线栓法大鼠脑缺血再灌注模型的制备
复方脑肽节苷脂注射液激活线粒体自噬改善脑缺血再灌注损伤
复方脑肽节苷脂注射液激活线粒体自噬改善脑缺血再灌注损伤王明洋;冯璐;范姝婕;郑吉;李冬梅;杨楠;左萍萍;刘雁勇【摘要】目的：观察复方脑肽节苷脂注射液(CPCGI)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用并探讨其机制。
方法 Sprague-Daw-ley大鼠随机分成假手术组、模型组、CPCGI低剂量治疗组、CPCGI高剂量治疗组、阳性药金纳多组，每组10只。
线栓法制备大鼠大脑中动脉梗阻2h后复灌模型，即刻给药，连续14d。
术后1d、3d、7d和14d行神经功能症状缺损评分，术后14d行贴纸去除及平衡木行走实验，Western blotting检测损伤周围脑组织Beclin1、PINK1及Parkin的表达。
结果术后14 d，与模型组相比，各给药组大鼠神经功能缺损评分降低(P<0.05)，大鼠过杆时间明显缩短(P<0.01)，CPCGI给药组去除两侧前肢贴纸的时间缩短(P<0.05)。
模型组皮层组织中Beclin1及Parkin蛋白表达明显下降(P<0.01)，PINK1蛋白表达明显上升(P<0.01)，CPCGI各组均能逆转该作用(P<0.05)。
结论CPCGI的神经保护作用机制之一可能与激活线粒体自噬，改善线粒体功能有关。
%Objective To investigate the neuroprotective effect and possible mechanism of Compound Porcine Cerebroside and Ganglio-side Injection (CPCGI) on cerebral ischemia-reperfusion injury in rats. Methods Healthy adult male Sprague-Dawley rats were divided into sham group (n=10), model group (n=10), CPCGI low dosage group (n=10) and high dosage group (n=10), and control group (Ginkgo biloba extract, n=10). All the rats was subjected to middle cerebral artery occlusion (MCAO) for two hours and reperfusion except sham group, and received treatment for fourteen days once reperfusion started. They were tested with modified Neurological Severity Score one, three, seven and fourteen days afterMCAO, and adhesive-removal test and beam-walking test fourteen days after MCAO. The expression of Beclin1, PINK1 and Parkin were detected with Western blotting. Results Compared with the model group, the Neurological Severity Score reduced (P<0.05) and the time crossing the beam reduced (P<0.01) in all the medical groups fourteen days after MCAO, and the time removing the adhesive paper reduced in the CPCGI groups (P<0.01). The expression of Beclin1 and Parkin decreased and the PINK1 level increased in the model group (P<0.01), and it was reversed in all the CPCGI groups (P<0.05). Conclusion CPCGI could relieve the cerebral ischemia-re-perfusion injury in rats through the regulation in mitophagy.【期刊名称】《中国康复理论与实践》【年(卷),期】2016(022)007【总页数】4页(P750-753)【关键词】脑缺血再灌注损伤;复方脑肽节苷脂注射液;线粒体自噬;大鼠【作者】王明洋;冯璐;范姝婕;郑吉;李冬梅;杨楠;左萍萍;刘雁勇【作者单位】中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005【正文语种】中文【中图分类】R743.32［本文著录格式］王明洋，冯璐，范姝婕，等.复方脑肽节苷脂注射液激活线粒体自噬改善脑缺血再灌注损伤［J］.中国康复理论与实践，2016，22（7）:750-753. CITED AS:Wang MY，Feng L，Fan SJ，et al.Effect of Compound Porcine Cerebroside and Ganglioside Injection on cerebral ischemia-reperfusion injury in rats［J］.Zhongguo Kangfu Lilun Yu Shijian，2016，22（7）:750-753.脑卒中是目前全球第二大致死性疾病，且致残率最高［1-2］。
色甘酸二钠对大鼠脑缺血
第 49 卷第 5 期2023年 9 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.5Sep.2023DOI：10.13481/j.1671‑587X.20230511色甘酸二钠对大鼠脑缺血/再灌注损伤的改善作用及其机制朱娴, 陈薪旭, 陈奕斌, 黎昌炫, 刘杰, 王埮（海南医学院第一附属医院神经内科，海南海口570102）［摘要］目的目的：探讨色甘酸二钠（SCG）对缺血性卒中（CIS）大鼠神经功能和认知功能的影响，阐明其作用机制。
方法方法：选取80只雄性SD大鼠，随机选取18只作为假手术组，剩余大鼠采用线栓法构建大鼠脑缺血/再灌注（I/R）损伤模型。
将造模成功的45只大鼠随机分为I/R组、I/R+低剂量SCG组和I/R+高剂量SCG组，每组15只。
造模后24 h，I/R+低剂量SCG组和I/R+高剂量SCG组大鼠分别腹腔注射20 和60 mg·kg－1 SCG，连续2周。
采用改良的神经功能缺损程度评分（mNSS）法评估各组大鼠神经功能评分，2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色检测各组大鼠脑梗死面积，Y型迷宫实验检测各组大鼠记忆能力，电生理检测各组大鼠正确反应率、正确反应时间和兴奋性突触后电位（fEPSP）斜率，高尔基染色检测各组大鼠脑组织中海马齿状回区树突棘密度，免疫荧光法检测各组大鼠脑组织中海马齿状回区5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）阳性细胞数和双肾上腺皮质激素（DCX）蛋白表达水平， Western blotting法检测各组大鼠脑组织中脑源性神经营养因子（BDNF）、抗酪氨酸激酶受体B（TrkB）、神经生长因子3（NT-3）和抗酪氨酸激酶受体C（TrkC）蛋白表达水平。
结果：与假手术组比较，I/R组大鼠神经功能评分升高（P<0.05），脑梗死区域面积增大（P<0.05），正确反应率降低（P<0.05），正确反应时间增加（P<0.05），fEPSP斜率和树突棘密度降低（P<0.05），脑组织齿状回区BrdU阳性细胞数和DCX蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05），海马组织中NT-3蛋白表达水平升高（P<0.05），而BNDF、TrkB和TrkC蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。
大鼠线栓(MCAO)模型+灌注取脑+TTC染色
第一部分 线栓模型制作1、实验器材（从左到右）：第一行：干棉球、酒精棉球、10％水合氯醛＋注射器、碘伏＋棉签第二行：三种不同粗细的鱼线（鱼线最好在2.0、2.5mm处各用记号笔作好标记，便于观察进入距离）、弯盘内为手术器材第三行：记号笔、自制拉钩（皮筋+曲别针＋大头针）2、麻醉：可用饮料瓶自制捕鼠器（适用于不敢手抓大鼠的），用于打麻药，根据大鼠的重量选择不同粗细的饮料瓶（太粗了大鼠可在瓶中回头）。
效果图3、麻倒后绑在手术台上。
4、剪去颈前的鼠毛，碘伏消毒。
5、沿经部正中切开皮肤。
说明：切开皮肤前最好将结扎动脉的线事先剪好（后面会用到）。
6、钝性分离皮下组织。
如图：大鼠腹侧可见事先剪好的结扎线。
7、分离到气管前肌后，沿右侧胸锁乳突肌腱向下分离，见到颈动脉鞘后可上拉钩。
8、分离动脉鞘。
如图：分离好后见光滑的颈总动脉。
9、分离出颈总、颈外、颈内动脉，结扎颈总、颈外动脉，注意中间那根线不要系紧，用来插鱼线时防止出血的。
10、夹闭颈内动脉，用眼科剪将颈总动脉剪一小口。
11、插入鱼线，鱼线进入颈内动脉后按图中注释方法插（成功率在90%以上）。
说明：（1）这一步鱼线选择是关键，根据大鼠重量（作的多了后根据动脉粗细就可选择了）选鱼线。
我们的经验是：250g以下的选0.26mm的线，250-300g的选0.26mm蘸腊的或0.28的都可以。
（2）如果遇到鱼线怎么也查不进去的情况，可让大鼠休息一会，换细点的鱼线再试，这种情况不一定都是进到翼腭动脉了，我曾解剖过4例这种情况的大鼠，有三例都是在如颅的地方卡住了，可惜我们手里没有0.24mm的鱼线。
（3）通过实践，我们认为结扎或夹闭翼腭动脉没有必要，按我们的方法，熟练的话，从切开到缝合完毕也就是15分钟，算上准备工作（如麻醉、消毒等）半小时也可以搞定了，这样一上午两人作10只大鼠不成问题。
（4）我们体会最好用蘸腊的鱼线作模型，好处是进线深度控制的好，不容易出现蛛网膜下腔出血。
阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注损伤后 神经细胞焦亡的影响
阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞焦亡的影响曹瑜;邢丹【期刊名称】《中国临床神经外科杂志》【年(卷),期】2024(29)2【摘要】目的探讨阿托伐他汀(AVT)对大鼠脑缺血再灌注(CIR)损伤后神经细胞焦亡的影响及机制。
方法选取成年雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组(Sham组)、模型组(CIR组)、阿托伐他汀组(AVT组)以及miR-21抑制剂组,每组15只。
线栓法制备CIR损伤模型。
AVT组大鼠缺血后2、14 h给予AVT灌胃[10mg/(kg·d)],Sham组大鼠给予等量生理盐水灌胃,miR-21抑制剂组大鼠先脑室注射病毒液(1010pfu/只)预处理3d后建立CIR模型并在缺血后2、14h给予AVT灌胃。
CIR后1周,采用Lon-ga法进行大鼠神经功能障碍评分,干湿重法检测大鼠脑组织含水量,HE染色观察大鼠海马神经元形态学变化,qRT-PCR检测大鼠海马组织miR-21表达,免疫印迹法检测海马组织细胞焦亡相关蛋白(Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18)的表达。
结果与CIR组相比,AVT组大鼠神经功能评分明显改善(P<0.01),脑组织含水量明显降低(P<0.01),海马组织miR-21表达明显升高(P<0.01)、焦亡相关蛋白cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-1β和IL-18表达水平明显降低(P<0.01)。
与AVT组相比,miR-21抑制剂组大鼠上述指标显著逆转(P<0.05)。
结论AVT能够改善CIR大鼠神经功能损伤,机制可能与上调miR-21表达、抑制神经细胞焦亡相关。
【总页数】6页(P92-96)【作者】曹瑜;邢丹【作者单位】张家港市中医医院药学【正文语种】中文【中图分类】R743【相关文献】1.丁苯酞通过NLRP3炎性小体信号通路对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞焦亡的影响2.针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质细胞焦亡的影响3.基于NLRP3炎症小体探讨电针对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞焦亡的影响4.miR-22-3p靶向NLRP3表达对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞焦亡的影响5.橘皮素调控PI3K/Akt信号通路介导的自噬对脑缺血/再灌注损伤大鼠神经细胞焦亡的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的研究及体会
Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ａ ｎ ｄ Ｅｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｎ Ｍａ ｋ ｉ ｎ ｇ Ｒａ ｔ Ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｏ ｆ Ｍｉ ｄ ｄ ｌ ｅ Ｃｅ ｒ ｅ ｂｒ ａ ｌ Ａｒ ｔ ｅ ｒ ｙ Ｏｃ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ／ Ｒｅ ｐ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｂ ｙ ｔ ｈ ｅ Ｔｈ ｒ ｅ ａ ｄ Ｏｃ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ Ｚｈ ａ ｎ ｇ
（ ５） ： １ ２—１ ４ （ 收稿 日期 ： ２ ０ １ ３— ０ ８—２ ０ ） （ 修 回 日期 ： ２ ０ １ ３— ０ ９—０ ３ ）
９
冯 天艳 ，方 荣 ， 邓 改 改 ，等 ．根 皮 苷 对 小 鼠 Ｃ Ｃ １ 急 性 肝 损 伤 的保 护作 用 ［ Ｊ ］ ．中 药药 理 临床 ， ２ ０ １ ０ ， ２ ６ （ ５ ） ： ４ ７— ４ ９
鼠随机分为两组 ， 组１ 体重控 制为 ２ ３ ０～ ２ ４ ９ ｇ ； 组２ 体 重控制为 ２ ５ ０一 ， ２ ６ ９ ｇ ， 每组 １ ０只 。 以 改 良的 Ｌ ｏ ｎ ｇ ａ 法 使 用 特 定 型 号 栓 线 制 作
大 鼠大 脑 中动 脉 闭 塞 模 型 ， 缺血 ２ ｈ后 拔 出线 栓 实 现 再 灌 注 ， 并 评 估 两组 大 鼠 的 神 经 功 能 缺 损 情 况 ， 再 灌注 ２ ４ ｈ时取 脑行 ２ ， ３ ， ５一 氯 化 三 苯 基 四氮 唑 染 色 ， 计 算 并 比较 两 组 大 鼠的 死 亡 率 ， 神经功能评分和相对脑梗 死体积。结果 两 组 大 鼠的 死 亡 率 均 为 １ ０ ％，
５ ９ ７
１ １ 曹 丹 ，薛 冰 洁 ，黄 文 峰 ，等 ．湖北 海 棠 总 黄 酮 对 去 势 大 鼠骨 质 疏 松的影响 ［ Ｊ ］ ．中药 药 理 与 临 床 ， ２ ０ １ １ ， ２ ７ （ ５ ） ： ５ ６—５ 北 海 棠 总 黄 酮 对 成 骨 细 胞 增 殖 分
金纳多对脑缺血再灌注损伤大鼠MMP-9活性和血脑屏障通透性的影响
金纳多对脑缺血再灌注损伤大鼠MMP-9活性和血脑屏障通透性的影响杨霄鹏李秋芳1杨瑞玲2郭志松3（郑州大学第二附属医院神经内科，河南郑州450014）〔摘要〕目的探讨金纳多对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。
方法采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，将成模大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、金钠多治疗组，各组按缺血再灌注6、12、24h 三个时间点分为3个亚组，每组10只。
用RT-PCR 方法测定损伤侧脑组织中MMP-9活性变化，用伊文思蓝方法测定同侧脑组织血脑屏障通透性。
结果（1）随缺血再灌注时间延长，MMP-9含量、EB 含量开始逐渐增加，各组之间表达差异均具有统计学意义（P ＜0.05）。
（2）金纳多治疗组MMP-9活性及EB 含量各个时间点明显低于缺血再灌注组（P ＜0.05）。
结论金纳多通过抑制脑缺血再灌注大鼠MMP-9的活性，减轻血脑屏障通透性，可能是其发挥脑保护作用的机制之一。
〔关键词〕金纳多；基质金属蛋白酶；血脑屏障通透性〔中图分类号〕R74〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）10-2105-03；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.10.0501郑州大学护理学院临床教研室2河南大学第一附属医院药剂科3河南省人民医院ICU通讯作者：郭志松（1974-），男，副主任医师，主要从事脑血管病研究。
第一作者：杨霄鹏（1973-），男，副主任医师，硕士生导师，主要从事脑血管病及神经免疫性疾病研究。
血脑屏障破坏被认为在脑缺血再灌注损伤中起关键作用。
基质金属蛋白酶9（MMP-9）与血脑屏障的通透性密切相关〔1〕，能降解和破坏血脑屏障基底膜的Ⅳ型胶原引起脑水肿〔2〕。
金纳多是一种标准化银杏叶萃取物，能保护细胞膜的结构及功能的完整性，明显减少脑缺血后脑梗死面积，减轻脑缺血后神经功能缺损，对缺血神经细胞有保护作用〔3〕。
本试验进一步探讨其在脑缺血再灌注损伤时脑保护作用的机制。
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型制备方法-图文并茂
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型制备方法Pipilulu目录：第一部分线栓模型制备理论及经验1插线法局灶性脑缺血模型简介2大鼠颈部及颅内动脉解剖及常用插线位置3大鼠大脑中动脉阻断实验的总结和心得（zhuqing0506战友）4 也谈大鼠MCAO模型的实验体会（bladeflyer战友）5 我的做MCAO模型的一些体会（intelligentwang战友）6 线栓法大鼠脑缺血再灌注模型（MCAO）制备技巧（ysf2k战友）第二部分线拴模型制作过程（雨后天晴战友）第三部分灌注取脑（pipilulu战友）第四部分 TTC染色（pipilulu战友）前 言相信不少神经内科的研究生都作过或将要作大鼠线栓模型，都有一个从查文献了解方法到跟师兄、师姐学习再到自己体会摸索直至熟练的过程，在模型制作的过程中可能的经历了从模型不成功的郁闷到熟练后成功的喜悦（我们是有这样的感觉）。
为了缩短各位将要作或刚开始作MCAO 模型的战友的摸索过程，提高模型制作的成功率，我们愿意将自己的经验与大家分享，相信各位战友看过后将对制作大鼠线栓模型有更深的认识，并以其为乐趣，同时欢迎各位熟练的战友与我们交流经验。
第一部分线栓模型制备理论及经验⒈插线法局灶性脑缺血模型简介八十年代Koizumi和Longa创用了不开颅的大鼠MCA可逆性脑梗塞模型，此后，应用插线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的方法不断改进和完善，已渐趋成熟，目前该法已逐渐取代开颅法而成为最流行的方法。
该模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。
从ECA插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。
此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。
1994年Huang等[55]首次将线栓技术应用于小鼠局部永久性脑缺血模型。
1997年Hara 等[56]将线栓技术改进后应用于小鼠局部暂时性脑缺血模型。
灯盏细辛注射液对大鼠脑缺血-再灌注后海马区IGF
灯盏细辛注射液对大鼠脑缺血/再灌注后海马区IGF [摘要] 目的探讨灯盏细辛注射液对大鼠脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用。
方法成年雄性wistar大鼠24只，应用线栓法经左侧颈外-颈内动脉插线建立缺血2 h再灌注48 h模型，灯盏细辛注射液腹腔注射（3.6 mg/kg）干预治疗，苏木精-伊红（he）染色观察海马神经元形态，tunel法检测神经元凋亡，免疫组化染色法检测igf-1表达。
结果经灯盏细辛注射液干预后，胰岛素样生长因子-1（igf-1）蛋白表达明显升高，海马神经元显著增加，细胞凋亡明显减少，大鼠认知功能明显改善。
结论灯盏细辛注射液可通过上调igf-1的表达，有效地抑制细胞凋亡，改善学习记忆能力。
[关键词] 脑缺血/再灌注；灯盏细辛注射液；igf-1；神经元凋亡；认知功能障碍[中图分类号] r743 [文献标识码] a [文章编号] 2095-0616（2013）07-44-03胰岛素样生长因子1（insulin like growth factor-1，igf-1）在成熟脑组织广泛低水平表达，对于神经细胞的正常生长、发育以及受损细胞的恢复有重要作用[1-2]，对中枢神经系统疾病具有治疗作用[3-4]。
许多研究发现[5-6]，脑缺血损伤后脑卒中igf-1表达增强，igf-1促进轴突生长和神经元存活。
灯盏细辛注射液（fleabane injection）的主要成分是灯盏花素，能改善大鼠脑缺血神经功能损伤[7]，缩小脑梗死范围[8]，减少神经细胞凋亡数量[9]。
本实验试图观察灯盏细辛注射液对大鼠脑缺血/再灌注后神经元凋亡和igf-1表达的影响以及认知功能障碍的作用。
1 材料与方法1.1 大鼠脑缺血/再灌注模型成年雄性wistar大鼠24只，spf级，4个月龄，体质量230～250 g，由青岛市药物检验所实验动物中心提供[（scxk（鲁）20090007）]。
大鼠实验前置实验室环境适用1周，自由进食、饮水，室温（23±2）℃，自然光照，通风，术前禁食12 h。
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线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的方法研究马贤德1孙宏伟1 柴纪严1 赵金茹1（1 辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110032；）摘要①目的建立一种比较系统，操作简单，成功率高的大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注动物模型，达到只要读者根据本文所述的方法操作就能制作出MCAO再灌注模型的目的。
②方法成年健康雄性 SD大鼠40只，参照Longa法并适当改进建立MCAO模型20只，假手术组20只。
本文将详细叙述手术过程以及再灌注时间点的合理选择。
最后利用行为学测试、四氮唑(TTC)染色对模型成功与否进行判定。
③结论线栓法是一种操作简单的制备MCAO 再灌注动物模型的方法，并且此方法的再灌注效果较为明显。
关键词动物模型；脑缺血；再灌注；线栓法Establishment a model of rat ischemia-reperfusion injury with intraluminal sutureMa Xian-de1 Sun Hong-wei1 Chai Ji-yan1 Zhao Jin-ru1(1.Liaoning University of Chinese Traditional Medicine, Shenyang, 110032) Abstract: Objective To establish a model of rat ischemia-reperfusion injury, in terms of the model, the operation will be simple, and the achievement ratio will be high. Methods: 40 Male Sprague-Dawley ( SD ) rats were separated into two groups randomly: 20 were model of rat ischemia-reperfusion injury based on Longa method, and the other 20 were sham-operated group. The process of the operation and the selection of different time point following ischemic-reperfusion were discussed in the paper. What’s more , the model was appraised by behavioral test and Triphenyl Tetrazolium Choloride（TTC）Staining. Conclusion: The operation of intraluminal suture method is very simple for the establishment of model of rat ischemia-reperfusion, what’s more, the effect of reperfusion is very obvious.Key words: Animal Model, ischemia, reperfusion, intraluminal suture脑缺血再灌注动物模型是研究缺血性脑血管病的一条重要途径，因为脑缺血再灌注动物模型具有很好的重复性并能最大程度模拟人类缺血性卒中的发生。
早在1986年，日本学者Koizumi发明了线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型。
1995年，我国也出现了相关的报道。
目前人们比较公认的是Longa等建立的大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注动物模型。
国内一些学者对此方法又进行了改进，但仍存在一些问题，例如：手术操作过程复杂，实验动物死亡率较高，而模型成功率较低，并且在所发表的文章中普遍存在一个缺点，就是对该模型的制作过程描述得过于简单，读者往往不能按照此类文献完成模型的制备工作。
本文旨在前人研究的基础上，建立一种操作简单，成功率高的 MCAO再灌注模型，并将此方法图文并茂的展现给读者，使读者只要根据本文所述的方法操作就能制作出MCAO再灌注模型。
1 材料与方法1.1 实验材料、动物及分组健康雄性SD大鼠40只，体重280-320g，由辽宁中医药大学实验动物中心提供。
随机分为模型组和假手术组，每组20只。
四氮唑红(TTC)染料，由沈阳市博尔美试剂公司提供。
1.2 栓塞线的制备栓塞线采用2.5号钓鱼线，直径0.25-0.28mm。
将其剪成4cm长，一端用细砂纸打磨成半球形（需在显微镜下筛选），再用记号笔分别在距打磨端0.6cm处、1.8cm和2.2cm处作好标记，以便在手术时随时判断栓塞线插入深度。
1.3 大鼠脑缺血模型的制作在室温 (22 ℃) 条件下 ,大鼠用10%水合氯醛(300 mg/kg)腹腔注射麻醉后,仰卧固定于手术台上,颈部用碘伏消毒后正中偏右0.5cm处纵向切开2cm 切口,分离右侧颈总动脉(CCA) 、颈外动脉 (ECA) 、颈内动脉 (ICA) （如图一）。
其中ECA 需暴露出3-5mm, ICA需分离至翼腭动脉。
在ECA远端距CCA分叉处3-5mm处结扎ECA（如图二），注意：结扎用的手术线不要剪断。
再用电凝器在结扎点远心端电凝ECA，用眼科手术剪在结扎点和电凝点之间剪断ECA。
然后将ECA向鼠尾方向牵拉，使ECA和 ICA成一条直线。
动脉夹夹闭 CCA 近心端和ICA远心端,在ECA结扎点前端剪一“V”形小口（如图三）,缓慢将栓塞线经ECA插入ICA，打开ICA远心端的动脉夹。
根据栓塞线上的标记，判断栓塞线插入的深度。
当CCA分叉进入栓塞线1.8cm至2.2cm标记之间区域时，插线力度一定要轻，稍感阻力立即停止向前插线。
在“V”形切口近心端结扎ECA，使栓塞线和ECA固定在一起。
剪断各结扎点上的手术线，逐层缝合，将栓塞线多余的部分缝合在创口之间，暴露于皮外。
1.4 假手术模型的制备假手术组手术方式同模型组，但不做栓塞，仅暴露出右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA)，然后逐层缝合即可。
1.5再灌注的时间及方法再灌注时间点的选择十分重要，时间过短，神经功能缺失体征不明显；时间过长，脑组织缺血过于严重，失去治疗意义。
经过多次试验和文献支撑，我们认为栓塞2小时后进行再灌注不仅神经功能缺失体征明显，TTC染色显示脑组织坏死程度适中，而且如果能进行有效治疗，可以得到满意的治疗效果。
再灌注的具体方法是将缝合线打开，完全暴露栓塞线，用眼科镊子固定结扎点，将栓塞线缓慢抽出，直至栓塞线上的0.6cm处标记点暴露出来为止，剪掉栓塞线多余部分，逐层缝合创口。
1.6 神经功能缺失体征评分参考 Longa及Bederson的5分制法在动物麻醉清醒后24h进行评分。
0分：无神经损伤症状；1分：不能完全伸展对侧前爪；2分：向对侧转圈；3分：向对侧倾倒；4分：不能自发行走,意识丧失。
分值越高 ,说明动物行为障碍越严重。
1.7 四氮唑红染色大鼠缺血2h再灌注24h后立即断头取脑,以2%TTC常规染色,4%多聚甲醛固定保存。
2 结果2.1 术中意外死亡率模型组20只大鼠中，意外死亡5只，其中术中死亡2只，术后24小时内死亡3只，总死亡率25%；假手术组无死亡。
死亡的5只大鼠中，经脑组织TTC染色证实，有2只因右侧大脑大面积梗死致死，另外3只大脑无缺血表现，分析原因可能因为麻醉程度过深致死。
2.2 神经功能评分模型组为2.65±0.8127，假手术组3只评为1分，其余均为0分。
图为被评为3分和1分的模型组大鼠。
被评为3分的模型大鼠被评为1分的模型大鼠2.3 脑组织TTC染色模型组剩余的15只大鼠脑组织经2%TTC染色后发现，右侧脑组织均有不同程度的缺血坏死灶，大小不一，位置在额、顶叶皮层居多，也有的在颞叶和新纹状体外侧部出现坏死。
图为模型组两只大鼠的脑组织TTC染色照片。
不同梗死程度大鼠的脑组织TTC染色3 讨论近年来，对大鼠脑缺血再灌注的动物模型研究很多，已建立多种制作方法 ,前人已摸索出的光化学诱导MCA血栓形成或经颞下电凝MCA的方法[2]，因创伤大 ,且不能够进行再灌注等缺点,不适合于人类脑梗死后血管再通方面的研究。
线栓法建立的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型不需开颅,创伤小,不影响缺血性脑病病理变化的自然过程,而且操作简单,MCA闭塞效果好,可准确控制缺血及再灌注时间,是目前局灶性脑缺血及再灌注损伤研究较为理想的模型。
模型制作过程中需要注意以下几个问题：（1）大鼠的麻醉。
麻醉程度要适中，过浅会影响手术过程的操作，过深会导致大鼠在术中的死亡。
但大鼠自身也有一定的差异性，有些会对麻醉药反映过于敏感，标准剂量也会致死，而有些对麻醉药有一定的耐药性，后一种情况较为好处理，可以在术前依据具体情况酌情追加一定量的麻醉药。
但特殊情况必定是少数的。
（2）术中血管的分离。
在分离右侧CCA、ECA、ICA时，要特别注意迷走神经的保护，一般用玻璃分针分离血管，可以减少对迷走神经的损伤，尽量避免对迷走神经的直接牵拉。
（3）术中大鼠状态的观察。
手术时，要密切观察大鼠的状态，如发现呼吸异常，可用镊子将大鼠舌体牵向口角一侧，防止舌根阻塞呼吸道窒息而死。
（4）手术视野的处理。
为了在手术时能有一个清晰的视野，可以自制一些金属钩，连接上橡皮筋，将切口向左右拉开，尽量扩大视野。
（5）栓塞线的处理。
栓塞线是模型成败的关键，栓塞线一般选用钓鱼线，可根据大鼠的体重来选择型号，300g左右的大鼠可以选择2.5号（直径0.25-0.28mm）的钓鱼线，以此为准上下稍作浮动来选择。
钓鱼线的打磨十分重要，由于用剪刀剪断钓鱼线时断端过于锐利，如不做处理，在插线过程中很可能将动脉壁戳穿而导致失败，因此要用细砂纸将断端打磨圆滑，也有文献报道用酒精灯将断端烧成球形的，但烧成球形的头部直径无法控制，容易导致实验的失败。
另外，在栓塞线上作标记是明确栓塞深浅的最好办法，不用模糊的判断是否已经栓塞到位，这也给模型的成功提供了保障。
（6）栓塞线插入方向的调整。
在插入栓塞线时，有时栓塞线只进入了1cm左右就遇到了阻力，这种情况多数都是由于栓塞线误入了翼腭动脉而至。
解决办法有二，对于操作手法较好的实验者来说，可以将ICA继续向前分离，充分暴露出翼腭动脉，用眼科镊子对栓塞线的方向作以纠正；而无法将ICA继续进行分离的实验者可以通过改变ECA断端方向的方法来调整栓塞线的方向而使栓塞线顺利进入ICA，这也是此种手术方式的优势所在。
参考文献：[1] Longa EZ, Weinstein PR,Carlson,et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniotomy in rat[J]. Stroke,1989,20(1):84- 91.[2] Pulsinelli WA , Brierley JB. A new model of bilateral hemispheric examination[J]. Stroke,1979,10(3):267-272.[3]冯新红，沈霞，袁伟，等。