胶体金免疫层析试纸条快速检测玉米细菌性枯萎病菌
胶体金免疫层析技术快速检测谷物中的黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素
挪I分析与检测胶体金免疫层析技术快速检测谷物中的黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素□贺丽丽拜发分析系统销售（北京）有限公司1971 年，Faulk 和 Taylor 首次将胶体金引入免疫化学领域，建立了 以胶体金标记抗原（或抗体）检测相 应抗体（或抗原）的免疫学新方法。
自此，胶体金标记技术成为继荧光标 记、酶标记和放射性免疫标记之后的 又一新型免疫标记技术〇经过近50年的 发展，免疫胶体金标记技术已较为成 熟，并被广泛应用于电镜水平研究、光显微细胞化学、免疫沉淀及蛋白质 染色技术中。
此外，这一技术还被引 进免疫诊断/检测领域，并在医学检验、植物学诊断、刑侦、食品安全检测方面应用广泛。
德国拜发生产的 RIDA®QUICK系列就是利用胶体金免疫层析原理制备成胶体金免疫层析横流检测卡，结合德拜发集团独有的RIDA®SM ARTAPP读数仪，能对食品中存在的霉菌毒素进行准确定量检测。
本文通过实验对德国拜发集团生产的RIDA®QUICK霉菌毒素系列在谷物、花生及花生粗榨油中的检测应用进行客观评价。
1材料与方法1.1材料RIDA®QUICK Aflatoxin RQSvRIDA®QUICK Zearalenon RQS、RIDA®QUICK DON 及 RIDA®SMART APP读数仪，均由德国拜发集团提供；用于添加回收实验的标准品为Trilogy®标准品，用于验证实验过程的参考物质为Tri丨ogy®参考物质；用于配合HPLC高效液相色谱使用并进行比对试验的霉菌毒素免疫亲和柱为EASI-EXTRACT®A F L A T O X IN、E A S I-E X T R A C T®ZEARALENONE、D0NPREP®。
以上所有材料均由德国拜发集团生产，购买自拜发分析系统销售（北京）有限公司。
胶体金免疫层析试纸条快速检测水和玉米中阿特拉津的残留
胶体金免疫层析试纸条快速检测水和玉米中阿特拉津的残留生威;那宇;张琳;刘冰;王硕【期刊名称】《现代食品科技》【年(卷),期】2012(028)003【摘要】本文以胶体金作为抗体标记物,建立了一种检测阿特拉津残留的免疫层析试纸条快速检测方法.该方法的检出限为2ng/mL,10min内可以得到检测结果.本文以自来水和玉米作为样品进行了添加回收实验,水样不需要任何前处理直接检测,水样的检出限为2 ng/mL;玉米样品经简单前处理后检测,玉米样品的检出限为40 ng/g,且该方法的检测结果与间接竞争ELISA方法的结果一致.该方法具有成本低、操作简单、灵敏度高、检测快速,结果易于判定等优点,适用于大量样品的现场筛选.【总页数】4页(P360-363)【作者】生威;那宇;张琳;刘冰;王硕【作者单位】天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室天津300457【正文语种】中文【相关文献】1.玉米中阿特拉津残留量的测定方法研究 [J], 毛应明;王学松;朱平华;张成燕;熊建军2.土壤和玉米籽粒中阿特拉津残留量的测定方法 [J], 李清波;黄国宏;王颜红;王朋;张旭东;骆永明3.气相色谱法测定玉米和甘蔗中阿特拉津残留量 [J], 谢碧俊;方亚群;向仕学4.阿特拉津残留快速检测技术研究进展 [J], 吴柳;豆小文;孔维军;杨世海;杨美华5.水、土壤和小麦中阿特拉津和草萘胺残留检测的前处理方法研究 [J], 金射凤;周游;张家俊;隋莹;杨红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
胶体金免疫层析法在食品快速检测中的应用研究进展
胶体金免疫层析法在食品快速检测中的应用研究进展谢桂芳，赖 飞，王艺蓉，周雪丽，王晓鹭，蔡 滔*（贵州省农产品质量安全监督检验测试中心，贵州贵阳 550001）摘 要：近年来，随着城市化进程加快，各类食品流通更为频繁，食品安全问题日益凸显,人们越来越关注食品安全，而准确、快速的检测方法是保证食品安全的重要手段。
本文介绍了胶体金免疫层析技术的基本原理和制备方法，并概述了其在检测食品中农药残留、霉菌毒素、食源性致病菌、重金属和非法添加剂等方面的应用及前景，为我国食品安全快速定量检测技术提供思路方法。
关键词：胶体金免疫层析技术；食品安全；快速检测The Progress of the Application of Colloidal GoldImmunochromatography in Rapid Food DetectionXIE Guifang, LAI Fei, WANG Yirong, ZHOU Xueli, WANG Xiaolu, CAI Tao* (Guizhou Agricultural Products Quality and Safety Supervision and Testing Center, Guiyang 550001, China) Abstract: In recent years, with the acceleration of urbanization, the circulation of various foods has become more frequent, and food safety issues have become increasingly prominent. People are paying more and more attention to food safety, and accurate and rapid detection methods are important means to ensure food safety. This paper introduces the basic principle and preparation method of colloidal gold immunochromatography technology, and outlines its application and prospects in the detection of pesticide residues, mycotoxins, foodborne pathogens, heavy metals, and illegal additives in food, providing ideas and methods for rapid quantitative detection of food safety in China.Keywords: colloidal gold immunochromatographic technology; food safety; rapidly detection近年来，食品安全事件频发，食品安全问题也受到了社会的高度关注。
粮油产品安全指标快速检测方法
粮油产品安全指标快速检测方法粮油作为生活的必需品,可以给我们提供蛋白质、脂肪、碳水化合物等,但随着经济的发展,环境污染逐渐加重,假冒伪劣产品层出不穷,食品安全事件日益频发。
为了解粮油的质量品质,就需要对其进行检测,但传统的大型仪器的检测方法,仪器大、费时长、成本高,已经无法满足日益增长的食品安全现场快速监管需求,因此需要一种费时短、易操作、灵活快捷的检测方法。
快速检测能够在短时间内检测出结果并能简化样品制备和操作过程,其主要特点为现场、快速时间短操作简便灵活,符合现代检测的需求。
目前,国外的粮油产品快速检测体系相对比较完善,国内对其研究还有很大的发展空间。
1粮油产品组分测定拉曼光谱是一门基于散射效应而发展起来的光谱分析技术,因其具有测试样品非接触性、非破坏性、检测灵敏度高、时间短、样品所需量小及样品无需制备等特点,并且在分析过程中不会对样品造成化学的破坏、机械的损失、光和热的分解,被广泛用于食品、医学等等方面的研究。
近年来,在近红外光谱技术的基础上,拉曼光谱凭借其较高的灵敏度和准确性得到了广泛应用,采用拉曼光谱技术检测食用植物油质量慢慢也已开始探索。
东野广智等结合拉曼光谱仪和傅里叶变换光谱分析仪,定性判别亚麻油各组分含量,发现可以根据拉曼光谱特征频率和近红外光谱谱峰,区分亚麻油的各组分含量的不同,为以后定性分析亚麻油的成分提供了参考。
刘燕德等利用拉曼光谱技术快速检测食用植物油,采集了分别掺有5%~20%花生油、大豆油和玉米油的芝麻油,把得出的拉曼光谱与PLS结合建立定标模型,交互验证相关系数均达到95%以上,因此拉曼光谱技术可用于快速检测掺假植物油。
章颖强等结合介电谱技术和拉曼光谱技术，把气相色谱仪的检测值作为标准值,建立了定量分析;模型分析食用植物油中饱和脂肪酸、油酸、亚油酸的含量,这为食用油的成分预测提供了快速、简便精确的检测方法。
邓平建等利用拉曼光谱-聚类分析快速检测方法鉴别掺伪油茶籽油，建立了基于全光谱的聚类分析模型,此模型根据各类样品的光谱信息量及光谱形态差异鉴别样品类别。
谷物及制品中真菌毒素前处理及检测技术研究进展
基金项目：浙江省自然科学基金项目（编号：ＬＧＮ１８Ｃ２０００２６）；省属高校基本科研业务费项目（编号：２１ＳＢＹＢ０８）作者简介：牛灿杰，女，浙江经贸职业技术学院工程师，硕士。
通信作者：叶素丹（１９７９—），女，浙江经贸职业技术学院教授，博士。
Ｅ ｍａｉｌ：６４９９９６０６＠ｑｑ．ｃｏｍ收稿日期：２０２２ １１ ２２ 改回日期：２０２３ ０４ １０犇犗犐：１０．１３６５２／犼．狊狆犼狓．１００３．５７８８．２０２２．８１０８７［文章编号］１００３ ５７８８（２０２３）０５ ０２０３ ０８谷物及制品中真菌毒素前处理及检测技术研究进展Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓｏｆｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓｉｎｃｅｒｅａｌｓａｎｄｃｅｒｅａｌ ｂａｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓ牛灿杰犖犐犝犆犪狀 犼犻犲 叶素丹犢犈犛狌 犱犪狀 胡玉霞犎犝犢狌 狓犻犪 周晓红犣犎犗犝犡犻犪狅 犺狅狀犵（浙江经贸职业技术学院，浙江杭州 ３１００１２）（犣犺犲犼犻犪狀犵犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犈犮狅狀狅犿犻犮犪狀犱犜狉犪犱犲，犎犪狀犵狕犺狅狌，犣犺犲犼犻犪狀犵３１００１２，犆犺犻狀犪）摘要：谷物及其制品在生产、贮藏、运输的各个环节均易受到真菌毒素的污染，且真菌毒素种类多、浓度低、毒性强、性质差异大，防治困难。
文章综述了谷物及其制品中真菌毒素的前处理技术（液液萃取技术、固相萃取技术、ＱｕＥＣｈＥＲＳ技术、免疫亲和层析技术）和检测技术（免疫层析技术、光谱技术、液相色谱技术、液质联用技术），并对真菌毒素检测技术的发展趋势进行了展望。
关键词：谷物；谷物制品；真菌毒素；前处理技术；检测技术犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｃｅｒｅａｌｓａｎｄｃｅｒｅａｌ ｂａｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓａｒｅｅａｓｉｌｙｐｏｌｌｕｔｅｄｂｙｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓｉｎａｌｌａｓｐｅｃｔｓｏｆｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｓｔｏｒａｇｅａｎｄｔｒａｎｓｐｏｒｔａｔｉｏｎ，ａｎｄｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓａｒｅｄｉｆｆｉｃｕｌｔｔｏｐｒｅｖｅｎｔｄｕｅｔｏｔｈｅｉｒｖａｒｉｅｔｙ，ｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｓｔｒｏｎｇｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄｌａｒｇｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｎａｔｕｒｅ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｓｕｍｍａｒｉｚｅｓｔｈｅｎｅｗｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ｌｉｑｕｉｄ ｌｉｑｕｉｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＱｕＥＣｈＥＲＳ，ｉｍｍｕｎｏａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）ａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｏｐｔｉｃａｌｓｐｅｃｔｒｕｍｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）ｏｆｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓｉｎｃｅｒｅａｌｓａｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｔｒｅｎｄｏｆｍｙｃｏｔｏｘｉｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓｗａｓａｌｓｏｐｒｏｓｐｅｃｔｅｄ．犓犲狔狑狅狉犱狊：ｃｅｒｅａｌｓ；ｃｅｒｅａｌ ｂａｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓ；ｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓ；ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ真菌毒素为曲霉菌、镰刀霉菌、青霉菌、麦角菌、链格孢霉菌等真菌产生的有毒次级代谢产物，有３００多种［１］，且大部分具有较强的生物毒性，可致癌、致畸、致突变［２］。
禽病胶体金快速诊断产品说明(6张)
禽病胶体金快速诊断产品说明石家庄市神九畜禽疾病防治及药物研究所与韩国瑞捷（RAPIGEN）研究所合作并在世界上首次推出新城疫（NDV）+禽流感（AIVH1～15）、禽流感（AIVH1～15）+禽流感（AIVH5）病毒快速诊断试纸。
该项目由国际上胶体金方面顶尖科学家朴在九(Jae-Ku Park)医学博士主持，可使鸡场提前5～10天探知瘟疫的侵入，在发病时能迅速判断是新城疫还是流感、是流感时又能分出是否是H5型的，解决了行业内的一大难题，非常适合中国需要。
相关产品如下：1、NDV + AIV（H1～15定性）快速诊断试纸2、AIV（H1～15定性）+ AIV（ H5分型）快速诊断试纸3、NDV 快速诊断试纸4、AIV（H1～15定性）快速诊断试纸5、AIV（ H5分型）快速诊断试纸一、产品设计原理禽用胶体金快速诊断试纸是利用胶体金原理和免疫层析原理来实现捕捉野毒的。
胶体金是俗称金子的金属金的水溶胶。
胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物或显色剂，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
免疫层析法(Immunochromatography)是九十年代兴起的一种基于免疫胶体金技术的快速诊断技术，其原理是将单克隆抗体与胶体金结合，置于聚脂膜中；加样后，如样品中有病毒，则金标抗体与部分病毒结合在毛细现象的作用下向上流动，遇到固定在硝酸纤维膜上的抗体时便生成“金标抗体/抗原/抗体”夹心免疫复合物从而聚集显色（检测线阳性），另一部分没与抗体结合的金标抗体与病毒结合物和随液体向上流动，遇抗抗体时形成“抗抗体/金标抗体/抗原”复合物显色（质控线）；当样本中不含病毒时，则不形成“金标抗体/抗原/抗体”夹心免疫复合物不显色（检测线阴性），但抗抗体与金标抗体复合物仍显色（质控线），从而实现特异性的免疫诊断。
该技术与以往常规诊断方法相比具有以下突出优点•快速：全部检测过程仅需5-30分钟。
•准确：比酶联免疫吸附测定（ELISA其设备5万元）准确度高，与聚合酶扩增技术（PCR其设备百万元）相近。
胶体金试纸条在蔬菜农药残留农户自检中的应用2[1]
![胶体金试纸条在蔬菜农药残留农户自检中的应用2[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/9b3dbb2bcfc789eb172dc83b.png)
胶体金试纸条在蔬菜农药残留农户自检中的应用农产品质量安全是关乎食品安全、“三农”问题和对外贸易发展的重大社会问题，历来受到全社会的高度重视。
近年来，随着我国质量安全管理力度进一步加大，农产品质量安全水平不断提升，蔬菜质量安全状况的改善尤为明显。
但由于我国以家庭小农散户为主体的农业生产方式，农药超标蔬菜问题并未彻底杜绝，蔬菜质量安全依然面临诸多隐患。
究其原因，缺乏适用于源头农户的经济快捷的自检手段是关键因素之一。
本文探讨了胶体金试纸条在农户自检农药残留中的应用。
一、农药残留超标的危害及我国蔬菜农药残留现状分析据统计，目前仍然存在2％～10％的农残超标，以每人每天消耗0.5kg蔬菜计算，每天有3900万人吃农药超标的蔬菜。
如果实行准入制度，每天将有195 00 t蔬菜遭到销毁。
按每kg 1~2元计算，每日将损失1 950万~3 900万元，每年将有71亿~142亿元损失。
可见，农药残留超标造成的经济损失是很大的。
蔬菜中农药残留超标对人体健康危害严重，可以致癌、致突变、致畸性[1]。
发达国家都相应的出台了一系列的法律、法规进行约束，如日本出台的肯定列表制度，欧盟和美国也在不断出台和修订农药残留的标准。
我国食品安全法和农产品安全法对有关于农药残留也有相关规定，然而农药残留超标的蔬菜还是经常流向市场，不但危害消费者的身体健康而且严重影响蔬菜的出口贸易。
2007年7月26日农业部发布《中国农产品质量安全概况》中提到2007年1月、4月两次监测，蔬菜中农药残留平均合格率为93.6％，其中，蔬菜生产基地合格率为96.7％，批发市场、超市和农贸市场的合格率分别为93.7％、91.7％和92.5％。
2008年5月27日农业部发布对全国37个城市蔬菜农药残留第二次例行监测结果合格率为96.7％。
2009年4月农业部组织有关检测机构在全国138个主要大中城市开展的农产品质量安全例行监测工作，蔬菜的合格率为95.9％，总体上我国蔬菜产品农药残留超标率在逐年下降，其质量安全合格率逐年提高，但是，农药残留超标问题仍然存在。
食品中玉米赤霉烯酮的快速检测 胶体金免疫层析法(KJ201913)
附件13食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法(KJ201913)1.范围本标准规定了食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法。
本标准适用玉米、小麦及其碾磨加工品中玉米赤霉烯酮快速筛选测定。
第一法比色法2.原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中的玉米赤霉烯酮经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条中检测线（T线）上的抗原结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线（T线）与控制线（C线）颜色深浅的比较，对样品中玉米赤霉烯酮进行结果判定。
3.试剂及材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，试验用水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1.试剂3.1.1.乙腈。
3.1.2.甲醇+水（7+3，体积比）。
3.1.3.稀释缓冲液（胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液或根据产品使用说明书配置）。
3.2.参考物质玉米赤霉烯酮的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥95%。
表1 玉米赤霉烯酮参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量注：或等同可溯源物质。
3.3.标准溶液的配制3.3.1.标准储备液：称取适量标准品，用乙腈（3.1.1）溶解，配制成浓度为100 μg/mL的标准储备液。
﹣18 ℃避光保存，有效期6个月。
3.3.2.标准工作液：准确量取标准储备液（100 μg/mL）（3.3.1）100 μL，置于10 mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 μ稀/mL的玉米赤霉烯酮标准工作液，2 ℃～8 ℃避光保存，有效期1个月。
3.4.材料玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为玉米、小麦及其碾磨加工品。
4.仪器和设备4.1.移液器：100 μL、200 μL、1 mL和5 mL。
4.2.旋涡混合器。
4.3.离心机。
4.4.电子天平：感量为0.01 g。
5.环境条件环境温度：20 ℃～30 ℃。
空气相对湿度：最佳测定湿度45 %～65 %。
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荡反应 15m in 。用酶标仪检测 OD520nm 值。 2 . 4 . 3 最佳抗体浓度的确定 将玉米细 菌性 枯萎 病菌 单 抗 2F5 稀 释至 0 . 2 m g /mL, 用 0 . 1m ol /L K2 CO3 调节胶体金溶液 p H值 至 8 . 5 。按表 2 加入试剂 , 振荡反应 30m in 后 , 分别 加入 10 % N aC I溶液 20 L, 振荡反应 15m in 。用酶 标仪检测 OD520nm 值。 表 2 胶体金标记抗体最佳浓度的测定
[ 1] 1, 2 1 1 1 1 1 3
能作为专 业技术 人员 在实验 室使 用的 标准方 法。 因此, 这些方法均难以实现现场检测。胶体金免疫 层析技术是 20 世纪 80 年代在酶联免疫吸附试验、 乳胶凝集试验、 单克隆抗体技 术、 胶体 金免疫技术 和新材料技术基础上发展起来的一种 免疫分析技 术
* 注 : CGM CC : Ch ina G eneral M icrob iological C ulture Col lect ion C en ter ATCC: Am erican Type Cu lture C ollection Cen ter CAA S: Plan t P rotection Inst itu te of CA AS
C lav iba cter m ichigan ensis su bsp. m ich iganensis CGM CC 1 . 1909 C lav ibacter m ich iganensis subsp. n ebraskensis C lav ibacter m ich iganensis subsp. sep edon icu s Er w inia ca rotovora subs p. carotovoraborgey Erw in ia stewa rtii s u bsp. ste w artii P seudom onas s yringa e pv . s yringa e X anthom onas campestris pv. holcicola ATCC 27822 CAA S 12057 CAA S 12104 ATCC 8200 CAA S 12056 CGM CC 1 . 1530
需贵重的检测仪器 , 但操作繁琐, 耗时较长; 分子生 物学检测方法灵敏度较高 , 但需要 贵重的仪器 , 只
项目基金 : 中国检科院科研项目 ( 2008 J K 017) ; 质检公益性行业科研专项 ( N o. 10- 47) 。
1
J OU RNAL O F I N SPECTION AND QUARA NTI N E 检验检疫学刊
序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 菌株名称 Ac idov orax avenae subs p. avenae C lav ibacter f ang ii Clavibac ter m ich iganensis subs p. in sid ios us 菌株来源编号 * CGM CC1. 1726 CGM CC 1 . 2000 CGM CC 1 . 1908
试剂 1 胶体金 ( L) 抗体 ( L ) 超纯水 ( L) 2 3 4 5 试验孔 6 7 8 9 10 11
200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 0 10 1 9 2 8 3 7 4 6 5 5 6 4 7 3 8 2 9 1 10 0
2 . 4 . 4 金标抗体的制备 用 0 . 1m o l /L K 2 CO3 调节 10 mL 胶体金溶液 p H 值至 8 . 5 。搅拌条件下, 将最适抗体量缓慢加入胶 体 金 溶 液 中 , 室 温 反 应 30 m in , 加 入 10 % BSA 600 L 封闭 30m in, 12000 r /m in 离心 30m in , 弃上 清 , 沉 淀 物 用 1m L TBS ( T ris - H C l 0 . 01 m o l/L、 0 . 02 % N aN3、 1 % 蔗糖、 1 % BSA ) 混悬, 4 避光保存 备用。 2 . 4 . 5 免疫层析试纸条的组装 样品垫、 结合垫 (含金标抗体 , 干燥 )、 硝酸纤维 素膜 (检测线: 玉米细菌性枯萎 病菌多抗 1mg /mL; 质控线 : 羊抗鼠 1m g /mL ) 、 吸水垫依次贴在带有粘 合剂的 PVC 背板上, 切成 4mm 宽的试纸条, 室温干 燥备用。 2 . 5 灵敏度测定 取 1mL 菌悬液, 用样品稀释液 ( 0 . 1 M T ris , 1 % Tw een20)进行 10 倍稀释, 共稀释 9 个稀释度 , 用试 纸条进行检测, 同时设 PBS 为空白对照。 2 . 6 特异性的测定 对表 1 中的菌株, 按 2 . 5 所述方法进行检测。 2 . 7 模拟阳性样品检测
2010年第 1期 V o. l 20 N o. 1
检验检疫学刊 JOURNA L OF I N SPECT I ON AND QUA RANT I NE
胶体金免疫层析试纸条快速检测玉米细菌性枯萎病菌
齐玲玲
1, 2
金涌
1
邹明强
北京
1
梁赤周
1
田世民
1陈艳1李卫华3(1 . 中国检验检疫科学研究院
100123; 2 . 山西大学生物技术研究所 ; 3 . 山西出入境检验检疫局 )
摘要
本文采用胶体金免疫层析技术成功建立了玉米细菌性枯萎病菌试纸条快速检测法 。 条件优化
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后的试纸条用于玉米细菌性枯萎病菌的检测 , 方法的检测限为 10 c fu /mL, 其灵敏度与双抗夹心 EL ISA 检测 方法相当 ; 交叉试验结果表明 , 该试纸条对玉米细菌性枯萎病菌有良好的特异性 。本方法可作为玉米细菌 性枯萎病菌日常监测的现场筛查手段, 具有简便 、 快速 、 成本低廉 、 便于普及等优点 , 对保障我国农产品安全 具有重要的现实意义。 关键词 玉米细菌性枯萎病菌 ; 免疫层析技术; 胶体金 ; EL ISA; 灵敏度; 特异性 ; 中图分类号 K392 . 11 ; S435 . 131 A Colloidal Gold- Based Imm unochro m atograph ic S trip for Rap id D etection of E rwinia stewartii subsp. S tewartii Q i L ing ling , Jin Yong , Zou M ingqiang , L iang Chizhou , T ia n Shi m in , Chen Yan , L iW e ihua (1 . Ch in ese Academ y of Inspection and Quarant in e , Be ijing 100123 ; 2 . Institute of B io lo g ical T echno logy of Shanx i University ; 3 . Shanx i Ex it- Entry Inspect io n and Quarantin e Bureau) A bstract : A collo id al gold- based i mm unochrom atograph ic strip w as developed fo r th e detection o fE r w inia stew ar tii subsp . stew artii. The detect io n li m it o f the strip w as 106c fu /mL. The sensitiv ity w as si m ila r to the doub le ant i bodies sandw ich EL ISA. No cross- reaction w ith the other strains w as found, ind icat ing good spec ific ity o f this str ip . As a rap id and conven ie nt m ethod for the de tect io n E rw inia stew artii subsp . Stewartii , the deve lo pm ent o f i m unochrom atog raph ic strip has practical sig nificance for agricu ltural and food safety m . K eywords : Erw inia ste w artii subsp . Stewartii; I mm unochrom atograh ic strip ; Go ld nanoparticles ; EL ISA; Sensitiv i ty ; Specificity 1 前言 玉米 细菌性枯 萎病菌 ( E r w inia stewartii subsp. stew artii) 是一种革兰氏阴性细菌 , 该细菌引起的枯 萎病是玉米生产上重要的病害之一 , 尤其对甜玉米 的损坏巨大, 严重时可造成绝产
2 . 4 免疫层析试纸条的制备 2 . 4 . 1 胶体金的制备 采用改良的柠檬酸三钠还原法
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, 其过程 为:
在搅拌条件下 , 98 mL 去离子水加热至 65 后, 加入 1 mL 1% 的氯金酸, 继续加热, 待温度上 升至 95 时, 加入 1mL 1 % 的柠檬酸三钠 , 当溶液呈酒红色时 停止加热 , 冷却后, 4 避光保存。 2 . 4 . 2 最适 p H 值的确定 取 200 L 胶体金溶液 , 用 0 . 1m o l/L K 2 CO3 溶 液将 p H 值分别 调至 7. 0、 7 . 5 、 8 . 0 、 8 . 5 、 9. 0 、 9 . 5 。 然后分别加入单抗 0 . 2mg /mL 2F5 10 L, 振荡反应 30m in 后 , 再分别加 10 % NaC l溶液 20 L, 继续振 2