大鼠大脑中动脉栓塞模型的建立

ＡＢＳＴＲＡＣＴ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ： Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ（ＭＣＡＯ） ｉｎ ｒａｔｓ ｓｏ ｔｈａｔ ｔｏ ｃａｒｒｙ ｏｕｔ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ． Ｍｅｔｈｏｄｓ： Ｓｐｒａｇｕｅ － Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｓｓｉｇｎｅｄ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ： Ｍｏｄｅｌ ａｎｄ Ｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ （ＯＰ）． Ｍｉｄｄｌｅ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｂｙ ｔｈｒｅａｄ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｉｎ ａｌｌ ｒａｔｓ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ． Ｔｈｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ， ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｂｒａｉｎ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ． Ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｐｅｎｕｍｂｒａ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ＭＲＩ，ｔｏｏ． Ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｃｉｄａｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘｅｓ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ： Ｔｈｅ ｒａｔｓ ｉｎ Ｓｈａｍ ＯＰ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ａｌｌ ａｌｉｖｅ． Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｔｗｏ ｒａｔｓ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｄｉｅｄ ｉｎ ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｏｎｅ ｒａｔ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｎｏｔ ｂｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｔ ７ ｒａｔｓ ａｌｌ ｈａｄ ｔｈｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ Ｈｏｒｎｅｒ ｉｎ ｌｅｆｔ ｓｉｄｅ， ａｎｄ ｔｈｅ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ ｗａｓ １ ｔｏ ３． Ｏｂｖｉｏｕｓ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｃｈａｎｇｅｓ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ． Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｇｒｅａｔ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｂｙ ＭＲＩ． Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ＳＯＤ ａｎｄ ＧＳＨ － ＰＸ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ Ｓｈａｍ ＯＰ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ＭＤＡ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ Ｓｈａｍ ＯＰ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ： ＭＣＡＯ ｉｓ ｓｕｃｃｅｓｓ．Ｔｈｉｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ＭＣＡＯ ｍｏｄｅｌ． ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ Ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ； Ｍｏｄｅｌ； Ｒａｔ
对侧前肢不能完全伸展； ２ 分： 爬行时向对侧转圈； ３ 分： 行走时身体向偏瘫侧倾倒； ４ 分： 不能自发行走， 意识丧失。１～３ 分为造模成功。 １．４．３ 病理学检查 １．４．３．１ ＴＴＣ 染色： 术后 ２４ ｈ， 将实验大鼠断头取脑， 将脑从额极向后连续冠状切面， 约 ２ ｍｍ 切一层， 将 脑片置于 ２％的 ＴＴＣ 溶液中， 于 ３７ ℃孵育 ３０ ｍｉｎ， 取 出置于 １０％多聚甲醛液中固定， 拍照， 正常脑组织着 鲜红色， 梗死脑组织着白色。 １．４．３．２ ＨＥ 染色： 常规脱水、透明、浸蜡、包埋， 脑组 织连续切片， 厚度 ５ μｍ， 裱片于涂有粘附剂的 载 玻 片上， 烤片后置于室温备用， 常规 ＨＥ 染色， 封片， 光 镜下观察病理变化。 １．４．４ 磁 共 振 成 像 检 查 于 造 模 后 进 行 磁 共 振 检 查。ＭＲＩ 扫描方式： 使用 ＧＥ １．５Ｔ Ｔｗｉｎ Ｓｐｅｅｄ Ｉｎｆｉｕｉｔｙ ｗｉｔｈ Ｅｘｃｉｔｅ Ｉ 超导型磁共振成像系统， 扫描序列包括 ＭＲＩ 冠状位弥散加权成像（ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｗｅｉｇｈｔｅｄ ｉｍａｇ－ ｉｎｇ， ＤＷＩ） 检查和弥散张量成像（ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｔｅｎｓｏｒ ｉｍａｇ－ ｉｎｇ ， ＤＴＩ） 检 查 。ＤＷＩ： 重 建 表 观 弥 散 系 数 （ ａｐｐａｒｅｎｔ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ， ＡＤＣ） 图。ＤＴＩ： 重建平均弥散系 数 （ａｖｅｒａｇｅ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ， ＤＣａｖｇ）图 ， 部 分 各 向 异性（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ ａｎｉｓｏｔｒｏｐｙ ， ＦＡ）图。 １．４．５ 血 清 ＳＯＤ 活 性 、ＧＳＨ－ Ｐｘ 活 性 、ＭＤＡ 含 量 测 定 测 定 造 模 前 后 血 清 抗 氧 化 指 标 ＳＯＤ 和 ＧＳＨ－ ＰＸ 活性、ＭＤＡ 含量。ＳＯＤ 活性测定采用黄嘌呤氧化 酶法， ＧＳＨ－ Ｐｘ 活性测定采用 ＤＴＮＢ 直接法， ＭＤＡ 含 量测定采用硫代巴比妥酸（ ＴＢＡ） 法。 １．５ 统 计 处 理 各 项 指 标 均 以 ｘ±ｓ 表 示 ， 采 用 ＳＰＳＳ１１．５ 统计软件进行分析。两组间比较采用 ｔ 检验。 ２ 结果 ２．１ 体 征 及 神 经 功 能 缺 损 评 分 假 手 术 组 大 鼠 全 部存活， 模型组除 ２ 只因麻醉过度死亡、１ 只插线未 成功 外 ， 其 余 ７ 只 均 出 现 左 侧 Ｈｏｒｎｅｒ 征 ， 神 经 功 能 缺损评分在 １～３ 分之间， 达到模型成功标准， 模型成 功率为 ７０％。 ２．２ 病理检查结果 经 ＴＴＣ 染色， 模型组大鼠脑组 织形态见显著病理改变， 神经细胞体积明显缩小， 染 色加深， 胞浆及胞核固缩， 胞突消失， 部分细胞呈三 角形， 胶质细胞亦固缩， 神经细胞、胶质细胞及毛细 血管、小血管与周围脑间质的间隙显著增大， 间质疏 松。假手术组大鼠脑组织神经细胞未见异常， 胞突形 态规则， 神经细胞、胶质细胞及毛细血管、小血管与 周围脑间质的间隙未见加大， 间质亦脑 中 动 脉 栓 塞 （ ＭＣＡＯ） 模 型 ， 以 便 今 后 进 一 步 进 行 缺 血 性 脑 梗 死 方 面 的 研 究 。 方 法 ： 将 大
鼠 随 机 分 成 模 型 组 和 假 手 术 组 ， 采 用 线 栓 法 建 立 大 鼠 左 侧 ＭＣＡＯ 模 型 ， 术 后 观 察 体 征 ， 进 行 神 经 功 能 缺 损 评 分 、脑
第 １３ 卷３ 期 ２００７ 年 ９ 月
天津医科大学学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＴＩＡＮＪＩＮ ＭＥＤＩＣＡＬ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
Ｖｏｌ． １３， Ｎｏ． ３
Ｓｅｐ． ２００７
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大鼠大脑中动脉栓塞模型的建立
常 红， 黄国伟， 刘 莉， 王晓峰， 刘欢， 王永明， 张雪君 （ 天津医科大学公共卫生学院， 天津 ３０００７０）
随着当今社会的老龄化， 脑血管病发病率不断 上升， 是目前公认的危害人类健康最重要的疾病之 一。脑血管疾病以缺血性脑梗死和脑出血为主要病
基金资助：天津市高等学校科技发展基金计划项目（ ２００４０１１４） 作者简介：常红（ １９６６－ ） ， 女， 副教授， 硕士， 研究方向： 营养卫生； 黄 国 伟（ １９６２－ ） ， 男， 教授， 硕士， 研究方向： 营养卫生。
组织病理学检查、磁共振成像（ ＭＲＩ） 检查、血清抗氧化指标测定。 结果： 假手术组大鼠全部存活， 模 型 组 除 ２ 只 因 麻
醉过度死亡、１ 只插线未成功外， 其余 ７ 只均出现左侧 Ｈｏｒｎｅｒ 征， 神经功能缺损评分在 １～３ 分之间。模型组大鼠脑组
织可见显著病理改变， ＭＲＩ 检查脑组织缺血病变明显。模型组血清 ＳＯＤ 和 ＧＳＨ－ Ｐｘ 活性高于假手术组， ＭＤＡ 含量低
ＣＨＡＮＧ Ｈｏｎｇ， ＨＵＡＮＧ Ｇｕｏ－ ｗｅｉ， ＬＩＵ Ｌｉ， ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ－ ｆｅｎｇ， ＬＩＵ Ｈｕａｎ， ＷＡＮＧ Ｙｏｎｇ－ ｍｉｎｇ， ＺＨＡＮＧ Ｘｕｅ－ ｊｕｎ （ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ ，Ｔｉａｎｊｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｔｉａｎｊｉｎ ３０００７０， Ｃｈｉｎａ）
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第 １３ 卷
遗留不同程度的残疾， 从而给国家和众多家庭带来 沉重的经济负担［１］。本研究采用线栓法建立大鼠大脑 中动脉缺血模型， 通过对神经细胞形态学的观察、脑 组织病理学检查、磁共振检查以及抗氧化指标的测 定， 证实造模成功， 为今后进一步进行缺血性脑梗死 方面的研究打下基础。 １ 材料与方法 １．１ 实 验 动 物 （ ２３０ ±３０） ｇ 清 洁 级 健 康 成 年 Ｓｐｒａｇｕｅ－ Ｄａｗｌｅｙ（ ＳＤ） 大 鼠 ２０ 只 ， 雌 雄 各 半 ， 购 自 北 京大学医学部实验动物科学部。 １．２ 试剂与器材 动脉夹、缝 合 线 、缝 合 针 ， 碘 伏 、 剪刀、镊子、直径 ０．２６ ｍｍ 尼龙钓丝、氯化三苯基四 氮唑（ ＴＴＣ） ， １０％水合氯醛。 １．３ 研究方法 １．３．１ 动物分组及处理 动物自由摄食饮水， 适应 环境 ３ ｄ， 大鼠随机分成两组： 模型组和假手术组。模 型组采用线栓法造大鼠左侧大脑中动脉栓塞（ ｍｉｄ－ ｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ， ＭＣＡＯ） 模 型 ； 假 手 术 组 除不插线外， 其余手术步骤同模型组。 １．３．２ 手 术 操 作 大 鼠 用 １０％水 合 氯 醛 腹 腔 注 射 麻醉， 仰卧固定于手术台上， 颈部正中切口， 剪开浅 筋膜， 显露左侧胸锁乳突肌。钝性分离胸锁乳突肌 与胸骨舌骨肌间的肌间隙， 暴露左侧颈总动脉 （ｃｏｍｍｏｎ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ， ＣＣＡ）和迷走神经。钝性分离 ＣＣＡ 和 迷 走 神 经 。 找 到 左 侧 颈 外 动 脉 （ｅｘｔｅｍａｌ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ， ＥＣＡ） 和 颈 内 动 脉 （ｉｎｔｅｍａｌ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ， ＩＣＡ）分 叉 ， 分 离 ＥＣＡ、ＩＣＡ， 结 扎 ＥＣＡ 近 分 叉 端。在近心端和分叉前分别用动脉夹夹住 ＣＣＡ， 在 距动脉分叉 ５ ｍｍ 处用针扎一小口， 插入栓线， 松开 分叉前的动脉夹， 将栓线缓慢向 ＩＣＡ 插入， 至 ＩＣＡ、 ＥＣＡ 交 叉 处 时 ， 调 整 插 线 角 度 ， 目 视 线 栓 头 部 进 入 ＩＣＡ 而不是 ＥＣＡ。继续将线栓缓慢向 ＩＣＡ 入颅方向 推进， 直到标记至分叉处为止。将栓线与 ＣＣＡ 结扎 固定， 松开近心端动脉夹， 剪除线栓多余末端， 最后 缝合筋膜、皮肤。假手术组除不插线外， 其余手术步 骤同模型组。 １．４ 观察指标与测定方法 １．４．１ 造模成功体征 左侧 Ｈｏｒｎｅｒ 征［２］（ 瞳孔缩小、 上眼睑下垂、眼球内陷） ， 右前肢瘫痪， 大鼠麻醉清醒 后， 提尾悬空时右侧前肢内收、屈曲， 自主运动时身 体向右侧转圈。 １．４．２ 神 经 功 能 缺 损 评 分 Ｌｏｎｇａ 评 分［２］分 级 标 准 为： ０ 分： 无神经系统功能缺损症状， 活动正常； １ 分：