肥达氏、外斐氏实验简易操作规程
临床检验标本采集、运输、保存操作规程
临床检验标本采集、运输、保存操作规程临床检验标本采集、运输和保存操作规程第一章体液标本的采集、运输和保存操作规程一、尿液标本的采集、运输和保存尿液标本的采集、运输和保存是临床检验中非常重要的一环。
尿液干化学测定的检查项目包括尿液比重、pH值、尿胆原、胆红素、潜血、酮体、蛋白质、白细胞、亚硝酸盐、葡萄糖和抗坏血酸等。
同时也需要检测尿液有形成份，如红细胞和白细胞形态等。
此外，还需要检测24小时尿总蛋白、尿肌酐和尿尿酸等。
二、脑脊液标本的采集、运输和保存脑脊液标本的采集、运输和保存也是非常重要的。
在采集脑脊液标本时，需要注意消毒和无菌操作。
运输时需要保持标本的低温，保存时需要在低温环境下保存。
三、浆膜腔积液标本的采集、运输和保存浆膜腔积液标本的采集、运输和保存需要注意消毒和无菌操作。
采集时需要避免污染和空气污染。
运输时需要保持标本的低温，保存时需要在低温环境下保存。
四、分泌物标本的采集、运输分泌物标本的采集、运输需要注意消毒和无菌操作。
采集时需要避免污染和空气污染。
运输时需要保持标本的低温。
五、分泌物革兰阴性双球菌检测标本的采集、运输分泌物革兰阴性双球菌检测标本的采集、运输需要注意消毒和无菌操作。
采集时需要避免污染和空气污染。
运输时需要保持标本的低温。
六、标本的采集、运输和保存标本的采集、运输和保存需要注意消毒和无菌操作。
采集时需要避免污染和空气污染。
运输时需要保持标本的低温，保存时需要在低温环境下保存。
七、前列腺液标本的采集、运输和保存前列腺液标本的采集、运输和保存需要注意消毒和无菌操作。
采集时需要避免污染和空气污染。
运输时需要保持标本的低温，保存时需要在低温环境下保存。
八、粪便采集、运输和保存粪便采集、运输和保存需要注意消毒和无菌操作。
采集时需要避免污染和空气污染。
运输时需要保持标本的低温，保存时需要在低温环境下保存。
第二章血液一般检验的标本采集、运输和保存操作规程一、未梢血标本采集未梢血标本采集需要注意消毒和无菌操作。
肥达氏试验方法
肥达氏试验方法肥达氏试验方法是一种用于检测蛋白质含量的标准化方法。
它于1889年由德国生化学家肥达（Kjeldahl）提出，并被公认为一种比较准确和可靠的蛋白质测定方法。
该方法也可以用于测定氨含量和总有机氮含量。
本文将详细介绍肥达氏试验方法的步骤、注意事项及其适用范围等。
一、试验原理肥达氏试验方法是通过将样品中的蛋白质水解成氨基酸，然后将氨基酸中的氮元素转化为氨，再通过化学反应使得氨与硫酸反应生成铵硫酸，最终再利用滴定法测定铵离子的数量，从而计算出样品中蛋白质的含量。
二、试验步骤1、样品的准备首先需要取样品，样品可以是动物组织或是植物材料等，但要求样品是均匀的混合物，并且要使样品干燥与研磨。
具体样品的准备方法根据样品的特点有所差异，下面用鱼粉为例进行介绍：将鱼粉称重，通常称量量为0.5g到1.0g；将称量好的鱼粉放入耐火玻璃瓶中，加入5ml的浓硫酸，使其浸润均匀；将反应瓶安置于加热板上，用气体灯或电烙铁加热，不断转动瓶口，直到混合物变成棕色液体，然后继续加热至混合物变成黑褐色固体，使之变成干燥的、煤黑色的块状物。
2、蛋白的水解将干燥的、煤黑色的块状物加入250mL锥形瓶内，加入20-30ml的蒸馏水，加入氢氧化钾或氢氧化钠使反应维持在弱碱性状态，加入苯甲酸或对羟基苯甲酸作为催化剂，然后加热使其反应，约引发溢出时即刻关火，继续于保温炉中加热约30分钟，氨基酸水解反应就完成了。
3、蒸馏分离将锥形瓶装上肥达装置中的蒸馏球，将蒸馏球与凝冷管连接形成蒸馏系统。
将瓶中所得混合物以中慢火温度加热至收集瓶，使去离子水和氨汽经过凝冷管冷却。
水蒸气运用到由肥达装置分装得到的滴定管中，同时回收被氢氧化钾或氢氧化钠吸收的碳酸气。
下面就可以利用滴定法测量甲醛中铵离子含量了。
4、甲醛滴定从蒸馏收集瓶中取出一定数量的溶液，加入指示剂碘化钾作为指示剂，然后用硫酸滴定至指示剂颜色发生转变。
硫酸的用量应当足够，要使瓶内产生强烈白烟，并保持一定时间，这样才能将反应中的所有铵离子捕捉起来，从而进行最终的计算，并得到样品的蛋白含量。
免疫作业指导书
1、为规范免疫室的工作管理，提高服务质量、服务效率，更好的满足客户的需要。
使检验工作严谨、高效、科学、有序，工作人员必须严格遵守本制度。
2、工作人员应遵守医院、科室和各专业组的各项规章制度。
组内实行组长负责制,组长、质量监督员、仪器负责人按各自岗位职责分工完成工作、分工不分家。
3、遵守医院和科室的考勤制度，严格遵守上下班时间。
4、上班期间，工作人员的言行举止应遵守《医院服务礼仪言行规范》要求。
5、上班期间不准进食、干私活，例如：娱乐、聊天、打瞌睡、高声喧哗、高谈阔论、阅读与专业无关的报纸、杂志等，应保持工作场所的严肃性。
6、应严格遵守操作规程，准确及时地发出检验报告。
7、经常检查试剂的数量、质量，试剂用后应及时放回冰箱保存。
8、每天按规定进行室内质控，并做好失控分析。
9、检查结果在填发报告之前要进行一次审查。
如发现与诊断不符，结果异常偏高或偏低，或质控血清值出现异常等，应仔细检查操作。
10、操作时严格遵守《安全管理制度》的相关要求，注意生物安全，防止标本污染、传染及其它事故的发生。
11、所有标本及接触标本的物品均视为传染性物质，应按《医疗废物管理规定》进行处理。
12、遵守HIV实验室的各项制度。
12．1登记制度：对阳性样品应按规定登记在专用登记本上。
并保留原始比色记录。
12．2 通知制度：出现阳性样品时，及时通知：a)所有实验室将病人的标本作相关处理，做好个人防护。
b)主诊医生(口头报告)。
c)报告科主任。
d)通知感染科(送标本)。
12．3保密制度: 该知的人要知，不须知的人不告知，病人由市疾控中心通知。
编写：审核：批准：批准日期：年月日1、总则为使免疫室的工作能保质保量的顺利完成，在遵守《检验科内务管理制度》的前提下，有必要对免疫室的各岗位进行分工，以明确各岗位的工作职责和工作范围。
要求做到分工不分家，发挥团结协作的精神，共同完成日常工作。
2、范围：免疫室3、岗位职责各岗位的职责包括：标本分流、编号、预处理、检测、结果审核、报告；室内质量控制；检测后标本的整理；每班工作结束后工作场地的整理；仪器的维护保养；仪器的使用维护记录、交接班记录。
标本抽血规范
是
促凝管
Ig-E区别生化免疫球蛋白
血凝五项
蓝色
不可凝固
枸橼酸钠
准确抽到刻度
颠倒混匀
血液流变学
金黄色
不可凝固
肝素锂
两管，各5ml
两对半，
梅毒，艾滋，
甲乙丙丁型肝炎
灰色
是
促凝管
两对半须用独立采血
血沉
黑色专用
不可凝固
枸橼酸钠
抽到刻度
颠倒混匀
血培养
不可凝固
血培养瓶
采血3ml
电解质，糖耐量实验，
绿色
是
促凝管
根据项目多少
可以3~5ml
肥达实验，外斐氏实验，
免疫球蛋白
是
促凝管
肥达实验，外斐氏实验需独立采血
化学发光系列：
AFP,CEA，CA-125,CA-153,CA-199,PSA,铁蛋白，甲状腺功能，性激素，肌红蛋白，肌钙蛋白，Ig-E，胰岛素，C-肽，
甲状腺球蛋白抗体，甲状腺微粒体抗体，B2-微球蛋白（血）
检验科采集血液标本规范
项目
是否凝固
采血管
注意事项
血常规（短管）
紫色
不可凝固
EDTA2K
短管（2ml）
B-尿钠肽（短管）
糖化血红蛋白（短管）
不可凝固
EDTA2K
短管（2ml）
与血常规分开
注明BTA2K
长管(5ml)
生化全套，肝功能，肾功能，心功能，RF，ASO，CRP,
护理技能操作规程及评分标准
一、广东医学院成人教育医学检验专业学生技能考核实施方案我校的成人本科或大专学生均已拥有大专或中专学历，经过2年和3年在校成人本专科教育，学生的理论水平得到了相应的提高。
成人本、专科学生在毕业前都经过1年临床实习，毕业后又有多年的临床实践，因此有部分学生可能已达到了普通医学检验本专科生毕业前的水平。
当前我校的成人本专科教育进行教学改革，采取了学分制，成人本科学生参加2年的理论学习、成人专科参加3年的理论学习取得足够的学分后，可由检验学院、继续教育学院和临床技能培训中心共同组织专家利用本考核纲要对学生进行考核，内容包括基本理论知识和临床实践能力，如果学生能达到合格水平，可以提前毕业。
管理机构：由检验学院、继续教育学院和各临床检验教研室专家组成一个考核管理小组，负责考核人员和考务的组织与安排。
组长：刘新光成员：罗辉、郭春华、庄海旗、袁汉尧、马丽、吴进军、许逢明1.基础理论考核：检验学院各教研室试题库进行命题2.考试内容：临床微生物检验学20%、临床生物化学检验20%、临床免疫学检验20%、临床基础检验学20%、临床血液学检验20%五门课程。
从命题的指导思想上，各教研室命题根据成人本专科各专科教学大钢对成人检验本专科学生的培养目标以及培养基本要求，来选择考试内容。
此外在考核内容选择上还应结合医学检验专业课程内容安排，临床微生物检验学、临床生物化学检验、临床免疫学检验、临床基础检验学、临床血液学检验为主要学科，所占学时多，涵盖专业内容广。
而且临床基础检验知识和技能运用在整个实习和工作过程中，因此医学检验专业考核主要是检查学生通过在校的理论学习和实习中对知识、技能的运用，对医学检验知识和技能掌握程度，临床疾病诊断、治疗、愈后观察、药效评价，对病人标本进行机能学和形态学研究，病因的确认、疾病的诊断做出准确评价，从中考查学生综合分析问题、解决问题的能力。
考试内容中，综合分析类占60%，应用占40%。
技能考核临床检验基础操作考核，考核内容为医学检验常用技术操作，考核内容及评分标准由临床基础检验教研室确定，学生随机抽签确定自己考核项目。
肥达试验和外斐氏反应临床意义
肥达试验和外斐氏反应临床意义在医学领域中，肥达试验和外斐氏反应是两个与自身免疫性疾病相关的常用检测方法和评估指标。
它们作为衡量免疫系统功能和疾病严重程度的重要工具，被广泛应用于临床实践中。
本文将深入探讨肥达试验和外斐氏反应的原理、操作方法、临床意义及相关疾病。
一、肥达试验（P-D反应）的原理和应用1. 肥达试验的原理和操作方法肥达试验是通过检测患者血清中对肥达菌（属于结核分枝杆菌复合体）的特异性IgG抗体来评估机体对结核分枝杆菌的感染程度及免疫应答情况。
具体操作方法为将患者血清与肥达菌抗原混合，观察是否发生可见的沉淀反应。
2. 肥达试验在结核病诊断中的应用肥达试验在结核病的诊断和鉴别诊断中具有重要价值。
阳性的肥达试验提示患者体内存在结核分枝杆菌感染，并能帮助评估感染的程度。
该试验可用于判断结核病是否处于活动期，对于携带者的筛查、结核性脑膜炎的辅助诊断等方面也有一定的临床意义。
二、外斐氏反应的原理和应用1. 外斐氏反应的原理和操作方法外斐氏反应是评价机体非特异性免疫功能的一种方法，通过检测患者血清中与人类红细胞（RH阴性）凝集反应的自然发生来反映血清中抗凝集抗体的含量。
具体操作方法为将患者血清与RH阴性人类红细胞混合，观察是否发生凝集反应。
2. 外斐氏反应在自身免疫疾病中的应用外斐氏反应被广泛应用于各种自身免疫性疾病的辅助诊断和疾病活动性评估中，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、干燥综合征等。
阳性的外斐氏反应提示患者体内存在过多的抗凝集抗体，与自身免疫反应有关。
外斐氏反应可以帮助医生评估疾病的严重程度、指导治疗方案的制定和疾病的预防控制。
三、肥达试验和外斐氏反应临床意义的总结回顾1. 肥达试验和外斐氏反应在临床中的重要性肥达试验和外斐氏反应作为常用的免疫功能评估工具，帮助医生了解机体对结核分枝杆菌感染的情况以及自身免疫性疾病的发展程度和活动性。
它们不仅有助于疾病的早期诊断和鉴别诊断，还可以指导治疗方案的制定、疾病的预后判断和预防控制措施。
临床微生物标本采集及运送
采血量：
血液中细菌和真菌的检出率依赖于足够的血量，但并非越多越好，超过一定 数量的采血量会稀释培养基内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质 （补体、抗体、抗生素）。血量与培养液的比例以 1：10为宜，但对已接受 抗菌药物长达 10 天以上的患者， 采血量与培养基的比例应为 1：20 或大 于 1：20 为宜。 成人 10~15ml 儿童 3~5ml 婴幼儿 1~2ml 骨髓 1~2ml
标本质量
合格标本的判断标准
外观：观察颜色、粘度、有无 血丝或脓。若标本为水状且很 明显是唾液，则应拒收。
为了判定是否来自下呼吸道的 痰，需检查是否为合格的痰标 本：WBC>25个/低倍视野， 鳞状上皮细胞<10个/低倍视 野为合格标本。采集合格标本 对细菌的诊断极为重要。
注意事项
在抗生素应用前采集痰标本 对于细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2~3天；不
取样部位应准确，反复涂抹数次，避免接触口腔、舌粘膜和唾液。 口腔表面组织的标本不适于细菌学评价。 咽拭子禁用于会厌发炎患者。 检查白喉棒状杆菌，应取疑为白喉假膜边缘部的分泌物；扁桃体部位
标本取扁桃体小窝处为宜。
下呼吸道（痰培养）标本
采集的临床指征
咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常见的症状。 咯血包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等 呼吸困难，呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛 发热伴WBC增高尤其是中性粒细胞或CRP明显增高 胸部影像学检查提示感染可能
临床微生物标本采集、 转运与处理
微生物标本规范化采集的重要性
恙虫病合并多脏器功能衰竭一例诊治体会
恙虫病合并多脏器功能衰竭一例诊治体会林锦锋;罗琳琳【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2016(027)016【总页数】1页(P2736-2736)【关键词】恙虫病;临床特征;焦痂或溃疡【作者】林锦锋;罗琳琳【作者单位】江门市新会区人民医院，广东江门529100;江门市新会区人民医院，广东江门 529100【正文语种】中文【中图分类】R513.2恙虫病由恙虫立克次体引起的急性传染病，临床表现常因其并发症而复杂多样，差异大，许多临床医生对其认识不足，极易误诊、漏诊而延误治疗。
笔者在临床上成功诊治一例重症恙虫病，现总结报道如下：患者男性，49岁，因反复畏寒、发热1周，伴头晕、全身乏力、肌肉酸痛、咽痛、咳嗽、恶心、排黑便，初诊于当地卫生院，予退热抗感染等处理不见好转并进行性加重，查血常规示白细胞(WBC)、中性粒细胞绝对值(NEUT)升高，血小板减少，心电图示窦性心动过速，拟发热查因：急性上呼吸道感染？心肌炎？于2015年12 月19日入新会人民医院心内科治疗。
入院查体：体温38.1℃，双肺听诊呼吸音清，心脏及腹部检查未见明显异常，查血示WBC 7.4×l09/L，NEUT 81.7%，淋巴细胞13.3%，血小板(PLT)45×l09/L，红细胞(RBC)3.66×l09/L，C-反应蛋白(CRP)119.16mg/L，白蛋白(ALB)34.3 g/L，谷丙氨酸(ALT)41 U/L，谷草氨酸(AST)151U/L，大便潜血阳性，甲流检测阴性；心电图示窦性心动过速，胸片未见异常，入院后予抗感染治疗，体温下降，检测血小板进行性下降，经血液内科会诊考虑特发性血小板减少性紫癜(ITP)及恶性血液病可能，2 d后排除心肌炎后转血液内科治疗，行自身抗体二项阴性，骨髓检查示感染性骨髓象、符合血小板减少性紫癜，骨髓流式细胞学示可见约1.59%的原始髓系细胞，排除免疫性疾病及恶性血液病，经予派拉西林舒巴坦联合依替米星抗感染仍反复发热，行胸部CT示双肺肺炎并胸腔积液，调整为左氧氟沙星联合奥硝唑抗感染并请呼吸内科会诊协助，病情无好转，住院第5天并出现心率快、呼吸促、血氧饱和度低，出现呼吸衰竭，经ICU会诊发现患者阴囊处一溃疡，结合患者从事渔业养殖，并请感染科会诊后确诊恙虫病并多脏器功能衰竭，转ICU治疗，并多次行肥达氏、外斐氏检查阴性，入ICU后立即给予机械通气、应用氯霉素联合多西环素抗立克次体、哌拉西林舒巴坦抗细菌、短期应用激素减轻炎症反应、输注血小板、冷沉淀、白蛋白等血制品及加强脏器功能支持、穿刺引流胸水等抢救措施治疗，体温逐渐恢复正常，脏器功能好转，入ICU第7天拔除气管插管，第8天转感染科继续治疗6 d后复查胸片、血常规及生化指标恢复正常，住院第19 d患者明显好转后出院。
医院样本的核收
医院样本的核收、保存与处理程序1.目的规范临床样本的验收、登记和保存程序，及时发现样本采集、处理和送收过程中的不符合项，保证样本符合检测项目的要求。
2.范围适用于检验部受理的样本。
3.职责3.1 实验室样本接收人员负责样本的接收、验收和登记。
3.2 各实验室或专业组负责本处样本的处理和保存。
4.工作程序4.1 样本的核收。
4.1.1 检验科室样本接收人员必须明确本科室接收样本的范围，非本科室接收范围内的样本应及时通知转运组将样本转入相应科室并在《送错地点样本登记表》上做好相应记录。
4.1.2 在接收样本时，样本接收人员应对样本进行检查和验收，仔细检查样本的标识、容器、抗凝剂、样本量、样本状态（如凝块、溶血等）是否符合有关检测要求，以及样本是否与检验申请相符4.1.3 对样本信息不详，或标记错误，或使用抗凝剂和采集容器不当，严重溶血或脂血，或与检验申请单不符的样本视为不合格样本。
对不合格的样本，样本接收人员应填写LAB-PF-TE- FO-19-2-4《不合格样本核收登记》，并录入LIS系统中即可立即将此信息传给护士站，以便及时做出快速处理，必要时电话通知相关采样人员。
必要时发回检验申请单，样本保留检验科，样本做好醒目的不符合标记，具体标识由各实验室自行约定，例如可用记号笔在样本条形码位置打上“×”作为识别依据。
4.1.4 如接收了不合格临床样本，应在检验报告中说明问题的性质，如有必要，在解释结果时也应说明。
4.1.5 样本的登记。
送到检验科室的样本交给该科样本接收人员，接收人员进入LIS 系统样本接收模块，通过扫描送检清单的批次条码，LIS系统列出本批次所有样本。
接收人员再扫描每一个样本的条码，LIS系统会自动与清单上的样本进行核对，当不一致时会给出提示。
然后，点击确认，LIS系统自动记录接收人和接收时间。
如果是来自住院患者的样本同时传送记账信息给医院信息系统（HIS）。
运送人员需要将送来的急诊样本在LAB-PF-TE-FO-19-2-2《急诊样本核收登记》上登记，检验科样本接收人员同时核对验收并在LIS系统中进行扫描条码确认。
细菌培养鉴定和抗生素敏感性试验
临床微生物实验室以细菌培养鉴定和抗生素敏感性试验为主，为临床提供各种体液、分泌物的细菌培养鉴定与抗生素敏感性试验、支原体检测与抗生素敏感性试验、肥达氏、外斐氏试验等项目的检测服务。
并承担医院的院内感染监控工作。
细菌培养样本的收集方法总则：用于细菌培养的样本收集时应注意无菌操作，特别是无菌部位的样本。
病人在采集样本做细菌培养项目时，如果怀疑细菌感染，应在使用抗生素前，并采样进行送检；如果患者已使用抗生素进行治疗，至少停用抗生素一周以上。
采样时，如果使用干燥的棉拭子，可在采集前先将棉拭子沾少许营养肉汤或无菌生理盐水以保持标本湿度，让细菌能存活更长的时间。
所有的标本要保证储存容器的密闭性，以防止污染，导致检测结果不准。
1、粪便：取有粘液、脓血部分粪便置无菌塑料盒中，如为稀水便。
可直接收集于无菌塑料盒中，置2~8℃冰箱待检。
2、眼、耳、鼻、咽拭子：将棉拭子沾取少许无菌生理盐水（如沾取的太多，可在无菌生理盐水瓶壁上挤去多余的水份），然后采取可疑部位的分泌物，倒悬于无菌试管内放2~8℃冰箱内待检。
3、脓液组织或液体优于拭子标本,尽可能在用药前采集标本。
标本采集前先用无菌生理盐水冲洗表面污染菌，用拭子采取脓液及病灶深部的分泌物。
为防止拭子干燥，可在采集前先将棉拭子沾少许营养肉汤或无菌生理盐水以保持标本湿度。
脓性分泌物较多时，先用无菌棉拭子擦拭，再取流出分泌物置无菌管内送检。
4、血液：A、凡怀疑菌血症和败血病的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，假如病人每天静脉滴注抗菌素时，应该在病人第二天使用抗菌素之前采血培养。
如果病人每8小时用药一次，应该在病人第二次用药之前采血，尽量避过抗菌素在体内浓度的高峰期。
B、成人每次采血5-10ml，小儿采血2-3ml。
C、常规消毒病人采血部位：抽一定量血液后，另换一无菌针头，消毒接种瓶口后将血接种在瓶内，轻轻摇匀。
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肥达氏、外斐氏实验简易操作规程
一、试剂厂家：宁波天润生物药业有限公司。
二、试剂名称：伤寒、副伤寒及变形菌OX2、OX19、OXK诊断菌液。
三、试剂主要组成成份：
肥达氏诊断菌液5瓶：(10ml/瓶，7.0×109/ml) 伤寒O901、伤寒H901、甲型副伤寒、乙型副伤寒、丙型副伤寒
诊断菌液，各一瓶。
外斐氏诊断菌液3瓶：(10ml/瓶，7.0×109/ml) 变形菌OX2、变形菌OX19、变形菌OXK诊断菌液，各一瓶。
四、检验原理：
用甲醛溶液灭活的伤寒、副伤寒及变形菌分别制成，通过凝集试验原理供肥达氏（Widal）、或外斐氏（weil-Felix）反应用。
五、标本要求：疑似伤寒、副伤寒或斑疹伤寒病人的血清。
六、检验方法：
1、用10×6规格的试管架分别装入洁净的玻璃大试管：肥达氏试验玻璃大试管5列×6排；外斐氏试验玻璃大试管3
列×6排。
2、用生理盐水配制1：40倍的血清稀释液16 ml，置于洁净的锥形玻璃瓶内（即生理盐
水15.6ml+血清400μl），旋转摇动充分混匀。
3、用吸量管分别在试管架的第一排试管内（肥达氏5管、外斐氏3管）加入1ml 1：40
倍的血清稀释液，在锥形玻璃瓶内加入8 ml生理盐水，对倍稀释了1：40倍的血清稀释液，旋转摇动充分混匀1：80的血清稀释液；用吸量管分别在试管架的第二排试管内加入1ml 1：80倍的血清稀释液，在锥形玻璃瓶内加入8 ml生理盐水，旋转摇动充分混匀成1：160的血清稀释液；依此方法连续对倍至第五排试管1：640的血清稀释液，并分别加入1ml血清稀释液在相对应的试管内；在第六排的试管内分别加入
1 ml生理盐水作为阴性对照。
4、轻轻摇匀诊断菌液，从第一列至第八列分别加入按O、H、甲、乙、丙、OX2、OX19、
OXK顺序对应的菌液50μl/管，并充分摇匀，把试管架平放置37℃的水浴箱内，18至24小时取出看结果。
七、结果判断：
1、观察时在斜射光光线下透视，观察试管中悬液的混浊程度及管底凝块的多少，先观察
对照管，再分别观察各试管的凝集情况并与对照管相比较。
根据混浊程度及管底凝块的多少，以“4+”“3+”“2+”“1+”符号记录。
（1）4+：上清液完全澄清，细菌凝集块全部沉于试管底，呈大的凝块。
（2）3+：上清液澄清度达75%，大部分细菌凝集块沉于试管底，呈较大的凝块。
（3）2+：上清液澄清度达50%，约50%细菌凝集块沉于试管底，凝块较小，但仍明显可见。
（4）1+：上清液混浊，澄清度仅有25%，仅有部分细菌凝集成块沉于试管底，凝块很小，需仔细观察才能见到。
（5）—：与对照管相同，液体均匀混浊，试管底无凝集块，但有细菌沉淀的圆形小团。
2、血清的凝集效价（即滴度）
（1）出现明显凝集（2+）的血清最高稀释度即为血清抗体的效价（滴度）。
（2）血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗体的量愈多。
一般认为，伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价在1：80以上，“H”抗体在 1：160以上，甲、乙型副伤寒沙门菌凝集效价在1：80以上才有诊断价值。
八、结果分析及临床意义：
1、首先应考虑当地人的凝集效价，凝集效价大于正常效价才有意义。
2、伤寒病人的“O”凝集素常较“H”凝集素出现早，存在于血清内的时间较短，而“H”凝集素出现较迟，但效
价较高，存在于血清内时间亦较长，可达数年。
3、因伤寒“H”凝集素在血内保持时间较久，而“O”凝集素较短暂，所以曾接种过伤
寒菌苗者，“O”凝集效价在诊断上较重要。
4、曾患过伤寒或曾戒接种过伤寒沙门菌，新近又感染流行性感冒或布氏杆菌等疾病时，
可产生高度的“H”凝集素及较低的“O”凝集素，这种反应称回忆反应。
5、确诊为伤寒的患者中约有10%的患者肥达反应始终为阴性，故阴性结果不能排除伤
寒的诊断。
6、采血的时间不同，肥达反应的阳性率也不同，发病第1周阳性率为50%，第2周为
80%，第4周为90%，恢复期凝集价最高，以后逐渐下降，以致转阴。
临床上一般以双份血清（疾病早期和恢复期）的凝集价有4倍增高作为新近是否感染该病的指征。
而单份血清的凝集价应达1：160以上才有诊断参考价值。
7、本实验可用于辅助伤寒及副伤寒沙门菌引起的肠热症。
九、注意事项：
1、结果观察时先不要震荡试管，先把试管举起以观察试管内上清夜和下沉凝集物，然后，
再轻摇试管使凝块从管底升起，最后按液体的清浊、凝块的大小进行记录。
观察结果时应首先观察对照管，此管应呈“—”（即不凝集）。
2、“H”凝集呈絮状，以疏松之大团沉淀于管底，轻摇试管即能荡起，而且极易散开。
3、“O”凝集呈颗粒状，以坚实凝片沉于管底，轻摇试管不易荡起，且不易散开。
4、菌液防止冻结，在有效期内使用，如果有摇不散的凝块时不能使用。