中，蒸馏水稀释10倍,备用) 1、温度对酶活性的影响 A．温度组 唾液 （2ml） 1%淀粉 （1ml） 1%碘液 A1管 冰水浴 5分钟 冰水浴 15分钟 2d A2管 37 ℃水 浴5分钟 37℃水浴 15分钟 2d A3管 沸水浴 5分钟 沸水浴 15分钟 2d
2、pH对酶活性的影响 B．PH值组 B1管 PH5.0 2ml 10d B2管 PH6.8 2ml 10d B3管 PH8.6 2ml 10d
磷酸盐缓冲液 （2ml） 1%淀粉 唾液
摇匀，立即置37℃保温，每隔30秒从2号管中吸取溶液1滴 加到白瓷盘小池中（小池预先加好0.1%碘液）。当碘液不 变色时，分别向3管中加入1%碘液2滴，观察颜色变化。
酶活性的实验报告
一、实验目的1. 了解酶活性测定的基本原理和方法。
2. 探究温度、pH值、底物浓度、酶浓度以及抑制剂和激活剂对酶活性的影响。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效、专一和可调节的特性。
酶活性是指酶催化反应的能力，通常用酶活力单位（U）表示。
在一定条件下，酶活力与反应速率成正比，即反应速率越快，酶活力越高。
本实验采用比色法测定酶活性。
在酶催化反应中，底物被转化为产物，同时产生一定量的有色物质。
通过测定有色物质的吸光度，可以计算出酶活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 酶：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等。
- 底物：淀粉、蛋白质、脂肪等。
- 抑制剂：碘化钠、氟化钠、氯化钠等。
- 激活剂：硫酸铵、氯化钙等。
- pH缓冲液：磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液等。
2. 实验仪器：- 紫外-可见分光光度计- 恒温水浴锅- 移液器- 试管- 试管架- 秒表四、实验方法1. 酶活力测定：- 将酶和底物混合，置于恒温水浴锅中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
- 根据吸光度计算酶活力。
2. 温度对酶活性的影响：- 将酶和底物混合，分别置于不同温度的水浴锅中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
- 分析不同温度下酶活性的变化。
3. pH值对酶活性的影响：- 将酶和底物混合，分别置于不同pH值的缓冲液中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
- 分析不同pH值下酶活性的变化。
4. 底物浓度对酶活性的影响：- 将酶和不同浓度的底物混合，置于恒温水浴锅中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
- 分析不同底物浓度下酶活性的变化。
5. 酶浓度对酶活性的影响：- 将不同浓度的酶与底物混合，置于恒温水浴锅中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响
温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响（间接碘量法）（effects of temperature pH activitor and inhibitor to activity of enzyme）一、目的1.了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响2.学习酶活性的判定二、原理酶活性大小可以用反应速度来表示，即在单位时间内，酶所催化底物的消耗量或产物的生成量来衡量。
酶活性大，反应速度就快。
反之则慢。
酶促反应速度受多种因素的影响。
如温度、pH、激活剂、抑制剂等。
本实验是观察在不同温度，pH，以及缺乏激活剂或有抑制剂的条件下唾液淀粉酶的活性大小。
借以验证各种因素对酶活性的影响。
唾液中含有唾液淀粉酶，此酶可以使淀粉逐步水解，最后生成麦芽糖。
麦芽糖具有还原性。
根据淀粉被唾液淀粉酶水解后产物的生成量（即还原性麦芽糖的多少）判定酶活性的大小。
用碘的反滴定法测定还原物的量，还原物多，酶活性大。
具体反应如下：1、试剂成分（S、H、S试剂）：CuSO4、Na2CO3、NaHCO3、KI、KIO3、酒石酸钾钠、草酸钾。
2、判定酶活性大小的化学反应过程：Na2CO3＋2H2O —→2NaOH ＋ H2CO3CuSO4＋2NaOH —→Cu(OH)2↓＋ Na2SO45KI ＋KIO3 ＋ 3H2SO4—→3I2＋3K2SO4 ＋3H2O酶淀粉———→麦芽糖麦芽糖＋Cu++—→麦芽糖氧化产物＋Cu+ Cu+＋ I2—→Cu++ ＋ 2I-COO- 草酸钾COO-Cu++＋|—————→| >CuCOO- 防止逆反应COO-剩余I2 ＋ Na2S2O3—→2I- ＋ Na2S4O6（与淀粉呈兰色) （与淀粉无色)3、判定酶活性大小的标志酶活性大→麦芽糖多→Cu+ 生成量多→I2消耗量多→剩余I2少→Na2S2O3消耗量少酶活性越大，Na2S2O3消耗量越少。
空白实验无酶活性，因此Na2S2O3消耗量最多。
与空白实验进行对比，差值越大，说明此条件下酶活性越大。
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加完摇匀，40℃水浴，同时保温。每隔2min，取1滴置在白瓷板上，用碘 液检验，观察那只试管内液体最先不呈蓝色反应，哪只次之，并解释原因。
六、思考题
1、试说明可逆抑制剂与不可逆抑关系？
激活剂与抑制剂对淀粉酶 活力的影响
一、实验目的
了解激活剂和抑制剂对酶活力的影响。
二、实验原理
酶的活性受某些物质的影响，能使酶活性增加的 称为激活剂，能使酶活性降低的称为抑制剂。很 少量的激活剂和抑制剂就会影响酶的活性，而且 常具有特异性。本实验中氯离子为唾液淀粉酶的 活化剂，铜离子为其抑制剂。
三、实验试剂
1％淀粉溶液、新鲜唾液稀释液、5％氯化钠溶 液、0.1％硫酸铜溶液、稀碘溶液
四、器材
六孔白瓷板、恒温水浴锅
五、操作方法
取三只试管， 取三只试管，按照下表操作 ： 试剂 ml 0.1%淀粉 管号 1 2 3 2.0 2.0 2.0 1%NaCl 1.0 —— —— 1% CuSO4 蒸馏水 —— 1.0 —— —— —— 1.0 1:30唾液 1.0 1.0 1.0