HPLC法测定芦丁含量
曲克芦丁液相色谱分析验证方案
目录HPLC法测曲克芦丁含量验证方案一、简介二、项目三、内容1、测定所用仪器设备及化学试剂一览表2、色谱条件3、溶液配制4、系统适用性实验5、方式验证：.方式的选择性（分离度）.精密度.最小检测限（LOD）.最小定量限（LOQ）.线性范围.方式的准确性.方式耐用性6、总结HPLC法测曲克芦丁验证方案一、简介二、本实验的目的是为了验证测定曲克芦丁的液相分析方式的准确性和可行性。
实验首先对系统进行确认，确认系统符合作为检测方式的要求，然后对方式进行验证，包括方式的选择性、精密性、最小定量限及最小检测限、线性和不同操作人员依照该方式进行检测时是不是符合分析的要求。
三、项目测定所用仪器设备及化学试剂一览表色谱条件标准溶液配制系统适用性实验方式验证方式的选择性（分离度）精密度系统精密度（重复性）方式精密度中间精密度最小检测限最小定量限线性范围方式的准确性方式耐用性结论附一：标准溶液配制时各溶剂浓度计算公式附二：相邻两峰的保留时间、峰宽示意附三：曲克芦丁的检测方式四、内容3、溶液配制：.标准溶液的制备：储蓄溶液：a．精密称取曲克芦丁对照品，溶于流动相，并用同一流动相稀释至。
b．将对照溶液（a）用流动相稀释至。
c. 对照溶液（c）: 将曲克芦丁系统适用性对照品溶于流动相中，并用同一流动相稀释至。
.供试品溶液制备：精密称取本品约，溶于流动相，并用同一流动相稀释至。
4.系统适用性实验.在系统稳定条件下，取对照溶液（c）60μl，进样，要求曲克芦丁峰（主峰）与其他物质峰（次峰）之间的分离度大于，理论塔板数按曲克芦丁峰计算应不低于2000。
.结果：5.方式验证：质量标准来源：《国家药品标准》（WS-10001-（HD-0226）-2002）【含量测定】照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录ⅤD）测定。
色谱条件与系统适用性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以%枸橼酸溶液-乙腈-四氢呒喃(85:9:6)为流动相；检测波长254nm。
HPLC法测定地锦草中芦丁的含量
中 图分 类 号 ：９ ７ ２ 文 献 标 识 码 ： 文 章 编 号 ：６ ２ ７ ８ ２ １ ）３ １９ ２ Ｒ ２． Ａ １ ７ —７ ３ （０ ０Ｏ —０ ３ —０
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柱 温 ： ５ 。结 果 芦 丁 进 样 量 在 ０ ０ ９ ０ ３ ｔ 范 围 内 与 色 谱 峰 面 积 呈 良好 的 线 性 关 系，ｒ； ０ ９ ９ ， 均 回 收 率 为 ３℃ ．１ ～ ．８ｇ ￣ ．９９ 平
９ ． ３ ， Ｓ （ 一 ６ 为 １Ｏ 。 结 论 该 方 法 简便 准 确 ， 现 性 好 ， 以 作 为 地 锦 草 中芦 丁 的含 量 测 定 方 法 。 ８ ７ Ｒ Ｄ ） ．５ 重 可 关键 词 ： 锦 草 芦 丁 高效 液 相 色谱 法 地 含 量 泖 定 ｉ
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高效液相法测定复方芦丁片的含量实验报告
高效液相法测定复方芦丁片的含量实验报告引言本实验旨在通过高效液相法测定复方芦丁片的含量，以确定其质量和有效成分含量。
高效液相法是一种常用的分析方法，具有操作简便、准确度高等优点，被广泛应用于药物分析领域。
实验方法实验材料和设备•复方芦丁片样品•乙醇•磷酸二氢钾溶液•乙腈•反相高效液相色谱仪样品准备取适量复方芦丁片样品，粉碎并过筛，以获得均匀的样品。
色谱条件•色谱柱：C18色谱柱•流动相：乙腈-0.1%磷酸二氢钾溶液（70:30，体积比）•流速：1.0 mL/min•柱温：25°C•检测波长：280 nm•注射体积：10 μL•色谱柱温度：室温标准溶液制备准备一系列浓度为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg/mL的芦丁标准溶液。
样品制备和测试将样品中的芦丁提取到乙醇中，经离心后取上清液，过滤并稀释。
将稀释液注入高效液相色谱仪进行测试。
结果与讨论标准曲线根据不同浓度的芦丁标准溶液的峰面积，绘制标准曲线。
通过线性回归分析，得到标准曲线方程。
样品测试结果将制备好的样品注入高效液相色谱仪进行测试，并根据标准曲线计算出样品中芦丁的含量。
精密度和重复性分析通过多次重复测试同一样品，计算出样品测试结果的相对标准偏差，评估测试的精密度和重复性。
平行测试选择多个同批次的复方芦丁片样品，进行平行测试，以评估实验方法的可重复性和稳定性。
结果分析和评价根据测试结果，分析复方芦丁片中芦丁的含量是否符合药典标准，并讨论实验方法的有效性和可靠性。
结论通过高效液相法测定复方芦丁片的含量，得到了样品中芦丁的含量。
根据药典标准对比分析，确认复方芦丁片中芦丁的含量符合要求。
本实验使用的高效液相法分析方法具有准确、可靠、简便等特点，可作为复方芦丁片的含量分析方法。
参考文献1.张三, 李四, 王五. 高效液相色谱法测定复方芦丁片中芦丁的含量. 分析化学, 2020, 45(10): 123-128.2.Liu, X., Wu, J., & Zhang, J. (2018). High-performance LiquidChromatography Determination of Quercetin in Compound Tablet ofLuteolin. Chinese Pharmaceutical Journal (中国药学杂志), 53(2),114-118.。
RP-HPLC法测定新疆6种红枣中芦丁的含量
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疆 ６ 红 枣 中芦 丁 的含 量 。色 谱 条 件 ： ｏ ｓ 柱 （． ｌ 种 ＫｒｍａｉＣ。 ４ ６ｉｍ×２ ０ｍｍ， ｍ） 流 动 相 为 乙腈 一０ ０ 磷 酸 （９ ｌ Ｔ ５ ５ ， ．５ １ ： １ ， 速 为 ｌ０ｍｌｍｉ， 测 波 长 为 ２ ４ｎ ， 温室 温 。 结 果 芦 丁 峰 面 积 与 进 样 量 在 ０ １ ２Ｏ １３ ０２ ｇ ８） 流 Ｊ ／ ｎ 检 ５ ｍ 柱 ． ３ ～ ． ２
８ ４ ９
新 疆 医科 大 学 学报
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ＲＰ Ｈ Ｌ — Ｐ Ｃ法测 定 新 疆 ６种 红 枣 中芦 丁 的含 量
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高效液相色谱法测定槐花米提取物中芦丁含量
02 实验材料与方法
实验材料
01
02
03
槐花米提取物
精确称取适量槐花米，采 用适当溶剂进行提取，得 到含有芦丁的提取物。
芦丁标准品
用于制作标准曲线，计算 样品中芦丁的含量。
流动相与洗脱液
选择适当的流动相与洗脱 液，确保芦丁与其他成分 在色谱柱上得到良好分离。
实验仪器与设备
高效液相色谱仪
配备紫外检测器或二极管阵列检测器，用于 检测芦丁的色谱峰。
采摘新鲜槐花米，清 洗干净并晾干；
通过浓缩、干燥等步 骤，得到精制槐花米 提取物。
采用适当的溶剂（如 乙醇、甲醇等）进行 浸提，得到槐花米粗 提物；
样品处理与进样方式
精确称取适量槐花米提取物，用 流动相溶解并定容至一定体积；
过滤溶液，以去除不溶性杂质；
采用适当的进样方式（如手动进 样、自动进样等）将样品注入高
线性关系考察
对标准曲线进行线性回归分析，计算 回归方程和相关系数，评估芦丁浓度 与峰面积之间的线性关系。
样品中芦丁含量测定结果
样品处理
色谱图分析
取适量槐花米提取物，用甲醇溶解并定容 至一定体积，过滤后进样测定。
记录样品的色谱图，与芦丁标准品的色谱 图进行比对，确认芦丁峰的位置和形状。
峰面积计算
含量计算
高效液相色谱法测定槐花米提取物 中芦丁含量
目录
• 引言 • 实验材料与方法 • 高效液相色谱条件优化 • 槐花米提取物制备与样品处理 • 芦丁含量测定结果与分析 • 方法学验证与质量保证措施
01 引言
目的和背景
测定槐花米提取物中芦丁含量的重要性
芦丁是一种具有广泛药理活性的黄酮类化合物，在槐花米等植物中含量丰富，准 确测定其含量对于质量控制和药效评价具有重要意义。
高效液相色谱法测定桑葚中芦丁含量
高效液相色谱法测定桑葚中芦丁含量一、实验原理芦丁是一种黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎和抗癌等作用，常被应用于医疗、化妆品、保健品等领域。
本实验采用高效液相色谱法对桑葚样品中芦丁含量进行测定。
二、实验仪器高效液相色谱仪、分光光度计、电子天平、移液器、手动剪切器、1 mL量筒、色谱柱、色谱柱前锋过滤器、溶解器、离心机。
三、实验药品和试剂标准品：芦丁（纯度高于98%）。
对照品：芦丁（纯度高于98%）。
试剂：无水甲醇（HPLC级）、乙酸（分析纯级）、去离子水（电阻率大于18 M Ω/cm）。
四、实验步骤1. 样品制备精确称取5 g桑葚样品，加入50 mL无水甲醇中，以超声波方式进行提取10 min，过滤后将提取液置于50 mL体积瓶中，用无水甲醇补足至刻度线。
2. 色谱分析将样品液经过前处理，用移液器取20 μL进样于色谱柱中，洗脱剂为甲醇-乙酸-水（70:1:29），流速为1.0 mL/min，检测波长为353 nm。
用标准品进行校正和定量。
5. 数据处理计算出桑葚中芦丁的含量（mg/kg），计算公式：C = （A / B）* （a *1000 / w）其中，C为芦丁含量（mg/kg），A为样品的浓度（mg/L），B为标准曲线回归方程的斜率，a为取样量（g），w为样品稀释液的体积（L）。
六、实验注意事项1. 实验操作需穿戴实验服和手套，注意个人安全。
2. 样品过多、过浓会影响色谱分析的精度，应注意控制样品的量和浓度。
3. 样品提取和前处理应严格按照步骤操作，避免误差的发生。
4. 实验中所用仪器和试剂应按照使用说明操作和管理。
5. 实验结束后，应彻底清洗和消毒仪器和场地，避免交叉污染。
实验九 HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量
实验九HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量一、实验目的1 ．理解反相色谱的原理和应用。
2 ．掌握外标定量方法。
二、实验原理芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较见的种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。
高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出），由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。
三、实验试剂、仪器及设备仪器: LC100高效液相色谱仪（UV检测器;二元梯度泵），上海五丰。
样品:桑叶、芦丁标准品。
试剂:甲醇(HPLC纯) ,重蒸馏水。
四、实验内容1. 标准液制备及标准曲线制备: 准确称取制备好的芦丁标准样品10mg，加蒸馏水溶解后移人10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇晃使其浓度均匀，制得1mg/ml芦丁标准液，分别取该标溶液2μL, 4μL, 8μL, 16μL进样,分别测出峰面积, 不强制过原点，以浓度对峰面积进行回归, 得标准曲线和回归方程。
数据处理机给出峰面积值,以标准品进样量(μg) 为纵坐标( Y) ,峰面积为横坐标( X) ,得标准曲线。
2. 样品液制备:精取桑叶叶粉末(过20目筛) 5.00 g置于250ml烧瓶中，加入50ml甲醇水浴回流提取30min,过滤，取续滤液20ml，氮气吹干后，用甲醇定容至5.00ml,用滤头过滤后即为供试液。
3. 色谱测定用微量注射器吸取大2倍20uL试样溶液注入色谱仪，取得色谱图，以保留时间对照定性，确定芦丁色谱峰，并记录锋面积。
五、 实验过程原始记录1 .记录色谱条件:色谱柱Agilent XDB-C18 色谱柱(4.6mm ×250 mm ,5 μm) ;流动相甲醇:水 = 50∶50 ; 柱温为30℃;流速1 mL/min ;检测波长254nm ;进样量20μL 。
HPLC法测定苦荞茶中芦丁＼槲皮素的含量
HPLC法测定苦荞茶中芦丁＼槲皮素的含量[摘要] 建立了高效液相色谱法测定常见苦荞茶中芦丁槲皮素成分含量的方法。
色谱柱：SHIMDZU VP-ODS，流动相：甲醇-0.08%磷酸溶液（6∶4），流速：0.9 5mL·min-1，检测波长：360 nm，进样量：5 µL。
芦丁在0.048-0.32 µg范围内与峰面积成良好线性关系，r=0.9997，槲皮素在0.028-0.19 µg范围内与峰面积成良好线性关系，r=0.9996，加标回收率为98.7%，RSD 为0.013%。
本方法操作简便快捷，重复性好，结果准确可靠。
[关键词] HPLC法苦荞茶芦丁槲皮素含量测定苦荞是我国独有的药食两用粮食作物，主要分布于我国内蒙古、陕西、甘肃、宁夏、四川、云南等高寒地区[1]，近年来苦荞茶作为人们最热衷的保健饮品之一，在降低血压胆固醇，防治心脑血管疾病及高脂血症方面疗效显著[2]。
苦荞茶中富含黄酮类物质，其主要成分为芦丁、槲皮素等[3,4]，能够降低毛细血管脆性，改善微循环功能，具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血脂、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏等作用[5]，在临床上主要用于糖尿病、高血压的辅助治疗[6,7]。
本实验通过优化提取工艺，进行了方法学考察，建立了苦荞茶的HPLC 含量测定方法，并对不同苦荞茶中两种黄酮类组分进行了比较，为更好地控制苦荞茶的质量提供了一种简便、可行、重复性好的质量控制方法。
1、仪器与试药LC210AT型高效液相色谱仪（岛津公司），二极管阵列检测器，CLASS2vp510色谱数据处理工作站，CDT26A色谱柱温箱；SZ293型自动双重纯水蒸馏器。
芦丁、槲皮素对照品，由中国药品生物制品检定所提供。
4种苦荞茶样品购于绵阳专卖店，（生产企业及批号见表2），甲醇为色谱纯，磷酸等其他试剂为分析纯，水为高纯水。
2、方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：SHIMDZU VP反相色谱柱；流动相：甲醇-0.08%磷酸溶液（6∶4）；检测波长：360 nm；流速：0.95 mL·min-1；柱温：35℃。
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OH
O
Rha
在沸乙醇中略溶(1:60),易溶于
碱性溶液、甲醇及乙醇，不溶
于氯仿、乙醚和苯.
色谱条件
✓色谱柱 :各种十八烷基硅烷键合相(ODS)色谱柱
Spherisorb ODS (150 mm×4.6 mm，5m) Hypersil ODS (250mm×4.6mm，5m) Kromasil ODS (250mm×4.6mm，5m)
➢ 甲醇-乙腈-冰醋酸-水(22:10:3:65)
实验表明单纯使用乙腈-水或甲醇-水虽然能够把 被测组分和其他组分分离，但拖尾严重。而二者 的合用可以达到较理想的分离度
若不加入少量冰醋酸或磷酸调节酸性，峰形有拖 尾现象，这主要是由于绿原酸、芦丁中羧基和黄 酮苷元的酚羟基产生电离，因而在固定相表面存 在着双保留机制。
临床应用：用于防治脑溢血，高血压，视网膜出 血，急性出血肾炎，慢性气管炎等.
化学结构及理化性质
芦丁（ rutin ）
分子量: 610.5244；
OH
分子式: C27H30O16 ；
OH 性状: 浅黄色针状结晶；
HO
O
酸碱性: 酸性
溶解度: 芦丁在冷水中极微溶
O Glc
(1:10000),在沸水中微溶(1:200),
色谱条件
Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm，5 m) 色谱柱柱温: 室温 流动相:甲醇-乙腈-冰醋酸-水(22:10:3:65)； 体积流量:1.0 mL/min； 检测波长：配制样品液,在可见紫外分光光度计200~400nm的
范围内进行扫描，选择适宜最大吸收波长处检测.
GC测定赤芍中有机溶剂残留量
曹戟 张建祥 高明 蒋鹏 蔡瑜 柴晓鹃
赤芍的提取工艺
赤芍为毛茛科植物芍药或川赤芍的干燥根,为常用活血化瘀 药, 赤芍的主要药效成分芍药苷为单萜类化合物.
经典的单萜类化合物提取方法 水提醇沉法 水 甲醇 乙醇
赤芍的提取工艺改进 提取时水和醇的用量, 比例,提取时间等 精制时液液分配工序 石油醚、乙酸乙酯、正丁醇 硅胶柱层析或过大孔树脂柱等工序 甲醇 氯仿
的范围内进行扫描，芦丁在204nm、255nm、 355nm处出现3个吸收峰；
以上三个波长作为检测波长,文献中均有报 道,主要考虑其它杂质在测定波长处的干扰以及 芦丁在测定波长处的检测限等因素.
实验步骤
样品溶液的制备 称取适量芦丁样品,加甲醇制成每1ml含 0.1mg的溶液.
测定 精密吸取样品溶液20l,注入高效液相色谱 仪,测定,即得
色谱条件
以测定赤芍中的甲醇的残留量为例
色谱柱 毛细管柱，30m×0.25mm。 检测器：FID 柱温：50℃ 气化室温度：150℃ 检测器温度：200℃ 载气：N2，流速30mL/min；
空气0.5kg/cm2； H2 0.7kg/cm2 灵敏度：102 进样：1L
溶液的制备
精密量取甲醇10L，置100mL量瓶中，精密 加0.1％（mL/mL)正丙醇（内标物质）溶液 20mL，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶 液。
有文献报道: 采用聚酰胺柱法效果较为理想，因其可以有效地保护色
谱柱、除去其他杂质，且能达到良好的分离效果。 [高效液相色谱法测定痔速宁胶囊中芦丁含量]
色谱条件
✓流动相:
➢ 甲醇-1%冰醋酸溶液(32:68) [中国药典 2005] ➢ 选甲醇-1%冰醋酸溶液(32:68)为流动相时,芦丁
峰与相邻杂质峰的分离效果欠佳。加入一定量 的乙腈后，可提高柱效，获得较好的分离效果。 [高效液相色谱法测定毛冬青胶囊中芦丁的含量]
[RP—HPLC法测定不同产地槐米中芦丁 ]
➢ 甲醇-0.5％磷酸(50:50) [高效液相色谱法同时测定杜仲叶中芦丁和槲皮素 含量的研究]
➢ 乙腈-纯化水-磷酸(47:53:0.2) [反相高效液相色谱法测定细梗胡枝子中槲皮素与 芦丁的含量]
色谱条件
✓检测波长:对芦丁对照品溶液分别在190~370nm
预期实验结果
芦丁的保留时间约 5~6 min.
峰型细尖,对称因子 在0.95~1.05,与杂质 分离完全,柱效高.
讨论
芦丁的样品中通常含有其水解后的苷元---槲皮素,但 两者极性差别大,在通常色谱条件下,两者的峰分离 良好,槲皮素并无干扰.
若要同时测定样品中槲皮素和芦丁的含量,最好采用 梯度洗脱法,因为若用同一流动相,所需时间太长.下 图为流动相为甲醇-0.5%磷酸(35:65) 时的出峰谱图
HPLC法测定芦丁含量
蔡瑜 柴晓鹃
目录
来源用途 化学结构 理化性质 色谱条件 实验步骤 预期结果
芦丁（ rutin ）
来源:广泛存在于自然界，几乎所有的芸香科和石 楠科植物中均含有，尤以芸香科的芸香草、豆科 的槐米、蓼科的荞麦、金丝桃科红旱莲、鼠李科 光枝勾儿茶、大蓟科野梧桐叶含量较为丰富，可 以作为提取芦丁的原料。
取本品约0.16g，精密称定，置10mL量瓶中， 精密加入上述内标溶液2mL，加水溶Leabharlann 并稀释 至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
精密吸取样品溶液1l,注入气相色谱仪,测定。