生物蛋白质修饰和表达
蛋白质的修饰和功能调控
蛋白质的修饰和功能调控蛋白质是生命体中最基本的分子组成部分之一，它们参与了细胞的几乎所有生物学过程。
然而，蛋白质单独的氨基酸序列并不能完全解释它们的多样功能。
蛋白质的修饰和功能调控起着非常重要的作用，通过化学修饰以及与其他分子的相互作用，蛋白质的功能可以被调节和扩展。
一、蛋白质修饰的类型及功能1. 磷酸化修饰磷酸化修饰是一种常见的蛋白质修饰方式，通过将磷酸基团共价地添加到蛋白质的特定氨基酸上，如丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。
这种修饰方式可以影响蛋白质的空间结构和电荷状态，从而改变其功能。
例如，磷酸化可以调节酶的活性，参与信号转导通路，调控细胞增殖和凋亡等过程。
2. 甲基化修饰甲基化修饰是一种将甲基基团共价地添加到蛋白质的氨基酸上的修饰方式。
这种修饰方式可以改变蛋白质的亲水性、电荷状态以及相互作用的能力，从而调节蛋白质的功能。
例如，甲基化修饰可以在染色质结构的调控中起到重要作用，调节基因的转录和表达。
3. 乙酰化修饰乙酰化修饰是一种将乙酰基团共价地添加到蛋白质的氨基酸上的修饰方式。
这种修饰方式可以改变蛋白质的结构和电荷状态，影响蛋白质的功能。
例如，乙酰化可以调节组蛋白的结构，影响染色质的结构和稳定性，从而调控基因的表达。
4. 糖基化修饰糖基化修饰是一种将糖基团共价地添加到蛋白质的修饰方式。
这种修饰方式可以改变蛋白质的结构、稳定性和溶解度，影响蛋白质的功能。
例如，糖基化修饰可以参与细胞黏附、信号转导和免疫应答等重要的生物学过程。
二、蛋白质修饰的调控机制1. 激酶和磷酸酶的作用蛋白质的磷酸化修饰通常是由激酶和磷酸酶调控的。
激酶可以添加磷酸基团到蛋白质上，而磷酸酶可以将磷酸基团去除。
这种激酶和磷酸酶之间的平衡调节，可以使蛋白质的磷酸化状态发生变化，从而影响其功能。
2. 转录调控因子的作用转录调控因子可以结合到蛋白质上，并改变蛋白质的修饰状态，从而调节蛋白质的功能。
通过与转录因子的相互作用，蛋白质可以参与基因的转录和表达调控。
化学生物学中的蛋白质合成与修饰
化学生物学中的蛋白质合成与修饰蛋白质是生物体内最重要的大分子物质之一，参与了生物体内几乎所有的生命过程。
蛋白质的合成与修饰是化学生物学领域的一个重要研究课题。
本文将从蛋白质合成的基本过程入手，探讨蛋白质的合成和修饰在生物学中的重要作用。
一、蛋白质合成的基本过程蛋白质合成是指将氨基酸按照特定的序列连接起来形成多肽链的过程。
蛋白质的合成主要通过翻译过程完成，包括三个主要步骤：转录、转运和翻译。
1. 转录转录是指将DNA模板转录成RNA的过程。
在细胞质中，核糖体RNA（rRNA）和转移RNA（tRNA）起着重要的作用。
在核内，DNA的两条链解旋，其中一个链作为模板合成RNA。
通过与氨基酸配对，RNA链合成一条辅助的RNA链，称为mRNA（信使RNA）。
mRNA包含了氨基酸顺序的编码信息。
2. 转运转运是指将mRNA分子从细胞核转移到细胞质的过程。
mRNA通过核孔复合体运输到细胞质，并在细胞质中定位到核糖体上。
3. 翻译翻译是指通过核糖体将mRNA上的信息转化成氨基酸序列的过程。
翻译过程中，mRNA的信息通过转移RNA（tRNA）上的三个碱基序列（编码子）被翻译成相应的氨基酸。
tRNA携带相应的氨基酸，通过与mRNA的编码子配对，使氨基酸按照指定的顺序连接起来，最终形成多肽链或蛋白质。
二、蛋白质修饰的重要作用蛋白质合成完成后，往往还需要经过多种修饰过程才能发挥其生物学功能。
蛋白质修饰是指通过化学反应在蛋白质分子上加上一些功能团或改变其磷酸化状态、甲基化状态等方式，以改变蛋白质的物理化学性质和功能。
1. 磷酸化修饰磷酸化修饰是蛋白质最常见的一种修饰方式。
通过磷酸化修饰可以改变蛋白质的电荷性质和空间构象，进而调控蛋白质的功能。
蛋白质的磷酸化修饰通常由激酶和磷酸酶等酶催化完成。
2. 甲基化修饰甲基化修饰是指在蛋白质上加上一个甲基团，常常通过甲基转移酶催化完成。
甲基化修饰可以影响蛋白质的稳定性、DNA结合能力和互作能力，对基因表达和细胞生命活动起着重要的调节作用。
蛋白质后修饰及其在生物学中的作用和应用
蛋白质后修饰及其在生物学中的作用和应用蛋白质是构成生物体的重要成分之一，由氨基酸单元组成。
在生物体内，蛋白质的功能和性质往往会受到后修饰的影响。
本文将介绍蛋白质后修饰的种类及其在生物学中的作用和应用。
一、蛋白质的后修饰种类1. 磷酸化磷酸化是一种广泛存在于生物体内的蛋白质后修饰方式，即通过酶类催化将一个或多个无机磷酸基团（PO4）2- 与特定氨基酸残基（常见的有谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸等）结合形成磷酸酯键。
磷酸化后的蛋白质功能和稳定性往往会发生变化，如调控细胞生长、分化和凋亡等生物学过程。
2. 乙酰化乙酰化是指在蛋白质N-末端或氨基酸侧链上与乙酰辅酶A反应的过程，使乙酰基（CH3CO-）与氨基酸残基结合形成酯键。
乙酰化引起的蛋白质功能变化通常与染色质重塑、基因表达和代谢等过程有关。
3. 甲基化甲基化是指通过酶类催化，在氨基酸侧链或蛋白质N-末端加入甲基（-CH3）基团。
甲基化后的蛋白质往往会发生转录调节、染色质变化和蛋白质交互作用等变化。
4. 糖基化糖基化是指通过酶类催化，蛋白质与糖类分子上的- OH基团或- NH2基团形成糖基化产物。
糖基化后的蛋白质往往在生物学中发挥重要的作用，如促进血糖转运、增加细胞膜粘附等。
二、蛋白质后修饰在生物学中的作用1. 调节基因表达蛋白质后修饰可以通过调节基因表达水平影响细胞功能。
例如，糖基化后的内皮细胞生长因子（EGF）可以通过增加其对细胞表面受体的亲和性，进而调控基因表达实现对细胞增殖的调节。
2. 信号转导磷酸化是一种重要的蛋白质后修饰方式，通过调节受体激活和信号转导通路中的关键蛋白质的磷酸化状态，从而调节特定细胞功能的过程。
3. 蛋白质交互作用蛋白质后修饰可以通过调节蛋白质互作起到调节细胞功能的作用。
例如，甲基化在细胞分化和表观遗传学中扮演着重要的角色，通过调节染色质状态影响细胞去分化状态，参与乃至决定细胞去分化方向。
三、蛋白质后修饰在应用中的应用1. 药物研发蛋白质后修饰在药物研发中扮演着重要的角色。
蛋白质修饰的生物学功能和临床应用
蛋白质修饰的生物学功能和临床应用蛋白质是构成生物体的最基本的分子之一，其在生命活动中扮演着重要的角色。
在生物体内，蛋白质不仅仅作为结构分子，还具有调节、信号传导、催化反应等多样化的生物学功能。
而蛋白质功能的实现往往与蛋白质的修饰密切相关。
本文将会重点阐述蛋白质修饰的生物学意义和临床应用。
一、蛋白质修饰的生物学意义蛋白质修饰是指蛋白质分子在其合成的过程中或之后，发生的各种化学修饰反应。
蛋白质修饰大致可分为三类：翻译后修饰（如拼接、剪接和C端修饰等）、翻译中修饰（如磷酸化、乙酰化和甲基化等）以及翻译前修饰（如蛋白质折叠和修饰酶的糖基化等）。
这些修饰反应可导致蛋白质的结构和功能发生重大变化，从而实现不同的生物学功能。
1.磷酸化修饰磷酸化修饰是最为常见的一种蛋白质修饰方式。
它是指以磷酸化作用将磷酸基引入到蛋白质分子中，从而改变它们的生物学功能。
这样的修饰可以影响蛋白质的结构、稳定性和活性等多方面的特性。
例如，磷酸化常用于信号传导和调节过程中。
细胞受到外界信号后，蛋白激酶会磷酸化它们的底物，并将其传递下去，在不同的细胞环境下发挥不同的作用。
2.甲基化修饰甲基化修饰是指在蛋白质分子中添加甲基基团，从而改变它们的生物学特性。
它通常出现在一些DNA结合蛋白中，对基因表达产生影响。
例如，一些组蛋白甲基转移酶可以将其与特定的组蛋白位点结合并进行甲基化。
这些修饰反应可以在调节基因表达等方面发挥重要作用。
3.糖基化修饰糖基化修饰是指添加糖基分子到蛋白质分子中，以改变它们的生物学特性。
这种修饰机制通常出现在可溶性蛋白、组蛋白和胶原蛋白等分子中，对蛋白质的结构、稳定性和生物学功能都有显著的影响。
4.其他修饰方式此外，还有许多其他形式的蛋白质修饰。
比如藻胆蛋白中的非谷氨酰化、氧化和硝化修饰等。
这些修饰反应在蛋白质分子的跨膜运输、保护细胞免受损伤、防止免疫系统攻击和细胞凋亡等方面发挥重要作用。
在理解蛋白质修饰的生物学意义后，我们可以进一步探讨它们在临床应用中的作用。
什么是蛋白质表达如何进行蛋白质表达
什么是蛋白质表达如何进行蛋白质表达蛋白质是生物体内重要的分子，参与了许多生命活动。
蛋白质表达则是指基因信息通过转录和翻译过程，转化为蛋白质的过程。
本文将详细介绍蛋白质表达的定义、基本过程以及常用的蛋白质表达方法。
一、蛋白质表达的定义蛋白质表达是指基因编码的蛋白质合成的过程，它涉及到两个关键步骤：转录和翻译。
转录是将DNA模板上的基因序列转录成mRNA的过程，而翻译则是将mRNA的信息转化为具有特定功能的氨基酸序列。
蛋白质表达是生物学中一个极为重要的过程，它决定了细胞的功能、个体的特征以及整个生物体的生理和生化过程。
了解蛋白质表达的机制对于我们理解生物的内部机制以及研究疾病治疗具有重要意义。
二、蛋白质表达的基本过程蛋白质表达的基本过程包括转录和翻译两个阶段，下面将详细介绍这两个步骤。
1. 转录转录是指将DNA模板上的基因序列转录成mRNA的过程。
在细胞核内，DNA双链解开，RNA聚合酶与DNA模板特定区域结合形成转录起始复合物。
然后，RNA聚合酶沿模板链将新的RNA链合成，其中基因信息由DNA转录成mRNA。
转录可分为三个阶段：起始、延伸和终止。
起始阶段包括转录起始复合物的形成，聚合酶开始链合成。
延伸阶段是RNA链的延伸过程，该过程直到遇到特定的终止序列才停止。
终止阶段包括终止复合物形成和RNA链的释放。
转录生成的mRNA将带有一段非翻译区（5'末端和3'末端），这些非翻译区在成熟的mRNA中起调节功能。
2. 翻译翻译是将转录形成的mRNA的信息转化为氨基酸序列的过程。
翻译发生在细胞的核糖体内。
核糖体是由rRNA和蛋白质组成的细胞器，它可以识别mRNA上的密码子，并将其翻译成相应的氨基酸。
翻译的步骤包括起始、延伸和终止。
起始阶段是核糖体与mRNA上的起始密码子结合，并帮助tRNA带有初始氨基酸进入核糖体A位的过程。
延伸阶段是通过核糖体移动到mRNA的下一个密码子位置，并将带有特定氨基酸的tRNA聚集进核糖体A位，使氨基酸逐渐连接成多肽链。
分子生物学第一篇基因表达调控和蛋白质修饰
分子生物学第一篇: 基因表达调控和蛋白质修饰基因组(Genome): 生物个体所携带遗传性物质的总量。
即细胞中的DNA总量，或病毒的DNA或RNA量“C值悖论”(C-value paradox): C值:一种生物细胞中特异不变的DNA总量（单倍体基因组）。
物种的C值和它进化的复杂性之间没有严格的对应关系，这种现象称为C值悖论。
基因表达(Gene expression): 在一定调控机制下基因经过激活、转录、翻译、等过程产生具有生物学功能分子从而赋予细胞一定功能或表型，即基因的转录和翻译的过程。
基因表达调控（Regulation of gen expression): 细胞或生物体接受环境信号刺激或适应环境营养状况变化在基因表达水平上作出应答的分子机制。
这包括对表达基因种类和数量上的调调控。
基础基因表达(basic gene expression)：又称持续性/组成型基因表达(constitutive gene expression）: 不易受环境变化而改变的基因表达。
这其中包括一类“管家基因(housekeeping genes)”, 这类基因产物是细胞生存活动所必需的，在个体各生长阶段都表达。
可调节基因表达(regulated gene expression):易受环境变化而改变的基因表达。
对环境应答时被增强表达的过程称为诱导(induction), 被激活的基因称为可诱导基因(inducible genes)；对环境应答时被抑制表达的过程称为阻遏repression)，被抑制的基因称为可阻遏基因(repressible genes)基因表达规律:组织特异性(tissue specificity) 时间特异性(temporal specificity)基因表达调节的生物学意义:(一) 适应环境，维持生长和增殖(二) 维持个体发育与分化.真核细胞的结构特性:1、庞大基因组，结构复杂，大量重复序列，基因组大部分是非蛋白质编码的序列，基因内部常被内含子(intron)隔开2、结构基因转录产物是一条单顺反子(monocistron) mRNA,基本上没有操纵元件的结构，而且真核细胞的许多活性蛋白是由相同和不同的多肽链形成的亚基构成的，涉及到多个基因的协调表达。
蛋白质修饰机制与生物学意义
蛋白质修饰机制与生物学意义蛋白质是生命活动中极其重要的分子，它们通过不同的化学结构实现了细胞内各种复杂的生物学过程。
蛋白质修饰机制是指通过化学修饰改变蛋白质结构和功能的过程。
此类修饰广泛存在于生命体系中，并且涉及到许多生理和病理过程。
下面将详细探讨蛋白质修饰机制及其生物学意义。
一、蛋白质修饰的种类及作用1. 磷酸化修饰磷酸化是一种常见的蛋白质修饰方式，是指通过酪氨酸、苏氨酸或丝氨酸等氨基酸上加入磷酸基团来改变蛋白质分子结构和功能的过程。
磷酸化可以改变蛋白质的结构、稳定性和亲水性，进而影响其相互作用和信号传导性质。
许多信号通路中的调控蛋白质都受到磷酸化修饰的影响，其中包括一些细胞周期调节蛋白、转录因子和细胞骨架等。
2. 甲基化修饰甲基化是一种化学修饰，即在蛋白质氨基酸侧链上加入一个甲基基团。
最常见的甲基化修饰是赖氨酸的甲基化，可以影响蛋白质的稳定性和亲水性。
甲基化修饰在基因表达、细胞信号转导和细胞分化等生物学过程中具有重要作用。
3. 糖基化修饰糖基化是一种蛋白质修饰机制，通过在蛋白质上加入糖基团来改变其结构和功能。
糖基化修饰参与了多种生物学过程，包括能量代谢、细胞信号传导和细胞-细胞相互作用等。
在生物学领域中，许多疾病都与蛋白质糖基化异常相关，如糖尿病、阿尔茨海默病等。
4. 乙酰化修饰乙酰化是指在氨基酸侧链上加入乙酰基，来改变蛋白质结构和功能的修饰方式。
乙酰化修饰对蛋白质稳定性、DNA修复和细胞增殖也有重要影响。
有研究显示，体内一些生化途径误调的时候都能导致蛋白乙酰化程度的变化，因而出现基因异常等症状。
二、蛋白质修饰的生物学意义1. 信号转导蛋白质修饰在细胞信号转导中扮演着至关重要的角色。
例如，在 Akt 信号通路中，丝氨酸/苏氨酸磷酸化被认为是活化 Akt 的机制之一。
此外，磷酸化修饰还涉及到注视成形、细胞周期、凋亡、DNA损伤修复等一系列生物学过程。
2. 基因表达和细胞分化蛋白质修饰对基因表达和细胞分化等生物学过程也有影响。
组蛋白修饰与基因表达的关系
组蛋白修饰与基因表达的关系组蛋白修饰是指将染色体上的蛋白质分子(组蛋白)上添加化学修饰而改变其功能的一种生物化学过程。
组蛋白修饰可以影响染色体的结构和状态，并直接或间接地影响基因表达。
因此，研究组蛋白修饰与基因表达之间的关系对理解生命系统的调节和疾病的发生和治疗具有重要的意义。
组蛋白是由蛋白和DNA组成的染色体的重要组成部分。
组蛋白可以包裹着DNA形成核小体，使得长长的DNA可以在有限的细胞核中紧凑地储存。
组蛋白可以被修饰的位置特别多，包括乙酰化、甲基化、泛素化、丝氨酸/苏氨酸磷酸化等多种修饰方式，这些修饰可以改变染色体结构和组装状态，影响基因的可读性和可调度性。
另外，除了上述化学修饰过程外，还有种独特的组蛋白修饰方式叫做“histone variant”(组蛋白变异体)，它们和常规的组蛋白不同，可以影响基因表达甚至参与组蛋白体系的稳定性。
不同的组蛋白修饰方式对基因表达的影响不同。
一些修饰会促进基因表达，而另一些则会抑制基因表达。
举个例子，乙酰化是一种广泛存在的组蛋白修饰方式，可以使得乙酰化的组蛋白降解，让染色体更容易被转录因子及其他调节因子找到并与其相互作用。
这样一来，基因的可读性被提高，基因的表达会增加。
相反，甲基化则可以促使染色体更为紧密，难以转录因子进入，从而抑制基因表达。
因此，组蛋白乙酰化和甲基化之间的平衡关系对细胞的生命活动和个体的正常发育具有至关重要的影响。
此外，某些组蛋白修饰还可以影响基因表达的选择性表达。
例如，组蛋白的泛素化在基因表达的调节中扮演着重要的角色，它能够形成新的调节因子来调节DNA的表达。
另一方面，一种被称为SAGA调节复合物的蛋白质混合物包含可以通过乙酰化影响基因表达的组蛋白乙酰转移酶，并且可以与基因特定的转录因子相互作用。
这样一来，SAGA调节复合物能够通过乙酰化方式选择性地促进某些基因的表达，抑制某些基因的表达。
总之，组蛋白修饰是一个非常复杂的生物化学过程，是基因表达的调节机制之一。
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定位突变：在已知DNA序列中取代、插入或缺失一 定长度的核苷酸片断 优点：突变率高、简单易行、重复性好 应用：研究基因的结构与功能的关系；蛋白质结 构与功能，读基因调控机理、疾病的病因和机理 方面研究 应用：寡核苷酸介导的定点突变、PCR方法介导 的定点突变及盒式突变
随机突变 优点：在体外模拟自然进化的过程
第四章 蛋白质的修饰和表达
• 蛋白质修饰的化学途径 • 蛋白质修饰的分子生物学途径
氨基的化学修饰
• 三硝基苯磺酸与赖氨酸残基反应，在420nm 和367nm能够产生特定的光吸收。
• 亚氨代乙酰基：亚氨代乙酰化反应可区分α氨基和ε-氨基。完全亚氨代乙酰化的蛋白质 仍保持在水溶液中的可溶性。
• α-异硫氰酸苯酯在严格控制的条件下可对α氨基进行相当特异性的修饰，而不作用于ε氨基。
3’ 5’
5’
盒式突变
• 盒式突变是利用一段人工合成的含基因突 变序列的寡核苷酸片断，取代野生型基因 中的相应序列，设计成粘性末端
• 步骤： 1、将克隆片断用限制性内切酶切割 2、将合成的寡核苷酸片断与酶切后的克隆片
寡核苷酸引物介导的定点突变的改进
缺点：产生突变效率低，原因：大肠杆菌中存在甲 基介导的碱基错配修复系统
改进：KUNKEL用尿嘧啶取代DNA 特点:1、采用甲基修复酶缺乏的菌株作为受菌体
2、采用改进后的质粒，省去制备单链模板的步 骤
3、增加了多个抗生素筛选标志和相对应的多对 敲除/修复引物，使质粒进行多次突变
常用手段：易错PCR、基因家族改组技术（DNA family shuffling)等
寡核苷酸引物介导的定点突变
1、将待突变基因克隆到突变载体上 2、制备含突变基因的单链模板; 3、引物与模板退火，以5’端磷酸化的突变寡核苷酸引
物,与待突变的核苷酸形成一小段碱基错配的异源双 链的DNA, 4、合成突变链:在DNA聚合酶的催化下,引物以单链 DNA为模板合成全长的互补链,而后由连接酶封闭缺 口,产生闭环的异源双链的DNA分子; 5、将异源双链DNA分子转化大肠杆菌后,产生野生型、 突变型的同源双链DNA分子。可以用限制性酶切法、 斑点杂交法和生物学方法对突变基因进行筛选 6、对突变基因序列进行分析
可以用主链肟键产生尾-尾相连二聚体
如：抗体 制备具有不同功能的F（ab)2的类似物
二、蛋白质改造的分子生物学途径
• 蛋白质改造的分子生物学方法
突变： 寡核苷酸介导的定向突变、 PCR方法、盒式突变
定向进化：异错PCR、基因家族改组技术
• 表达体系
原核表达：大肠杆菌 真核表达：酵母、昆虫、哺乳动物细胞
羧基的化学修饰
• 由于羧基在水溶液中的化学性知识的蛋白 质分子中的谷氨酸和天冬氨酸的修饰方法 很有限，产物一般是酯类或酰胺类。水溶 性的碳化二亚胺类特定修饰羧基基团，可 在较温和的条件进行
氧化和还原反应
• 二硫键的还原：2-巯基乙醇、巯基乙酸和二硫苏糖醇等。 • 判断蛋白质分子中有无二硫键，是链内二硫键还是链间二
Amps
Tetr
Tetr
Amps
突变 氨苄青霉素抗性的阳性克隆
设计突变体引物 氨苄青霉素抗性修复寡核苷酸
ห้องสมุดไป่ตู้
PCR方法介导的定点突变
• 通过改变引物中的某些碱基而改变基因序 列，达到有目的改造蛋白质结构、研究蛋 白质的结构和功能之间的关系的目的
• 取代突变、插入突变、缺失突变
5’ 3’
5’
3’ 3’
硫键的方法可用非还原/还原双向SDS-PAGE电泳技术。处 理后的蛋白很容易自动氧化，重新形成二硫键，因而需要 经过羧甲基处理，防止重新形成二硫键。 • 5，5’二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）（Ellman试剂），可与 巯基反应形成二硫键，使蛋白质分子上标记1个2-硝基-5硫苯甲酸（TNB），同时释放1个有很强颜色的TNB阴离 子，可在412nm处通过光吸收的变化来监测反应的程度。 Ellman是目前常用的定量测定蛋白质分子巯基数目试剂， 还被用于探测蛋白质分子去折叠与再折叠时的构象变化状 态及跟踪构象变化的过程。
二、蛋白质功能的全新设计
• 蛋白质设计的目标是产生既能折叠为预想的 结构和有用的功能。功能设计主要涉及键合 及催化
• 为达到这些目的可以采用两条不同的途径： 反向实现蛋白质与工程底物的契合，改变功 能；从头设计功能蛋白质
蛋白质的功能设计
１．通过反向拟合天然蛋白质设计新的功能 ２．键合及催化的从头设计 ３．在全新蛋白质中引入结合位点 ４．催化活性蛋白质的设计 ５．膜蛋白及离子通道的设计 ６．新材料的设计
化学修饰影响的条件
• 1、温和的反应条件是防止蛋白质分子变性 的一个必要条件
• 2、pH值得变化：决定了具有潜在反应能力 的基团所处的可反应和不可反应的离子状 态。
• 3、温度：影响活性巯基的微环境 • 4、有机溶剂：试剂需要有机溶剂来助溶，
但有机溶剂可使蛋白质变性。
• 化学方法：
产生半合成的结构，一个天然多肽与一个人造 （或化学修饰）的多肽相缔合
寡
U
Kunkel方法
3’ U
核
苷
酸
引
U
U
物
模板中尿嘧啶取代胸腺嘧啶
介
尿嘧啶-N-糖基化酶缺陷菌株 ung-
导
dUTP酶缺陷突变体
dut-
的
定
转染ung+
U
点
突
变
模板链降解
的
U
改
进
关键技术步骤：制备高质量的含U的单链DNA模板 宿主：E.coli CJ 236品系
基于抗生素抗性“回复”的突变方法
多克隆位点
非共价缔合 产生二硫键 形成肽键 产生非天然型的共价键
• 非共价缔合
在多肽链中如果出现一个切口，但多肽链 并不因此分开，仍能保持其生物学活性。 在变性系统中，破坏非共价键后，在非变 性基质中仍可形成原来的构型，活力也随 之恢复。这一现象可用来产生半合成的类 似物
• 产生二硫键 二硫键被还原剂打开，多肽彼此分开 DTT、 二硫苏糖醇
将这些片断与适当的被修饰的或合成的另一 肽相混合，通过重新形成二硫键而形成嵌 合分子
• 形成肽键 通过酶连接反应形成肽键 从猪胰岛素生产人胰岛素 将B链丙氨酸残基改为苏氨酸残基（胰蛋白 酶）
通过酶法与活性酯偶联 羟基琥珀酰亚胺酯作为接头分子
• 产生非天然型共价键 利用双功能试剂可以将不同的蛋白质连在一起。 常用的方法是将双功能的接头与两个蛋白质分子 中的赖氨酸残基侧链相连接。