细胞生物学实验报告记录
细胞生物学实验报告记录
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实验一:细胞的形态观察及其大小测量
一、实验目的:
1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察,了解细胞的形态及其显微结构;
2、学习显微测量的方法,对细胞的大小有一直观认识。
二、实验材料和仪器:
小白鼠肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片;
普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片。
三、实验步骤:
(一)细胞形态观察
l、动物细胞的观察
(1)人肝细胞切片:在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。
(2)鸡血细胞涂片的观察:观察血细胞的组成;红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察
(1)取蚕豆叶片横切片的观察:注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。
(二)细胞的大小和测量
1、卸下目镜的上透镜,将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上,再旋上目镜
的上透镜。
2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好,使测微尺分度位于视野中央。调焦至
能看清镜台测微尺的分度。
3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊,可转动目镜上
透镜进行调焦),使两尺左边的一直线重合,然后由左向右找出两尺另一次重合的
直线。
4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每
格等于多少μm:
镜台测微尺的格数
目镜测微尺每格的微米数=—————————× 10
目镜测微尺的格数
四、实验结果:
1、目镜校正:40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.24
2、细胞大小的测量:
测量次数
细胞种类一/um 二/um 三/um 平均/um
人肝细胞(10×
19.44×21.3618.00×18.96 16.32×19.68 17.92×20.00
40)
血红细胞(10×
7.20 7.68 7.68 7.52
40)
血白细胞(10×
9.12 9.60 9.84 9.52
40)
血小板(10×10) 1.44 1.44 1.44 1.44
栅栏组织(10×
9.12×79.20 10.08×81.1210.56×80.649.92×80.32
40)
五、作业与思考:
1、血细胞按含量高低,主要含有:红细胞,白细胞,血小板。
白细胞最大,红细胞次之,血小板最小。红细胞:主要的功能是运送氧。白细胞:主要扮演了免疫的角色,当病菌侵入人体时,白细胞能穿过毛细血管壁,集中到病菌入侵部位,将病菌包围,吞噬。血小板:止血过程中起着重要作用。细胞形态见下图。
2、植物细胞一般比动物细胞大一些。形态图见下。
3、在不同放大倍数下,测定的细胞大小基本一致,但有一些偏差。放大倍数越大,在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大,而更容易测量准确。
实验二:PAS(Periodic Acid Schiff)反应显示糖原和其它多糖物质
一、实验目的
1、熟悉PAS法原理及操作步骤;
2、观察PAS反应的染色结果,并观察多糖在组织细胞中的分布。
二、实验原理
多糖是由多个单糖分子缩合脱水而生成的化合物。一些不溶性的多糖构成植物和动物的骨架,如植物的纤维素和动物的甲壳素,一般称为结构多糖。另一些多糖在生物体内作为能量贮存,如淀粉(植物)和糖元(动物),在需要时可以通过生物体内酶系统的作用分解,释放出单糖。
三、实验用品:
过碘酸酒精溶液、Schiff试剂、亚硫酸水溶液、苏木精溶液、二甲苯、100%乙醇+二甲苯(1:1)。
梯度乙醇溶液:100%,95%,90%,80%,70%,50%各两份,一份用于脱腊复水,一份用于脱水。
载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜、小烧杯、胶头滴管、镊子、刀片、土豆;小鼠肝细胞石蜡切片。
四、实验步骤:
(一)土豆切片的观察
制作土豆徒手切片→过碘酸处理15~30min→70%乙醇1min→schiff 试剂15min →亚硫酸水漂洗2~3次→蒸馏水漂洗→镜检
(二)小鼠肝细胞切片的观察
取鼠肝石蜡切片→二甲苯脱蜡约10min →二甲苯+100%乙醇(3 min)→梯度乙醇脱二甲苯,在各浓度乙醇(100%,95%,90%,80%,70%,50%)中约2~3 min →过碘酸氧化15~30 min →蒸馏水漂洗→Schiff 试剂15~30 min →亚硫酸水漂洗2~3
次→蒸馏水漂洗→苏木精染色10 min →流水冲洗→梯度乙醇脱水(50%,70%,80%,90%,95%,100%),在各乙醇浓度中约2~3 min →100%乙醇+二甲苯2~3 min→二甲苯适度透明→指甲油封片→镜检
五、实验结果:
六、作业与思考:
1、描述土豆切片和鼠肝切片中糖原分布特点。
土豆切片中,多糖多在细胞质液泡中。
鼠肝切片中,多糖多在靠近核的区域。
2、影响PAS 反应染色效果的关键步骤是什么?
Camey固定液固定;Schiff 染色液染色;对分色的控制。
3、如何制作徒手切片?应注意什么才能得到薄而均匀的切片?
应注意需要连续快速地切下多片薄片,并从中选出较好的切片。
实验三:叶绿体的分离与荧光观察
一、实验目的:
1、通过植物细胞叶绿体的分离,了解细胞器分离的一般原理和方法。
2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光,并熟悉荧光显微镜的使用方法。
二、实验原理:
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法。将匀浆液1000r/min的条件下离心2min, 以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。然后,在3000r/min的条件下离心5min,即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。
某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态,从激发态回到基态时,就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光,这种光就称为荧光。若停止供能,荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后,可直接发出荧光(称为自发荧光)。有的生物材料本身不发荧光,但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光(称为间接荧光)。
三、实验材料和仪器:
普通离心机,粗天平,荧光显微镜,剪刀,研钵,移液管,漏斗,滴管, 10ml刻度离心管,纱布若干, 无荧光载玻片和盖玻片,新鲜菠菜,0.35mol/L氯化钠溶液,0.01%吖啶橙(acridine orange)、
四、实验步骤:
1、叶绿体的分离
(1)选取新鲜的菠菜嫩叶,洗净擦干后,去除叶梗及粗脉并剪碎,称取2g左右,置于预冷的研钵;
(2)加10ml的0.35mol?L-1 NaCl溶液研磨匀浆;
(3)用6层纱布过滤,滤液盛于烧杯中;
(4)取滤液4ml于1000rpm离心2min,弃去沉淀;
(5)将上清液3000rpm离心5min,弃去上清液,沉淀即为叶绿体(混有部分细胞核);
(6)沉淀用0.35molL-1NaCl溶液悬浮。
2、叶绿体的观察
(1)滴叶绿体悬浮液一滴于载片上,加盖片;在普通光镜下观察,注意观察所分离的叶绿体的形态以及其是否完整。
(2)滴叶绿体悬浮液一滴于无荧光载片上,加无荧光盖片;在荧光显微镜下观察叶绿体有无自发荧光,其颜色如何。
(3)滴叶绿体悬浮液一滴在无荧光载片上,再滴加一滴0.01%吖啶橙荧光染料,加无荧光盖片后即可在荧光显微镜下观察其次生荧光。
3、完整细胞中的叶绿体观察
(1)用镊子撕取一片菠菜叶子表皮,平铺于载玻片上,滴加一滴提取缓冲液,加盖片后轻压,备用。
(2)用镊子撕去菠菜叶子的表皮,用刀片刮下一些叶肉细胞,放于载玻片上,滴加一滴提取缓冲液,加盖片后轻压,备用。
(3)将以上两种制片进行一下三种方式的观察:
a、通光镜下观察。
b、光显微镜下观察。
c、加一滴0.01%吖啶橙荧光染料,加无荧光盖片后,在荧光显微镜下观察。
五、实验结果:
叶绿体自发荧光叶绿体次生荧光
六、作业与思考:
1、描述你所观察到的实验现象,自发荧光和次生荧光的区别?
自发荧光:有些生物体内的物质受激发光照射后,直接发出的荧光称为自发荧光,如叶绿素的火红色荧光。
间接荧光:有的生物材料本身不发荧光,但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光,则称为间接荧光,如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。 2、叶绿体分离的原理是什么?操作过程中应注意什么?
通过研磨绿色植物叶片使叶肉细胞破损,叶绿体被释放到提取液中,再通过等渗介质中差速离心去除杂质, 再次离心,则可分离出叶绿体沉淀。
应注意须在低温下迅速提取,且须注意等渗液溶度,离心速度和时间的把握,避免叶绿体破裂。
表皮细胞(荧光)
木质素(荧光)
表皮细胞(光镜)
实验四:吖啶橙(acridine orange)染色
观察口腔上皮荧光
一、实验目的
1、熟悉荧光显微镜的原理及使用方法。
2、观察荧光染料染色后结合物发出的荧光。
二、实验原理
吖啶橙荧光染料可与细胞内DNA和RNA结合。其吸收光谱405nm,发射的荧光光谱是530~640nm,因此,吖啶橙和不同的细胞成分结合后,可发射红橙黄绿蓝各色荧光。
三、实验用品
荧光显徽镜、载玻片、盖玻片、染色缸、牙签;口腔黏膜上皮细胞临时制片;
0.1mol/L pH7、0 PBS液。0.1%吖啶橙原液、95%乙醇
四、实验步骤
1、用牙签刮取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上;
2、95%乙醇溶液固定5min;
3、滴加0.01%吖啶橙染液染色5min;
4、用PBS缓冲液缓慢冲洗;
5、加盖玻片镜检。
五、实验结果
口腔上皮细胞(荧光)