仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验
仔猪大肠杆菌分离鉴定及药敏试验
各种药片贴于平板 上 ， 每个平板７ 张药
片 ，将 贴 好 药 片 的平 板 置 于３ ７ ℃ 的恒 猪
肠 道 菌 群失 调 、 大肠 杆 菌 过 量 繁殖 是
温 箱 中培 养 ２ ４ ｈ 后 观 察 实 验 结 果 并 测
其 培 养特 性 、 形态 、 染 色 反 应 符 合 大肠 杆 菌 的 菌 株确 定 为 致 病 性 大 肠杆 菌 。
１ － ２ ． ３ 药敏试验 ： 将 致 病 性 大 肠 杆 菌
采用世界 卫生组织（ ＷＨ Ｏ ） 推荐 的Ｋ ｉ ｒ －
ｂ ｙ ． Ｂ ａ ｕ ｅ ｒ 氏法ｆ 即美 国 临 床 实 验 室 标 准
１ ． １ ． ２ 主要试剂 ： 培 养 基 及 细 菌 鉴 定 用 的生 化试 剂等 购 自河 南 美 凯 生 物科 技有限公司。 １ ． １ ． ３ 供试药片 ： 购 自杭 州 微 生 物 试 剂责任有限公司。 １ ． １ ． ４ 试验动物 ： 清 洁 级 昆 明 系小 白 鼠雌 雄 各 半 ， 共２ ０ 只。 １ ． １ ． ５ 器材： 蒸 汽高 压灭 菌锅 、 培 养
素 ，抗 生 素 广 泛 使 用 对 此 病 的 预 防 与
控 制 取 得 了一 定 的 效 果 。但 由于 养 殖 户 的不 合 理 用 药 ．使 动 物 长 期 服 用 大 量抗菌药物 ， 易 破坏 肠 道 正 常 菌群 ， 增 加 反 复感 染 和继 发 感 染 的几 率 ．加 速 了猪大肠杆 菌耐药性 的产生 和扩散 ， 从 而 给该 病 的 防治 带 了前 所 未 有 的 困
睑 或 其 它部 位 水 肿 、神 经 症 状 为 主要 特 征 的 疾 病 。仔 猪 大肠 杆 菌病 在集 约
致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 20140220
致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验1.材料与方法1.1实验材料1.1.1器材设备：剪刀、镊子、手术刀、接种环、接种针、涂布棒、酒精灯、载玻片、盖玻片、染色缸、染色架、革兰氏染液、光学显微镜、香柏油、恒温培养箱、游标卡尺等。
1.1.2病料采集：根据临床症状、流行病学采集疑似发病未死猪或刚死亡猪只的肝脏、脾脏、心脏、肺脏、大肠、排泄物等并冷藏运输于3h内送至实验室，待检。
1.1.3培养基与试剂：普通营养琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、微量生化反应管、药敏片、青霉素等抗生素。
1.2试验方法1.2.1细菌的形态学检查：触片镜检，用镊子夹取待检病料一端，再用灭菌过的剪刀剪出一个切面，将新鲜的切面在干净的载玻片上轻触几下，载玻片自然干燥后进行瑞氏染色或美兰染色并镜检。
可初步判断待检病料中是否含有细菌。
触片也可以是排泄物悬浮液或研磨后的组织液，注意，为避免细胞碎片影响观察，涂片或触片时一定要均匀、薄。
1.2.2分离培养：将手术刀灼烧趁热在待检病料表面烫一下，以杀灭其表面杂菌；用无菌剪刀在烫面剪出一个小口，用灭菌过的接种环从其切面伸入并旋转勾取组织，用分区划线的方法接种于普通营养琼脂培养基、麦康凯培养基和伊红美蓝培养基上；或将组织研磨后用灭菌生理盐水或灭菌PBS液稀释，再用接种环勾取悬浮液使用分区划线的方法接种于普通营养琼脂培养基、麦康凯培养基和伊红美蓝培养基上，置37℃恒温箱培养18-24h后观察菌落形态。
在普通营养琼脂培养基上长出灰白色光滑圆形菌落，麦康凯培养基上长出粉红色或砖红色光滑圆形菌落，在伊红美蓝培养基上长出紫黑色并有金属光泽的光滑圆形菌落。
注：麦康凯培养基和伊红美蓝培养基为鉴别培养基。
1.2.3培养物革兰氏染色：用接种环取一滴灭菌生理盐水于载玻片上→用接种环挑去麦康凯培养基上单个中等大小的红色菌落于生理盐水中混匀→均匀涂布成直径约为1cm的薄层→那载玻片在酒精灯上方30-40cm处干燥→使用酒精灯外焰固定→滴加一滴草酸结晶紫1min→水洗→加革兰氏碘液2-3min→水洗→95%酒精脱色0.5-1min →水洗→滴加石炭酸复红0.5-1min，用滤纸吸干，油镜镜检。
一例仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验
霞 ， 齐继红 ， 赵 家磊 。 ， 李
峰 ， 沈 志 强 ，
２ ５ ６ ６ ０ ０ ）
２ ５ ６ ６ ０ ０ ； ２ ． 山东省滨 州畜牧 兽医研 究院， 滨州
文章编号 ： １ ０ ０ ２ — １ ９ ５ ７ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ２ — ０ １ ０ ０ — ０ ３
摘 要 为确定仔猪 的死亡 原 因并为猪场及 时制定 防控措施提供参考依 据 ， 对病料样 品进行镜 检 观察、 细 菌分 离培养 与纯化 、 分 离菌株 的形态特征观 察 、 生化试 验 、 致病 性试验 、 １ ６ Ｓ ｒ Ｒ Ｎ Ａ序 列鉴 定等 ， 最终鉴定为仔猪致病性大肠杆菌 。药敏试验 结果 显示 ， 分离菌株在 １ ３种 常见药物 中对环 丙 沙星 、 头孢 曲松钠 、 阿奇霉素 、 氧氟沙星 、 头孢噻 呋、 头孢噻肟 、 阿莫西林 、 氟苯尼考 ８ 种 药物高度敏 感， 对红霉素 、 阿米卡星、 庆大霉素 ３种 药物 中度敏感 ， 对 强力霉 素、 四环 素 ２种 药物低度敏感 。 关键词 仔猪 ； 大肠杆菌 ； 分 离鉴定 ； 药敏试验 猪大 肠杆 菌病 是 由致病 性 大肠埃 希 氏菌 的某 些血清 型及其毒 素引起 的一种 肠道传 染性疾 病 ， 主 要危害仔猪 ， 可 引起仔猪生长发育迟 缓， 生产性能低 下， 甚至造成死亡 ， 是 目前危 害仔猪 生长发 育的主要 疫病之一 ， 每年都给养猪业造成一定 的经济 损失［ １ － ２ ］ 。 该病 的流行无 明显季节性 ，但一般在过于潮湿 炎热 的夏季和 极其 寒冷 的冬季易发生 ，而在温 暖的春季 和 秋季较 少 发生［ ３ １ 。２ ０ １ ６年 ８月， 连续 多 日降雨过 后 ，山东省 滨州 市某 猪场 饲养 的 ２ ３月龄 仔猪 发 病， 表现 为呼吸 困难 ， 厌食 ， 精神 萎靡 ， 体温升 高 ， 肝 脏和 肾脏坏死、 有 出血点 ， 根据临床症状和剖检病理 变化初 步诊断为疑似大肠杆菌感染 。 为进一步确诊 ， 本研 究进行 了病料样品 的镜检观察 、细菌的分离与 鉴定等实验室诊断 ， 并对分离菌株进行 了药敏试验 。 盒 、琼脂 糖凝胶 Ｄ Ｎ Ａ回收试 剂盒购 自北京 百泰克 生物科技有 限公司； Ｔ ａ ｑ酶 、 ｄ Ｎ Ｔ Ｐ 、 Ｄ Ｌ ２ ０ ０ ０ Ｄ Ｎ Ａ Ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ 购 自宝生物工程 （ 大连） 有 限公司 ； 健康 昆明 系小 白鼠购 自山东省实验动物 中心 。 １ ． ４ 病料样 品的镜检观 察 将采集 的病料样 品涂 片， 革 兰 氏染色 ， 镜检观 察 是 否存在 可疑细 菌。 １ ． ５ 细菌分 离培养与纯化 将采集 的病料样 品分别接种于麦康凯琼 脂平板 和 营养琼脂平板 ， ３ ７ ｃ Ｃ 培养至 ２ ４ ｈ ， 观察菌落特 征 。 挑 取单菌落连续传代纯化至菌落大小与形态均一 。 １ ． ６ 分 离菌株的形 态特征观察 取纯化后单菌落涂片 ， 革兰 氏染色 ， 镜 检观察形 态特征 。 １ 材 料 与 方 法 １ ． ７ 分 离菌株 的生化试验 取分离菌株分别接种至各种 生化鉴定管 ，按 常 １ ． １ 临床病料样品 的采 集 对病死 猪进行解 剖 ，无菌采集 病死猪 的肝脏 、 规方法测 定分离菌株 的生化特性 。 。 肾脏 、 脾脏等病变组织 ， 低温条件运往 实验 室 。 １ ． ８ 分 离菌株 致病 性 试验 １ ． ２ 实验 室检 测 时 间 与 地 点 取营养肉汤 中培养 的分离菌株腹腔接种 ２ ０ ～ ２ ２ ｇ 实验室检测于 ２ ０ １ ６ 年 ８月 ２ ６日至 ２ ０ １ ７年 １ 月 健康 昆明系 小 白鼠 １ ０只 ， ０ ． ２ ｍ Ｌ ／ 只 ， 同时取 １ ０只 １ ８日在 山东 省滨 州市预 防兽 医学 与动物 生物 技术 小 白鼠接 种营养 肉汤培养基作为对照 ， 隔离饲养 ， 观
仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验
仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验程子兵1 董春霞2石国界3沙里塔那4 马长丽1（1. 塔城地区动物疾控与诊断中心新疆塔城834700；2. 重庆市武隆县畜牧兽医局重庆市武隆县408500；3. 塔城市畜牧兽医工作站新疆塔城834700；4. 额敏县兽医工作站新疆额敏县834600）摘要:对塔城地区一农户饲养猪群中仔猪发生的临床症状以水肿病、白痢、黄痢为特征的病例进行了样品采集，后经麦康凯、伊红美蓝分离培养，糖发酵生化试验、动物试验等结果显示均为大肠杆菌，同时通过药敏试验筛选出敏感抗生素。
关键词：仔猪；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验Abstract：Specimens with dropsy and dysentery clinical symptoms were isolated from one household raises pig group in Tacheng area. By bacteria culture, biochemical test and animal test, the results indicate the bacterium is pathogenic Escherichia Coli. Meanwhile, we ascertain sensitive antibiotics to this E coli by medicine test.Key words:pig; Escherichia Coli; isolate indentify; medicine test仔猪大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的肠道传染病，主要表现为仔猪白痢、黄痢和水肿病，其中黄痢多发生于1周内哺乳仔猪，病猪主要表现为排黄色糊状粪便；白痢多发于10～30日龄，病猪主要表现为排乳白色或灰白色腥臭糊状粪便；水肿病多发于断奶仔猪，主要有神经症状、胃壁、肠黏膜等组织水肿，四季均可发生，发病率和致死率高低不等，严重者同窝仔猪中发病率可达90％以上，致死率可达100％，幸存者则影响生长，甚至成为僵猪【l】。
仔猪大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验
仔猪大肠 杆菌 的分离鉴定及药敏试验
廖 娟 ， 小春 ， 萌 ， 超 ， 钢★ 任 唐 伍 王
（ 四川乐山师范学院化学与生命科学学院，乐山 ６ ４ ０ ） １ ０ ０
ＤＯ １ ０３ ６ ／ ． ： ．９ ９ ＪＩ １ ＳＳＮ．６ １ ６ ２ ．０１ ．７ ０ ３ １ ７ － ０ ７２ ２０ 。 １
中草药包括天然 的动植 物类药和矿物质类药 ， 不仅含有 丰富的维生素 、 白质等 营养物 质 ， 蛋 还含 有生物 碱 、 甙类 、 鞣
消化吸收 ， 还刺激动物 的免疫机制 ， 提高免疫能力 。
１ 材 料 及 方 法
质等 ， 在提 高动物 的抗病 力保护 动物健康 的 同时 ， 高 了动 提
中草药对杂交肉牛育肥效果观察
何 继红 ， 张
摘
令
（ 贵州省盘县农业局，盘县 ５ ３ ３ ） ５５７
要 ： 试 验 选 购 了 １￣ ６月龄 ， 本 ４１ 活体 重 约 ３ ０ ｇ西 杂 肉牛 ２ 头 ， 据 完全 随机 分 组 原 则 平 均 分 成 ３组进 行 试 验 。 ０ｋ １ 根 结
２ 染色镜检 ． ２ ２３ 生化鉴 定 ．
分离菌株革兰 氏染色为阴性小杆菌 ， 两端 钝 分离 出的菌株 均能发酵葡萄糖 、 糖 、 芽 乳 麦
圆， 多单个存在 ， 与大肠 杆菌染色特性相符。 糖、 甘露醇 ， 均能产 酸产气 ， 大多数菌株 不利用蔗糖 ， 少数 缓
慢发酵 ， Ｐ实验 、 Ｖ 枸橼酸盐试 验均为 阴性 ， 吲哚试验 、 ＭＲ试 表１ 分 离菌株的药物敏感性试验结果
仔 猪大肠杆菌病 俗称 白痢 、 黄痢 ， 由致病性大肠杆 菌 是 引起 的急性肠道传染病 ຫໍສະໝຸດ 该疾病是常见且危害性极大 的传染
关于桃源猪场育肥猪大肠杆菌的分离甄别及药物敏感程度探究
关于桃源猪场育肥猪大肠杆菌的分离甄别及药物敏感程度探究摘要本次试验旨在探究桃源地区猪致病性大肠杆菌的流行血清型及其耐药状况，并筛选出抑菌效果显著的药物。
研究人员对桃源猪场的病猪展开采样工作，随后历经菌种培育、分离、提纯、革兰氏染色、肠杆菌生化鉴定、血清型鉴定以及药敏性测试等一系列流程，成功分离并鉴定出大肠杆菌，进而筛选出对该菌敏感的药物。
试验结果显示，所分离的猪致病性大肠杆菌血清型为 O144：K，此血清型在所有菌株中占比高达 66.6%。
经药敏试验发现，分离出的大肠杆菌对奥复星、复达欣、头孢曲松、丁胺卡那霉素这四种药物表现出敏感性，对麦迪霉素和氨苄西林呈中度敏感状态，而对头孢呋辛、万古霉素、诺氟沙星、多黏霉素 B、复方新诺明、丙氟哌酸、庆大霉素、先锋、四环素、强力霉素、卡那霉素、新霉素、美满霉素等 13 种药物则产生耐药性。
鉴于此，建议桃源猪场选用奥复星、复达欣、头孢曲松、丁胺卡那霉素这四种药物进行治疗，预期能够取得较为理想的疗效。
关键词：育肥猪；大肠杆菌；分离鉴定；药物敏感性Study on Isolation and Identification and Drug Sensitivity of Escheric hia Coli in Taoyuan Pig Fattening PigsAbstractThis experiment aimed to investigate the prevalent serotypes and drug resistance of porcine pathogenic Escherichia coli in the Taoyuan area and screen out drugs with significant antibacterial effects. The researchers carried out sampling work on the diseased pigs in the Taoyuan pig farm. Subsequently, through a series of processes such as strain cultivation,isolation, purification, Gram staining, enterobacter biochemical identification, serotype identification, and drug sensitivity testing, Escherichia coli was successfully isolated and identified, and then the drugs sensitive to this bacterium were screened out.The test results showed that the serotype of the isolated porcine pathogenic Escherichia coli was O144:K, and this serotype accounted for as high as 66.6% of all strains. Through the drug sensitivity test, it was found that the isolated Escherichia coli showed sensitivity to four drugs, namely Ofloxacin, Fortum, Ceftriaxone, and Amikacin, was moderately sensitive to Midecamycin and Ampicillin, and was resistant to 13 drugs such as Cefuroxime, Vancomycin, Norfloxacin, Polymyxin B, Compound Sulfamethoxazole, Ciprofloxacin, Gentamicin, Cefazolin, Tetracycline, Doxycycline, Kanamycin, Neomycin, and Minocycline. In view of this, it is recommended that the Taoyuan pig farm use these four drugs, namely Ofloxacin, Fortum, Ceftriaxone, and Amikacin, for treatment, and it is expected to achieve relatively satisfactory curative effects.Key words: Pig; Escherichia coli; Isolation and Identification; Drug Sensitivity1 引言大肠杆菌在生物分类体系中处于细菌界（Bacteria）、变形菌门（Proteobacteria）、Y - 变形菌纲（Gammaproteobacteria）、肠杆菌目（Enterobacteriales）、肠杆菌科（Enterobacteriaceae）、埃希氏菌属（Escherichia），其具体种名为大肠杆菌（E.coli）。
仔猪大肠杆菌的分离鉴定及市售药物比较
仔猪大肠杆菌的分离鉴定及市售药物比较仔猪大肠杆菌是引起仔猪腹泻的常见病原菌之一，对仔猪的健康和生长发育造成严重影响。
对仔猪大肠杆菌进行分离鉴定并选择适当的市售药物进行比较，对于控制仔猪腹泻具有重要意义。
一、仔猪大肠杆菌的分离鉴定1. 样品采集为了分离鉴定仔猪大肠杆菌，首先需要收集相关的样品。
可以从仔猪粪便、肠道分泌物等样品中进行采集。
2. 分离培养将样品接种到含有适当选择性抑制剂和诱导剂的培养基中，进行培养。
利用大肠杆菌的生理生化特性进行分离纯化。
3. 鉴定检测通过形态学观察、生理生化试验和分子生物学方法进行鉴定检测。
包括菌落形态、革兰氏染色、氧化酶试验、发酵试验、PCR等方法。
二、市售药物比较1. 抗生素目前市面上常见的用于治疗仔猪大肠杆菌感染的抗生素包括青霉素、氨氯地平、头孢霉素等。
这些抗生素可以通过口服、注射等方式进行给药。
2. 肠道免疫调节剂除了抗生素外，还有一些肠道免疫调节剂也被用于治疗仔猪腹泻。
比如益生菌、益生元等产品，可以通过调节肠道菌群平衡，增强免疫力来缓解仔猪大肠杆菌感染引起的腹泻。
3. 中成药市面上还有一些中成药，如藿香正气水、黄连素片等，也被用于治疗仔猪大肠杆菌感染。
这些中成药多具有清热解毒、抗菌消炎等功效，对于缓解腹泻症状有一定效果。
三、药物比较及选择建议1. 疗效比较通过临床试验和实验室研究，可以对不同药物的疗效进行比较。
比如抗生素和肠道免疫调节剂在治疗仔猪大肠杆菌感染时的疗效、耐药性等进行比较和评估。
2. 安全性比较除了疗效之外，还要考虑药物的安全性。
比如抗生素的滥用可能导致细菌耐药和残留问题，而肠道免疫调节剂多具有较好的安全性。
3. 综合选择根据疾病的病原特性、个体动物的状态以及药物的疗效和安全性进行综合选择。
一般建议在临床治疗中，可以综合应用不同类型的药物，从不同角度进行治疗。
四、注意事项在选择和使用药物时，需要注意以下事项：1. 严格按照药品说明书和兽医指导进行用药，避免滥用和超量用药。
仔猪大肠杆菌的分离鉴定及市售药物比较
仔猪大肠杆菌的分离鉴定及市售药物比较仔猪大肠杆菌是一种常见的猪病原菌，能够引起仔猪大肠炎，严重影响猪的健康和生长。
为了及时采取有效的防治措施，需要对仔猪大肠杆菌进行分离鉴定，并比较市售的药物的疗效。
对仔猪大肠杆菌进行分离鉴定是确保诊断准确和疗效有效的关键步骤。
分离方法可采用病原菌培养和鉴定的常规方法。
可以从疑似仔猪大肠杆菌感染的仔猪粪便、尿液等样本中取出一小部分，并进行前处理，去除异物。
然后，将样本接种于含有所需营养成分的培养基上，进行培养。
在适宜的条件下，仔猪大肠杆菌可在培养基上生长形成菌落。
然后，通过形态学特征、生理生化特性、生长条件等特征，对所得的菌落进行初步鉴定。
通过进一步的生物学繁殖、抗生素敏感性试验等手段，对分离的细菌进行进一步鉴定，确定为仔猪大肠杆菌。
收集了大量的仔猪大肠杆菌样本后，我们可以从市场上选取一些常用的药物，进行疗效比较。
常用的市售药物包括抗生素、疫苗和抗菌剂等。
抗生素是目前最常用的治疗仔猪大肠杆菌感染的药物之一。
对于已经感染的仔猪，可以使用广谱抗生素如青霉素、磺胺类药物和氟喹诺酮类药物进行治疗。
疫苗是预防仔猪大肠杆菌感染的有效手段，可以通过接种疫苗提高仔猪的免疫力，减少感染的风险。
抗菌剂可以通过抑制仔猪大肠杆菌的生长，减少感染，如灭杀素、新霉素和四环素类抗菌剂。
在比较这些市售药物的疗效时，可以从不同方面进行评估。
可以比较治疗效果的持续时间和治疗成功率。
不同药物可能具有不同的持续时间和治愈率，需要选择持续时间较长且治愈率较高的药物进行治疗。
可以比较药物的副作用和安全性。
一些药物可能会导致不良反应，影响仔猪的健康。
需要选择副作用小、安全性高的药物进行治疗。
还可以比较药物的费用和易用性。
一些药物可能价格较高，难以承担，或者使用起来不方便。
需要选择价格合理、易于使用的药物进行治疗。
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仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验
程子兵1 董春霞2石国界3沙里塔那4 马长丽1
（1. 塔城地区动物疾控与诊断中心新疆塔城834700；2. 重庆市武隆县畜牧兽医局重庆市武隆县408500；3. 塔城市畜牧兽医工作站新疆塔城834700；4. 额敏县兽医工作站新疆额敏县834600）
摘要:对塔城地区一农户饲养猪群中仔猪发生的临床症状以水肿病、白痢、黄痢为特征的病例进行了样品采集，后经麦康凯、伊红美蓝分离培养，糖发酵生化试验、动物试验等结果显示均为大肠杆菌，同时通过药敏试验筛选出敏感抗生素。
关键词：仔猪；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验
Abstract：Specimens with dropsy and dysentery clinical symptoms were isolated from one household raises pig group in Tacheng area. By bacteria culture, biochemical test and animal test, the results indicate the bacterium is pathogenic Escherichia Coli. Meanwhile, we ascertain sensitive antibiotics to this E coli by medicine test.
Key words:pig; Escherichia Coli; isolate indentify; medicine test
仔猪大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的肠道传染病，主要表现为仔猪白痢、黄痢和水肿病，其中黄痢多发生于1周内哺乳仔猪，病猪主要表现为排黄色糊状粪便；白痢多发于10～30日龄，病猪主要表现为排乳白色或灰白色腥臭糊状粪便；水肿病多发于断奶仔猪，主要有神经症状、胃壁、肠黏膜等组织水肿，四季均可发生，发病率和致死率
高低不等，严重者同窝仔猪中发病率可达90％以上，致死率可达100％，幸存者则影响生长，甚至成为僵猪【l】。
由于致病性大肠杆菌的血清型复杂，在不同猪场、不同季节、不同批次，不同年龄流行菌株均可能不相同，造成规模化猪场的防控困难，引起较大的经济损失[2]。
笔者对塔城地区农户散养猪群中采集的仔猪白痢、黄痢和仔猪水肿病的病料进行了细菌分离培养、鉴定及药敏试验。
现将结果报告如下：
1 材料与方法
1．1 材料
1.1.1 采取农民散养户中临床症状较为典型的5份仔猪白痢、黄痢肛门拭子及仔猪水肿病的小肠黏膜2份。
1.1.2 培养剂、普通肉汤、血清琼脂平板由本实验室自行配制，麦康凯琼脂（MCK）、伊红美蓝琼脂（EMB）按参考文献[3]制备；三糖铁琼脂培养基、三糖铁琼脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸橼酸盐琼脂斜面、葡萄糖微量生化反应管、乳糖微量生化反应管、麦芽糖微量生化反应管、甘露醇微量生化反应管购自杭州微生物试剂有限公司，10种药敏试纸购自北京天坛生物技术有限公司。
1.1.3 实验动物 12只小白鼠。
1.1.4 药敏试验抗生素药敏纸片青霉素（PG）、丁胺卡那霉素（AKN）、头孢噻肟（CTX）、复合磺胺（SXT）、庆大霉素（GEN）、妥布霉（TOB）、苯唑青霉素（OXA）、头孢唑啉（CFZ）、头孢三嗪（CRO）、氟派酸（NOR）。
1.2 方法
1.2.1 细菌分离培养与镜检
将待检样品接种于普通肉汤进行细菌培养，置37℃温箱培养12～16h观察结果；然后将培养物分别划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板进行细菌培养，37℃温箱培养20-24h后挑取平板上可疑菌落抹片革兰氏染色镜检。
1.2.2 生化试验
生化鉴定挑取经纯培养的菌落分别接种于三糖铁琼脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸橼酸盐琼脂斜面和葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇等发酵管，37℃培养24 h。
1.2.3 致病性试验
将分离菌的肉汤纯培养物对10只健康小白鼠分别腹腔注射0.4～0.5 mL，另2只小白鼠腹腔注射0.4～0.5 mL无菌肉汤培养液作为对照，24～48 h 死亡或发病者取肝脏抹片革兰氏染色镜检。
1.2.4 药敏试验
采用药敏纸片扩散法[4],37 ℃培养18～24 h 后观察结果并测量抑菌圈。
2 结果
2.1 分离培养疑似培养物在麦康凯琼脂培养20h后均为红色菌落，在伊红美蓝琼脂上培养20h后为中心暗蓝黑色并有绿色金属闪光的菌落；革兰氏染色镜检均为革兰氏阴性中等大小杆菌。
2.2 生化反应从7份样品中分离的细菌经生化鉴定后，确定均为大
肠埃希氏菌，具体结果见表1：
表1：大肠杆菌生化鉴定结果
2.3 致病性结果将分离菌的肉汤纯培养物对12只健康小白鼠分别
腹腔注射0.4～0.5 mL，另2只小白鼠为对照，24～36 h内死亡6只,48 h后死亡2只,另2只发病, 对照鼠不发病。
取发病者肝脏抹片革兰氏染色镜检，结果均为革兰氏阴性中等大小杆菌。
2.4 药敏试验
药敏试验结果见表2。
表2 大肠杆菌抑菌圈直径测量结果
3 小结与讨论
3.1 鉴定结果
根据培养特性、形态、生化试验、致病性试验鉴定结果表明此细菌分离株为致病性大肠杆菌。
3.2 动物试验结果
根据动物试验结果，显示分离株毒力较强，为致病性大肠杆菌，可使小鼠发病率达100%，致死率达80%。
3. 3 治疗药敏试验结果
当前大多猪场致病性大肠杆菌对许多药物具有不同程度的耐药性，这可能与猪饲料中长期使用某些抗菌药物及滥用抗生素有关，因
此，使用药物治疗大肠杆菌病时，应根据药敏试验结果，选择敏感药物，且应注意交替使用。
从本次药敏试验结果可以看出，分离的大肠杆菌对青霉素（PG）、头孢噻肟（CTX）、复合磺胺（SXT ）、苯唑青霉素（OXA）等不敏感；对庆大霉素（GEN）、妥布霉（TOB）、头孢唑啉（CFZ）等中敏；而对头孢三嗪（CRO）、丁胺卡那霉素（AKN）、氟派酸（NOR）高敏。
因此，应该避免盲目使用抗生素,在治疗时采用广谱抗菌药与特效抗生素结合对症治疗，才能使病情得以控制，防止产生耐药性和错过治疗时机。
3.4 防治
大肠杆菌分布广泛，也是动物肠道内的正常寄居菌，当肠道内环境发生变化时,附着在肠黏膜上并大量繁殖,产生许多对宿主有害的
毒性物质，如肠毒素、内毒素及其他有害产物引起动物发病。
特别是初生仔猪十分易感，常发生严重腹泻和败血症，严重影响生长和造成死亡，给养猪业带来严重的损失。
而防控仔猪大肠杆菌病方面，结合多年的临床工作经验，笔者认为应该重点考虑以下三点：（1）加强饲养管理应从疫苗、药物预防、温度、湿度、饲料配方、环境卫生、消毒、饮水、饲养密度等方面采取综合的生物安全措施，做到预防为主。
（2）从源头上采取措施坚持自繁自养的原则，不从疫情不明的猪场引进种猪；做好母猪分娩前后的环境清扫和消毒工作，尽快让仔猪吸吮到初乳，使仔猪迅速获得初乳抗体，以增强抵抗力。
（3）药物防治需慎重不要盲目的长期大剂量使用某种药物，
以免造成耐药菌株的出现。
且由于大肠杆菌易产生耐药性，临床用药时建议以药敏试验结果为依据，有指导性的、科学的使用抗生素。
这样不但能够克服了用药的盲目性，而且可大大缩短疫病治愈的时间，节约生产成本。
参考文献：
[1]蔡宝样．动物传染病诊断[M】．南京：江苏科学技术出版社，1993：
280～288
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