免疫胶体金技术及应用
免疫胶体金技术及其在兽医临床上的应用
X u m u s h o u y i免疫胶体金技术是一种全新的免疫标记方式，有着方便、成本低、应用范围广等多方面使用优势。
这一技术在20世纪80年代发展，随着其发展近年来在生物医学的不同领域中得到充分的应用，特别是在兽医领域中得到足够的发展。
免疫胶体金凭借着自身的精准性高、操作简单等特点在兽医临床中应用，可以在很短的时间内实现对畜禽疫病的有效判断，可提升禽畜疫情防控的成效。
一、免疫胶体金技术概述1、基本原理在具体的应用中，免疫胶体金主要是通过胶体金作为示踪的标注物，在抗原抗体的反应中实际使用。
氯金酸在还原剂的作用下渐渐的变为金颗粒，成为疏水胶溶剂，会带有负电荷。
在弱碱环境中，胶体金有着负电荷，动物体内则有着正电荷基团，将此二者结合后不会对蛋白质原本的生物特性造成影响。
而且，胶体金离子会对蛋白质的分子形成一定的吸附功效，可在临床疫病的检测中有效应用。
2、检测技术一般情况下，常常使用的检测技术有CGEIA、DIGFA这两种方法。
此两种方式的相同点是，在抗原或者是抗体中加入适量的需要检验的标本，在渗滤作用下，两者会结合，再通过胶体金标记。
DIGFA应用中，会将蛋白质吸附，加快免疫速度，也使颜色转变更加明显。
CGEIA在实际应用中，要通过免疫层析条，依照一定的顺序粘贴，并切成条状检测。
3、使用优点这一技术在实际使用中有着多方面优势。
具体来讲，在使用上方便且高效，可以在基础或者是现场等环境中使用，其所有呈现的反应都能够维持在15分钟之内。
使用的费用不高，此技术在应用中不需要购买特殊或者是贵重的相关仪器。
应用的范围也很广泛，能够满足各种检测的条件。
还可以开展多项内容的测试，将样品的应用率提高，在保证成本大幅度降低的同时，也能有效解决部分样品难以获取的难题。
这项技术的标记物性质也很稳定，保留的时间很长，而且保存所需条件也不多。
二、免疫胶体金技术在兽医临床上的应用1、在禽类临床上应用禽类产品的质量将直接影响人们的身体健康，若是禽类产品出现疾病，造成的危害是不可估量的。
胶体金测验法原理及应用
胶体金测验法原理及应用胶体金测验法是一种分析技术，可以用于检测生物分子的存在。
该方法广泛应用于医学、生物化学、生物工程和生命科学等领域。
本文将介绍胶体金测验法的原理和应用。
胶体金测验法的原理：胶体金测验法是一种抗原-抗体反应，涉及到金纳米颗粒和抗体之间的相互作用。
抗体与特定的生物分子结合，因此可以用于检测免疫反应。
抗体也可以修改金纳米颗粒表面的性质，使其在特定的光照条件下发射色散光，从而产生颜色变化。
这种颜色变化可以通过视觉观察或仪器检测进行测量。
在胶态金试验中，金纳米颗粒被修饰成粉红色，这是因为它们的表面上带有羧基（羧酸结构）末端的甘油胺。
当与抗原结合时，它们的表面羧基减少，导致纳米颗粒聚集，并因散射金颜色变化而显现出来。
当抗体与抗原结合时，粉红色会变成暗紫色。
这是因为大量的金纳米颗粒被聚集在一起，形成聚集体，并散发出更强烈的光散射。
此时，光谱会在600nm左右出现新的峰值，并在520nm处消失。
这种光谱变化可以通过分光光度计或相关仪器进行测量。
胶态金试验中的羧酸和聚集体是测定抗原和抗体浓度的关键因素。
抗原和抗体在它们的适当浓度下，可以聚集成小聚集体，并形成蓝色溶液。
增加抗原的浓度，会导致聚集体的增加，使光谱中出现新的特征峰。
这种响应可以在适当的条件下使用光学技术进行定量分析。
胶态金试验的应用：由于胶态金试验具有高灵敏度、高选择性和易于操作等特点，因此被广泛应用于以下领域：1.生物学和医学胶态金试验可用于检测特定抗原或特定抗体的存在和水平变化，例如癌症生物标志物、丙型肝炎病毒和艾滋病病毒等。
它还可以用于诊断动物疾病、检测食品中的病原体、制药和生物分子的筛选等领域。
2.环境科学胶态金试验可以用于监测水和土壤中的有毒金属和污染物，例如重金属、有机化合物和细菌等。
它的高灵敏度和快速性使其成为检测水和土壤质量的良好工具。
3.纳米技术胶态金试验也可用于纳米颗粒的制备和表征，因为它可以测量纳米颗粒的聚集状态和光学特性。
胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用研究
胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用研究胶体金免疫层析技术是一种在食品检测中广泛应用的方法。
该技术利用胶体金颗粒的特性，在固体支撑上进行免疫层析反应，实现对分析物的检测。
本文将从胶体金免疫层析技术的原理、方法和应用等方面进行介绍，并探讨该技术在食品检测中的优势和未来发展方向。
首先，胶体金免疫层析技术是基于免疫学原理的一种快速、灵敏、特异的检测方法。
该技术利用胶体金颗粒的特殊性质，即在纳米尺度下具有高度可控的光学和电化学性质。
由于胶体金颗粒的尺寸和形态可以通过调整合成条件进行控制，因此可以用于检测不同大小和形态的分析物，包括蛋白质、DNA、细菌等。
其次，胶体金免疫层析技术的方法简单、操作便捷、成本低廉。
在实际操作中，只需将样品滴加到含有胶体金颗粒和特异抗体的免疫纸条上，然后等待几分钟即可观察到胶体金颗粒在纸条上的迁移情况。
通过观察纸条上的色带出现与否以及色带的颜色变化，可以判断样品中是否存在目标分析物，并进行定量分析。
相比于传统的基于酶标记技术的免疫层析方法，胶体金免疫层析技术不需要复杂的仪器设备和多步酶标记过程，因此更加简便快速。
再次，胶体金免疫层析技术在食品检测中具有广泛应用前景。
目前，该技术已被应用于多种食品中的残留物检测，包括食品中的农药、重金属、毒素等。
例如，研究人员利用胶体金免疫层析技术能够检测到食品中的抗生素残留、农药残留、酶毒素等，在食品安全监测中起到了重要的作用。
此外，胶体金免疫层析技术还可以应用于快速检测食品中的转基因成分、食品中的过敏原等。
最后，尽管胶体金免疫层析技术在食品检测中已经取得了一定的成就，但仍面临一些挑战和未解决的问题。
例如，该技术在样品预处理、灵敏度、特异性等方面还需要进一步优化和改进。
此外，胶体金颗粒的稳定性和存储问题也需要解决，以确保该技术能够在实际应用中长期稳定地实现。
因此，未来的研究方向应该着重解决这些问题，提高胶体金免疫层析技术的准确度和可靠性。
综上所述，胶体金免疫层析技术作为一种快速、灵敏、特异的检测方法，具有广泛的应用潜力。
免疫胶体金技术及其在肉类安全检测中的应用
分单 一 ， 特异性 好而 多用 于标记 ， 应 注意 的是 在选 但 用单 克 隆抗体 配对 时针对 同一抗 原 的两种 单 克隆抗
体的抗原决定簇 应不 同。多克隆抗体成分复杂， 增 加 了与样 品 中 的其 他 物 质 发 生非 特 异 的 可 能性 ， 但
其制 备方 法简单 ， 成本 较 低 ， 被 广泛使 用 。无论 也 选 用哪种 抗体 用于标 记在 用于 标记 前 至少 应进 行 一
些氨 基酸 残基包 括色 氨酸 与金 粒子 表 面之 间 的疏 水
根据 检 测 目的 的不 同来 选 择 标 记 抗 原 还 是 抗 体 。细胞 裂解 液 、 化 蛋 白或重 组 蛋 白都 可 以作 为 纯 相关 抗原 的来 源 ， 而对 于某 些小 分 子物 质像 激 素 、 药 物及 其他 小 分 子 （＜１ Ｋ 与 金 表 面没 有 足 够 的结 ０ Ｄ）
在 光镜 电镜 下对 抗 原 或 抗 体 物 质 进行 定 位 、 性 乃 定
至定 量研究 的标 记技术 。
４ ｎ 大小 。在 胶体 金 与蛋 白质 偶 联 的过 程 中金 颗 ０ｍ 粒 的品 质起着 决 定 性 的作 用 ， 果 应用 劣 质 的胶 体 如 金用 于标 记直 接 影 响 试 纸 条 的灵 敏 度 ， 定 性 和特 稳
合位 点 ， 被 动 交联 之 前 必 须 先结 合 到 大 分 子 载体 在
上， 多为 牛血 清 蛋 白。在 以 检测 抗 原 为 目的的试 纸
吸附作用 ；３ 蛋 白中的半胱 氨酸 的硫基 与金 粒 子间 （）
的配价结 合 。
条制 作 时 ， 则选 用抗体 作 为被标 记 物 ， 克 隆抗 体 和 单
Ｋｅ ｒ ｓ ｉ ｙ ｗｏ ｄ ｍｍ ｕ ｅ ｃ ｌｏｄ ｌｇ ｌ ｅ ｈ ｉ ｕ ｎ ｏｌｉ ａ ｏｄ ｔｃ ｎ ｑ ｅ；ｃ ａ ａ ｔｒｓｉｓ；ａ ｌ ａｉｎ ｈ ｒ ｃ ｅ ｔｃ ｉ ｐｐｉ ｔｏ ｃ
《免疫胶体金技术》课件
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
免疫胶体金的技术
2. 凝胶过滤法
u 将探针溶液装入透析袋内， 4℃ ，置于硅胶或聚乙 二醇中浓缩至原体积的1 4～1 5 u 离心 1500 r min，20min 弃沉淀 u 经Sephacryl（丙烯葡聚糖）S400层析柱分离纯化。 用0.02mol/L TBS(0.1%BSA)洗脱 ? TBS的PH根据蛋白质种类而定 u 按红色深浅分管收集洗脱液
1. 光镜免疫金银法 3 在免疫金染色的基础上增加物理显影的步骤 3 显影液的配制及显影过程应在暗处进行 3 阳性部位呈黑色颗粒状 32. 电镜免疫金银法 3 包埋前染色, 包埋后染色
【IGSS法优点】
1. 可被用于光镜和电镜观察 2. 敏感性高 3. 定位准确 4. 背景清晰, 对比度好 5. 方法简便, 安全 6. 成本较低, 标本可长期保存
【常用还原剂】柠檬酸钠、鞣酸、白磷等
柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大，15~150nm
白磷还原制备的金颗粒直径较小，3~12nm
【具体制备方法】
（二）影响溶胶稳定性的因素 u 电解质 u 胶体金浓度 u 温度 u 大分子物质
（三）胶体金的鉴定
【鉴定方法】在电镜下观察金颗粒的大小 及金颗粒的均匀程度
( 七) 标记探针的鉴定
1. 负染色检查: 将胶体金溶液滴在覆有
Formavar膜( 支持膜) 的镍网上, 空气中干燥, 醋 酸铀负染, 透射电镜下观察
2. 生物活性鉴定: 可用直接或间接法放射免疫
测定, 凝聚试验及免疫组化染色进行鉴定
四. 免疫胶体金染色方法
( 一 ) 免疫金染色法
Immunogold staining, IGS
( 五）标记
1. 计算所需待标记蛋白质的总量
根据用以标记的胶体金溶液总体积及所测定的最 适蛋白质稳定量，计算出所需待标记蛋白质的总量
免疫胶体金技术
面临挑战与解决策略
技术挑战
提高胶体金的合成效率、稳定性和生物相容性，降低生产成本，推动技术的实际应用。
应用挑战
拓展免疫胶体金技术在生物医学领域的应用范围，提高其在实际应用中的准确性和可靠 性。
法规与伦理挑战
建立健全相关法规和标准体系，规范免疫胶体金技术的研发和应用，确保其安全性和有 效性。同时，关注伦理问题，尊重人类生命和尊严，推动技术的健康发展。
环境毒理学研究
毒性评估
利用免疫胶体金技术，可以研究 环境污染物对生物体的毒性作用 ，评估其对生态系统和人类健康
的影响。
毒理机制研究
该技术可用于揭示环境污染物与生 物体相互作用的分子机制，为环境 毒理学的深入研究提供有力工具。
污染物代谢研究
通过免疫胶体金技术，可以研究环 境污染物在生物体内的代谢过程， 了解其在生物体内的转化和排泄途 径。
食品营养成分分析
蛋白质检测
利用免疫胶体金技术，可以准确测定食品中的蛋白质含量，为食品 的营养价值评估提供依据。
维生素检测
该技术可用于食品中多种维生素（如维生素A、维生素E等）的定量 分析，有助于评价食品的营养成分组成。
矿物质检测
通过免疫胶体金技术，可以检测食品中的矿物质元素含量，如钙、铁 、锌等，为食品的营养价值提供全面数据。
02
免疫胶体金制备技术
原料选择与处理
01
02
03
氯金酸的选择
选择高纯度的氯金酸作为 原料，确保胶体金的合成 质量。
还原剂的选择
常用还原剂如柠檬酸三钠 、抗坏血酸等，用于将氯 金酸还原为金颗粒。
溶液配制
将氯金酸溶解在适量超纯 水中，配制成一定浓度的 氯金酸溶液。
胶体金合成方法
免疫胶体金技术的应用结课论文
免疫胶体金技术的应用免疫胶体金技术是继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)后发展起来的固相标记免疫测定技术。
免疫胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物, 应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
近年来, 该技术在医学、动植物检疫、食品安全监督等各领域得到了日益广泛的应用。
1免疫胶体金技术的基本原理胶体金标记技术实质上就是蛋白质分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程［6］。
在适宜条件下，抗原和抗体与胶体金颗粒反应产生聚集，达到一定的密度时，大量聚集的标记物显示出肉眼可见的红色或粉红色斑点。
因此免疫胶体金技术在基础研究和检验检疫中定性或半定量的快速检测中得到广泛的应用［8］。
2免疫胶体金在电镜水平的应用胶体金是用于免疫电镜的最佳标记物, 因为它呈球形, 非常致密, 在电镜下具有强烈反差, 容易追踪在电镜下检出抗原抗体复合物。
胶体金免疫电镜技术已成为目前最常用的免疫细胞化学方法之一, 它具有灵敏度高、特异性强、定位精确等优点, 同时它还可以对抗原进行定性、定量、定位的分析与观察。
3免疫胶体金在光镜水平的应用应用胶体金颗粒呈桔红色到紫红色的特性，在光镜水平检查细胞表面抗原，具有操作步骤少、制片稳定、染色易控制，呈色鲜明的优点。
在胶体金染色的基础上增加了银显影，提高胶体金标记在光镜检测中的灵敏度，胶体金标记的结合位点将被更好地观察。
张铁汉等应用IGSS 染色法，建立了光镜水平检测血清抗核抗体，使基层医院自身免疫性疾病的诊断得到开展，将IGSS 染色法的应用从形态学诊断提高到免疫学水平。
4免疫胶体金快速诊断技术的应用4.1 在斑点免疫渗滤实验中的应用该技术主要应用微孔滤膜(NC膜)作载体的免疫检测技术, 先将抗原或抗体点于NC膜上, 封闭后加待测样品, 洗涤后用胶体金探针检测相应的抗原或抗体。
通过金颗粒来放大免疫反应系统, 使反应结果在固相载体NC膜上显示出来。
有科学家应用胶体金标记SPA，建立了检测日本血吸虫、边虫病、猪旋毛虫病、羊东毕吸虫病、囊虫病、抗精子抗体的DIGFA4.2 胶体金免疫层析法胶体金免疫层析(GICA) 法是将胶体金标记技术、层析分析技术和免疫检测技术等多种方法结合，具有结果清晰，无污染，携带方便等优点的快速免疫分析方法［26］。
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• 结果判断: 对照管或加入蛋白量不足，胶体金出 现由红变蓝的凝聚现象；加入蛋白质量达到或超过 稳定量，则胶体金保持红色不变
2. 光电比色法
利用分光光度计测各管580nm的OD值, 然后以OD 值为纵坐标, 蛋白质浓度为横坐标作一曲线, 取曲 线最先与横轴相接近的那一点的蛋白质浓度, 即为 最适稳定量.
4. 继续磁力搅拌，加入5％牛血清白蛋白， 使其终浓度为1％，搅拌10min；也可加3％ 聚乙二醇，使其终浓度为0.05％
（六）金标记物纯化
纯化的目的
去除溶液中未标记的 蛋白质，未充分稳定的胶 体金，以及在标记过程中可能产生的各种聚合物
纯化的方法
超速离心法和凝胶过滤法
1. 超速离心法
速度快，适合大样品的制备 • 离心 1500 r min，20min 弃沉淀 • 超速离心 4℃ 1h 弃上清 • 沉淀用PBS或TBS缓冲液（含0.1％牛血清白蛋 白重新悬浮至原体积的 1 10～1 20 • 离心 1500 r min，20min 弃沉淀 • 分装 4℃ 保存
溶胶。其中分散的金颗粒直径在1~100nm 之间。
二. 胶体金的获得
(一) 可用多种方法制备胶体金 1. 分散法:包括机械分散法、超声波法、电分
散法和胶溶法等
2. 凝聚法:包括物理凝聚法、化学凝聚法（氧 化法、水解法和还原法）
3. 化学还原法
化学还原法
【基本原理】在氯化金水溶液中加入一定量的还 原剂，使金离子还原为金原子。在适当条件下， 还原的金原子凝聚成一定大小的金颗粒，形成 金溶胶。
【常用还原剂】柠檬酸钠、鞣酸、白磷等
柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大，15~150nm 白磷还原制备的金颗粒直径较小，3~12nm 【具体制备方法】
（二）影响溶胶稳定性的因素 电解质 胶体金浓度 温度 大分子物质
（三）胶体金的鉴定
【鉴定方法】在电镜下观察金颗粒的大小 及金颗粒的均匀程度
胶体金技术
Immunogold Technique
大纲
概述 胶体金的获得 金标记物的制备及调试 胶体金技术的应用 胶体金技术的优点 胶体金技术的未来发展方向
一. 概述
(一) 发展历史
1971年 Faulk和Taylon 用兔抗沙门氏菌抗血清与胶 体金颗粒结合, 制备成金标抗体, 检测细菌表面抗原的 分布
标记之前将胶体金的PH值调至待标蛋白质 的等电点或略偏碱
调节PH的方法：
当需要提高胶体金的PH值时，用0.2mol/L K2CO3 或0.1mol/L KOH
当需要降低胶体金的PH值时, 用0.1M HCL或醋酸
(三) 待标记蛋白质的处理 1. 透析除盐: 将蛋白质溶液装入透析袋中, 放
在蒸馏水中透析, 4℃过夜 2. 离心: 10000 r/min, 4℃, 1h, 去除蛋白质聚
按红色深浅分管收集洗脱液
(七) 调试与鉴定
胶体金试纸条检测原理及组成：
吸收垫
NC膜
金标垫
C线（控制线）
T线（检测线）
【鉴定方法】将胶体金滴在覆有Formvar 膜或碳- Formvar膜的镍网上，空气干燥， 透射电镜下观察，拍照，测量金颗粒的 直径，并计算100个以上胶体金颗粒直径 的平均值及标准差
（四）制备胶体金的注意事项
1. 玻璃器皿的清洁
玻璃器皿清洗→清洁液浸泡24h →流水冲→蒸馏 水反复洗涤→晾干
2. 试剂配制
合物等沉淀
(四) 胶体金蛋白质最佳结合率测定
不同直径的金颗粒, 及不同分子量大小的 蛋白质, 其结合的比例是不同的
常用的检测二者结合量的方法有目测法和光 电比色法
1. 目测法
• 先将待标记蛋白质逐级稀释
• 取一批小试管，编号，每管内加已调好PH的胶 体金100ul
• 按从低→高的浓度，将已稀释好的蛋白溶液，
应尽量使用分析纯试剂
各种水溶液必须用三蒸水或去离子水配制
3. 影响胶体金颗粒大小的因素
加入还原剂的速度
搅拌是否均匀
制备胶体金所用的烧瓶大小
三. 金标记物的制备及调试
(一) 胶体金与蛋白质结合的原理
胶体金标记蛋白质的过程, 实际上是蛋白质在等电 点或稍偏碱时, 被吸附于胶体金颗粒表面.
（二）胶体金的预处理
1986年 Fritz等 在免疫金银法基础上成功进行了 彩色免疫金银染色
免疫胶体金技术
以胶体金为标记物应用在免疫组织化学研 究中，对细胞表面或细胞内的多糖、糖蛋 白、蛋白质、多肽、激素和核酸等生物大 分子进行定位研究
（二）胶体金的基本概念 胶体金，一般指金的水溶液，又称金溶胶。 ---金以微小的粒子分散在水中所形成的金
2. 凝胶过滤法
将探针溶液装入透析袋内， 4℃ ，置于硅胶或聚乙 二醇中浓缩至原体积的1 4～1 5 离心 1500 r min，20min 弃沉淀 经Sephacryl（丙烯葡聚糖）S400层析柱分离纯化。 用0.02mol/L TBS(0.1%BSA)洗脱
TBS的PH根据蛋白质种类而定
(五）标记步骤
1. 计算所需待标记蛋白质的总量
根据用以标记的胶体金溶液总体积及所测定的最 适蛋白质稳定量，计算出所需待标记蛋白质的总量
2. 调节PH：根据所标记蛋白质的等电点来调节胶
体金的 PH
常用几种蛋白质标记时胶体金的 PH
蛋白质
PH
抗体
9.0
SPA
6.0
过氧化物酶
8.0
低密度脂蛋白
5.5
3. 磁力搅拌下，逐滴加入蛋白质溶液，作 用 5～15min
1975年 Horisberger等 把胶体金技术推广应用于扫 描电镜、透射电镜及冰冻蚀刻电镜的研究
1978年 Geoghegan 水平的应用
发表了胶体金标记物在光镜
1981年 Danscher
建立了银显影液增强，光镜
下金颗粒可见性的方法
1983年 Moeremans等 在蛋白质转移电泳中应用 了免疫金银染色法
分别加入已编号的试管中，对照管只加不含蛋白 的稀释液，混匀，静置5 ~ 10 min • 各管分别加10%NaCl 10μl，混匀，静置2hr， 观察结果
12 3456g) 5 10 15 20 25 30 35
10%NaCl 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1