论文正文(范例批注版)
论文模板(含注释)

第九章地理教材教法与教案一、地理教学的基本方法1.以语言为主的地理教学方法2.以直观为主的地理教学方法3.以实践为主的地理教学方法【经典真题回顾】简答题讲授法对教师教学语言的要求是什么?【答案】(1)思想性。
任何教育都具有一定的思想性,地理教学中教师要善于根据教材内容和地理知识的特点,正确地使用富于思想性的教学语言,寓思想教育于地理教学之中。
(2)科学性。
科学性的教学语言既要符合地理学科的科学要求,又要符合教育科学的要求。
它必须是观点正确、含义准确、严密周到、措词精当、不生歧义的准确语言,绝不能使地理知识“失真”。
(3)启发性。
在地理教学中教师要善于运用启发性的语言激发学生的学习兴趣,调动他们的学习积极性,引导学生去发现知识、理解问题和解决问题,要做到条理清楚,重点突出,并遵从学生理解问题的认识序列,尽量做到深入浅出,通俗易懂。
(4)艺术性。
教师的教学语言要注意艺术性,教学语言要清晰、鲜明、洗练、准确、生动,具有较强的感染力和趣味性,寓艺术性于科学性之中。
第一章特岗教师招录面试概述一、面试的测评要素面试内容分为若干测评要素,主要包括综合分析能力、言语表达能力、应变能力、计划组织协调能力、人际交往的意识与技巧、自我情绪控制、举止仪表和专业能力。
必要时,根据职位要求,面试内容可以增加其他测评要素。
特岗教师招录面试的主要考查方面有:1.通过查看应试者思想品德鉴定表、交谈、提问考察应试者的思想状况、评议表达与思维能力。
2.通过案例分析考察应试者教育教学理论知识和功底。
3.通过观察应试者仪表、举止考察应试者基本素养。
4.通过现场书写和教案考察应试者“三笔字”。
二、教师招录面试的基本形式特岗教师招录面试一般包括以下几个环节:1.应试者抽取顺序签和题签。
2.应试者准备。
(写教案,不少于1000字,时间40分钟)3.面试、说课(试讲)。
应试者先说课(试讲),然后由考官随机提问进行面试,时间10分钟。
4.汇总测试结果、专家组长签署评价意见并由专家成员签名。
论文规范格式——批注范本

四川师范大学本科毕业论文我国上市公司股权融资偏好的成本与收益分析——以海尔为例学生姓名院系名称商学院专业名称班级学号指导教师完成时间20年 5 月 15 日我国上市公司股权融资偏好的成本与收益分析——以海尔为例学生姓名:李娅男指导教师:李洋内容摘要:本文基于我国上市公司的股权融资偏好现状,通过西方资本结构理论对公司融资选择的适用性分析,引入股权融资成本与收益计量模型,并以海尔作为实证样本,得出我国上市公司的股权融资成本低于债务融资成本,股权融资会在一定程度上增大企业价值的研究结论,从成本与收益两个方面对股权融资偏好行为进行了解释。
关键词:股权融资偏好融资成本公司价值 MM理论融资优序理论Analysis on the Cost and Income of Equity Financing Preference in China Listed Companies ——Take Haier Co. Ltd as A Empirical SampleAbstract:Basing on the present situation of equity financing preference in China listed companies, and through analyzing the applicability of western capital structure theory to financing choice of listed companies, this paper quotes the cost and income measuring models of equity financing, and takes Haier Co. Ltd as a empirical sample, and brings forward the research conclusion, which not only equity financing cost is lower than debt financing cost, but also to some extent equity financing can increase firm value. This conclusion would translate the behavior of equity financing preference from aspects of cost and income.Key words: Equity Financing Preference Financing Cost Firm Value MM Theory Pecking Order Theory of Financing目录一、我国上市公司的融资现状分析 (1)二、西方资本结构理论在我国上市公司的适用性分析 (2)(一)西方资本结构理论概述 (3)(二)西方资本结构理论对我国上市公司融资选择的适用性 (4)三、我国上市公司股权融资的成本与收益计量模型 (5)(一)股权融资成本计量模型 (6)(二)股权融资收益计量模型 (7)四、海尔股权融资偏好的实证分析 (8)(一)海尔股权融资偏好现状 (9)(二)海尔股权融资的成本分析 (10)(三)海尔股权融资的收益分析 (11)五、我国上市公司股权融资偏好的成本与收益分析 (12)(一)我国上市公司股权融资偏好的成本分析 (13)(二)我国上市公司股权融资偏好的收益分析 (14)六、结束语 (15)参考文献 (16)【注意】:正文前面的封面、内容摘要、关键词、目录均无页码,单面打印!我国上市公司股权融资偏好的成本与收益分析——以海尔为例企业在融通资金时,面临多种融资方式的选择,只有综合权衡融资所带来的成本、风险与收益,建立最佳资本结构,才能达到企业价值最大化,实现财务管理目标。
论文模板(批注版)教材

2016届本科生毕业论文题目论李白山水诗的艺术风格作者姓名杨欢指导教师王莉二级学院人文学院专业汉语言文学学号5B126XXX论李白山水诗的艺术风格摘要李白并不是以山水诗闻名,但是,李白的山水诗以想象雄奇、浪漫飘逸、形象宏伟、气势磅礴、情景交融、韵味悠长、清新自然、意境开阔的艺术特色见长,他的山水诗突破了中国传统山水诗借山水以自娱的窠臼,独具艺术特色;李白的山水诗在创作手法上写的不是山水的细节,而是山水的气势、山水的精神、山水的魂魄,蕴含丰富的内涵;李白的山水诗,最能为山水诗的传神写照;李白的山水诗,以卓然独具的艺术风采和强烈的时代精神,达到了审美性与社会性的统一,具有很高的人文、旅游审美和生态价值。
李白屹立于浪漫主义的艺术巅顶,给后世产生了深远的影响,奠定了他在中国山水诗文学发展史上“奇峰突起,意境独辟”的特殊地位。
关键词:李白;山水诗;艺术风格Theory Of Li Bai Landscape Art StyleAbstractLi Bai is one of the stars shining in the tang dynasty the most dazzling star one. Li Bai is a famous landscape poetry is not, however, Li Bai's poems to imagine the grand, elegant, romantic image grand and magnificent, is a fusion of, long lasting appeal, clear and natural, open the artistic features of artistic conception to grow perceptibly, his landscape poems broke through the traditional Chinese landscape poetry can borrow landscape's misconduct, unique artistic features. Li Bai's poems in creation on the technique of writing is not the landscape details, but the momentum, and the spirit of mountains and rivers, mountains and rivers of the soul, contains rich connotation. Li Bai's poems, the poems for our reflection. Li Bai's poems, with outstanding unique artistic style and strong spirit of the day, to the aesthetic and social unity, has the very high birth humanities, tourism aesthetic, ecological value. Li Bai stand on the romantic art of vertex, to later generations have had a profound impact, laid his landscape poems in Chinese history of literature "qifeng, yea, artistic conception only monarch" special status.Key words: Li Bai ; Landscape poetry; art style目录引言 (1)1 李白山水诗的独特艺术风格 (2)1.1 想象雄奇,浪漫飘逸 (2)1.2 形象宏伟,气势磅礴 (3)1.3 情景交融,韵味悠长 (5)1.4 清新自然,意境开阔 (6)2 李白山水诗独特艺术风格形成的原因 (8)2.1 时代原因 (8)2.2 个人原因 (9)2.2.1 思想原因 (9)2.2.2 独特的创作方法 (10)3 李白山水诗的价值 (12)3.1 李白山水诗中的人文价值 (12)3.2 李白山水诗中的旅游审美价值 (12)3.3 李白山水诗中的生态价值 (13)结论 (16)参考文献 (17)致谢 (18)引言山水诗,是以自然山水为主要审美对象与表现对象的诗歌。
毕业论文模版(有批注)

以下为论文范文格式(不做论文内容参考):序号(学号):0507…..长春大学光华学院毕业设计(论文)在此输入论文题目,黑体小二姓名系别管理学院专业专业名称全称班级07…指导教师姓名职称2011 年 6 月24 日加入WTO对我国会计的挑战及其对策[摘要]世界贸易组织(WTO)由于关贸总协定(GATT)、服务贸易总协定(GATS) 和知识产权协定(TRIPS)三部分组成,主要为所有贸易事务制定规范,协调冲突,维持秩序,讲究效率和公平,包括关税、市场准入、知识产权、倾销、最惠国待遇、劳工、仲裁和制裁等方面.WTO是一个超国家的经济立法和司法机构,与货币基金组织、世界银行三足鼎立,成立二十一世纪世界经济秩序中贸易、金融和发展三大领域中维持经济秩序、协调经济纠纷的主要支柱。
随着中美加入世界贸易组织协议的签定,我国加入WTO是指日可待,这为我国提供了千载难逢的发展良机,同时也带来了许多挑战.[关键词] WTO 会计准则信息化Join the WTO to the our country accountancy's challenge andits counterplans[Abstract] WTO ( WTO) because of total pact of total pact( GATT), the service trade of the pass ( GATS).Constitute with the intelligent property right pact( TRIPS) three parts, main draw up the norm for all trade businesses, moderate blunt, Keep order, pay attention to the efficiency and equities, include the tariff, market precise go into, intelligent property right, dump, most Country treatment, labor, arbitrate and sanctions etc. aspect。
批注论文标准格式模版

武汉工程大学毕业设计[论文]题目专业班级姓名指导教师年月日武汉工程大学继续教育学院毕业设计(论文)说明书题目专业班级学生指导教师总评成绩年月日目录前言 (1)一、我国管理会计的现状 (1)(一)管理会计在我国起步较晚 (2)(二)管理会计在我国大多数企业被忽略 (3)(三)管理会计在我国取得了一定的成果也存在一些问题 (4)二、我国管理会计发展面临的障碍 (4)(一)管理会计的理论与实践脱节 (5)(二)管理会计的发展不适应知识经济的挑战 (5)(三)会计人员素质与管理会计要求有一定差距 (6)三、针对我国管理会计现状与障碍提出解决对策 (6)(一)充分运用管理会计强化企业管理层的管理意识 (6)(二)建立管理会计系统与理论相结合的企业管理模式 (7)(三)走管理会计与会计电算化相结合的企业管理道路 (8)(四)建立中国管理会计师组织,提高会计人员素质 (8)四、设想管理会计发展的新趋势 (9)(一)建立环境管理会计的新模式 (9)(二)建立作业会计新理论 (11)(三)建立战略管理会计的新趋势 (12)结论 (13)致谢 (14)参考文献 (15)标题:对管理会计的剖析作者:XXX摘要:本文系运用规范研究的方法进行专题研究,结合当前经济形势分析管理会计在我国的运用,分别从我国管理会计的现状;我国管理会计发展面临的障碍及解决对策;设想管理会计发展的新趋势三个方面进行阐述以供有识之士商权。
本文创新主要体现在结合当今经济发展状况,深入剖析我国管理会计发展状况和面临障碍,提出了有针对性的解决对策。
关键词:管理会计发展状况障碍对策前言世界经济进入战后发展的新时期以来,技术革命的浪潮日益高涨,迅速推动了社会生产力的进步,全球经济环境瞬息万变,传统的会计理论已经不能满足经济的发展需要。
在这个阶段上管理会计适应了现代经济管理的要求,不仅完善发展了规划控制会计的理论与实践,而且还逐步充实了以“管理科学学派”为依据的预测决策会计和以“行为科学”为指导思想的责任会计等内容。
Essay范文及批注

我给你一个经济学的范文STATEMENT OF PURPOSEDue to the comprehensiveness of China's “Reform and Open” policies, economics plays an increasingly important role in the development of its global position. As a senior at Beijing University majoring in Economics, I feel that my field is fundamental to the progress of my country. Yet, at the same time, I realize only too well that what I have learned as an undergraduate is far from enough. Therefore, it is my desire to pursue a graduate degree in Economics at your university. If accepted, my intended concentration would be Economic Development and Public Economics.In the process of preparing myself for advanced research, I obtained a solid academic background in mathematics, computer science and basic economic theory. In order to enhance my capabilities and further establish my background, I plan to take Probability and Econometrics as my electives during my last semester at Beijing University. During my undergraduate career I was fortunate to be able to audit several advanced graduate level courses taught by overseas professors such as Comparative Economic Systems and Advanced Macroeconomics. These classes not only introduced me to new economic concepts and theories, but also broadened my perspective and gave me new insights into the depth of my field.After over three years of studying economics and extensive reading in related fields, I have developed my own understanding of the present Chinese economic system. I feel, and it is an idea shared by many, that the Chinese government is presently struggling to adapt a policy which would peacefully integrate the advantages of a market economy with the current Socialist system. To a certain extent, I feel that the government has been successful in implementing this aim. However, many problems have yet to be resolved. Chief among these is the problem of rejuvenating and restructuring the larger, state-owned enterprises. As a result under the Chinese socialist system, these companies not only lack a spirit of competition, but are also hopelessly overstaffed. There is a definite need to cut back on workers, many of whom are unskilled and present an unnecessary burden on these companies.The fundamental problem here is that China lacks unemployment and social security programs, which would be able to assist and re-train these workers should they be laid off. As there are no options for them, the companies are forced to retain these laborers, creating a stagnant state which limits both production levels and net profits. While foreign-imported goods and foreign companies were scarce in China, this was not a major problem. However, the influx of foreign goods and corporations has forced China into a predicament where it can no longer afford to maintain uselessemployees for the benefit of the State. Should the situation here continue unchecked, China risks loosing its domestic market to foreign companies?These ideas were the result of my field research conducted during my junior year. During that time, I studied first-handedly China's system of public economics and found it lacking in many ways. I feel that if China is ever to be a serious competitor in the world market it needs first to develop a more progressive system of public policies. For this, China will have to look to other systems which have struggled and successfully handled this same problem. My goal is to continue my education in the United States where I can not only witness the dynamics of an economic system different from ours, but also study the ways in which America's public policy could be adapted and utilized by China.In terms of global economics, China still has much to learn. The government is far from reconciling itself with many of the principles that underlie the modern market. I also feel that the Chinese situation is unique, and, that in order to be successful, policy makers must take into consideration regional characteristics, historical tradition and social psychology when defining the course of the future. However, it is also essential that the future generations of leaders, administrators and teachers learn from other countries in order to better understand the complexity of China's role within the global economic situation.The more China's economy is prosperous, the more it needs its own economists. Therefore, at the end of my graduate study, I intend to return to my country and contribute to China's economic progress. My ultimate goal is to teach, introducing advanced Western research methods to my country and, if possible, tackle some of the economic problems faced by my country.I am also applying for overseas graduate study because of the fact that the United States holds the leading position in the research of my chosen field. Your institution, known for its careful and exacting work-ethic and nurturing academic atmosphere, is the university I have long admired. I am confident that with your distinguished faculty and recognized facilities, my potential will develop into knowledge and experience beneficial to both the United States and China.。
毕业论文正文范文(加批注)

浙江工贸职业技术学院信息传媒学院毕业设计(论文)课题名称:学生姓名:专业:学生学号:学生班级:指导教师:门诊管理系统卢珊珊信息传媒学院班级:软件06(2)班指导老师:黎浩宏摘要:随着计算机性能不断提高,价格不断下降,计算机已在医院医疗、教学、科研、管理等方面得到越来越广泛的应用。
计算机化的医院信息系统已成为现代化医院运营过程中必不可少的基础设施与技术支持环境。
就好像一个现代化医院的成功运行离不开功能完整、美观舒适的建筑物,技术娴熟的医护人员,性能齐全、高精尖的医疗设备一样,它也离不开计算机化的医院信息系统。
门诊管理系统作为企…关键词: C/S SQL VS2005目录1引言 (1)1.1 门诊管理系统的开发背景 (1)1.2 门诊管理系统的意义与设计目的 (1)2开发工具及环境介绍 (3)2.1 门诊管理系统开发环境 (3)2.2 本项目应用的主要开发工具 (3)2.2.1 Microsoft Visual Studio 2005 (3)2.2.2 XXXX (4)2.2.3 xxxxx (5)2.2.4 XXXX (5)2.2.5 C# 程序设计 (6)2.2.6 XXX (6)3项目概述 (8)3.1 项目概述 (8)3.2 项目风险 (9)3.3 项目进度计划 (10)4需求分析 (11)4.1 业务分析 (11)4.1.1 xxxxx (11)4.1.2 xxxx (11)4.2 功能性需求概述 (11)4.2.1 系统总功能结构图 (11)4.2.2 功能模块概要说明 (12)4.3 概要设计 (12)4.3.1 总体结构 (12)4.4 现行研究存在的问题及解决办法 (13)4.5 用例模型 (14)4.5.1 确定软件项目中的参与者: (14)4.5.2 确定软件项目中的用例 (15)4.5.3 软件项目用例图 (16)4.5.4 用例列表 (17)4.6 子用例 (18)4.6.1 用例:登录 (18)5数据库设计 (21)5.1 数据库表结构 (21)5.2 数据库表 (22)5.3 数据库表关系图 (24)5.4 数据库中表视图 (25)5.4.1 视图 (25)5.5 数据库设计命名规范 (25)6系统实现 (26)6.1 说明 (26)6.1.1 项目文件命名规范 (26)6.1.2 项目的文件结构说明 (26)6.2 系统功能实现 (26)6.2.1 xxxxx (26)6.2.2 数据库链接代码说明 (28)6.2.3 xxxxx (29)6.2.4 xxx (31)6.2.5 管理界面 (32)6.2.6 查询并打印报表界面 (35)7测试 (37)7.1 测试例子及其结果 (37)7.1.1 登录测试 (37)7.1.2 添加测试 (38)7.1.3 查询测试 (38)7.1.4 查询测试 (39)8系统安全 (40)9总结与展望 (41)致谢 (43)参考文献 (44)1 引言1.1 门诊管理系统的开发背景经过60来年计算机的发展,当今社会经济的发展和科学技术的进步,医疗技术也迅速发展,计算机在各行业中应用的普及,利用计算机实现医疗管理。
高中优秀议论文三篇(有批注)【范本模板】

勿以善小而不为范宜康修船工小小的善举却救了船主的孩子,修船工本可以不去做,但正因为他这一不昧良心的小善救了几个孩子的命,得到人们的称赞和社会的认可。
这告诉我们一个道理:勿以善小而不为。
把简单的事做好就是不简单,把平凡的事做好就是不平凡。
的确,雷锋不管事大或小能帮上一把就帮一把,帮这个战友缝缝被子,替那个战友择择青菜……尽管都是小事,但却无不体现了他的善良,让年仅二十几岁的生命永远活在了我们的心中.小善如涓涓细流汇聚在了一起便成就了雷锋,铸造了“勿以善小而不为"的精神。
当年,刘备除留下一个不完整的江山,还给了后主一句“勿以善小而不为”的遗诏。
正是希望后主能够积累小的善行来实现自己未了的统一中原的抱负.却可笑无知阿斗乐不思蜀,可惜了刘备的良苦用心。
历史不容许任何人不劳而获,他告诉我们:乱世对枭雄而言是机遇,如刘备,他本是一个落魄的汉室后裔,却为善小一步步成就了他鼎立三国的一方;而乱世对平庸者来说是灾难,又如后主刘禅,他不懂得父辈的割据势力是一个个小的善行拼凑出来的,如果没有精打细算的明君他就如散沙堆起来的一般,即使有贵人相助,却终究要崩塌。
(本段用对比,突出了论点!)勿以善小而不为,不只是一个口号,更是一种行动。
南丁格尔只是尽力照顾好每一个伤员,却有了“提灯天使”的美誉;特蕾莎修女不过用心帮助穷人,亦成为人们心中的贫民窟圣人,她却说“我们做的不过是汪洋中的一滴水";还有“当代雷锋"郭明义……这样来看,只要我们在生活中做到勿以善小而不为,也会实现自己的人生价值。
试想,如果伟大的人一开始只是空口喊大话而不积累小善,那么他也会一无是处。
勿以善小而不为,在社会道德滑坡的今天更需要这种敢于为小善的勇气。
谁也不愿看到“扶不起”事件的好心人痛心而无奈地坐在法庭的被告席上。
难道这在告诉助人做好事要三思吗?不!如果无视小善的开始,而变为对求助者习惯性的无视时,这将不只是个人的悲哀,更是社会的悲哀。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
毕业论文(设计)题目膜分离茶多酚工艺初步研究指导老师张星海专业班级生物技术及应用0701姓名何晓琴学号200770111322012年5月27日页眉1.6cm,从摘要到五号宋体居中,有一浙江经贸职业技术学院毕业论文(设计)摘要:研究膜分离技术制备低咖啡因高表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)含量茶多酚生产工艺。
主要采用高速离心、微滤、超滤、纳滤技术,高效液相色谱检测,结果表明,高速离心具有较好的澄清效果,微孔膜在孔径为5μm,压力0.1MPA,流速为20mL/min分离咖啡因去除率0.23%,EGCG损失率0.18%。
超滤膜5kdal(膜单位道尔顿)在压力0.5MPA,流速7mL/min分离咖啡因去除率0.18%,EGCG损失率0.11%;超滤5kdal跟1kdal分离咖啡因去除率0.28%,EGCG损失率0.04%。
纳滤膜浓缩压力0.5MPA,流速5mL/min咖啡因去除率0.23%,EGCG损失率0.25%。
膜的使用及选择结合木质纤维素树脂分离技术,在一定程度上降低咖啡因的含量使其达到标准(<0.4%),提高EGCG的含量达到标准(>50%)。
所得产品得率为7.3%,咖啡因的纯度为0.36%,EGCG纯度为59.50%。
关键词:膜分离;微滤;超滤;纳滤;咖啡因;EGCG摘要和目录单独编页,小五号宋体居“Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ”,注意不要直接写数目录引言 (1)1材料与仪器 (2)1.1实验材料 (2)1.2实验试剂 (2)1.3试验仪器 (2)2实验方法 (3)2.1分离液制备 (3)2.1.1提取液制备 (3)2.1.2提取液离心分离 (3)2.2微孔膜分离 (3)2.3超滤膜分离 (3)2.4树脂分离 (4)2.4.1上样液调配 (4)2.4.2柱平衡及上样洗脱 (4)2.5纳滤膜浓缩 (5)2.6分析方法 (5)2.6.1HPLC分析条件 (5)2.6.2标准曲线制作 (5)2.6.3茶多酚含量计算方法 (5)3结果与分析 (6)3.1标准曲线制作 (6)3.2微孔膜分离效果 (7)3.3超滤膜分离效果与比较 (8)3.4纳滤膜浓缩效果 (9)结论 (10)参考文献 (11)引言膜分离技术是21世纪最具有发展潜力的高新技术,分离过程以选择性透过膜为分离介质,在压力差浓度差等推动力下,原料侧组分选择性地透过膜,以达到分离、提纯的目的[1]。
由于其兼有分离、浓缩、纯化的目的,选择合适的膜与操作参数,可得到较高的回收率,处理系统可密闭循环,防止外来污染,不外加化学物质,透过液可循环使用,降低成本,减少对环境的污染。
在各种工业生产中得到广泛的应用。
已开发应用的膜分离技术有反渗透(RO)、纳滤(NF)、超滤(UF)、微滤(MF)四种[2]。
大多数膜分离过程中物质不发生相变化,分离系数较大,操作温度在室温左右。
微滤用于悬浮液(粒子粒径为0.1~10μm)的过滤;超滤以低能耗、无热效应、无相变化、结构简单、占地小、操作简便、使用的压力低、产水量较大易于实现自动化的特点而广泛地应用于多种物质的分离、浓缩、净化等领域;纳滤膜介于超滤与反渗透之间,能截留分子量为300~1000的小分子物质,其集浓缩与透析为一体,可使溶质的损失达到最小,反渗透膜能将水与低分子量物质分离,其典型应用是海水脱盐[3-4]。
将膜分离技术应用于茶多酚制品的生产工艺中具有深远意义。
由于浸提过程中的富集,一般茶提取物中咖啡因的含量都远远高于鲜叶,将茶提取物作为功能成分在食品和药物上利用时,脱去咖啡因是提高产品附加值的前提基础条件[5-6]。
目前膜分离浓缩茶多酚的研究报道较少,浙江一企业需要咖啡因低于0.4%,EGCG高于50%,在之前的研究中,咖啡因的含量0.61%,EGCG的含量45.50%达不到所需要求。
因此膜的使用研究变的尤为重要,本文就对微孔膜、超滤膜分离,纳滤浓缩作了一些研究,膜使用让结果达到了所需要求,并能扩大中试生产。
1材料与仪器1.1实验材料茶叶(炒青大宗茶沫,购于金华浦江),表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG(实验室提供)页脚1.5cm,从引言开始,小5号宋法为“第1页,第2页……”,注意不1.2实验试剂95%乙醇(食用级),柠檬酸、酒石酸亚铁、磷酸氢钠、磷酸二氢钾等均为分析纯试剂,乙醇(色谱纯),冰乙酸,水为蒸馏水。
1.3实验仪器核酸蛋白自动测定仪(SHQT-6A上海琪特分析仪器有限公司);N2000色谱数据工作站(浙江大学智达信息工程有限公司);分光光度计(752N上海精密科学仪器有限公司);分析天平(SPS202F梅特勒-托利多称重设备系统有限公司);喷雾干燥器(SY-6000上海世远生物设备工程有限公司);冷冻干燥仪(1-2LD德国ALPHA);超声波清洗器(KQ-500DA昆山市超声仪器有限公司);层析柱(16×40mm,40×800mm上海亚荣生化仪器厂);旋转蒸发仪(RE-52AA上海亚荣生化仪器厂);真空泵(SHB-III郑州长城科工贸有限公司);微孔过滤膜(上海市新亚净化器件厂);超滤膜小试平板超滤膜设备FlowMem0250(厦门世达膜科技有限公司);卷式膜小试设备(RNF-0460 厦门世达膜科技有限公司);高速离心机DL-5型(上海安亭科学仪器厂)。
2 方法2.1分离液的制备2.1.1提取液制备称取1000.0g绿茶沫,以1:12比例加30%酒精浓度的溶剂,65℃水浴超声加热提取,30min(每15min停2min),纱布过滤提取液、重复一次,合并滤液,即得提取液17L。
2.1.2提取液离心分离得到提取液,高速离心机离心,离心料液共17L,转速10000转/min,流速10m3/h,压力0.5MPA,流速5L/min,所得澄清溶液16L左右,取16L进行分离即为待分离的分离液。
2.2微孔膜分离1.原料液槽2.输液泵3.压力表4.微滤组件5.循环阀图2.1 微孔膜试验流程示意图微滤膜主要应用于截留颗粒物,液体的澄清以及大部分细菌的去除,并作为超滤过程的前处理。
取分离液16L溶液通过孔径为5μm滤芯,压力为0.1MPA,流速20mL/min,收集滤液,水洗浓缩液,关机后收集系统残留液,抽取透过液和截留液的溶液过滤分别取滤液做检测分析。
试验工艺图2.1如下:2.3超滤膜分离超滤膜能截留分子量在上千至数十万的大分子,除能完成微滤的除颗粒、除菌和澄清作用外,还能除去微滤膜不能出去的病菌、热源、胶体和蛋白质等大分子化合物。
超滤以全回流方式进行,在超滤时一般情况下,膜压力为0.5MPA,流速7mL/min经微孔膜过后取15L透过液先通过截留分子量5kdal的膜饱超滤,再通过截留分子量1kdal的膜饱超滤。
开机进料液并收集滤液,水洗浓缩液,关机后收集系统残留液。
抽取透过液和浓缩液的溶液过滤分别取滤液做检测分析。
试验工艺图2.2如下:1.原料液槽2.输液泵3.压力表4.反渗透(超滤、纳滤组件)5.流量计6.循环阀7.浓液阀8.流量计阀图2.2 超滤、纳滤试验流程示意图2.4树脂分离2.4.1上样液调配将精滤液按比例调配成pH=4,酒精度为10%的绿茶溶液,为上样液。
2.4.2柱平衡及上样洗脱柱平衡:用10%酒精,柠檬酸调pH=4平衡树脂柱,使整个树脂柱体系处于酒精度为10%,pH=4。
上样量取500ml,上样:以V=1.5L/min流速上样,上样完成后静置10min。
10%洗脱:以5BV(层析柱床程)体积的10%酒精pH=4洗脱,流速控制在1.6L/min≤V ≤1.8L/min。
40%洗脱:以3BV体积的40%酒精洗脱,流速控制在1.7L/min≤V ≤1.9L/min。
70%洗脱:以2BV体积的70%酒精洗脱,流速控制在1.7L/min≤V ≤1.9L/min。
2.5纳滤膜浓缩采用NF-200 卷式纳滤组件,在压力0.50MPa、流速5ml/min 室温条件下操作运行,试验流程如图2 所示。
取40%洗脱液进行纳滤操作,开机进料液并收集浓缩液,关机后收集并洗出系统残留浓缩液,浓缩液分别做检测分析。
浓缩液即得茶多酚成品。
2.6分析方法2.6.1 HPLC分析条件1)流动相配制:A相:0.5%冰醋酸+3%乙腈+水定容B相:0.5%冰醋酸+30%乙腈+水定容2)戴安PH680高效液相色谱仪,色谱柱:C18柱(250mm*4.6mm,5um),v=1mL/min,波长280nm,进样量20ul,柱温30℃,检测器:UVD170U紫外检测器流动相变化如表2.1:表2.1 HPLC流动相配比随时间变化表检测时间(min)A相B相0~45min 100% 0%45~50min 0% 100%50~60min 100% 0%2.6.2标准曲线制作配制标准溶液:准确称取表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)0.250g,准确称取咖啡因0.125g,配成母液5mg/ml,配成EGCG为0.5,1,1.5,2,2.5mg/ml的浓度,用于制作标准曲线。
2.6.3茶多酚含量计算方法茶多酚得率计算经验公式如下:a% =A1×3.15×N1×V1 /A0×3.15×N0×V0…………………… 公式(2.1)公式中变量含义a%:得率;A0:原液茶多酚检测吸光度;A1:茶多酚检测吸光度;3.15:经验值(企业检测经验值);N0:茶多酚检测过程原液稀释的倍数;N1:茶多酚检测过程第二次稀释的倍数;V0:原溶液体积;V1:第二次检测溶液体积;3结果与分析3.1标准曲线的制作将0、0.5、1、1.5、2,2.5mg/ml6个不同浓度的EGCG 和咖啡因标准品,按照2.6.1检测方法,得样品浓度与样品出峰面积相应值依次为:0、185.938、376.523、531.483、714.3、856.011(EGCG ), 0、192.747、371.133、501.032、650.444、767.510(咖啡因);将此浓度与出峰积分面积值在EXCEL 中进行线性回归,制得标准曲线如图3.1、3.2所示:EG C G 标准曲线y = 344.01x + 14.035R 2 = 0.998020040060080010000123浓度(m g/m l )峰面积A1(系列1)图3.1 EGCG 标准曲线图咖啡因标准曲线y = 305.17x +R 2 = 0.9922020040060080010000123浓度(m g/m l )峰面积A1(系列1)图3.2 咖啡因标准曲线图由图3.1、3.2可得EGCG 标准曲线为y = 344.01x + 14.035,R 2=0.998;咖啡因标准曲线为y = 305.17x + 32.344,R 2=0.9922。