大鼠脑缺血模型制作
大鼠缺血模型
大鼠和小鼠的优势
1. 大鼠品种多，易于饲养，价格低廉 2. 纯种鼠属近亲交配，基因型相似，脑血管解剖和生理机能也相 似 3. 大鼠脑血管解剖和生理机能接近于人类 4. 脑血管损伤部位恒定，实验重复性好 5. 动物存活时间长，利于脑缺血相关病理改变过程的研究 6. 脑体积大小适宜，易施低温固定技术和组织生化分析 7. 有关系列大鼠的生理、药理和生化方面的实验资料可供分析比 较 8. 克服了体外实验无法实施再灌流的缺陷 9. 沙土鼠缺乏后交通动脉及完整的基底动脉环，两侧大脑供血相 对独立，通过闭塞一侧或双侧CCA即可复制效果明显的同侧或 双侧脑缺血模型
栓线法
由 ECA 插入 4 -0 尼龙线进入 ICA , 阻断 MCA起 始端而导致局灶性脑缺血。通过提拉插线可以造成 再灌流损伤模型。
优点：该法手术创伤小, 动物易长时间存活血栓形
成过程与人类相似可选择皮层梗塞部位
缺点：较早地导致终末动脉及微血管永久性闭塞 ,
不利于扩血管及促进侧支循环作，切开皮肤， 暴露颅骨，静脉注射光敏材料虎红酸钠，用特 定冷光源(500--600nm)照射切口处颅骨，光 线透过颅骨与血管内的光敏物质接触，激发光 化学反应而产生单线态氧，直接损伤血管内皮 细胞而诱导血栓形成。 优点：不开颅，手术创伤小，动物易长时间存 活，血栓形成过程与人类近似，适用于抗血小 板、抗血栓及内皮细胞保护药物的急慢性动物 实验研究。 缺点：较早地导致终未动脉及微血管永久性闭 塞，不利于扩血管及促进侧支循环作用的研究
开颅法、光学法、栓塞法、栓线法。
开颅法
麻醉动物，耳眼连线的中点垂直切开皮肤，通过钝
性分离颞肌，开颅后暴露MCA，用电凝器横过嗅束旁 的MCA使其凝闭，用10号手术丝线结扎MCA，造成MCA 支配区局灶性脑缺血模型。
大鼠局灶性脑缺血模型的建立
缺 血 侧 ， 侧 为 正 常 对 照 。 １ 水 合 氯 醛 腹 腔 内 注 射 麻 醉 ， 右 用 Ｏ 游 离左 侧 颈 总 动脉 （ Ａ） 甲状 腺 上 动脉 及 其 细 小 分 支 ， ＣＣ ， 分
～ １ 者 ， 水 肿 不 明 显 。光 镜 观 察 ： 组 左 侧 大 脑 皮 层 可 见 分 脑 Ｃ
高 ， 起 人 们 对 溶 栓 疗 法 的 重 新 认 识 。 目 前 适 用 于 溶 栓 研 有 不 足 之 处 。我 们 采 用 并 改 良 Ｏｖ ｒ ａ ｒ ｅ ｇ ａ ｄ ＫⅢ 等 的 颈 内 动 脉 注 入 自体 血 凝 块 的 方 法 ， 作 制
大 鼠 局 灶 性 脑 缺 血 模 型 ， 模 型 具 有 与 人 类 脑 缺 血 极 其 相 似 此
的特 点 ， 适 用 于溶 栓研 究 ， 报 道如 下 。 最 现
１ 材 料 与 方 法
散 在 的 小 缺 血 灶 ， 经 细 胞 轻 度 肿 胀 ， 神 经 元 胞 核 及 胞 浆 神 但
分 为 Ｃ 、 Ｃ Ｃ 、 共 ３组 （ ： 指 长 度 为 ２ ｍ 的 血 栓 栓 子 制 注 Ｃ ａ ｒ
隙 增 大 ， 质 间 隙 略 增 大 。缺 血 ２ ｈ组 缺 血 区 淡 染 的 同 时 缺 白 ４
血 局部 可 见 神经 元 变性 ， 固性 坏 死 ， 胞 周 围间 隙增 大 ， 凝 细 胞 浆 均匀 呈 嗜伊 红 改变 ， 核 结构 不清 ， 色加 深 。 期 的缺血 胞 染 此 范围最 大 ， 显 著 的 改变是 此 期 缺血 组 织 与正 常 组织 的 分界 最 最 清 晰可 辩 ， 质疏 松 ， 显淡 染 ， 大 量空 泡形 成 。 血 ４ｈ 白 明 有 缺 ８ 组 缺 血 中 心 区 可 见 凝 固 性 坏 死 ， 经 元 胞 浆 与 胞 核 结 构 不 神
大鼠脑缺血模型制作
大鼠脑缺血模型制作大鼠脑缺血是一种神经病理学状态，常用于研究脑缺血和再灌注相关的疾病，如中风和心脑血管疾病。
制作大鼠脑缺血模型可以帮助研究者深入了解脑缺血的机制，并探索治疗方法。
下面将介绍一种常用的大鼠脑缺血模型制作方法。
材料准备：1.正常健康的大鼠（约250-300g）2.异氟醚（用于麻醉大鼠）3.氧化氮（用于麻醉大鼠）4.0.9%氯化钠溶液（生理盐水，用于预先裂解血栓）5.弹簧夹（用于阻断大脑供血）6.血管夹（用于再灌注）7.生理盐水或PBS（用于清洗伤口和冲洗大脑）操作步骤：1.麻醉大鼠-以适当的浓度向氧化氮罩中送气，让大鼠吸入异氟醚麻醉。
-确定大鼠是否处于麻醉状态，如失去帕金森反射。
-为了确保大鼠的安全性和麻醉质量，要定期监测大鼠的许多生理参数，如呼吸频率、血氧饱和度和体温。
2.颅窗手术-将大鼠固定在手术台上，用5%碘伏消毒实验区域的皮肤。
-在头部进行剃发和消毒。
- 用手术刀在头部切开皮肤，在颅骨上切开一个直径约 1 cm的圆洞。
-清除头骨上的组织，暴露出颅骨。
-用电动开骨钻在颅骨上进行微抖动，直到打开一个圆洞。
通过控制速度和钻头的压力来避免损伤脑组织。
-用细钳将头皮撕开，暴露出脑膜。
3.制作脑缺血-用生理盐水或PBS洗涤脑膜，以确保大脑的清洁。
-用弹簧夹仔细阻断大脑的供血。
通常选择大脑的前动脉（MCA）或双侧MCA，使大脑区域发生缺血。
-检查大鼠是否出现神经功能缺陷，如软瘫、不对称性和意识丧失等。
-记录缺血时间，通常在20-30分钟之间。
-选择再灌注时间，通常是60分钟。
4.再灌注-在再灌注前，用生理盐水或PBS冲洗大脑。
通过防止缺血时间和再灌注时间的太长，以减少实验操作引起的伤害。
-用血管夹将阻断的血管解除，实现再灌注。
-观察大鼠是否恢复神经功能，例如排尿、动作和体位等。
-保持大鼠体温适宜，定期监测大鼠身体参数。
5.实验后处理-在实验结束后，用生理盐水或PBS冲洗伤口。
-给大鼠提供足够的水和食物，让其恢复。
脑血管病动物模型制作步骤及方法
脑血管病动物模型制作步骤及方法1自发性脑梗死模型高血压动物可形成自发性脑梗死。
常用的有原发性高血压和继发性高血压两大类。
前者以日本种的自发性高血压大鼠(SHR)及其易卒中亚型(SHRsp)为常用，后者为各种肾性高血压动物。
这种脑梗死与人类的脑梗死发病情况为接近，是目前较为理想的动物模型之一，国内主要的实验动物研究机构都有供应。
2沙鼠大脑中动脉缺血模型【操作步骤】成年沙鼠，10％水合氯醛(4ml/kg)腹腔麻醉，沿腹部中线于颈部切开。
剥离出一侧颈动脉，用银制钳夹夹闭。
考虑实验需要可实行长期夹闭或可再灌注。
【结果分析】由于沙鼠后交通动脉缺失，Willis环前后不连续，故经颈部夹闭一侧总动脉可以方便地造成同侧半球缺血，可依据沙鼠表现的体征，结合眼底观察镜观察眼底缺血情况判别。
3急性大鼠大脑中动脉阻塞全脑缺血模型【操作步骤】成年SD或Wistar大鼠，10％水合氯醛(4ml/kg体重)麻醉。
右侧卧位，在左眼外缘到左外耳道连线的中点，垂直于连线切开皮肤约2cm，沿颧弓和下颌骨，用文氏钳将手术面撑大，暴露鳞状骨的大部分，用牙科钻在颧骨前联合前内2cm处钻孔开颅。
在手术显微镜下切开硬脑膜，暴露出大脑中动脉，分离出中动脉周围的软脑膜和蛛网膜，使中动脉游离。
用双电极(电压12V)电灼损毁Willis环起始部至嗅沟段的大脑中动脉，使之阻塞。
为防止电极的电流对脑组织造成电损伤，在操作过程中不断向中动脉周围滴加生理盐水，并尽量缩短操作时间。
创面覆盖一小块明胶后，缝合肌肉和皮肤。
【结果分析】大脑中动脉从Willis环发出后向外跨过嗅束蜿蜒走行于大脑的外侧面，供应大部分的大脑半球，大脑中动脉在Willis环起始到嗅沟区发出许多的分支，供应豆壳复合体，所以电灼此段大脑中动脉的主干血流，复制中风模型的成功率较高。
用本实验手术方法复制的大鼠中风模型的成功率较高，死亡率低，较为理想，有面积不等的梗死区出现，行为障碍约占90％。
由于手术部切断颧弓，术后基本不影响动物的采食行为，并可以进行长期的观察，有利于建立慢性中风动物模型。
大鼠窒息性心跳骤停全脑缺血模型制作的改进
大 鼠窒息 性 心 跳 骤停 全 脑 缺 血 模 型 制作 的改 进
廖 常莉 。 姜 鲜。 张 英。 欧册 华 （ 州医 学院附属 医院 ， 泸 四川 泸 州 ６６０ ） ４００
摘要 ： 目的
对 大 鼠窒 息性心跳骤停 全脑缺 血模型进行 改进 。方法
（ ０ ０ ） ａｄｔ ｅｒｎ ｅ ｓｉ ｅｅｌ ｅ ａ ｏｅｉ ａ ｏｐ（ ０ ０ ） ｏ ｃ ｓ ｎ Ｒ ｔ ｄ ｌ ｆ ｓ Ｐ＜ ． １ ， ｎ ｅｎｕ ａ ｄｎｉｅ ｗ ｒ ｗ ｒｈ ｎｔ ｓ ｓ ｍ ｇ ｕ Ｐ＜ ．１ ．Ｃ ｎ ｌ ｉ ｓ ａ ｍｏｅ ｏ — ｈ ｏｌ ｔｓ ｏ ｔ ｈ ｎｈ ｒ ｕｏ ａ
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全脑缺血再灌注动物模型建立方法
全脑缺血再灌注动物模型建立方法引言全脑缺血再灌注是一种临床上常见的危重症，常见于心脏骤停、溺水等情况下，出现全脑缺血缺氧，随后通过复苏措施进行再灌注。
建立全脑缺血再灌注动物模型对于深入研究相关疾病的发病机制，评估治疗方法具有重要意义。
本文将介绍一种常用的全脑缺血再灌注动物模型的建立方法。
动物模型选择建立全脑缺血再灌注模型时，主要选择小鼠或大鼠作为实验动物。
一般情况下，小鼠更为常用，因其易于操作、成本较低，且其脑血管结构与人类相似，因此具有较高的可比性。
对于大鼠，其相对较大的体积能够更好地模拟人体情况，但操作相对较为复杂。
手术操作准备在进行全脑缺血再灌注动物模型的建立前，需要进行手术操作的准备工作。
首先需要进行动物的麻醉和固定，确保手术操作的安全性。
其次需要准备全脑缺血再灌注模型所需的仪器和设备，包括导管、监测仪器等。
在手术操作前，还需要对实验动物进行术前处理，包括禁食、定时给予抗生素等。
手术操作步骤1. 麻醉和固定：将实验动物置于麻醉箱内，使用合适的麻醉药物使其达到麻醉状态。
随后将其固定在手术台上，以确保手术操作的稳定性。
2. 手术部位暴露：在麻醉状态下，对实验动物进行皮肤消毒，随后进行手术部位的切开，暴露出颅骨表面。
3. 血管结扎：通过显微外科手术操作，对实验动物的颅骨表面的动脉和静脉进行结扎，以模拟全脑缺血的状态。
4. 缺血时间控制：根据实验设计的需要，控制全脑缺血的时间，一般为15至20分钟。
5. 再灌注：在全脑缺血一定时间后，通过解开血管结扎，使血液重新灌注至大脑。
6. 术后处理：对实验动物进行术后处理，包括给予液体、保暖、饲养等。
检测指标和评价方法建立全脑缺血再灌注模型后，需要对实验动物进行一系列的检测和评价，以评估其神经功能恢复情况。
常用的评价指标包括神经行为学评分、脑组织病理学检测、神经元凋亡检测、脑组织炎症因子检测等。
通过对这些指标的检测和评价，可以全面地评估全脑缺血再灌注模型的建立效果，为后续的实验研究提供可靠的依据。
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型的制备
线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的方法研究马贤德1孙宏伟1 柴纪严1 赵金茹1（1 辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110032；）摘要①目的建立一种比较系统，操作简单，成功率高的大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注动物模型，达到只要读者根据本文所述的方法操作就能制作出MCAO再灌注模型的目的。
②方法成年健康雄性 SD大鼠40只，参照Longa法并适当改进建立MCAO模型20只，假手术组20只。
本文将详细叙述手术过程以及再灌注时间点的合理选择。
最后利用行为学测试、四氮唑(TTC)染色对模型成功与否进行判定。
③结论线栓法是一种操作简单的制备MCAO 再灌注动物模型的方法，并且此方法的再灌注效果较为明显。
关键词动物模型；脑缺血；再灌注；线栓法Establishment a model of rat ischemia-reperfusion injury with intraluminal sutureMa Xian-de1 Sun Hong-wei1 Chai Ji-yan1 Zhao Jin-ru1(1.Liaoning University of Chinese Traditional Medicine, Shenyang, 110032) Abstract: Objective To establish a model of rat ischemia-reperfusion injury, in terms of the model, the operation will be simple, and the achievement ratio will be high. Methods: 40 Male Sprague-Dawley ( SD ) rats were separated into two groups randomly: 20 were model of rat ischemia-reperfusion injury based on Longa method, and the other 20 were sham-operated group. The process of the operation and the selection of different time point following ischemic-reperfusion were discussed in the paper. What’s more , the model was appraised by behavioral test and Triphenyl Tetrazolium Choloride（TTC）Staining. Conclusion: The operation of intraluminal suture method is very simple for the establishment of model of rat ischemia-reperfusion, what’s more, the effect of reperfusion is very obvious.Key words: Animal Model, ischemia, reperfusion, intraluminal suture脑缺血再灌注动物模型是研究缺血性脑血管病的一条重要途径，因为脑缺血再灌注动物模型具有很好的重复性并能最大程度模拟人类缺血性卒中的发生。
全脑缺血动物模型制作步骤及方法
全脑缺血动物模型制作步骤及方法1两动脉阻断法(occlusion of bilaterial carotis communis artery) (1)复制方法 SD大鼠，雌雄不拘，体重为250～300g。
经腹腔注射水合氯醛(350～400mg/kg体重的剂量)或戊丨巴丨比丨妥丨钠(50～60mg/kg体重的剂量)麻醉后，仰卧位固定，剃除颈部毛发，手术区域皮肤常规消毒。
颈前正中切口，分离双侧颈总动脉(carotis communis artery, OCA)，夹闭双侧CCA，同时合并低血压以减少脑血流量，造成急性脑缺血。
由于啮齿动物(沙土鼠除外)脑血液循环有较人类丰富的侧支循环，仅结扎双侧CCA不足以明显降低脑血流量(CBF)，因此结合降压药三丨甲噻吩、酚妥拉明或静脉放血等方法使动脉血压降低至50mmHg(6.7kPa)，使CBF降低至正常的5％～15％。
放血方法：由颈静脉插管至右心房，供放血并连续记录EEG。
采用抽血的方法放血，失血达80mmHg(10.7kPa)时结扎双侧颈动脉，再继续抽血，使血压降至6.7kPa。
(2)模型特点此方法的优点是操作简便，用一次性手术即可完成，阻断可逆，可人为控制动物呼吸。
采用这种方法复制的模型，能进行缺血再灌流损伤的研究，模拟了临床上休克、心功能不全、脑血管严重狭窄或阻塞合并血液低灌流引起的脑循环障碍，造成不同程度的脑组织缺血损伤。
因而，对于探讨人类缺血性脑损伤的发病规律，评价抗脑缺血药物的疗效等有价值。
缺点是：①模型不能在清醒动物上复制，无法研究血管狭窄后行为学的变化。
②常因存在侧支循环而造成缺血不，部位不宜确定。
③脑缺血时限长，有时导致脑缺血后抽搐、癫癎等并发症的发生。
且由于低血压状态，可干扰其他器官、组织的供血和实验结果。
此方法除可用于大鼠外，也可用于兔、猫和猴的性脑缺血。
2四动脉阻断法(occlusion of four blood vessels)(1)复制方法 SD大鼠，雌雄不拘，体重为250～300g。
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脑缺血模型分类及制备
1.全脑缺血模型
一般采用四血管闭塞法制作大鼠全脑缺血模型。
也有人通过结扎双侧颈动脉闭塞配合低氧或放血降压使全脑缺血。
但是全脑缺血模型与人类通常的脑梗死（多为单一血管闭塞）情形不一致, 且不能进行健患侧自身对照所以全脑缺血的动物模型在脑缺血研究中用的较少。
2. 局灶性脑缺血模型
2.1.线栓法：大脑中动脉阻塞 (middle cerebral artery occlusion，MCAO) 是目前最常用的局灶性脑缺血模型,MCAO 模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。
从ECA插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。
此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。
线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点，用于研究神经元对缺血的敏感性、耐受性，药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想，同时也具有对全身影响小、动物存活时间长的特点，适于慢性脑损伤的研究。
控制好易变因素，可避免实验结果的不稳定性。
1.0实验动物
1.2 SPF级SD大鼠，健康，雄性，体重为250g-300g
1.3.建模方法
1.4 颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉，颈内动脉和颈外动脉。
使用6-0丝线在距离颈总动脉分叉4mm处结扎颈外动脉远心端，在颈外动脉穿入另一根6-0丝线，在靠近颈总动脉分叉处打一个活结。
3.使用动脉夹夹闭颈总动脉。
在距离颈总动脉分叉处3mm处的颈外动脉上剪一个小口，将一根头端处理过的0.33mm直径的尼龙线从小口中插入，进入颈内动脉，并向内插入大脑中动脉，尼龙线的插入深度距离颈总动脉分叉处约16±1mm。
4.缺血后90min拔掉线栓，用6-0丝线结扎外动脉近心端，用3-0丝线缝合颈部伤口，活力碘消毒伤口，将大鼠放在加热垫上，待清醒后放入恒温抚养箱饲养。
2.2 化学刺激诱导血栓性阻断法
首先开颅暴露嗅束和大脑下静脉之间的大脑中动脉，并置一小片塑料薄膜保护血管周围组织，将浸有50% FeCl3溶液10ul的定量滤纸敷于暴露的大脑中动脉上30min。
术后24h大脑中动脉内即可形成混合性血栓。
其优点既能反应抗栓药又能反应溶栓药的药效，缺点是必须开颅，创伤较大。
2.3 微栓子阻断法
微栓子栓塞法是将微栓子分段注入颈内动脉，这样不仅颅内形成栓塞，而且颅外也栓塞，有一定的缺点。
近来有研究者改良了微栓子阻断法，将导管插至大脑中动脉起始部的血管腔内，通过导管把微栓子注入颅内段, 对栓子进入大脑中动脉供血区所致的损伤进行组织病理学分析等，这种模型成功率高些，但是也存在一定缺点。
2.4 开颅阻断法
利用显微外科技术，开颅暴露大脑中动脉，电凝阻断大脑中动脉的不同部位，发现在基底核和皮质区这些部位可形成相对比较恒定的梗死灶。
这种模型在一定程度上接近人类脑缺血的情况，但在实验过程中可能会一定程度上损伤相邻的部分脑组织。
2.5光化学诱导法
通过静脉途径注射光化学诱导剂玫瑰红B，然后用特定波长（560nm）的光束经颅骨表面照射大脑特定的部位,被照血管内产生光化学反应，引发血栓形成,建立大脑皮质血栓性梗死模型。
后来，又有人建立了老年大鼠光化学诱导局灶脑梗塞模型。
这类模型所造成的脑梗死现象和人类脑血栓形成的发病过程相似，并且根据此模型可以指导药物的研究。
然而毛细血管损伤所形成的脑血栓仍然和临床病人发生的脑血栓存在一定的差异。
2.6 内皮素诱导法
内皮素是一种内源性血管收缩活性物质，可通过其强烈持久的缩血管作用使局部脑血流量减少促进脑梗死形成外，还能直接损伤神经元及胶质细胞诱发脑缺血。
这种方法优点在于该模型可以控制脑缺血的再灌注时间，缺点在于需要开颅手术。
2.7地塞米松法
采用肌肉注射地塞米松的方法造大鼠血瘀模型，每日于大鼠后腿内侧肌注地塞米松溶液0.2mg|kg ，连续注射10d,血瘀模型成功时，麻醉动物分离两侧颈总动脉作结扎术，造脑缺血模型。