三萜类化合物的提取与分离
灵芝三萜的提取分离及总三萜的含量测定(精)
— 70 —现代中药研究与实践2010年第24卷第5期Chin Med J Res Prac,2010 Sept.,Vol.24 No.5灵芝是一种名贵的药用真菌，属于担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝和紫芝的总称，始载于«神农本草经»，具有补中益气、滋阴强壮、扶正固本、延年益寿等功效。
灵芝主要成分为多糖类和三萜类。
三萜类成分复杂，曾祥丽等[1]报道灵芝含有122种三萜类成分，其中最主要是灵芝酸37种。
林志彬等研究认为灵芝三萜具有抗HIV-1及HIV-1蛋白酶活性、保肝、抗肿瘤和抗艾滋病毒等药理活性[2-5]。
本文对灵芝三萜的提取分离及总三萜的含量测定作以下报道。
1 仪器、试剂旋转蒸发仪（日本生产，EYELA ROTORYEVAPOPATOR N-1000）；GB204电子天平（瑞典）；751型紫外-可见分光光度计（上海分析仪器灵芝三萜的提取分离及总三萜的含量测定侯敏娜1，刘剑 2（1.陕西国际商贸学院，陕西咸阳 712046；2. 陕西香菊药业集团责任公司，陕西商洛 726000）摘要：目的研究灵芝三萜的最佳提取方法，并测定其总三萜的含量。
方法采用正交实验方法，用硅胶柱进行总三萜分离，通过紫外-可见分光光度法测定总三萜含量。
结果最佳提取方法为用5倍量95%乙醇回流提取3次，每次1.5 h ；用 30倍量硅胶装柱，以石油醚-乙酸乙酯（9：1和7：3）进行洗脱；经分离得到针状晶体Ⅰ和Ⅱ，测定该品种中灵芝总三萜含量为9.07%。
结论本提取方法稳定可行，可作为灵芝三萜工业化生产的参考。
关键词：灵芝三萜; 提取分离 ; 含量测定中图分类号：S567.3+1 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(201005-0070-02 Ganoderma Triterpenoids Extraction and Determination of the Total TriterpenoidHOU Min- na1 , LIU Jan2(1.Shan’anxi Institute of International Trade & Commerce, Xianyang 712046, China ;2. Shan’anxi Xiangju Pharmaceutical Group Co., Shangluo 726000,ChinaAbstract: Objective To design the best out of Ganoderma triterpenoids extract programs and separation methods, and measured the total content of triterpenoid. Methods Filter through the orthogonal extraction method, using silica gel column for the total separation of triterpenoids by ultraviolet - visible spectrophotometry triterpenoid content. Results The optimum extraction method is to use fi ve times the amount of 95% ethanol was extracted three times for 1.5 hours each time; loaded with 30 times the amount of silica gel column with petroleum ether - ethyl acetate (9:1 and 7:3 for elution; by ultraviolet - visible spectrophotometry in order to ursolic acid as a reference substance, the total triterpene content of Ganoderma lucidum were determined. Conclusion The extraction method is stable and feasible, and Ganoderma triterpene content was to 9.07%.Key words: Ganoderma lucidum Triterpenes; extraction and separation; content determination厂）；硅胶G （青岛高能达化工有限公司）；薄层层析硅胶板HSGF254（烟台江友硅胶开发有限公司）、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、甲醇等试剂均为分析纯，熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所）。
萜类化合物的提取和分离
2. 碱提酸沉法
利用内酯化合物在热碱液中，开环成盐而溶于水中，酸化后又 闭环, 析出原内酯化合物的特性来提取倍半萜类内酯化合物。但
是当用酸、碱处理时，可能引起构型的改变, 应加以注意。
萜类化合物的提取分离
TEPENOIDS AND VOLATILE OILS
3. 吸附法
1. 活性炭吸附法： 苷类的水提取液用活性炭吸附，经水洗除去水
（二） 萜类化学成分的分离 1. 结晶法分离 2. 柱层析分离 常用的吸附剂有硅胶、氧化铝（中性氧化铝）。 亦可采用硝酸银柱层析进行分离。 3. 利用结构中特殊功能团进行分离 如倍半萜内酯可在碱性条件下开环，加酸后又环合，借此可 与非内酯类化合分离；
萜类生物碱也可用酸碱法分离。不饱和双键、羰基等可用加 成的方法制备衍生物加以分离。
(6)
(140mg)
(7)
(84mg)
(8)
(89.4mg)
(9)
(201mg)
(10)
(79mg)
(11)
(51.6mg)
(12)
(89mg)
(13~18)
萜类化合物的提取分离
TEPENOIDS AND VOLATILE OILS
冬凌草叶干粉（2400g） 乙醚提取 残渣弃去
冬凌草甲素的分离
乙醚液 回收乙醚
萜类化合物的提取和分离
TYPE OF TERPENOIDS
萜类化合物的提取分离
TEPENOIDS AND VOLATILE OILS
（一） 萜类化学成分的提取
1. 有机溶剂法
2. 碱提酸沉法 3. 吸附法
（二）萜类化学成分的分离
1. 结晶法分离 2. 柱层析分离
3. 利用结构中特殊功能团进行分离
白桦茸三萜提取方法
白桦茸三萜提取方法白桦茸是一种珍贵的中药材，它具有多种药用价值。
其中，白桦茸中的三萜类化合物是一类重要的活性成分，具有很高的药用价值。
本文将介绍白桦茸三萜的提取方法。
一、材料准备1. 白桦茸：选择新鲜、无虫蛀、无霉变的白桦茸作为原料。
2. 有机溶剂：可选择乙醇、甲醇等有机溶剂作为提取溶剂。
二、提取方法1. 粉碎：将白桦茸用研磨机或者研钵研磨成细粉。
2. 提取：将粉碎后的白桦茸放入提取器中，加入适量的有机溶剂，浸泡一段时间。
3. 过滤：将提取液过滤，去除固体残渣。
4. 浓缩：将过滤后的提取液放入蒸发器中，进行溶剂的蒸发浓缩，直到得到浓缩物。
5. 结晶：将浓缩物溶解于适量的溶剂中，加热至溶解，然后冷却结晶，得到纯净的白桦茸三萜。
三、注意事项1. 提取过程中要做好通风，避免有机溶剂蒸气对人体造成损害。
2. 选择合适的提取温度和时间，以保证提取效果。
3. 提取液的过滤要彻底，避免固体残渣带入浓缩物中。
4. 浓缩过程中要控制温度，避免溶剂挥发过多。
5. 结晶过程中要控制冷却速度，以获得较大的结晶颗粒。
6. 提取液和浓缩物要密封保存，避免受潮、受热和光照。
四、应用价值白桦茸三萜具有很高的药用价值，可以用于治疗风湿关节炎、骨质增生等疾病。
此外，白桦茸三萜还具有抗菌、抗炎、抗氧化等多种药理活性，对于提高免疫力、抗衰老等方面也有一定的作用。
总结：白桦茸三萜的提取方法主要包括粉碎、提取、过滤、浓缩和结晶等步骤。
在提取过程中需要注意通风、控制温度和时间等因素，以保证提取效果。
白桦茸三萜具有很高的药用价值，广泛应用于中药制剂的研究和开发中。
通过对白桦茸三萜的提取和研究，有助于进一步挖掘和开发白桦茸的药用价值。
三萜类化合物
二、结构与分类
4、环菠萝蜜烷型
β构型
21
22
24 25 26
12 18 20
23
11 19
H
1317 16 14
27
2 1 10 9 8
15
α构型
35
30
4
67
H
Cycloartanes
29 28
二、结构与分类
从中药黄芪（Astragalus membranaceus中分离到的
黄芪苷 I ：
24
二、结构与分类
二）单环三萜 菊科蓍属植物-----蓍醇A
HO
蓍醇A
二、结构与分类
三）双环三萜
从海洋生物Asteropus sp. 中分离得到 pouoside A-E是一类具有双环骨架的三萜乳糖苷类。
OR4
OH
OO
OH
OR3
OAc
R1 O
OR2
二、结构与分类
四）三环三萜 蕨类植物、楝科植物等。
常见的糖有D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、 L-鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸，另外还有D夫糖、D-鸡纳糖、D-芹糖、乙酰基和乙酰氨基糖等，多 数苷为吡喃型糖，但也有呋喃型糖。
有些苷元或糖上还有酰基等。这些糖多以低聚糖形式与 苷元成苷，成苷位置多为3位或与28位羧基成酯皂苷 （ester saponins），另外也有与16、21、23、29位等羟 基成苷的。
第七章 三萜类化合物
一、概述 二、结构与分类 三、理化性质 四、提取分离 五、鉴别
一、 概述
一、概述
多数三萜（triterpenoids）是由30个碳原子组成 的萜类化合物，根据“异戊二烯法则”，多数三 萜被认为是由6个异戊二烯（三十个碳）缩合而成 的，该类化合物在自然界广泛存在. 有的以游离形式存在
三萜类化合物
一般C-3位均有-OH，或游离，或成苷，或氧取代
例如：
O
OH
OH
3
HO
H
HO
羊毛脂醇
OH
黄芪醇
二、分类
（一）四环三萜（tetracyclic triterpenoids） 3、 大戟烷型（euphane） 结构特点：
A/B、B/C、C/D环：均为反式 （与达玛烷型一致） 10、14位：β-角甲基 13位：α-角甲基
21 11 1 19 9 2 3 12 18 22 20 17 16 15
1 4 10 14 13
24 23 25 27
26
C 13 D H 14
30 7
A
4 28
10 5
B
6
H 8
17
20
H
29
lanostane
二、分类
（一）四环三萜（tetracyclic triterpenoids）
2、羊毛脂烷型（lanostane）
A
4
B
6
8
30
7
H
29
dammarane
二、分类
（一）四环三萜（tetracyclic triterpenoids）
1、达玛烷型（dammarane） 结构特点：
A/B、B/C、C/D环：均为 反式 8、10位：β-角甲基 14位：α-角甲基 13位： β-H 17位：β-侧链 20位构型：R 或 S
C 13 A
10
R或S 20
H
17
D
B 8
H
dammarane
二、分类
（一）四环三萜（tetracyclic triterpenoids）
三萜类化合物
29 19
COOH
▪ 3、羽扇豆烷型19 H21
18 22
第三节 三萜类化合物的理化性质
一、一般物理性质
1、性状
➢ 苷元多有较好的结晶 ➢ 苷多为无定型粉末 ➢ 具有苦和辛辣味,对人体粘膜有刺激性,还具有吸湿性.
2、溶解性
➢ 苷元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等。 ➢ 苷极性较大,可溶于水,易溶热水,热甲醇,热乙醇和稀醇,难溶于
3、溶血实验 供试液1毫升，水浴蒸干，0.9%生 理盐水溶解，加入几滴2%红细胞悬浮液，溶液 油浑浊变澄清，则溶血。
二、色谱检识 1、薄层色谱 吸附剂 ：硅胶 展开剂：游离三萜 环己烷-乙酸乙酯
苯-丙酮 氯仿-乙酸乙酯 三萜皂苷 氯仿-甲醇-水 正丁醇-醋酸-水 显色剂：10%硫酸、三氯乙酸等。
▪ 2、纸色谱 ▪ 皂苷：水为固定相 ▪ 苷元：甲酰胺为固定相
第七节 含皂苷的中药实例 一、人参
➢ 五加科人参属植物人参的干燥根。 ➢ 有大补元气、生津止渴、调养营卫。
（一）主成分结构、性质 1、皂苷 含量约4%，根须中的含量高于
主根。
➢ 人参总皂苷（Rx)。 ➢ 根据皂苷元的不同分为A、B、C三类。
▪ （1）分类及主要化合物
▪ A型
➢ 人参皂苷-苷元为20（S)原人参二醇（最
3分布
三萜类化合物在菌类、蕨类、单子叶和双子叶植物、动 物及海洋生物中均有分布，尤以双子叶植物中分布最 多
➢ 游离三萜：豆科、菊科、大戢科、卫矛科 ➢ 三萜苷类：豆科、五加科、桔梗科、远志科、葫芦科、
毛茛科等分布较多
➢ 常用中药人参、黄芪、甘草、三七、桔梗、远志、柴
胡等都含有皂苷（三萜苷）。
第二节 三萜类化合物的结构与分类
齐墩果酸
肖咪 2013110419
一、来源及功效 二、三萜类化合物的提取及分离 三、齐墩果酸的结构鉴定 四、齐墩果酸衍生物的结构鉴定
一、来源及功效
枫杨(PterocaryastenopteraDC1)为胡桃科枫杨属
植物,是我国云南西双版纳地区河岸季雨林的代表群落 类型，作为传统中药,具有杀虫止痒,利尿消肿的功效。
三、齐墩果酸的结构鉴定
CD谱：
化合物1在220nm处呈现正的 Cotton效应,根据扇形规则结合 八区律观察化合物,可以确定齐 墩果酸的结构类型为17S。
三、齐墩果酸的结构鉴定
结论：将化合物1与参考文献对照,碳谱数据基
本一致,与齐墩果酸对照品共薄层, 三种
展开剂系统Rf值均一致,故确定化合物1 为齐墩果酸。
三、齐墩果酸的结构鉴定
三、齐墩果酸的结构鉴定
三、齐墩果酸的结构鉴定
13C-NMR谱：
共有30个碳信号 3位连氧碳信号δ 79.0 12、13位特征烯碳信号δ 122.6、 δ 143.6 28位羧基碳信号δ 183.4 其余信号为三萜骨架信号
（乌苏酸:δ (C12)125.5, δ(C13)138.0,因此对于用质谱不能区别 的齐墩果酸和乌苏酸,可用13C核磁共振谱进行区别。）
13C-NMR谱中检测到2个双键碳δ123.43(d,C12),
四、齐墩果酸衍生物的结构鉴定 通过解析该化合物的1H-1H COSY、HMQC及HMB谱, 确定化合物2具有2,3,23-三羟基齐墩果酸的平面结构。根据 H-2和H-3之间的偶合常数(J2,3=9.5 Hz),H-2和H-3均应处于 a键上,由此确定2-OH为α型,3-OH为β型。 鉴定化合物2为2 α,3 β,23-三羟基齐墩果酸
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法
灵芝是一种珍贵的中草药，在传统中医药和现代药物领域都有重要的应用价值。
灵芝
中的有效成分主要包括多糖、三萜类化合物和蛋白质等。
提取这些有效成分可以增强灵芝
的药用价值，下面将介绍一些灵芝中有效成分的提取方法。
一、多糖的提取方法：
1. 热水提取法：将灵芝切碎，加入适量的开水，水温保持在80-100℃之间，连续浸
泡2-3小时。
之后，过滤得到提取液，再用醇沉淀得到多糖。
2. 酶解法：将灵芝粉末加入含有酶的溶液中，温度保持在50℃左右，酶解2-3小时。
之后通过离心或过滤，得到多糖的提取液。
二、三萜类化合物的提取方法：
1. 乙醇提取法：将灵芝切碎，加入适量的乙醇中，浸泡12-24小时。
之后，过滤得到提取液，再用乙醇沉淀得到三萜类化合物。
2. 超临界流体萃取法：利用超临界二氧化碳作为溶剂，将灵芝粉末加入超临界流体
萃取设备中，进行高温高压的提取。
之后通过减压，得到三萜类化合物的提取物。
需要注意的是，在提取灵芝中有效成分的过程中，应根据具体成分的性质和目的选择
合适的提取方法。
提取过程中也需要控制温度、时间、浓度等条件，以保证提取效果和成
分的纯度。
为了确保提取物的质量和安全性，提取过程中还要注意卫生和消毒，以防止细
菌和其他有害物质的污染。
灵芝中有效成分的提取方法多种多样，选择合适的提取方法可以充分发挥灵芝药用价值。
在提取过程中要严格控制条件，确保提取物的纯度和质量。
提取物的应用还需要进一
步研究和开发，以发挥其在医药和保健品领域的作用。
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3
4
4
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的分离
1.分段沉淀法
利用皂苷难溶于乙醚、丙酮等溶剂来分离。
皂苷/醇液+ 滴加乙醚等→
优点—简便
沉淀
5 缺点—分离不完全，不易获得纯品
5
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的分离 2.胆甾醇沉淀法
皂苷（醇提液）
胆甾醇
沉淀
水，醇，乙醚洗涤除杂
天然药物化学
第九章 三萜及其苷类
第四节 三萜类化合物的提取与分离
一、三萜皂苷的提取与分离
1. 三萜苷元类化合物的提取 多采用极性较小的溶剂进行回流提取 2. 三萜皂苷类化合物的提取 多采用极性较大的溶媒提取，如甲醇、乙醇、含水醇 等
2
2
第四节 三萜类化合物的提取与分离
一、三萜皂苷的提取
1.醇类溶剂提取法：醇提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯，正丁醇 等溶剂进行分部提取，然后进一步分离，三萜成分主要从氯仿部位中 获得。 2.酸水解－有机溶剂萃取法：以获得苷元为目的。由于水解反应比较强 烈，发生结构变异而生成次生结构，得不到原始皂苷元。欲获得原始 皂苷元，则应采用温和酸水解，两相酸水解、酶水解或Smith降解等 方法。 3.碱水提取法：酸性皂苷。
8
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的提取分离实例
（一）人 参
1．结构分类
人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷 (ginsenosides)。人参根中总皂苷的含量约5％，根须中人参皂苷的含量
比主根高。目前已经确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷Ro、Ral、Ra2
、Rbl、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rgl、Rg2、Rg3、Rhl及Rh2、Rh3等30 多种，根据皂苷元的结构可分为A、B、C三种类型：
（四）柴 胡 1.结构与分类
21
21
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、提取分离实例
（四）柴 胡 2.提取分离
柴胡皂苷a、d、c 的提取分离
22
22
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的提取分离实例
（二）甘 草
1．结构
13
甘草皂苷
13
甘草次酸
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的提取分离实例
（二）甘 草
2．提取分离
（1）甘草酸铵盐的制备
14
14
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、提取分离 实例
（二）甘 草
2．提取分离
（2）甘草酸单钾 盐的制备
沉淀
乙醚回流
6
乙醚液 （胆甾醇）
6
残渣 （皂苷）
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的分离 3.色谱分离法 吸附色谱：固定相为中性氧化铝、硅胶，洗脱剂为有机溶 媒（极性较小、或中等极性皂苷） 分配色谱：如反相HPLC、MPLC、ODS、纸色谱（极性 较大皂苷）、DCCC、HSCCC。 大孔吸附树脂色谱：一种新型非离子型高分子聚合物吸附剂。 凝胶色谱：分子筛的作用。
（三）黄 芪 1.结构与性质
从膜荚黄芪中分离鉴定近20个皂苷，绝大多数为环菠萝蜜烷型三萜皂 苷。如黄芪苷Ⅰ(astragalosideⅠ)、黄芪苷V(astragaloside V)、黄芪苷 Ⅶ(astragaloside Ⅶ)等。中国药典主要检测其中的黄芪苷IV(astragaloside IV)
17 ，也叫黄芪甲苷。这些皂苷在酸性条件下水解时，可获得共同的皂苷元环
黄芪醇。
17
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的提取分离实例
（三）黄 芪
18
18
二、三萜皂苷的提取分离实例
（三）黄 芪 2.提取分离
黄芪甲苷（黄芪苷IV）的提取分离
19
19
第四节 三萜类化合物的提取与 胡
柴胡，药用部位为伞形科植物柴胡或狭叶柴胡的干燥根。春、秋 二季采挖，除去茎叶及泥沙，干燥。柴胡是常用解表药。
20
性味苦、微寒，归肝、胆经。有和解表里，疏肝升阳之功效。用
于感冒发热、寒热往来、疟疾、肝郁气滞、胸肋胀痛、脱肛、子宫脱 垂、月经不调。
20
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的提取分离实例
9
(1)人参二醇型－A型 (2)人参三醇型－B型 (3）齐墩果酸型－C型
9
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的提取分离实例
10
10
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的提取分离实例
11
11
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的提取分离实例
（二）甘 草
甘草，为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草 12 Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根茎 。分布于东北、华北、陕西、甘肃、青海、新疆、山东等地。 具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药之功效。常 用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈 肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。 12
15
15
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的提取分离实例
（三）黄 芪
16
黄芪为豆科植物膜荚黄芪(Astragalus membranaceus)或蒙古黄芪的 根，具有补气升阳，固表止汗，利水消肿，生津养血，行滞通痹，
托毒排脓，敛疮生肌之功效。
16
第四节 三萜类化合物的提取与分离
二、三萜皂苷的提取分离实例
7
7
第四节 三萜类化合物的提取与分离
三、三萜皂苷的提取分离实例
（一）人 参
人参本品为五加科植物人参的干燥根。主产吉林、辽宁、黑龙江等省。 性味归经：甘、微苦，平。归脾、肺、心经。
8 功效：大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神。
主治：用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少便溏，气短乏力，肺虚喘 咳，津伤口渴，内热消渴，久病虚羸，惊悸失眠，阳痿宫冷；心力衰竭， 心原性休克。