HPLC法测定骨碎补配方颗粒中柚皮苷的含量
HPLC测定壮骨关节丸中柚皮苷的含量
［ 参 考 文 献］
［ １ ］ 美国糖尿病学 会 （ Ａ ｉＡ） ｒ ２ ０ ０ ５年公 布． 糖尿病 诊疗 标准㈢ ［ Ｊ ］ ． 国际内分 泌代谢杂志 ， ２ ０ ０ ６ ， ２ ６ ： 附录 Ｉ 一１ ． ［ ２ ］ 杨文英 ． 糖调节 受损 的 不同类 型及 其特 点 ［ Ｊ ］ ． 新 医学 杂志 ，
于 ＮＧ Ｔ组 及 Ｉ Ｆ Ｇ组 ， Ｉ ＧＴ组 和 Ｉ Ｆ Ｇ／Ｉ Ｇ Ｔ组 之 间、
［ ３ ］ 李玲， 王贵新 ， 厉平 ， 等． 空腹 血糖 水平 与胰 岛 素抵 抗的 关 系 ［ Ｊ ］ ． 中华 内科杂 志， ２ ０ ０ ５ ， ４ ４ （ １ ０ ） ： ７ ５ ５ —７ ５ ８ ． ［ ４ ］ 康冬梅 ， 胡世莲， 叶山东， 等． 老年人 不同糖耐 量状态胰 岛紊抵 抗和胰 岛 Ｂ细胞功 能的研究 ［ Ｊ ］ ． 中国临床保 健杂 志， ２ ０ ０ ７ ， １ ０
统； ＭＥ Ｔ ＴＬ Ｅ Ｒ ＴＯ Ｌ Ｅ Ｄ Ｏ Ｘ Ｓ １ ０ ５电子 分 析 天 平 ； Ｓ Ｂ ３ ２ ０ ０ 超声清洗器； Ａ Ｙ Ｊ １ —０ ５ ０ １ 一Ｕ 艾 科 蒲 超 纯 水 系统 ； 柚 皮 苷对 照 品批 号 １ １ ０ ７ ２ ２—２ ０ ０ ６ １ ０ ， 购自 中国 药 品 生 物 制 品检 定 所 ； ９ ５ ％乙醇、 甲醇 为 分 析 纯， 乙腈 为色 谱纯 ， 水 为重蒸 馏 水， 水 为 自制超 纯水 。 壮骨关 节 丸 （ 三 九 医 药 股 份 有 限 公 司 ，批 号 ：
【 中图分类号 】 Ｒ 【 文献标识码］Ｂ 【 论文编号 ］１ ０ ０ ４ — ０ ９ ５ １ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ４ — ０ ４ ６ ３ — ０ ２
壮骨关 节 丸具有 补肝 肾 、 祛 风湿 的功 能， 用 于老 年退变 性骨 质 增生 。 属 肝 肾亏 虚证 者 。 本 实验 参 考 《 中 国药典 》 ２ ０ １ ０版… 方 法 采 用 ＨＰ Ｉ ｃ对 壮 骨 关 节
HPLC法测定增食颗粒中柚皮苷和橙皮苷的含量
摘要： 目的 建立增食颗粒 中柚皮苷和橙皮苷的含量测定方法。方法
／ ／＝１ ９ ９ ６×１ ６ 一 １ ． ８ ０
．
采用 ＨＬ ＰＣ法，ｒｍｓ １Ｃ柱 ， 乙 水一 Ｋｏａ ｌ 以 腈一 ｉ ８
磷酸 （ ： ０：．２为流动相， ２ ８ ００） ０ 流速 １０ｍ／ ｉ， ． Ｌｍｎ检测波长 ２３ｎ， ８ ｌ柱温 ３ ｌ ｌ ５℃， 进样量 ２ 。结果 柚皮苷回归方程为： ０
０ １ ８５ ．９ ｇ ｆｒＮ ｒ ｇ ａａ ｄ ００ ３６ ～０３ ８４ ； ｒＨｅ ｐ ｒ ｉ （＝０９ ９９ ｅ ｐ ｃｉｅｙ Ｔ ｅ ．７ ～０８ ２５ ｌ ａ ｔ ｈ ．７ ８ ．６ ｆ ｓ ｅ ｄｎ ｒ ．９ ）ｒｓ ｅ ｔ ｌ． ｈ ａｏ ｎ ｎ ｏ ｉ ｖ ａ ｅａ ｅ ｒｃ ｖ ｒ ｓ ９ ．４ （ Ｄ＝ １２１ ｎ ｄ ９ ．５ （ Ｄ＝ １ ９ ｖ ｒ ｇ ｅ ｏ ｅｙ ｗａ ７２ ％ ＲＳ ． ％）ａ ６９ ％ ＲＳ ． ％）ｒ ｓ ｅ ｔ ｅ ．Ｃ ｎ ｌｓ ｎ Ｔ ｅ ４ ｅ ｐ ｃｉ ｌ ｖ ｙ ｏｃ ｉ ｈ ｕｏ
Ｔ Ｍ Ｃ ｌ ｇ ， ａ ｚ ｏ ３ ０ ０ Ｃ ｉａ Ｃ ｏｌ ｅ Ｌ ｎｈ ｕ７ ０ ０ ， ｈ ｎ ） ｅ
Ａｂｔａ ｔ ｓ ｃ：Ｏｂｅｔ ｅＴ ｓａ ｌ ｈ ａ ｍｅｈ ｄ ｆｒｄ ｔｒ ｎ ｎ ｅｃ ｎ ｅ ｔｏ ｎ ｇ ａ ｄ Ｈｅ ｐ ｒ ｉ ｎ ｒ ｊｃｉ ｏｅ ｔ ｂｉ ｔ ｏ ｏ ｅｅ ｍｉ ｉ ｇｔ ｏ ｔｎ ｆ ｖ ｓ ｈ Ｎａ ｎ ｍ ｎ ｓ ｅｉ ｎ ｉ ｄ
ｍ ｅ ｈｏ ｓ ｓ ｍ ｐ ｅ， ｃ ｕｒ ｔ ， ｅ ｒ ｄｕｃ ｂ ｅ ａ ｄ ｃ ｎ ｂｅ ｕｓ ｄ ｆ ｒｑ ｌ ｙ ｏ ｔ ｏ ｆＺ ｎｇ ｈ ｌ ｔ ｄ ｗａ ｉ ｌ ａ ｃ ａ ｅ ｒ ｐ ｏ ｉ ｌ ｎ ａ ｅ ｕａ ｉ ｃ ｎ ｒ ｌｏ ｅ ｓ ｉＫｅ ｉ ｏ ｔ ． Ｋｅ ｒ ｓ Ｚ ｎｇ ｈｉ Ｕ； ＨＰＬ ｙ ｗｏ ｄ ： ｃ ｓ Ｋｅ Ｃ： Ｆｒ ｃ ｓＡｕｒ ｔｉＩ ｍ ａ ｕｒ ； Ｎａ ｉ ｉ ｕ ｔ ｕ ｎ ａ ｉ ｍ ｔ ｕｓ ｒｎｇ ｎ； Ｈｅ ｐ ｒｄ ｎ ｓｅ ｉ ｉ
骨碎补中柚皮苷含量测定方法的优化研究
醇-醋酸-水（40∶3∶60）为流动相；流速 1.0 mL/min；柱温 25 ℃；检测波长 283 nm。 结果 柚皮苷在 0.15~1.22 μg 范围
线性关系良好（r=0.999 6），加样回收率为 98.5%，RSD=1.8%（n=6）；5 种 不同制备方法所得供试液中柚 皮 苷 的 含 量 分
动，跌扑闪挫，筋骨折伤；外治斑秃，白癜风。 骨碎补主含 柚皮 苷 （naringin）、新北 美 圣草 苷 等 多 种 黄 酮 类 成 分[1]，其 内 在质 量 评 价 多 以 柚 皮 苷 为 指 标 ， [2]179 其 含 量 测 定 方 法 多
〔收 稿 日 期 〕2009－11－10 〔基 金 项 目 〕湖 南 省 中 医 管 理 局 科 研 基 金 资 助 项 目 （2006-084 ） 。 〔作 者 简 介 〕伍 奕 （1972－）， 男 ， 湖 南 张 家 界 人 ， 硕 士 研 究 生 ， 主 管 药 师 ， 主 要 从 事 中 药 制 剂 与 炮 制 研 究 。 〔通讯作者〕* 蒋孟良，男，教授，硕士研究生导师，Tel：0731-85381527。
1 实验材料
1.1 仪器 1525 型高效液相色谱仪（美国 Waters 公司,包括 1525
泵， 在线真空脱气机，2487 检测器，HP-A.09.01 工作站）； UV-2450 型紫外分光光度计（日本岛津）；DK-S22 型电热 恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；AR1140 型电 子分 析 天平 （，奥 豪 斯国 际 贸 易 (上 海)有 限 公 司 ）；FZ102 型微型植物粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。 1.2 试剂
A 柚皮苷对照品
t/min
B 骨碎补样品
t/min 图 1 骨碎补 HPLC 图
关于HPLC法测定增食颗粒中柚皮苷和橙皮苷的含量
关于HPLC法测定增食颗粒中柚皮苷和橙皮苷的含量【摘要】目的建立增食颗粒中柚皮苷和橙皮苷的含量测定方法。
方法采用HPLC法，Kromasil C18柱，以乙腈-水-磷酸(20∶80∶0.02)为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长283 nm，柱温35 ℃，进样量20 μL。
结果柚皮苷回归方程为：Y＝1.989 6×106X－1.243×103，r＝0.999 9，线性范围为0.178 5～0.892 5 μg。
橙皮苷回归方程为：Y＝1.964 9×106X－1.015×104，r＝0.999 9，线性范围为0.0736 8～0.368 4 μg。
柚皮苷平均回收率为97.24%，RSD＝1.21%。
橙皮苷平均回收率为96.95%，RSD＝1.49%。
结论方法简便、准确，重复性好，可作为增食颗粒的质量控制方法。
【关键词】增食颗粒；高效液相色谱法；枳实；柚皮苷；橙皮苷增食颗粒系由全国名老中医于己百教授的经验方“于氏增食煮散”演化而来，由砂仁、枳实、鸡内金、焦三仙、连翘、蒲公英等组成，经多年临床应用，对于治疗小儿厌食症具有很好的疗效。
但原剂型味觉差、服用体积大、携带不方便。
根据本方的用途，将剂型改为颗粒剂，不仅方便服用，还能提高制剂的稳定性。
为有效控制药品质量，本试验参照相关文献[1-4]，以枳实中的柚皮苷和橙皮苷为质控成分，采用HPLC法进行了含量测定方法的研究。
结果表明，该法操作简便、快速、重现性好，可用于其质量分析。
1 仪器与试药高效液相色谱仪，Waters 515泵，2487紫外检测器，717自动进样器，Empower色谱工作站(Waters公司)；KQ-250B超声波清洗器(昆山超声仪器公司)；AE204可变量程电子天平(瑞士梅特勒公司)。
柚皮苷(批号0722-200108)和橙皮苷(批号0721-9909)对照品由中国药品生物制品检定所提供；增食颗粒剂由甘肃中医学院药学院提供。
HPLC法测定保济颗粒中柚皮苷的含量
HPLC法测定保济颗粒中柚皮苷的含量摘要】目的建立测定保济颗粒中柚皮苷含量的方法。
方法以乙腈-磷酸缓冲溶液（20:80）为流动相，以Agilent TC-C18为色谱柱的高效液相色谱法对保济颗粒中柚皮苷的含量进行定量测定。
结果柚皮苷在21.36～178µg线性关系良好，平均回收率为98.60%，RSD小于0.39%。
结论本方法重现性好，专属性强，为保济颗粒的质量控制和开发利用提供科学依据。
【关键词】保济颗粒柚皮苷含量测定保济丸是著名老牌良药，具有“解表，祛湿，和中”等功效[1]，用于治疗腹痛腹泻、噎食嗳酸、恶心呕吐、肠胃不适、消化不良、晕车晕船、四时感冒、发热头痛等症[2]。
国内对保济丸的化学成分、药理作用、测定方法等方面已有大量研究[3]。
但保济丸不利于老人、小孩吞服，而最新的保济颗粒是在保济丸配方基础上，运用现代制药技术，经超声提取、浓缩制成的颗粒冲剂，具有服用简便，适用范围广，药用效果明显等优点。
保济颗粒的主要成分有厚朴酚、和厚朴酚以及柚皮苷，不少专家建议增加的柚皮苷含量测定。
我们拟建立高效液相色谱法（HPLC法）进行柚皮苷的含量测定，为保济颗粒的质量标准制订提供依据。
1 仪器与材料仪器：Waters 2695高效液相色谱仪：(四元泵、2998光(电)二极管矩阵检测器、Empower色谱工作站)；十万分之一天平（Sartorius 公司）。
试剂：乙腈为色谱纯；水为自备双蒸纯净水；甲醇、磷酸、三乙胺分析纯。
样品：广州王老吉药业股份有限公司提供。
柚皮苷对照品（0722-200309）由中国药品生物制品检定所提供。
2 色谱条件色谱柱：Agilent TC-C18(4.6×250mm,5µm) ；流动相：乙腈-磷酸缓冲溶液（取磷酸 1.7ml，加水至1000ml，再加三乙胺 1.8ml）（20:80），检测波长：283nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：10μl。
HPLC法测定抗骨增生胶囊中柚皮苷的含量
HPLC法测定抗骨增生胶囊中柚皮苷的含量目的： HPLC法对抗骨增生胶囊中的柚皮苷含量。
方法：KromasilC18(4.6mm×250mm，5μm)为色谱柱,甲醇∶醋酸：水(35：4∶65)为流动相;流速:1.0ml/min;检测波长:440nm，柱温40℃。
结果：柚皮苷浓度在5.50～27.48 ug/ ml之间线性关系良好,平均回收率96.62%,RSD=1.1%，结论：该方法简单、可靠、专属性强，可用于抗骨增生胶囊的质量控制。
[关键词]: 抗骨增生胶囊, 柚皮苷 , HPLC抗骨增生胶囊是熟地黄、鸡血藤、肉苁蓉（酒蒸）、莱菔子(炒)、狗脊（盐制）、骨碎补、女贞子（盐制）、牛膝、淫羊藿等9味中药组成的复方制剂[1]。
具有补腰肾，强筋骨，活血止痛。
用于骨关节炎肝肾不足、瘀血阻络证，症见关节肿胀、麻木、疼痛、活动受限。
骨碎补为该制剂的主要药物之一，含有柚皮苷等有效成分。
原标准中未收载含量测定项 ,本文采用高效液相色谱法对该制剂中的柚皮苷[2，3]含量进行研究 ,实验结果表明，该法简便易行，灵敏度高，能准确地反映柚皮苷的含量，为更好的控制本品的内在质量提供了科学依据。
1方法和结果 1.1 仪器与试药BP211D型电子天平（赛多利士）；Agilent1100高效液相色谱仪，G1314A VWD检测器（美国安捷伦公司），柚皮苷高氯酸盐对照品 (中国药品生物制品检定所0811-9302),甲醇为色谱纯；水为二次重蒸水；其他试剂为分析纯；抗骨增生胶囊（河南禹州市药王制药有限公司批号：060302，060604，070703）。
1.2 实验方法和结果1.2.1 色谱条件色谱柱：KromasilC18(4.6mm×250mm),流动相：甲醇∶醋酸：水(35：4∶65)为流动相，流速：1.0mL/min，检测波长440nm，进样量：10ul，理论塔板数：5352，柱温：40℃，色谱图见图1。
HPLC法测定抗骨增生片中柚皮苷的含量
取本品（批号 110060）10 片，称定重量，研细，称取粉末 1g， 精密称定，依法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下，分别于 0，1，2，4，8, 12h 进样 10µL 测定，比较各色谱峰峰面积，结果提示 供试品溶液在 12 小时内测定，色谱峰面积无明显变化，RSD 为 0.77%（n=6），说明柚皮苷在 12 小时内化学性质基本稳定。 3.6 加样回收试验
4 讨论
（1）样品前处理 2010 版一部药典骨碎补药材采用加热回流 3 小时，在实验过程中分别采用超声 30min，1 小时，和加热回流 3 小时处理样品，结果表明，超声处理能显著缩短提取时间，达到 相同的提取效果。
（2）关于流动相的选择，试验中考察过乙腈-水做流动相[2,3]， 保留时间长，峰型一般。2010 版一部药典骨碎补药材采用甲醇醋酸-水（35∶4∶65）为流动相，含有醋酸，对柱子有一定损坏，经 多次试验，采用甲醇-水（46∶54）为流动相，对测定也无干扰，分 离效果好，分析时间短，适用于抗骨增生片的含量测定。
106
3.2.1 对照品储备液的制备
精密称取 105 ℃ 干燥 5h 的柚皮苷对照品 10.02mg，加甲醇溶
解 至 50mL 容 量 瓶 中 ，并 定 容 至 刻 度 ，摇 匀 ，制 得 浓 度 为
200.40µg/mL 的溶液。
3.2.2 标准曲线的绘制
分别精密吸取对照品储备液 0.5、1、2、4、8、10mL，分别置
（3）骨碎补为抗骨增生片中的君药，柚皮苷为骨碎补的主要 活性之一。为提高药品质量，保证疗效，采用 HPLC 对骨碎补中 的主要活性成分柚皮苷进行定量，分离效果好，准确度高，阴性 无干扰，专属性强。
骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定-精选文档
骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定骨碎补是较常用的中药，具有补肾强骨，活血续伤之功效。
骨碎补活性成分为柚皮苷等二氢黄酮类化合物［1,2］，为了考察不同炮制方法对骨碎补有效成分的影响，我们用分光光度法测定骨碎不同炮制品（生品骨碎补、砂烫骨碎补、酒骨碎补）中总黄酮的含量，用高效液相色谱法测定柚皮苷含量。
1 实验材料1．1 药品骨碎补购自湖北，经鉴定均为水龙骨科植物槲蕨Drymaria fortunei (Kunze)J.sm. 的干燥根茎。
1．2 炮制品生品：（1）除祛杂质，洗净，未去毛。
（2）鲜骨碎补洗净，除祛杂质，去毛。
砂烫骨碎补：取沙子置锅内，用武火加热后，加入净骨碎补或片，不断翻动，烫至鼓起时，取出，筛去沙子，撞去毛，放凉。
酒骨碎补：取去毛骨碎补片，加酒拌匀，用文火炒干为度，每骨碎补１００Ｋg，用酒或白酒１０Ｋg。
1．3 仪器7520型分光光度计，1050型液相色谱仪（惠普公司）；LA-204型电子天平（常熟市衡器厂）。
2、实验方法与结果2．1 总黄酮含量测定方法与结果标准曲线制备精密称取柚皮苷对照品4.9mg，置50ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，作为对照品溶液，再分别吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，以甲醇为空白，在283nm处测吸收度，以吸收度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，经回归得标准曲线方程A=0.0292C-0.0577，r=0.9998，线性范围4.9~29.4μg.ml-1.2.2 骨碎补不同炮制品样品溶液制备及测定精密称取骨碎补各炮制品干燥粉末(经80℃干燥4小时,过40目筛)1 g,置索氏提取器中，分别用50毫升甲醇提取12小时，将提取液转移至100毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，精密吸取1毫升于25毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，于283纳米处测定吸收度，按回归方程计算总黄酮含量未去毛的骨碎补甲醇提取液中总黄酮的含量平均值却为4.1，其它四组数据的平均值都在5.0左右，数据相差的很大，可见骨碎补经去毛炮制可使总黄酮在甲醇提取液中的含量增加，从而提示我们经去毛炮制有利于有效成分的溶出。
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HPLC法测定骨碎补配方颗粒中柚皮苷的含量摘要:目的：建立骨碎补配方颗粒中柚皮苷的含量测定方法。
方法：采用高效液相色谱法定量柚皮苷，色谱柱：大连依利特C18反相柱（5μm×250mm×4.6mm），流动相：甲醇-醋酸-水（35：4：65），柱温为35℃，流速：1.0mL/min，检测波长：283nm。
结果：HPLC 图谱显示，色谱峰形好，分离度高，阴性对照无干扰；供试品在24h 内稳定（RSD＝0.80％）；该方法精密度高（RSD＝0.31％），重复性良好（RSD＝0.34％），平均加样回收率为96.97%（RSD＝0.76%）。
结论：所建立的方法适合作为骨碎补配方颗粒的含量测定方法。
关键词:骨碎补配方颗粒柚皮苷HPLC
骨碎补配方颗粒，为深圳三九医药股份有限公司生产的其中一种配方颗粒剂，在国内医院广泛应用。
骨碎补，为水龙骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根茎，疗伤止痛，补肾强骨，外用消风祛斑，该药材及其饮片的质量标准收载于《中国药典》2010年版一部[1]。
然而，骨碎补配方颗粒剂却缺乏质量标准。
因此，为有效地控制该制剂的质量，本文采用高效液相色谱法（HPLC）对骨碎补配方颗粒中的柚皮苷进行含量测定。
该方法操作简便、重现性好、专属性强，灵敏度高，结果科学准确，适合作为该品种的含量测定方法。
具体研究如下。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪，电子天平，超声波清洗器；骨碎补配方颗粒；柚皮苷对照品；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱
大连依利特C18反相柱（5m×250mm×4.6mm）；流动相为甲醇-醋酸-水（35：4：65）；流速为1.0min/min；柱温为35℃；检测波长为283nm；进样量为10μL。
在此条件下，理论塔板数按柚皮苷峰计算不得低于3000，柚皮苷峰与相邻的其他峰的分离度应大于1.5。
柚皮苷对照品、骨碎补配方颗粒和阴性对照色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
取柚皮苷对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加甲醇制成每
1ml含60μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取适量本品，研细，取约0.02g，精密称定，置5p2.7 重复性试验
取同一批号的骨碎补配方颗粒按2.3项下供试品溶液制备方法平行制备6份，测定柚皮苷的峰面积，计算。
2.8 加样回收率试验
取同一供试品；柚皮苷含量为28.1mg/g）6份，分别加入适量本品并精密称定，按2.3项下供试品制备方法和2.1项下色谱条件测定，计算。
通过取样量（g）、样品含量（mg）、对照品加入量分别为0.3992mg、总含量（mg）、回收率（%）、RSD%=0.76%进行试验。
结果依次如下：
1、0.01233g、0.3477mg、0.7348mg、97.0%
2、0.01192g、0.3361mg、0.7233mg、97.0%
3、0.01443g、0.4069mg、0.7881mg、95.5%
4、0.01524g、0.4298mg、0.8187mg、97.4%
5、0.01421g、0.4007mg、0.7890mg、97.3%
6、0.01325g、0.3736mg、0.7633mg、97.6%
2.9 样品测定
分别取3批不同批号的骨碎补配方颗粒，按2.2项下供试品制备方法和2.1项下色谱条件进行测定，计算样品中柚皮苷的含量。
3 讨论
3.1 提取方法的比较
笔者曾比较本文和中国药典2010年版一部收载的骨碎补材含量测定项下提取方法[1]对柚皮苷含量测定结果的影响。
结果表明，超声处理和加热回流两种方法无显著性差异。
另外，在超声处理时间的优化方面，笔者曾比较了30min、45min和1h，最后发现超声处理45min便能将样品中的柚皮苷提取充分。
故本文选用操作简单的超声提取45min作为供试品制备方法。
3.2 不同色谱柱的比较
笔者比较了3种不同品牌的色谱柱（戴安C18、大连依力特C18和迪马C18）对柚皮苷含量测定结果的影响，结果表明，不同色谱柱的含量测定结果无显著性差异，该方法耐用性良好（RSD%=0.54%）。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中国人民共和国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2010.。