免疫胶体金层析法
胶体金快速检测技术试验(传染病实验课)
实验四胶体金快速检测技术试验一、胶体金试纸条诊断技术的原理：以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。
二、层析法免疫胶体金检测方法的优点：• 1.方便使用，体现在操作简单，不需经过特殊培训。
• 2.短时间获得检测结果，一般10－15分钟即可得出结论。
• 3.不同环境下的稳定性好，不需冷藏。
• 4.相比而言，其生产成本和检测成本均较低。
• 5.检测标本种类多：可用于查血、尿液或粪便。
•三、应用•猪伪狂犬病抗体快速金标检测卡•原理：猪伪狂犬抗体检测试剂盒（胶体金法），系采用国际最先进的胶体金免疫层析技术检测样本（全血、血清、血浆）中抗猪伪狂犬抗体的方法。
整个试验只需20分钟，操作简便、快速、准确，灵敏度高、结果直观、容易判定。
• 1.操作方法：•①在检测卡的加样孔内加入100μl待检血清或血液样品。
•②将检测卡平放于桌面上，在室温下静置5-20分钟内判定结果。
超过20分钟的结果只能作为参考。
• 2.结果判定：•♦阳性：在观察孔内，检测线区（T）及对照线区（C）同时出现紫红色线。
猪伪狂犬抗体滴度越高，检测线（T）颜色越深。
•♦弱阳性：在观察孔内，检测线区（T）及对照线区（C）同时出现紫红色线，但检测线区（T）出现的颜色很浅。
•♦阴性：在观察孔内，只有对照线区（C）出现一条紫红色线。
•♦失效：在观察孔内，对照线区（C）和检测线区（T）都不出现色线；或仅检测线区（T）出现色线。
•猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病抗体快速金标检测卡原理、操作方法、结果判定与猪伪狂犬病抗体快速金标检测卡的基本相同••••。
第5章 常见免疫学检测技术-胶体金免疫层析
（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
LA T E R A L FLO W T E S T S T R IP O F V E D A LA B
30
（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
©①双抗体夹心法
• 固定于膜上的抗 体1＋标本中待测 抗原＋金标记的 抗体2显色
• 用于测抗原
原 • 是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术 理 • 将结合各的种以反应微试孔剂滤分膜点为固载定体在的测快试速版的相固应相
• 通区膜域过免，毛疫检细分测析管标作技用术本加使在样试品纸溶条 液的 在一 层端析材料 上泳动，样本中的待测物与层析材料中 的反应试剂发生特异性结合反应，形成 的复合物被富集或固定在层析条上的特 定区域（检测线），通过标记抗体显色
§ 最初应用于免疫组化染色，随后发展到以膜为 载体的免疫测定技术
一、胶体金标记免疫检测应用现状
§ 胶体金标记技术具有简单、快速、灵敏等特 点，得到了广泛应用
§ 20世纪90年代兴起的胶体金免疫层析技术，特 别是试纸条的发展，使操作更加方便快捷
§ 胶体金标记免疫检测技术在临床医学检测、激 素检测、食品安全检测、药物残留和毒品快速 检测，以及抗原抗体分析等诸多领域迅速发展
食品 食品安全检测中心, 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精
安全 各监管部门
等）,大肠杆菌,黄曲霉素
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瘦 肉 精
沙 丁 胺 醇
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瘦 肉 精
沙 丁 胺 醇
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瘦 肉 精
克 伦 特 罗
瘦肉精—莱克多巴胺
瘦肉精—莱克多巴胺
瘦肉精—莱克多巴胺
—
兽 药
恩 诺 沙 星
致病菌--大肠杆菌O157
胶体金检测常用方法
胶体金检测常用方法
胶体金检测是一种常用的生物分析技术，广泛应用于生物学、医学、环境科学等领域。
常用的胶体金检测方法有以下几种：
1. 色谱层析法：将待检样品加入胶体金溶液中，经过色谱层析
柱进行分离，最终观察胶体金试纸的颜色变化，可判断样品是否含有目标分子。
2. 电化学法：将胶体金修饰在电极表面上，通过电化学反应检
测待检样品中的目标分子。
电化学法检测的胶体金电极具有灵敏度高、稳定性好等优点。
3. 原位杂交法：利用胶体金标记的探针与待测样品中的DNA或RNA进行杂交反应，通过颜色变化来判断目标分子的存在情况。
4. 免疫层析法：将待测样品加入含有特定抗体的胶体金试纸中，观察试纸的颜色变化来判断样品中是否含有特定抗原。
5. 荧光探针法：将荧光染料标记在胶体金表面上，通过荧光信
号来检测待测样品中的目标分子。
该方法具有高灵敏度、高选择性等优点。
这些方法在生物检测中广泛应用，为生物学、医学、环境科学等领域的研究提供了有力的技术支持。
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胶体金免疫层析技术原理
胶体金免疫层析技术原理胶体金免疫层析技术是一种常用的生物分析方法，其原理基于抗原与抗体之间的特异性结合。
在这种技术中，胶体金颗粒被用作标记物，以便在样品中检测特定的抗原或抗体。
胶体金颗粒是一种具有特殊化学和物理性质的纳米材料。
它们具有高度可控的形状和大小，并且表面易于修饰。
这使得它们成为生物学研究和诊断中广泛使用的标记物。
在胶体金免疫层析技术中，首先需要制备具有特异性结合能力的抗体。
这通常涉及到将目标分子（即要检测的抗原）注射到动物中，以刺激其产生相应的抗体。
然后从动物血清中提取这些抗体，并进行纯化和检验。
接下来，需要将这些抗体固定在固定相上。
通常使用聚合物或硅胶微球作为固定相。
这些固定相表面通常都含有活性基团，可以与抗体上的氨基酸或半胱氨酸等官能团发生化学反应，从而将抗体固定在固定相上。
然后，将这些固定相与样品混合，并加入胶体金颗粒。
这些胶体金颗粒表面通常都含有某种亲和剂，例如羧基、胺基或硫醇基等。
这些亲和剂可以与固定相表面上的活性基团发生化学反应，从而将胶体金颗粒与固定相结合。
当样品中存在目标分子（即要检测的抗原）时，它们会与固定相上的抗体结合。
这会导致在胶体金颗粒表面形成一层薄薄的抗原-抗体复合物。
由于胶体金颗粒具有特殊的光学性质，在紫外线或可见光照射下会呈现出明显的色泽变化。
因此，通过观察样品中是否存在红色或紫色条带，就可以判断样品中是否存在目标分子。
需要注意的是，在进行胶体金免疫层析技术时需要控制多个因素以确保准确性和稳定性。
其中一个重要因素是选择适当的抗原和抗体对。
必须确保它们之间具有高度特异性的结合能力，以避免误报和假阳性结果。
此外，还需要控制反应时间、温度和pH值等因素，以确保反应的可重复性和稳定性。
总之，胶体金免疫层析技术是一种简单、快速、灵敏和特异性高的生物分析方法。
它在生物学研究、医学诊断和环境监测等领域中得到了广泛应用。
胶体金免疫层析竞争法
胶体金免疫层析竞争法1. 背景介绍胶体金免疫层析竞争法（Colloidal Gold Immunochromatographic Assay）是一种常见的免疫层析快速检测方法。
该方法基于免疫学原理，利用胶体金颗粒与样品中的目标分子相互作用，通过色素沉淀形成可见的测试结果。
这种检测方法具有检测快速、操作简单、结果直观等优点，在临床诊断、食品安全监测、环境污染监测等领域得到广泛应用。
2. 原理介绍2.1 免疫学原理免疫学原理是胶体金免疫层析竞争法的基础。
免疫层析法是一种通过抗原-抗体反应实现分离和检测的技术。
在该方法中，通过将抗原（目标分子）与抗体（特异性与抗原结合的蛋白质）结合，形成免疫复合物，从而实现目标分子的检测。
2.2 胶体金颗粒胶体金颗粒是胶体金免疫层析法的关键试剂。
胶体金颗粒具有良好的生物相容性、稳定性和可见性，广泛应用于免疫学和生物医学领域。
胶体金颗粒的颜色通常为红色或紫色，直径一般在10-100纳米之间。
在光学显微镜下观察，胶体金颗粒呈现明显的表面等离子共振吸收峰，即表现为红色。
2.3 竞争反应胶体金免疫层析竞争法通过竞争反应实现目标分子的检测。
竞争反应分为两个步骤：竞争体系构建和检测结果显示。
2.3.1 竞争体系构建竞争体系构建是胶体金免疫层析竞争法的关键步骤。
在这一步骤中，将胶体金颗粒与目标分子结合。
首先，将目标分子与胶体金颗粒中的抗体结合，形成免疫复合物。
然后，将样品中的目标分子与胶体金颗粒中的抗体竞争结合。
当样品中的目标分子存在时，会与胶体金颗粒中的抗体竞争结合，导致免疫复合物的形成减少。
而当样品中的目标分子不存在时，胶体金颗粒中的抗体能与胶体金颗粒自身上的抗原结合，免疫复合物形成量较多。
2.3.2 检测结果显示检测结果显示是胶体金免疫层析竞争法的关键步骤。
在这一步骤中，利用胶体金颗粒的可见性进行结果显示。
当竞争体系构建完成后，将样品滴在测试纸上，胶体金颗粒会经由纸质的吸收作用，沿纸张上升。
简述胶体金免疫层析试验的原理
简述胶体金免疫层析试验的原理
胶体金免疫层析试验是一种广泛应用于临床诊断的免疫学方法，其原理基于抗原与抗体的特异性反应和胶体金颗粒的性质。
首先，抗原与抗体具有高度的特异性反应。
抗原是一种可以诱导免疫系统产生抗体的物质，而抗体则是由免疫系统识别并与抗原结合的蛋白质。
在胶体金免疫层析试验中，目标抗原与特异性抗体预先反应形成抗原-抗体复合物。
其次，胶体金颗粒具有特殊的性质。
胶体金颗粒是直径约为
20-200纳米的纳米金粒子，具有强烈的表面等离子共振吸收
特性，使其呈现出红色或紫红色。
胶体金颗粒还具有良好的稳定性和容易修饰的特点。
在试验过程中，将已经与抗原形成复合物的胶体金颗粒滴加到试纸上，然后样品溶液滴加到试纸样品孔上。
如果样品中存在目标抗原，它们会与复合物竞争结合到特异性抗体上。
当目标抗原与抗体结合后，胶体金颗粒会被阻滞在试纸样品孔上，形成红色或紫红色的线条。
如果样品中不存在目标抗原，则胶体金颗粒会沿着试纸上升，不会形成线条。
通过观察样品孔上的线条的形成情况，可以判断样品中是否存在目标抗原。
线条的出现通常表示阳性结果，即样品中存在目标抗原；线条未出现则表示阴性结果，即样品中不存在目标抗原。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用胶体金免疫层析技术（Colloidal gold immunochromatography assay，CGIA）是一种简便、快速、准确的检测方法，在食品安全现场快速检测中得到广泛应用。
该技术可用于检测食品中的污染物质，如农药残留、细菌、病毒、毒素等，具有检测时间短、操作简便、准确性高等优点。
胶体金免疫层析技术基于抗体与抗原之间的特异性识别原理，是一种间接固相免疫层析技术。
同时，该技术利用了胶体金颗粒的物理特性，即在特定pH值下，胶体金颗粒呈现出红色或紫色的可见光谱。
当产生特异性抗体与抗原之间的结合后，存在于测试区的胶体金颗粒会沉淀下来，使红色或紫色的可见光谱消失或变浅，从而可以获得结果。
目前，CGIA技术在食品行业中已经得到广泛应用。
例如，在动物源性食品检测中，CGIA技术可用于检测牛奶中的咖啡因和抗生素残留、肉和海鲜中的细菌、病毒、病原菌和其它污染物质等。
在植物源性食品检测中，CGIA技术可用于检测蔬菜和水果中的农药残留、食用油中的氯丹残留、谷物中的镉污染等。
此外，CGIA技术还广泛应用于饮料、水产品、奶制品、肉制品、调味品等食品中的快速检测。
CGIA技术的优点在于其操作简单、迅速、用量少、化学废物少、设备要求少、误差小、灵敏度、特异性高，可以在平板和便携式检测设备上使用。
这使得CGIA技术成为了实现食品安全快速检测的重要方法之一。
但是，也需要注意，CGIA技术的敏感度较高，但定量度不如高通量手段。
因此，在现场快速检测中，CGIA技术可以与其它技术相结合，实现对食品安全的全面检测。
通过多种技术手段的协同作用，我们可以更全面地了解食品中存在的污染物质情况，从而更好地保障公众的食品安全问题。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用随着食品工业的快速发展和全球贸易的加速，食品安全问题日益受到人们的关注。
食品安全检测是保障食品质量和保障公众健康的重要环节，快速、准确的检测技术对于食品安全已经成为不可或缺的一环。
胶体金免疫层析技术是一种迅速、敏感、特异性好，并且易于操作的检测技术。
本文将介绍胶体金免疫层析技术的原理、特点及在食品安全现场快速检测中的应用。
一、胶体金免疫层析技术原理胶体金免疫层析技术是基于抗原与抗体之间的特异性结合原理。
首先将目标分子作为抗原，与特异性的抗体反应形成抗原-抗体复合物，然后将其与胶体金颗粒结合。
当抗原-抗体复合物与胶体金颗粒结合时，会发生颗粒聚集，产生可见的颜色变化。
通过颜色的变化可以判断样品中是否存在所需检测的目标分子，从而实现快速检测。
1. 快速性：胶体金免疫层析技术无需复杂的操作步骤，通常能在几分钟内完成检测。
对于食品安全现场快速检测来说，时间就是金钱，因此快速性是其最大的优势之一。
2. 敏感性：胶体金免疫层析技术对目标分子的检测灵敏度高，可以检测到极低浓度的目标分子。
这使得其在食品安全检测中能够及时发现微量的有害物质，保障公众健康。
3. 特异性：胶体金免疫层析技术对目标分子的检测特异性好，能够区分目标分子和其他干扰物质，减少误判的可能性。
4. 易操作性：胶体金免疫层析技术不需要复杂的仪器设备，操作简单，适用于各种现场检测环境。
5. 成本低廉：胶体金免疫层析技术的试剂成本低廉，相对于传统的检测方法，可以大大降低检测成本。
1. 残留农药检测：农药残留是食品安全的一个重要问题，特别是对于农产品出口国家来说，农药残留的限量标准要求更加严格。
胶体金免疫层析技术可以快速检测食品中的农药残留情况，为食品出口提供可靠的检测数据。
2. 食品中毒素检测：食品中的毒素是一种常见的食品安全隐患，例如黄曲霉素、赭曲霉素等。
采用胶体金免疫层析技术可以对食品中的毒素进行快速检测，及时发现食品中的毒素污染问题。
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←胶体金标记鼠抗人HCG单抗
←羊抗鼠IgG
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positive
HCG 阳性标本MFra bibliotekX尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色 在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控 线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质. 控对照。
negative
HCG 阴性标本
MAX
尿中无HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物
随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体不结合而不显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控 线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
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试纸条失效
失效
MAX
免疫胶体金层析法
——金标记免疫法测HCG
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原理
• 采用胶体金标记抗体，以硝酸纤维 素膜为载体，使抗原抗体反应和洗 涤在同一渗滤膜上，反应后根据在 膜上的颜色判断结果。
• 以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔 膜毛细管作用，使膜一端的液体慢 慢向另一端渗移，犹如层析
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← HCG分子 ← 鼠抗人HCG单抗 ← 胶体金颗粒
金标鼠抗人IgG单抗随层析作用向上移动，到达质控线，无羊抗鼠IgG( 二抗)或破坏失效，不结合而 不显色，作为质控对照。
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大便隐血
MAX
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注意事项
• 1. 将试条有标志线的下端浸入尿液标本中， 深度不可超过标志线（若超过，可能会出 现假阳性）
• 2. 约3秒后取出，平放，5分钟内观察结果 (时间不能小于5分钟)：两条红线为(+)，提 示尿中含HCG。一条红线为(一)，表示不含 HCG。（时间过短，可能有假阴性）
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方法学评价
• 该法为定性检测尿中HCG，不能确定其浓度 • 因为该法是用单抗来测定HCG，特异性较高， 黄
疸、蛋白、血细胞和浑浊度对结果观察都无影 响。、 • 晨尿中一般含有最高的HCG值，检出率较高。 • 检测时间：HCG一般在受精卵着床后几天才出现 在尿液中，而且要达到一定的量才能被检出，因 此，对于平时月经正常的妇女需在月经推迟后才 可能在尿中检出，二月经周期长或排卵异常的妇 女有可能在停经40-44天才能检出 • 尿液稀释：如果喝水过多使尿液稀释可能会导致 假阴性结果。