双缩脲试剂和两个肽键反应
高中生物第二章组成细胞的分子第2节生命活动的主要承担者__蛋白质1作业含解析新人教版必修
生命活动的主要承担者-蛋白质一、选择题(每小题5分，共60分)1. (双选)以下关于蛋白质的叙述，正确的是( )A．氨基酸是组成蛋白质的基本单位B．每种蛋白质都有20种氨基酸组成C．每种蛋白质都含有C、H、O、N、S、P、Fe等元素D．蛋白质是肽链以一定方式形成具有复杂空间结构的高分子化合物【解析】蛋白质的基本组成单位是氨基酸，A项正确；组成生物体蛋白质的氨基酸大约有20种，但每种蛋白质不一定都由20种氨基酸组成，B项错误；每种蛋白质都含有C、H、O、N四种元素，有的蛋白质还含有S或Fe等元素，C项错误；一条或几条肽链以一定方式盘曲折叠所形成的具有复杂空间结构的高分子化合物即为蛋白质，D项正确。
【答案】AD2.下列物质中哪些一定能和双缩脲试剂发生颜色反应( )①胰岛素②生长素③甲状腺激素④抗体⑤抗原⑥生长激素A．②⑤⑥B．③④⑥C．①④⑥ D．①③⑤【解析】双缩脲试剂能与分子中含有两个或两个以上肽键的化合物如多肽、蛋白质等发生紫色反应。
胰岛素、抗体、生长激素都是蛋白质，能与双缩脲试剂发生颜色反应，C正确。
【答案】 C3.下列关于蛋白质的描述，正确的是( )A．都有C、H、O、N、P五种元素B．所有的酶和激素都是蛋白质C．检测蛋白质的试剂是斐林试剂D．生物膜上的载体都是蛋白质【解析】蛋白质主要由C、H、O、N四种元素组成，很多重要的蛋白质还含有P、S两种元素，有的也含微量的Fe、Cu、Zn等元素，A项错误；绝大多数酶是蛋白质，有些激素是蛋白质如胰岛素等，但也有些激素如性激素等不是蛋白质，B项错误；检测蛋白质的试剂是双缩脲试剂，斐林试剂是用来检测还原糖的，C项错误；生物膜上的载体都是蛋白质，D项正确。
【答案】 D4．用化学分析法测得某有机物的化学元素及含量如下表所示，该物质最可能是( )A.核酸 B．脂肪C．糖类 D．蛋白质【解析】核酸由C、H、O、N、P五种元素组成，A项错误；脂肪和糖类都只含有C、H、O 三种元素，B、C项错误；所有蛋白质都含有C、H、O、N四种元素，有些蛋白质含有S、Fe 等元素，该化合物含有Fe元素，最可能是血红蛋白，D项正确。
蛋白质含量测定——双缩脲试剂法 实验报告
蛋白质含量测定——双缩脲试剂法实验报告一、实验目的1、掌握双缩脲试剂法测定蛋白质含量的原理和方法。
2、学会使用分光光度计进行比色测定。
3、熟悉标准曲线的绘制和应用，能够通过标准曲线计算样品中蛋白质的含量。
二、实验原理双缩脲试剂是由硫酸铜和酒石酸钾钠在碱性条件下生成的淡蓝色的络合物。
当含有两个或两个以上肽键的化合物与双缩脲试剂反应时，会形成紫色的络合物。
蛋白质分子中含有多个肽键，因此在碱性条件下能与双缩脲试剂反应产生紫色复合物。
颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，在一定范围内符合朗伯比尔定律，可通过比色法测定其吸光度，进而计算出蛋白质的含量。
三、实验材料与仪器1、材料（1）标准蛋白质溶液：称取结晶牛血清白蛋白（BSA） 10mg，用蒸馏水溶解并定容至 100ml，配制成100μg/ml 的标准蛋白质溶液。
（2）待测蛋白质溶液：＿____（3）双缩脲试剂：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O） 15g 和酒石酸钾钠60g，分别用蒸馏水溶解，然后混合，加入 300ml 10%氢氧化钠溶液，并用蒸馏水定容至 1000ml，摇匀，避光保存。
2、仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）移液器（4）容量瓶（100ml、50ml）（5）试管及试管架四、实验步骤1、标准曲线的绘制（1）取 6 支干净的试管，按下表加入试剂：｜管号｜ 1 ｜ 2 ｜ 3 ｜ 4 ｜ 5 ｜ 6 ｜｜｜｜｜｜｜｜｜｜标准蛋白质溶液（ml）｜ 0 ｜ 02 ｜ 04 ｜ 06 ｜ 08 ｜ 10 ｜｜蒸馏水（ml）｜ 10 ｜ 08 ｜ 06 ｜ 04 ｜ 02 ｜ 0 ｜｜蛋白质含量（μg）｜ 0 ｜ 20 ｜ 40 ｜ 60 ｜ 80 ｜ 100 ｜（2）向各管中加入 4ml 双缩脲试剂，摇匀，在室温（20-25℃）下放置 30 分钟。
（3）以第 1 管为空白对照，在 540nm 波长处用分光光度计测定各管的吸光度（A）值。
（4）以蛋白质含量（μg）为横坐标，吸光度（A）值为纵坐标，绘制标准曲线。
双缩脲试剂鉴定蛋白质的原理
双缩脲试剂鉴定蛋白质原理
说起双缩脲试剂鉴定蛋白质，这可真是一门学问。
双缩脲试剂，它主要是用来检测蛋白质的好帮手，由硫酸铜和氢氧化钠组成。
原理嘛，简单说，就是蛋白质里头有肽键，这个肽键跟双缩脲试剂里头的铜离子一碰到，就在碱性条件下生成紫色的络合物，颜色越深，就说明蛋白质越多。
为啥子要这样检测呢？因为蛋白质在生物里头太重要了，是生命活动的主要承担者。
而这个双缩脲试剂，它选择性高，不跟氨基酸或者小分子肽搞混，专门跟蛋白质中的肽键反应，所以用起来特别准。
操作起来也不复杂，先把A液（氢氧化钠溶液）加进去，再加B液（硫酸铜溶液），就会看到颜色变化。
颜色越深，那就说明蛋白质的浓度越高。
这个颜色变化，还可以通过分光光度计来定量，真是高科技。
说起来，四川人对方言里的程度副词可是情有独钟。
比如说甜，不说甜，要说抿甜；苦不说苦，要说焦苦。
这双缩脲试剂鉴定蛋白质，颜色变化也是分个程度，浅的、深的，一看就知道蛋白质是多还是少。
总之，双缩脲试剂鉴定蛋白质，原理简单，操作方便，结果准确。
就像四川话里的“抿甜”一样，让人一目了然，心知肚明。
这不仅是实验室里的好帮手，也是生物学知识的一个小窗口，让我们更加了解生命的奥秘。
以后啊，要是有人问起双缩脲试剂是咋回事，你就可以跟他说，这就像四川话里的程度副词一样，深浅自知，一看便知。
双缩脲试剂配置
(一) 方法学评价试验双缩脲试剂配置摘要目的：掌握双缩脲法的试剂的配置，并熟悉和掌握分光光度计的使用方法掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理与操作方法：标准管法测物质含量的方法、双缩脲法测定蛋白质含量的方法、双缩脲反应法结果：成功的配置双缩脲试剂，血清总蛋白的量是38.27g/l.结论：能够按照正确的方法配置双缩脲试剂，并测定出血清总蛋白量。
英文翻译Abstract Master configuration Biuret reagent，and Familiar with and master the use of the spectrophotometer。
Master the principle and operation of the determination of total proteins by Biuret Method。
Methods Standard tube method to measure the material content，Double deflation urea method for the determination of protein content and Biuret reaction.Result configuration of biuret reagent Successfully ,The serum total protein amount of 38.27g/l.Conclusion We can use the correct way to configured Biuret reagent,and we know determination of serum total protein.关键词：双缩脲法配置血清总蛋白前言双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物，在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色络合物，此反应即为双缩脲反应。
含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。
双缩脲试剂和几个肽键反应
双缩脲试剂和几个肽键反应
小朋友可能还不太懂双缩脲试剂和肽键反应这么专业的知识呢。
不过，让我来试着用小学生能懂的方式讲讲吧！
哎呀！你知道吗？双缩脲试剂就像是一个神奇的小侦探，专门来找肽键的“麻烦”。
肽键呢，就像是连接珠子的小绳子，把氨基酸一个一个串起来，变成了蛋白质这个长长的“项链”。
那双缩脲试剂到底是怎么和肽键反应的呢？
就好像我们在玩捉迷藏，双缩脲试剂一直在找肽键藏在哪里。
当它找到肽键的时候，就会发生神奇的变化，颜色从蓝色变成紫色。
我就在想，这是不是像我们看到彩虹一样惊喜呀？
老师在课堂上讲的时候，同学们都瞪大眼睛，听得可认真啦！小明还举手问老师：“老师老师，是不是所有有肽键的东西都会和双缩脲试剂反应变色呀？”老师笑着回答说：“不是的哦，要至少有两个肽键连在一起才可以。
”
我又在心里琢磨，这是不是就像要两个好朋友手牵手，双缩脲试剂这个小侦探才会注意到呀？
小红也跟着问：“那如果只有一个肽键，是不是双缩脲试剂就不理睬啦？”老师点点头说：“对呀，小红真聪明！”
经过老师这么一解释，我们好像都明白了一些。
你说，科学世界是不是特别神奇？就这么一个小小的双缩脲试剂和肽键的反应，都藏着这么多有趣的秘密。
我觉得呀，只要我们一直保持好奇心，就能发现更多像这样神奇又好玩的知识！。
双缩脲反应
双缩脲反应是指具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应,生成红紫色的络合物.所有的蛋白质均有此显色反应.双缩脲试剂就是指能与具有两个以上肽键的化合物发生红紫色显色反应的试剂.它是NaOH和CuSO4两种溶液.在实验过程中,先在含蛋白质的溶液中加入等体积的NaOH溶液,混合均匀后,再滴几滴CuSO4溶液(量较少).即先后加入NaOH和CuSO4溶液.如果在NaOH中滴几滴CuSO4溶液混合后,再加入到含蛋白质的溶液中,混合液中就没有Cu2+,显色反应就不会发生.除-CONH-有此反应外，-CONH2-，-CH2-，NH2-，-CS-CS-NH2，等基团亦有此反应。
具体方程式和产物分子式见附件，解包后有个图像文件，上边的是方程式，下边的是紫色产物的结构。
双缩脲试剂(AB液)使用说明
双缩脲试剂(AB液)使用说明货号：PC0041保存：室温保存。
有效期12个月。
试剂盒组成：规格Storage名称试剂(A):Biuret Reagent A100ml RT避光试剂(B):Biuret Reagent B10ml RT避光产品说明：双缩脲是一种用于分析蛋白质的方法，双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色。
所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例，可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。
双缩脲法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂影响，对于血清总蛋白的双缩脲分析，胆红素、脂类、血红蛋白、葡聚糖具有一定干扰作用。
双缩脲试剂(AB液)由Biuret Reagent A、Biuret Reagent B组成，如组织里含有蛋白质或具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应，颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
该试剂是较为粗略的验证蛋白质存在的方法，多用于定性检测蛋白质。
操作步骤(仅供参考)：1、先将Biuret Reagent A3ml加入待测样品3ml，振荡均匀，以便产生碱性环境。
2、加入2~3滴Biuret Reagent B，振荡均匀，如果组织里含有蛋白质或具有两个或两个以上肽键的化合物皆可不双缩脲试剂产生紫色反应，颜色深浅不蛋白质浓度成正比。
3、如果想采用分光光度计或酶标仪测定，应于540nm波长处的吸光值，如无540nm，520～562nm之间的波长也可，根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
注意事项：1、待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后，如果収现检测效果丌佳，可以室温放置1h或60℃放置15min，颜色会随着时间的延长丌断加深。
显色反应也会随温度升高而加快。
2、检测中収现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
双缩脲法测蛋白质浓度
一、目的：1.了解双缩脲法测定蛋白质浓度的基本原理。
2.熟悉双缩脲法测蛋白质浓度的实验操作方法。
二、原理：双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出1个分子氨后得到的产物在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过1个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定范围为1~10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
三、实验试剂和仪器1.硫酸铜、酒石酸钾钠、NaOH、KI、酪蛋白2.双缩脲试剂：取0.75g硫酸铜和3.0g酒石酸钾钠溶于250ml蒸馏水，加入150ml 10%NaOH溶液（可另加0.5gKI以防止Cu2+自动还原成一价氧化亚铜沉淀），用水稀释至500ml。
此试剂可以长期保存。
3.10mg/ml标准蛋白溶液：取1.0gNaOH加入500ml蒸馏水中，配成0.05mol/lNaOH溶液。
用0.05mol/lNaOH溶液溶解0.25g酪蛋白，定容至25ml。
4.待测样品液：可以用酪蛋白配制，也可用蛋清，牛血清蛋白。
5.仪器：容量瓶，试管，移液管，量筒，烧杯，胶头滴管，吸耳球，洗瓶，分光光度计四、步骤标准曲线的绘制（表1）。
表1加入物加入量（ml）0 1 2 3 4 5标准液0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.05mol/lNaOH1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0双缩脲试剂4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0室温下振荡均匀，显色30min后，用分光光度计于540nm测定各管吸光度。
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双缩脲试剂和两个肽键反应
双缩脲试剂是一种可以检测蛋白质中两个相邻氨基酸之间是否存
在胺基磷酸酯键的化学试剂。
它利用两个缩脲结构，将一段肽链分成
两部分，形成两个小肽段，同时在分离时将信号染色。
这种试剂在蛋
白质结构中的作用是非常重要的，因为它可以帮助科学家深入研究复
杂的蛋白质结构。
在反应中，双缩脲试剂与蛋白质发生反应形成新的化合物，这种
化合物可以协同反应物的其他特性来理解蛋白质的结构和功能。
例如，双缩脲和休肌酸反应可以用来研究蛋白质之间的相互作用，而双缩脲
和硝海藻酸酯反应可以检测这些化合物之间的交互作用。
肽键在蛋白质中起着非常重要的作用，由于肽键的存在才使得蛋
白质中的氨基酸链条能够相互连接，形成单元结构，最终构成三维结构。
而双缩脲试剂正是利用肽键的存在与否分成两部分的原理来检测
蛋白质中肽键的存在性。
肽键的形成和切断，对蛋白质的结构和功能都有着至关重要的影响。
生物大分子的正确折叠和功能需要在生物环境中进行，这意味着
蛋白质中的肽键会不断发生断裂和重新连接。
如若蛋白质中的肽键发生异常，如脂质过多或温度过低等，蛋白质结构就会发生变化，进而影响蛋白质的生物活性。
因此，对肽键的研究和了解有利于更好地分析和预防蛋白质结构异常的发生。
总之，双缩脲试剂通过特有的反应机理，可以非常有效地检测肽链中的肽键结构，进而有助于我们更深入地了解蛋白质结构和功能。
对蛋白质结构的研究在生命科学、生物工程、医学等领域中都有着广泛的应用前景。