细胞化学技术ppt课件
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细胞工程应用PPT课件
总结词
干细胞是具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞，是构成人体各种组织器官 的原始细胞。根据分化能力的不同，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。
详细描述
干细胞具有自我复制的能力，即产生与自身完全相同的细胞，保持数目恒定。 同时，干细胞具有多向分化的潜能，在特定条件下可分化成不同类型的细胞， 参与组织器官的修复和再生。
02
细胞培养技术
细胞培养的定义与分类
定义
细胞培养技术是指将生物组织或细胞从体内取出，并在体外模拟 体内环境进行培养、繁殖和维持其生命活动的过程。
分类
根据培养目的和应用的不同，细胞培养技术可以分为原代细胞培 养、传代细胞培养、干细胞培养和肿瘤细胞培养等。
细胞培养的基本条件
温度
细胞生长和代谢需要稳定的温度条件，一般维持 在37°C左右。
组织工程
通过细胞培养技术构建组织或 器官，用于移植治疗和再生医 学研究。
毒理学研究
利用细胞培养技术检测化学物 质、药物等的毒性作用，为新 药研发和安全性评估提供依据 。
基因工程
通过细胞培养技术实现基因转 移、基因敲除和基因编辑等操 作，为基因功能研究和基因治
疗提供手段。
03
干细胞工程
干细胞定义与分类
在医学方面，克隆技术 可以用于生产用于移植 的器官和组织，以及用 于研究人类疾病和开发 新药的细胞系。
在农业方面，克隆技术 可以用于繁殖优良品种 的动植物，提高农业生 产效率。
在生物多样性保护方面 ，克隆技术可以用于保 护濒危物种和恢复生态 平衡。
05
基因编辑技术
基因编辑技术简介
基因编辑技术主要依赖于特定的核酸酶，如ZFNs（锌 指核酸酶）、TALENs（转录激活因子样效应物核酸酶） 和CRISPR-Cas9系统等，这些核酸酶能够识别并切割 DNA或RNA分子，从而实现对其的精确编辑。
干细胞是具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞，是构成人体各种组织器官 的原始细胞。根据分化能力的不同，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。
详细描述
干细胞具有自我复制的能力，即产生与自身完全相同的细胞，保持数目恒定。 同时，干细胞具有多向分化的潜能，在特定条件下可分化成不同类型的细胞， 参与组织器官的修复和再生。
02
细胞培养技术
细胞培养的定义与分类
定义
细胞培养技术是指将生物组织或细胞从体内取出，并在体外模拟 体内环境进行培养、繁殖和维持其生命活动的过程。
分类
根据培养目的和应用的不同，细胞培养技术可以分为原代细胞培 养、传代细胞培养、干细胞培养和肿瘤细胞培养等。
细胞培养的基本条件
温度
细胞生长和代谢需要稳定的温度条件，一般维持 在37°C左右。
组织工程
通过细胞培养技术构建组织或 器官，用于移植治疗和再生医 学研究。
毒理学研究
利用细胞培养技术检测化学物 质、药物等的毒性作用，为新 药研发和安全性评估提供依据 。
基因工程
通过细胞培养技术实现基因转 移、基因敲除和基因编辑等操 作，为基因功能研究和基因治
疗提供手段。
03
干细胞工程
干细胞定义与分类
在医学方面，克隆技术 可以用于生产用于移植 的器官和组织，以及用 于研究人类疾病和开发 新药的细胞系。
在农业方面，克隆技术 可以用于繁殖优良品种 的动植物，提高农业生 产效率。
在生物多样性保护方面 ，克隆技术可以用于保 护濒危物种和恢复生态 平衡。
05
基因编辑技术
基因编辑技术简介
基因编辑技术主要依赖于特定的核酸酶，如ZFNs（锌 指核酸酶）、TALENs（转录激活因子样效应物核酸酶） 和CRISPR-Cas9系统等，这些核酸酶能够识别并切割 DNA或RNA分子，从而实现对其的精确编辑。
生物显微技术 第三章 细胞化学和组织化学
❖ 显示脂类的基本原理 ：用易溶于脂类的染料, 使之溶于所检的脂质(如脂滴)中,使组织内的 脂类着色.
❖ 常用方法： 苏丹黑B法、油红O法、硫酸尼 罗蓝法 、苏丹Ⅲ染色法等
❖ 基本要求 ⑴ 不用石蜡切片. ⑵ 固定剂一般用Formalin保存磷脂较好. ⑶ 方法: ① 物理法:脂溶性染料,不溶于水,属 偶 氮染料.常用苏丹Ⅲ,Ⅳ,苏 丹黑 ,油红O等. ② 化学方法:硫酸尼罗蓝显示脂肪酸. ③ 选择 性提取法(对照)
❖ 差不多与此同时(1900-1935年)，发现疾病组织中出 现的物质变化，更促进了化学技术在病理学染色方法 中的应用，也丰富了在显微镜下显示无机物、色素、 脂类、糖类、蛋白质、核酸等物质的组织化学内容， 此后又出现了酶的组织化学等。由此可见，“组织化 学”一词的含意是随时代而变化的，由定位趋向于与 定量相结合的研究。
❖ 3、灌注固定法：从心血管途径将固定剂灌注到全 身或某一个器官，使细胞保持生活时的状态而不发 生移位，固定后再迅速取材。
三、制 片
❖ 涂片法、石蜡切片法、冰冻切片法 ❖ 最常使用的为恒冷箱冰冻切片法。
四、注意事项
❖ 1、实验所用的器械、器皿都必须清洁无污染。 ❖ 2、配制试剂时应使用双蒸馏水。 ❖ 3、固定、取材都应在冷的环境下进行。 ❖ 4、各种试剂的pH值都要调准，否则影响反应结果。 ❖ 5、所用试剂要纯，都必须达到分析纯(A·R级)。 ❖ 6、同时、同条件情况下做阴性和阳性对照。 ❖ 7、了解和掌握被检组织中所要测定的化学物质或
❖ 以下介绍McGee-Ruseell核固红法。 ❖ 1、操作步骤 ❖ (1) 石蜡切片常规脱蜡至水。 ❖ (2)核固红染液染色2一10分钟。 ❖ 核固红染液的配制：核固红2g，蒸馏水100ml洗涤2次，剩
❖ 常用方法： 苏丹黑B法、油红O法、硫酸尼 罗蓝法 、苏丹Ⅲ染色法等
❖ 基本要求 ⑴ 不用石蜡切片. ⑵ 固定剂一般用Formalin保存磷脂较好. ⑶ 方法: ① 物理法:脂溶性染料,不溶于水,属 偶 氮染料.常用苏丹Ⅲ,Ⅳ,苏 丹黑 ,油红O等. ② 化学方法:硫酸尼罗蓝显示脂肪酸. ③ 选择 性提取法(对照)
❖ 差不多与此同时(1900-1935年)，发现疾病组织中出 现的物质变化，更促进了化学技术在病理学染色方法 中的应用，也丰富了在显微镜下显示无机物、色素、 脂类、糖类、蛋白质、核酸等物质的组织化学内容， 此后又出现了酶的组织化学等。由此可见，“组织化 学”一词的含意是随时代而变化的，由定位趋向于与 定量相结合的研究。
❖ 3、灌注固定法：从心血管途径将固定剂灌注到全 身或某一个器官，使细胞保持生活时的状态而不发 生移位，固定后再迅速取材。
三、制 片
❖ 涂片法、石蜡切片法、冰冻切片法 ❖ 最常使用的为恒冷箱冰冻切片法。
四、注意事项
❖ 1、实验所用的器械、器皿都必须清洁无污染。 ❖ 2、配制试剂时应使用双蒸馏水。 ❖ 3、固定、取材都应在冷的环境下进行。 ❖ 4、各种试剂的pH值都要调准，否则影响反应结果。 ❖ 5、所用试剂要纯，都必须达到分析纯(A·R级)。 ❖ 6、同时、同条件情况下做阴性和阳性对照。 ❖ 7、了解和掌握被检组织中所要测定的化学物质或
❖ 以下介绍McGee-Ruseell核固红法。 ❖ 1、操作步骤 ❖ (1) 石蜡切片常规脱蜡至水。 ❖ (2)核固红染液染色2一10分钟。 ❖ 核固红染液的配制：核固红2g，蒸馏水100ml洗涤2次，剩
细胞培养技术培训ppt课件版
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
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见的是贴附于平面支持物细胞。在一般光镜下 生存中的细胞是均质而透明的，结构不明显。
细胞在生长期常有1-2个核仁，在细胞机能 状态不良时，细胞轮廓会增强，反差增大。
若胞质中时而出现颗粒、脱滴和腔泡等， 表明细胞代谢不良。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
倒 置 显 微 镜
back
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
液 氮 罐
back
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
血液学血细胞化学染色 ppt课件
分子生物学分型：提高到分子水平
2020/11/13
9
四、基本步骤
1. 固定 （1）物理法：干燥、火焰 （2）化学法：
A、蒸气固定：甲醛 B、液体固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙 酮。
2020/11/13
10
2. 显示：有色沉淀反应
（1）偶氮偶联法：酯酶染色 （2）联苯胺法：POX （3）普鲁士蓝反应：Fe （4）希夫反应：PAS （5）金属沉淀法：NAP （6）物理显色法：SBB
2020/11/13
19
【结果判断】
幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝 绿色。
2020/11/13
20
细胞内铁(油镜观察幼红细胞)
Ⅰ型：1～2个小铁颗粒； Ⅱ型： 3～5个小铁颗粒； Ⅲ型： 6～10个小铁颗粒或1～4个大颗粒； Ⅳ型： 10个以上小铁颗粒或5个以上大颗粒
2020/11/13
诊断 3. 观察疾病的疗效和预后 4. 疾病发病机制的探讨
2020/11/13
8
白血病的诊断：MICM分型
M：morphology I：immunology C：cytogenitics M：molecular biology 形态学分型：进行初步的诊断
免疫学分型：明确细胞种类
细胞遗传学分型：与疾病预后有关
13
第二节 常用细胞化学染色技术
➢ 铁染色 ➢ 过氧化物酶染色 ➢ 苏丹黑B染色 ➢ 酯酶染色 ➢ 过碘酸-希夫反应 ➢ 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 ➢ 酸性磷酸酶染色
2020/11/13
14
一、 铁 染 色 （ferric stain）
2020/11/13
15
原理
酸性环境
铁 ＋亚铁氰化钾
亚铁氰化铁
2020/11/13
9
四、基本步骤
1. 固定 （1）物理法：干燥、火焰 （2）化学法：
A、蒸气固定：甲醛 B、液体固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙 酮。
2020/11/13
10
2. 显示：有色沉淀反应
（1）偶氮偶联法：酯酶染色 （2）联苯胺法：POX （3）普鲁士蓝反应：Fe （4）希夫反应：PAS （5）金属沉淀法：NAP （6）物理显色法：SBB
2020/11/13
19
【结果判断】
幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝 绿色。
2020/11/13
20
细胞内铁(油镜观察幼红细胞)
Ⅰ型：1～2个小铁颗粒； Ⅱ型： 3～5个小铁颗粒； Ⅲ型： 6～10个小铁颗粒或1～4个大颗粒； Ⅳ型： 10个以上小铁颗粒或5个以上大颗粒
2020/11/13
诊断 3. 观察疾病的疗效和预后 4. 疾病发病机制的探讨
2020/11/13
8
白血病的诊断：MICM分型
M：morphology I：immunology C：cytogenitics M：molecular biology 形态学分型：进行初步的诊断
免疫学分型：明确细胞种类
细胞遗传学分型：与疾病预后有关
13
第二节 常用细胞化学染色技术
➢ 铁染色 ➢ 过氧化物酶染色 ➢ 苏丹黑B染色 ➢ 酯酶染色 ➢ 过碘酸-希夫反应 ➢ 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 ➢ 酸性磷酸酶染色
2020/11/13
14
一、 铁 染 色 （ferric stain）
2020/11/13
15
原理
酸性环境
铁 ＋亚铁氰化钾
亚铁氰化铁
高中生物细胞的化学组成PPT4 中图版
从对面盒饭哥的脸上，看出了焦虑和疲惫，但依然在不停的王嘴里塞着凉凉的米饭，可能他要保持体力，可能他要让自己不饿，生活的重担坦然接受，有时候压垮人的可能真的是一颗轻微的稻草！ 有点扎心，但是事实。没有一个人的生活是容易的。
上午上班 中午赶到昆山去看房，很不入眼的房型，房价依旧那么傲娇的200多万，不为什么，只为靠近上海，没有在那边过多的停留，马不停蹄赶回上海，和北京来的一个客户谈合作，从他战略投资到高层资源，一顿高谈阔论，我们就像是两个谈判数亿资产的双方一样，据理力争，强势压过对方，可他可能不知道，对面的这个人刚从看房的场地出来，正在思考怎么买到房，我可能我不清楚，对面的这个人葫芦里买的究竟是什么药，人生就像一场戏，回头想想都不容易，天很大，海也很大，人有时候也觉得自己很伟大，就当站在星河穹顶之下，面对万丈高山时，人类才会认识到自己的渺小，人间万物皆有生命，永远记得天外有天，人外有人，过好当下，活出自己想要的那样，才无悔，才不负此生。 有点扎心，但是事实。没有一个人的生活是容易的。
玉米和人体细胞部分元素含量的比较
玉米 氧 44.43
人 14.62
这说明什么?
碳 43.57
55.99
氮 1.46
9.33
氢 6.24 钾 0.92 钙 0.24 磷 0.20 硫 0.17 氯 0.14 镁 0.18 铁 0.08
7.46 1.09 4.67 3.11 0.78 0.47 0.16 0.012
必修1 分子与细胞 第2章 细胞的构成
第1节 细胞的化学组成
济南二中 王磊
学习目标
1、描述组成生物体的主要化学元素的种 类及其重要作用；
2、通过生物体组成元素与非生物的对比， 说明生物界与非生物界的统一性与差异 性；
上午上班 中午赶到昆山去看房，很不入眼的房型，房价依旧那么傲娇的200多万，不为什么，只为靠近上海，没有在那边过多的停留，马不停蹄赶回上海，和北京来的一个客户谈合作，从他战略投资到高层资源，一顿高谈阔论，我们就像是两个谈判数亿资产的双方一样，据理力争，强势压过对方，可他可能不知道，对面的这个人刚从看房的场地出来，正在思考怎么买到房，我可能我不清楚，对面的这个人葫芦里买的究竟是什么药，人生就像一场戏，回头想想都不容易，天很大，海也很大，人有时候也觉得自己很伟大，就当站在星河穹顶之下，面对万丈高山时，人类才会认识到自己的渺小，人间万物皆有生命，永远记得天外有天，人外有人，过好当下，活出自己想要的那样，才无悔，才不负此生。 有点扎心，但是事实。没有一个人的生活是容易的。
玉米和人体细胞部分元素含量的比较
玉米 氧 44.43
人 14.62
这说明什么?
碳 43.57
55.99
氮 1.46
9.33
氢 6.24 钾 0.92 钙 0.24 磷 0.20 硫 0.17 氯 0.14 镁 0.18 铁 0.08
7.46 1.09 4.67 3.11 0.78 0.47 0.16 0.012
必修1 分子与细胞 第2章 细胞的构成
第1节 细胞的化学组成
济南二中 王磊
学习目标
1、描述组成生物体的主要化学元素的种 类及其重要作用；
2、通过生物体组成元素与非生物的对比， 说明生物界与非生物界的统一性与差异 性；
《细胞化学染色》课件
、切片或裂解样品，确保样品处
标记染色剂
2
于最佳状态以获得清晰的染色结果。
选择适当的染色剂，与细胞内的目标
分子发生特异性反应。
3
洗涤
去除多余的染色剂，减少非特异性背
显微镜观察
4
景染色。
使用显微镜观察和记录染色后的细胞 结构和染色结果。
细胞化学染色的应用领域
1 病理学研究
方法
包括直接染色、间接染色和特殊染色等方法， 根据目的和需求选择适当的方法。
技术
需要合适的实验步骤和条件，包括样品制备、 染色剂选择和显微镜观察。
常用的细胞化学染色方法
伊纳尔反应
用于检测脱氧核糖核酸(DNA)的存在和分布。
酸性磷酸酶染色
用于检测酸性磷酸酶活性和酶的分布。
特殊染色
用于检测细胞中特定结构或分子的存在和分布，如免疫组化染色。
结论及展望
细胞化学染色是一种强大的技术，帮助我们深入了解细胞结构与功能。未来， 随着技术的不断发展和创新，细胞化学染色将在多个领域继续发挥重要作用。
细胞化学染色
细胞化学染色是一种通过特定染色剂使细胞内的化学成分显现的技术。它在 细胞研究和诊断中起着重要的作用，帮助我们更好地了解细胞的结构和功能。
细胞化学染色的定义
目的
通过染色剂将细胞内的特定化学成分显现出 来，例如核酸、蛋白质、多肽等。
原理
染色剂与细胞内化学成分之间的特异性反应， 例如酶活性、酸碱性和亲和性。
通过染色剂对病理变化 进行观察和鉴定，辅助 诊断和治疗决策。
2 细胞生物学研究
了解细胞结构和功能， 探索细胞内分子的表达 和相互作用。
3 药物研发
评估药物对细胞内目标 分子的作用和影响，辅 助药物研发过程。
标记染色剂
2
于最佳状态以获得清晰的染色结果。
选择适当的染色剂，与细胞内的目标
分子发生特异性反应。
3
洗涤
去除多余的染色剂，减少非特异性背
显微镜观察
4
景染色。
使用显微镜观察和记录染色后的细胞 结构和染色结果。
细胞化学染色的应用领域
1 病理学研究
方法
包括直接染色、间接染色和特殊染色等方法， 根据目的和需求选择适当的方法。
技术
需要合适的实验步骤和条件，包括样品制备、 染色剂选择和显微镜观察。
常用的细胞化学染色方法
伊纳尔反应
用于检测脱氧核糖核酸(DNA)的存在和分布。
酸性磷酸酶染色
用于检测酸性磷酸酶活性和酶的分布。
特殊染色
用于检测细胞中特定结构或分子的存在和分布，如免疫组化染色。
结论及展望
细胞化学染色是一种强大的技术，帮助我们深入了解细胞结构与功能。未来， 随着技术的不断发展和创新，细胞化学染色将在多个领域继续发挥重要作用。
细胞化学染色
细胞化学染色是一种通过特定染色剂使细胞内的化学成分显现的技术。它在 细胞研究和诊断中起着重要的作用，帮助我们更好地了解细胞的结构和功能。
细胞化学染色的定义
目的
通过染色剂将细胞内的特定化学成分显现出 来，例如核酸、蛋白质、多肽等。
原理
染色剂与细胞内化学成分之间的特异性反应， 例如酶活性、酸碱性和亲和性。
通过染色剂对病理变化 进行观察和鉴定，辅助 诊断和治疗决策。
2 细胞生物学研究
了解细胞结构和功能， 探索细胞内分子的表达 和相互作用。
3 药物研发
评估药物对细胞内目标 分子的作用和影响，辅 助药物研发过程。
细胞生物学实验技术(PPT)
• 分辨力为6~10nm，因人眼的分辨力〔区别荧光屏上距 离最近两个光点的能力〕为，扫描电镜的有效放大倍 率为。
第三十七页，共八十四页。
Scanning electron microscope〔 SEM〕
第三十八页，共八十四页。
• 工作原理：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品外表激发出次级电 子，次级电子的多少与样品外表结构有关，次级电子由探测器收集，信 号(xìnhào)经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步 的扫描图像。
• 用于观察能激发出荧光的结构。用途：免疫荧光观察、 基因(jīyīn)定位、疾病诊断。
Fluorescence image, DNA in blue and Microtubules in green
第十三页，共八十四页。
〔三〕激光共聚焦(jùjiāo)扫描显微境 Laser confocal scanning microscope, LCSM
〔七〕微分(wēi fēn)干预差显微镜 Differential interference contrast microscope 〔DIC〕
• 1952年Nomarski创造，利用两组平 面偏振光的干预，加强影像的明暗 效果，能显示结构的三维立体投影。 标本可略厚一点(yī diǎn)，折射率差异 更大，故影像的立体感更强。
第二章 细胞生物学实验(shíyàn)技术
METHODS AND TECHNIQUES
第一页，共八十四页。
本章 内容提要 (běn zhānɡ)
• 第一节 显微技术
• 一、光学显微镜 • 二、电子显微镜
• 三、显微操作技术
• 第二节 生物化学(shēnɡ wù huà xué)与分子生物学技术
第三十七页，共八十四页。
Scanning electron microscope〔 SEM〕
第三十八页，共八十四页。
• 工作原理：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品外表激发出次级电 子，次级电子的多少与样品外表结构有关，次级电子由探测器收集，信 号(xìnhào)经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步 的扫描图像。
• 用于观察能激发出荧光的结构。用途：免疫荧光观察、 基因(jīyīn)定位、疾病诊断。
Fluorescence image, DNA in blue and Microtubules in green
第十三页，共八十四页。
〔三〕激光共聚焦(jùjiāo)扫描显微境 Laser confocal scanning microscope, LCSM
〔七〕微分(wēi fēn)干预差显微镜 Differential interference contrast microscope 〔DIC〕
• 1952年Nomarski创造，利用两组平 面偏振光的干预，加强影像的明暗 效果，能显示结构的三维立体投影。 标本可略厚一点(yī diǎn)，折射率差异 更大，故影像的立体感更强。
第二章 细胞生物学实验(shíyàn)技术
METHODS AND TECHNIQUES
第一页，共八十四页。
本章 内容提要 (běn zhānɡ)
• 第一节 显微技术
• 一、光学显微镜 • 二、电子显微镜
• 三、显微操作技术
• 第二节 生物化学(shēnɡ wù huà xué)与分子生物学技术
组织化学与细胞化学技术培训课件
组织化学与细胞化学技术
27
Ab-2（Ho）
Ab-1 （Mo）
Ab-3（Mo）
细胞
免疫酶桥联(APAAP)法染色原理
组织化学与细胞化学技术
28
卵白素（Avidin）
生物素化Biotion （HRP/AP）
ABC复合物
生物素化二抗
Ab-1
ABC法染色
细胞
组织化学与细胞化学技术
原理图
29
三、多聚螯合物法(ELPS)
体－抗补体荧光抗体复合物。此法敏感性较高。但其较 易
出现非特异性染色，而且操作过程相对较复杂。
（四）双标记法
运用两种荧光素在不同的激发光下显示不同颜色的特
点，将不同荧光素分别标记所需的特异性抗体。可在同
一
组织化学与细胞化学技术
19
单色荧光染色
组织化学与细胞化学技术
20
双色荧光染色
组织化学与细胞化学技术
种，酶反应所需的底物基质液和偶联剂品种也很丰富。在双重 标
记技术中可选用一些显示色差异较明显的显色系统。但往往由 于
组织化学与细胞化学技术
8
1.原 理
过碘酸氧化多糖类中的乙二醇使之成为双醛基，后 者与无色品红结合形成紫红色化合物。定位于含多糖 类的细胞质内。多糖类物质含量决定了色泽的深浅。
2.参考范围:（正常阳性细胞）
①粒细胞系—原粒细胞多呈阴性,通常随细胞不断成 熟阳性反应由弱渐强,至细胞完全成熟后达到最大 强度。其中中性粒细胞呈胞浆内弥散状红色阳性, 嗜酸粒细胞S颗粒之间的胞浆呈红色阳性,嗜碱粒 细胞呈大小不一的颗粒状紫红色阳性。
(二)免疫荧光技术和免疫荧光技术
利用不同荧光素在激发光下呈现不同颜色这一特点,如异硫氰
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3
组织细胞化学染色方法分门别类有许多种,结果的显 示也不尽相同,有时即使是检测同一物质,因采取的方法 不同,其结果有可能存在一定的偏差,另一些是由于方法 学上本身的缺陷,其结果也可能产生误差,所以我们应注 意选择结果稳定、方法简便(操作步骤越繁复,结果出现 误差的可能性就越多),阳性显示明显的细胞化学染色方 法如果条件允许可与细胞免疫化学、细胞遗传学、分子 生物学等相结合,使细胞化学染色发挥最大、最准确的 作用。
5
中性粒细胞呈 粗颗粒强阳性
单核细胞呈 弥散弱阳性
6
过碘酸一雪夫反应
periodic acid Schiff reaction ,PAS 此试验中能被过碘酸-雪夫反应呈阳性的多糖类物 质有糖原、粘多糖、糖蛋白、糖脂、还包括一些磷脂 类物质等，因此PAS阳性不能简单地就表明有糖原的存 在，只是在对血细胞的组织化学研究中通常习惯于将 PAS阳性认同于糖原。 PAS染色虽然不完全代表糖原，但在血液系统疾病特 别在各类型急性白血病中却有相当大的应用价值。PAS 染色若结合其他化学染色和细胞免疫表型检测可对部 分疾病的诊断和鉴别诊断提供一定的价值。
一．免疫荧光细胞化学技术
免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与 显微显示的精确性相结合。用已知的抗体在不影响其免 疫学特性的前提下与荧光素相结合。然后将结合了荧光 素标记的抗体作为一种标准试剂。对被检细胞进行检测 和鉴定。并在荧光显微镜下采用一定波长的荧光，可以 直接观察被检测中有否特异荧光的表达。目前用于标记 抗体的荧光素主要有异硫氰酸荧光黄（FITC）、四乙基 罗丹明（RB200）、四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）及 藻红蛋白（PE）在流式细胞术（FCM）中较常用。较为经 典的方法有下列几种：
12
组织细胞免疫标记技术的方法学建立至今仅为 短短30年左右的时间，但其发展异常迅速，检测 方法可多达20多种以上。其基本原理是将组织和 细胞作为抗原，与其相应的特异抗体产生抗原－ 抗体反应，并借助荧光色素、酶、胶体金、铁蛋 白等显示系统，在被测组织和细胞所相应的位置 显示出来。由于抗原－抗体系统具有高度的特异 性和敏感性，能够将细胞形态学和功能代谢紧密 的结合起来，进行观察和分析。
7
1.原 理
过碘酸氧化多糖类中的乙二醇使之成为双醛基，后 者与无色品红结合形成紫红色化合物。定位于含多糖 类的细胞质内。多糖类物质含量决定了色泽的深浅。
2.参考范围:（正常阳性细胞）
①粒细胞系—原粒细胞多呈阴性,通常随细胞不断成 熟阳性反应由弱渐强,至细胞完全成熟后达到最大 强度。其中中性粒细胞呈胞浆内弥散状红色阳性, 嗜酸粒细胞S颗粒之间的胞浆呈红色阳性,嗜碱粒 细胞呈大小不一的颗粒状紫红色阳性。
2
一 组织细胞化学染色
组织细胞化学染色是将形态和功能相结合的细胞科 学。它是在保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下, 运用化学反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构 及生理活性物质原位地显示。因而对于探索化学成分、 生理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变有着重要的 意义。
组织细胞染色的范围一般可分为：蛋白质类（氨基 酸)、核酸类、多糖类、脂类、盐类或金属类，采用的 方法通常为化学结合物理溶解显示及酶-底物反应。
细胞化学技术
1
组织化学技术: 应用化学、物理、生物化学、免疫学或分子生物
学的原理和技术与组织学相结合而产生的技术，能在 组织切片定性、定位地显示某种物质的存在与否以及 分布状态。还可进一步用显微分光光度计或图象分析 仪测定光镜切片中该物质反应的强度，获得定量的信 息。
细胞化学技术: 应用组织化学技术于游离细胞的样品(如细胞涂 片)，则称细胞化学技术。
4
常用组织细胞化学染色
过氧化物酶 peroxidase ,(POX)
1.原理 血细胞中的POX能分解H2O2而释放出新生态氧，后者
可使联苯胺氧化成联苯胺蓝沉淀于细胞质酶活力处。 2.正常阳性细胞:
①. 中性粒细胞呈均匀颗粒状蓝黑色阳性。 ②. 嗜酸性粒细胞呈均匀粗大颗粒状蓝色阳性。 ③. 单核细胞呈弥散细颗粒状蓝色阳性。
13
目前实验室常用的方法有免疫荧光法， PAP法，ABC法、IGSS法等10大类。但由于各 种方法均有其特性和检测适应范围，即某一 种方法无法在所有的检测标本中被应用，我 们应充分发挥各种方法上的特点。有选择性 的将不同来源的组织和细胞标本并选用不同 的方法来进行检测。使我们的检测结果更精 确。
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中性粒细胞碱性磷酸酶
neutrophil alkaline phosphatase ,(NAP)
1.原理ห้องสมุดไป่ตู้
细胞内碱性磷酸酶在碱性环境下水解磷酸萘酚，使 之释放出萘酚，后者与重氮盐偶联形成有色沉淀物。 定位于酶活性所在处。
2.参考范围 ：
中性粒细胞碱性磷酸酶活力正常范围2%～56%, 积分 4～80 分 /100个中性粒细胞
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NAP染色结果 (+) — (++++) 固紫- B
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二 组织细胞免疫化学 标记技术
组织细胞免疫化学是细胞化学吸收了免疫 学的理论和技术而发展起来的一门重要方法学. 在现代医学领域中被广泛应用.尤其在组织细 胞学中该技术的应用是微观世界形态学研究从 单一的形态学描述上升到结构、功能和代谢为 一体的动态观察。并可对细胞的属性、分化阶 段和变异进行鉴别，有助于临床疾病的诊断。
8
② 红细胞系— 幼红细胞及红细胞均呈阴性。 ③ 巨核细胞系— 从原始阶段到血小板均呈阳性。 ④ 淋巴细胞系— 大多数淋巴细胞呈阴性，小部分
淋巴细胞成阳性。 ⑤ 单核细胞系— 原始阶段呈阴性，幼稚阶段以后
可见浆内呈弥散细小颗粒状红色阳性。 ⑥ 浆细胞系— 大多数浆细胞呈阴性，小部分浆细
胞呈阳性。
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（一）直接法
是以荧光标记抗体直接与被检标本内的抗原反应。
依据荧光出现的位置及强弱对被检细胞做出判别。该法的
优点为简单特异。但其缺点也很明显即敏感性较低另需制
备大量特异性的荧光抗体。
（二）间接法
间接法采用抗球蛋白试验原理，先制成荧光素标记抗抗
体。检测中先将特异性抗体与被检标本作用一定的时间
后，充分洗去未结合的游离特异性抗体，然后添加荧光素
组织细胞化学染色方法分门别类有许多种,结果的显 示也不尽相同,有时即使是检测同一物质,因采取的方法 不同,其结果有可能存在一定的偏差,另一些是由于方法 学上本身的缺陷,其结果也可能产生误差,所以我们应注 意选择结果稳定、方法简便(操作步骤越繁复,结果出现 误差的可能性就越多),阳性显示明显的细胞化学染色方 法如果条件允许可与细胞免疫化学、细胞遗传学、分子 生物学等相结合,使细胞化学染色发挥最大、最准确的 作用。
5
中性粒细胞呈 粗颗粒强阳性
单核细胞呈 弥散弱阳性
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过碘酸一雪夫反应
periodic acid Schiff reaction ,PAS 此试验中能被过碘酸-雪夫反应呈阳性的多糖类物 质有糖原、粘多糖、糖蛋白、糖脂、还包括一些磷脂 类物质等，因此PAS阳性不能简单地就表明有糖原的存 在，只是在对血细胞的组织化学研究中通常习惯于将 PAS阳性认同于糖原。 PAS染色虽然不完全代表糖原，但在血液系统疾病特 别在各类型急性白血病中却有相当大的应用价值。PAS 染色若结合其他化学染色和细胞免疫表型检测可对部 分疾病的诊断和鉴别诊断提供一定的价值。
一．免疫荧光细胞化学技术
免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与 显微显示的精确性相结合。用已知的抗体在不影响其免 疫学特性的前提下与荧光素相结合。然后将结合了荧光 素标记的抗体作为一种标准试剂。对被检细胞进行检测 和鉴定。并在荧光显微镜下采用一定波长的荧光，可以 直接观察被检测中有否特异荧光的表达。目前用于标记 抗体的荧光素主要有异硫氰酸荧光黄（FITC）、四乙基 罗丹明（RB200）、四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）及 藻红蛋白（PE）在流式细胞术（FCM）中较常用。较为经 典的方法有下列几种：
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组织细胞免疫标记技术的方法学建立至今仅为 短短30年左右的时间，但其发展异常迅速，检测 方法可多达20多种以上。其基本原理是将组织和 细胞作为抗原，与其相应的特异抗体产生抗原－ 抗体反应，并借助荧光色素、酶、胶体金、铁蛋 白等显示系统，在被测组织和细胞所相应的位置 显示出来。由于抗原－抗体系统具有高度的特异 性和敏感性，能够将细胞形态学和功能代谢紧密 的结合起来，进行观察和分析。
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1.原 理
过碘酸氧化多糖类中的乙二醇使之成为双醛基，后 者与无色品红结合形成紫红色化合物。定位于含多糖 类的细胞质内。多糖类物质含量决定了色泽的深浅。
2.参考范围:（正常阳性细胞）
①粒细胞系—原粒细胞多呈阴性,通常随细胞不断成 熟阳性反应由弱渐强,至细胞完全成熟后达到最大 强度。其中中性粒细胞呈胞浆内弥散状红色阳性, 嗜酸粒细胞S颗粒之间的胞浆呈红色阳性,嗜碱粒 细胞呈大小不一的颗粒状紫红色阳性。
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一 组织细胞化学染色
组织细胞化学染色是将形态和功能相结合的细胞科 学。它是在保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下, 运用化学反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构 及生理活性物质原位地显示。因而对于探索化学成分、 生理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变有着重要的 意义。
组织细胞染色的范围一般可分为：蛋白质类（氨基 酸)、核酸类、多糖类、脂类、盐类或金属类，采用的 方法通常为化学结合物理溶解显示及酶-底物反应。
细胞化学技术
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组织化学技术: 应用化学、物理、生物化学、免疫学或分子生物
学的原理和技术与组织学相结合而产生的技术，能在 组织切片定性、定位地显示某种物质的存在与否以及 分布状态。还可进一步用显微分光光度计或图象分析 仪测定光镜切片中该物质反应的强度，获得定量的信 息。
细胞化学技术: 应用组织化学技术于游离细胞的样品(如细胞涂 片)，则称细胞化学技术。
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常用组织细胞化学染色
过氧化物酶 peroxidase ,(POX)
1.原理 血细胞中的POX能分解H2O2而释放出新生态氧，后者
可使联苯胺氧化成联苯胺蓝沉淀于细胞质酶活力处。 2.正常阳性细胞:
①. 中性粒细胞呈均匀颗粒状蓝黑色阳性。 ②. 嗜酸性粒细胞呈均匀粗大颗粒状蓝色阳性。 ③. 单核细胞呈弥散细颗粒状蓝色阳性。
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目前实验室常用的方法有免疫荧光法， PAP法，ABC法、IGSS法等10大类。但由于各 种方法均有其特性和检测适应范围，即某一 种方法无法在所有的检测标本中被应用，我 们应充分发挥各种方法上的特点。有选择性 的将不同来源的组织和细胞标本并选用不同 的方法来进行检测。使我们的检测结果更精 确。
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中性粒细胞碱性磷酸酶
neutrophil alkaline phosphatase ,(NAP)
1.原理ห้องสมุดไป่ตู้
细胞内碱性磷酸酶在碱性环境下水解磷酸萘酚，使 之释放出萘酚，后者与重氮盐偶联形成有色沉淀物。 定位于酶活性所在处。
2.参考范围 ：
中性粒细胞碱性磷酸酶活力正常范围2%～56%, 积分 4～80 分 /100个中性粒细胞
10
NAP染色结果 (+) — (++++) 固紫- B
11
二 组织细胞免疫化学 标记技术
组织细胞免疫化学是细胞化学吸收了免疫 学的理论和技术而发展起来的一门重要方法学. 在现代医学领域中被广泛应用.尤其在组织细 胞学中该技术的应用是微观世界形态学研究从 单一的形态学描述上升到结构、功能和代谢为 一体的动态观察。并可对细胞的属性、分化阶 段和变异进行鉴别，有助于临床疾病的诊断。
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② 红细胞系— 幼红细胞及红细胞均呈阴性。 ③ 巨核细胞系— 从原始阶段到血小板均呈阳性。 ④ 淋巴细胞系— 大多数淋巴细胞呈阴性，小部分
淋巴细胞成阳性。 ⑤ 单核细胞系— 原始阶段呈阴性，幼稚阶段以后
可见浆内呈弥散细小颗粒状红色阳性。 ⑥ 浆细胞系— 大多数浆细胞呈阴性，小部分浆细
胞呈阳性。
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（一）直接法
是以荧光标记抗体直接与被检标本内的抗原反应。
依据荧光出现的位置及强弱对被检细胞做出判别。该法的
优点为简单特异。但其缺点也很明显即敏感性较低另需制
备大量特异性的荧光抗体。
（二）间接法
间接法采用抗球蛋白试验原理，先制成荧光素标记抗抗
体。检测中先将特异性抗体与被检标本作用一定的时间
后，充分洗去未结合的游离特异性抗体，然后添加荧光素