胶体金技术
免疫胶体金技术
The gold conjugate must be purified from excess antibody and any small clusters removed before concentrating and storing. Spin the gold conjugate at speeds according to gold particle size . The gold conjugate will form a loose precipitate at the bottom of the tube. Discard the clear supernatant and resuspend the pellet with proper buffer.
. 劣质金外形不均一，且非球形，有凝集现象，颗粒间变异系数较大
How are the antibodies coupled to the gold?
Conjugation of antibodies to gold particles depends upon three separate but dependent phenomena : a). ionic attraction between the negatively charged gold and the positively charged protein b). hydrophobic attraction between the antibody and the gold surface c). Sulfur binding (Cysteine and Methionine)
胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。 需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需要降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH可能损害pH测定计的探头，因此，一般用精密的pH试纸测定其pH即可.
胶体金法各种方法法原理
胶体金法各种方法法原理胶体金（colloidal gold）是一种常见的纳米材料，广泛应用于生物医学、光电子学以及化学分析等领域。
胶体金法则是制备胶体金纳米颗粒的一种常用方法，它包括了各种不同的制备方法。
本文将详细介绍胶体金法的各种方法和原理。
一、胶体金法的概述胶体金法是指利用化学还原或还原剂将金离子还原成金原子并使其聚集形成胶体金颗粒的过程。
胶体金颗粒具有良好的可控性和活性，可以通过调节制备条件来控制其形状、尺寸和表面性质，便于在各个领域的应用中发挥优越性能。
二、化学还原法化学还原法是制备胶体金的一种常见方法。
其原理是通过将金离子与还原剂反应，使金离子还原为金原子，形成胶体金颗粒。
常用的还原剂有氨水、柠檬酸等。
这种方法制备的胶体金颗粒形状和尺寸较均匀，可以通过调节还原剂浓度、反应时间和温度等参数来控制颗粒的大小和形状。
三、光化学法光化学法是一种利用光照射来控制胶体金纳米颗粒形成的方法。
在该方法中，金离子在紫外光照射下被激发产生自由电子，然后与还原剂发生反应，形成胶体金颗粒。
这种方法具有反应速度快、颗粒形状可调控等优点。
光化学法的适应范围广，可以制备不同形状和尺寸的胶体金颗粒。
四、微乳液法微乳液法是一种利用乳化剂将金离子包裹在微乳液中，通过还原剂将金离子还原为金原子，最终生成胶体金颗粒的方法。
微乳液具有稳定性好、溶剂消耗少等特点，在胶体金制备中广泛应用。
该方法不受金离子浓度的限制，能够制备出较大尺寸的胶体金颗粒。
五、溶胶-凝胶法溶胶-凝胶法是一种将金离子逐渐转化为胶体金的方法。
首先，将金离子转化为胶态溶胶，然后通过加热或干燥使其凝胶，最终形成胶体金凝胶。
该方法可以制备出较大尺寸的胶体金颗粒，也可用于制备具有复杂结构的胶体金材料。
六、电化学法电化学法是一种利用电化学反应制备胶体金的方法。
在电化学细胞中，金阳极上的金离子被还原为金原子，并在阴极表面聚集形成胶体金颗粒。
该方法具有较高的纯度和良好的控制性能，可用于制备高质量的胶体金。
胶体金技术总结Ⅱ
胶体金技术总结Ⅱ一、胶体金技术原理胶体金技术的基本原理是将金金属离子还原成金纳米颗粒并通过其中一种方法使其分散在溶液中。
金纳米颗粒可以通过改变反应条件来调控其形貌和大小，以及表面性质。
其中，分散性是胶体金技术的重要特点，因为金纳米颗粒只有在分散状态下才能充分发挥其特殊性质。
二、胶体金技术制备方法化学还原法是最常用的制备胶体金的方法之一、它通过将金离子还原为金金属颗粒，并通过表面活性剂、电解质等调控分散性。
化学还原法制备的胶体金颗粒粒径较小且分散性好，但对条件要求较高。
溶胶-凝胶法是一种将溶胶中的颗粒逐渐转变为凝胶的制备方法。
通过控制凝胶形成的条件，可以调节金纳米颗粒的形貌和大小。
沉积法是通过将预制的胶体金颗粒沉积到底物表面，制备具有特定功能的薄膜或涂层。
该方法可以制备出均匀、稳定的胶体金薄膜，并且可以调控颗粒的形貌和密度。
光化学法是通过光化学反应将金离子还原为金颗粒。
光化学法制备的胶体金颗粒分散性好，并且可以调控颗粒的形貌和大小。
三、胶体金技术应用1.材料科学方面，胶体金可以用于制备纳米尺度的电子材料，如导电薄膜、导电纳米线等。
此外，胶体金还可以作为催化剂、催化剂载体、光催化材料等。
2.生物医学方面，胶体金颗粒具有良好的生物相容性和生物活性，可以用于制备药物载体、生物传感器、光热治疗等。
胶体金的表面还可以修饰生物分子，用于生物成像、生物分析等应用。
3.传感器方面，胶体金可以用于制备高灵敏度、高选择性的传感器。
通过修饰胶体金表面的功能分子，可以实现对特定分子的检测，并且可以通过纳米尺度的效应提高传感器的性能。
4.光电子方面，胶体金颗粒具有优异的光学性质，可以用于制备光电器件，如光伏器件、光探测器等。
胶体金颗粒的表面还可以修饰光子晶体，制备具有特殊光学性质的材料。
总之，胶体金技术是一种具有广泛应用前景的技术。
通过调控金纳米颗粒的形貌、大小和表面性质，可以制备出具有特殊功能的材料，并用于材料科学、生物医学、传感器、光电子等领域。
胶体金免疫层析技术原理
胶体金免疫层析技术原理介绍胶体金免疫层析技术（Colloidal Gold Immunochromatography Test）是一种常用于快速、便捷地检测生物体内特定分子的方法。
该技术基于免疫层析原理，利用胶体金颗粒作为信号指示剂，实现对目标分子的高灵敏检测。
原理胶体金免疫层析技术主要依赖于抗原-抗体的专一性识别和相互结合。
当胶体金颗粒与特异性抗体结合后，形成颗粒/抗体/抗原复合体。
通过将样品与含有抗原的试剂盒进行反应，可使目标分子与胶体金颗粒上的特异性抗体结合，形成颗粒/抗体/抗原/目标分子复合体。
操作步骤使用胶体金免疫层析技术进行检测通常需要以下步骤：1.样品处理–收集待测样品，并进行必要的前处理，例如离心、稀释等。
–如果样品是固体，需要先进行溶解或悬浊处理。
2.反应溶液的制备–根据试剂盒的说明书，将试剂溶解或稀释到适当的浓度。
3.准备试剂盒–打开试剂盒包装，并将提供的试剂按照指示加入到试剂盒中。
4.加样–使用专用的吸管或滴管，将处理好的样品滴入试剂盒的样品孔中。
5.反应–让样品与试剂盒中的抗体共反应一定时间，通常为几分钟。
6.拍照解读–将试剂盒放置在专门的解读器上，并对结果进行解读。
–解读器会对胶体金颗粒的颜色进行分析和判断，从而得出检测结果。
7.结果判读–根据解读器显示的结果，确定样品中目标分子的存在与否。
–通常，胶体金免疫层析技术结果可分为阴性、阳性或无效，具体判读标准需根据试剂盒说明书确定。
优势和应用领域胶体金免疫层析技术具有以下优势和应用领域：1.快速：检测时间短，通常在几分钟内可以得出结果。
2.简便：操作简单，无需复杂的设备和专业技术人员。
3.准确：具备高灵敏性和特异性，可以有效地识别目标分子。
4.可视化：结果直接显示在试剂盒上，无需显微镜等设备。
5.应用广泛：可以用于临床医学、环境检测、食品安全等多个领域。
局限性和发展趋势胶体金免疫层析技术虽然具有许多优点，但也存在一些局限性：1.灵敏度限制：相比于其他方法，如PCR和ELISA，胶体金免疫层析技术的灵敏度相对较低。
《免疫胶体金技术》课件
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
免疫胶体金的技术
2. 凝胶过滤法
u 将探针溶液装入透析袋内， 4℃ ，置于硅胶或聚乙 二醇中浓缩至原体积的1 4～1 5 u 离心 1500 r min，20min 弃沉淀 u 经Sephacryl（丙烯葡聚糖）S400层析柱分离纯化。 用0.02mol/L TBS(0.1%BSA)洗脱 ? TBS的PH根据蛋白质种类而定 u 按红色深浅分管收集洗脱液
1. 光镜免疫金银法 3 在免疫金染色的基础上增加物理显影的步骤 3 显影液的配制及显影过程应在暗处进行 3 阳性部位呈黑色颗粒状 32. 电镜免疫金银法 3 包埋前染色, 包埋后染色
【IGSS法优点】
1. 可被用于光镜和电镜观察 2. 敏感性高 3. 定位准确 4. 背景清晰, 对比度好 5. 方法简便, 安全 6. 成本较低, 标本可长期保存
【常用还原剂】柠檬酸钠、鞣酸、白磷等
柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大，15~150nm
白磷还原制备的金颗粒直径较小，3~12nm
【具体制备方法】
（二）影响溶胶稳定性的因素 u 电解质 u 胶体金浓度 u 温度 u 大分子物质
（三）胶体金的鉴定
【鉴定方法】在电镜下观察金颗粒的大小 及金颗粒的均匀程度
( 七) 标记探针的鉴定
1. 负染色检查: 将胶体金溶液滴在覆有
Formavar膜( 支持膜) 的镍网上, 空气中干燥, 醋 酸铀负染, 透射电镜下观察
2. 生物活性鉴定: 可用直接或间接法放射免疫
测定, 凝聚试验及免疫组化染色进行鉴定
四. 免疫胶体金染色方法
( 一 ) 免疫金染色法
Immunogold staining, IGS
( 五）标记
1. 计算所需待标记蛋白质的总量
根据用以标记的胶体金溶液总体积及所测定的最 适蛋白质稳定量，计算出所需待标记蛋白质的总量
胶体金技术及其应用
该42013年第09期二榷影妞却爵言注公目高二璃纤维的结合释放垫上其一端与膜相连相连膜的另一端连有吸水垫尿或其他体液后样品通过毛细管的扩散作用向前移动并通过含标记物的玻璃纤维使标记物重新水化并与胶体金标记物相互反应然后一起向前泳动至检测线固定有特异性抗原或抗体时标记物与待测物的复合物会被检测线截获而出现明显而直观的红色结果则会和游离标记物一起越过检测线到达质控线或试验终止线被截获而出现红色的对照结果或问接法检测抗体池有采用双孔间接法或反流免疫层析法检测i如和glm对于小分子抗原如药物残留定等来说则宜采用竞争抑制法胶体金快速检测技术的特点检测面广免疫胶体金技术既可用于抗原抗体检测也可用于体内生物活性物质检测等领域操作方便不论是胶体金免疫层析技术还是斑点免疫金渗滤技术都具有操作步骤简单无需特殊仪器殊处理作人员无特殊技能要求快捷迅速免疫胶体金快速诊断技术需时短要5口0币n就会出结果而其它方法如elisa需要1卫hpcr需要时间更长特异性强由于该技术大多用单克隆抗体标记定了它只对某一抗原决定簇进行检测因而具有很好的特异性灵敏准确由于试验条件的不断优化敏度都可达到检测中总体符合率均在95以上靠4石携带方便由于胶体金标记蛋白质是一物理结合过程碑吉合牢固定不受温度等外界因素影响河随身携带随时检测脸测结果也可长期保存安全环保与其它检测方法相比大简化了操作段有诸如放射性同位素质参与试验所以既不会损害操作者健康池不会污染环境具有放射性同位素或酶标等检测方法所无法比拟的安全性胶体金技术在兽医学中的应用在畜禽病毒病诊断中的应用扩大和畜禽疫病的复杂化对疫病的诊断及鉴别诊断要求不但要准确而且要求快速才能有效的做好防治工作病毒抗原检测技术的进步免疫胶体金技术以其快速可单份检测多等优点也开始被逐渐应用于畜禽病毒病的诊断目前利用胶体金技术制备的试纸在畜禽病毒病的诊断中发挥了重要的作用心法建立的猪瘟病毒抗体检测免疫层析试纸条启可以用来另一端与样品垫quot
胶体金检测技术-
阳性结果 样品中可能含有等于或源自于3ng/ml的盐酸克伦特罗。培训资料
四、ß -激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍
以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例
一．适用范围： 主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊 尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要 5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当 尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测 卡才能检测到。
试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无 法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性， 从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。 因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。 3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹
尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如果 风吹太阳晒，NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位置，会 产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电风扇、空 调的风直吹。
培训资料
二 、包装 每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡 ，滴管1个、干燥剂1片。
三、现场筛查步骤
1. 在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡 和待检样本溶液恢复至室温。
2. 从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地 使用。
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3．将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂 直滴加3滴（约80ul）于加样孔中，加样后开始计时。
培训资料
图1 金颗粒示意 图
在溶液中金颗粒呈 圆形, 表面带有负电 荷 , 由于静电的排斥 力 , 使其在水中保稳 定状态，形成稳定 的胶体状态。
培训资料 3. 胶体金试纸条的构造
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免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)文章来源： 文章作者： 发布时间：2007-04-24 字体： [大 中 小]（一） 原理 免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。
胶体金是由氯金酸（HAuCl 4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。
胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA 、PHA 、ConA 等。
根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
（二） 胶体金的制备根据不同的还原剂可以制备大小不同的胶体金颗粒。
常用来制备胶体金颗粒的方法如下。
1．枸橼酸三钠还原法（1）10nm 胶体金粒的制备：取0.01％HAuCl 4水溶液100ml ，加入1％枸橼酸三钠水溶液3ml ，加热煮沸30min ，冷却至4℃，溶液呈红色。
（2）15nm 胶体金颗粒的制备：取0.01％HAuCl 4水溶液100ml ，加入1％枸橼酸三钠水溶液2ml ，加热煮沸15min ～30min ，直至颜色变红。
冷却后加入0.1Mol/L K 2CO 30.5ml ，混匀即可。
（3）15nm 、18nm ～20nm 、30nm 或50nm 胶体金颗粒的制备：取0.01％HAuCl 4水溶液100ml ，加热煮沸。
根据需要迅速加入1％枸橼酸三钠水溶液4ml 、2.5ml 、1ml 或0.75ml ，继续煮沸约5min ，出现橙红色。
这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm 、18～20nm 、30nm 和50nm 。
2．鞣酸—枸橼酸钠还原法A 液：1％HAuCl 4水溶液1ml 加入79ml 双馏水中混匀。
B 液：1％枸橼酸三钠4ml ，1％鞣酸0.7ml ，0.1Mol/L K 2CO 3液0.2ml ，混合，加入双馏水至20ml 。
将A液、B液分别加热至60℃，在电磁搅拌下迅速将B液加入A液中，溶液变蓝，继续加热搅拌至溶液变成亮红色。
此法制得的金颗粒的直径为5nm。
如需要制备其它直径的金颗粒，则按表15-1所列的数字调整鞣酸及K2CO3的用量。
表15-1鞣酸—枸橼酸钠还原法试剂配制表3．制备高质量胶体金的注意事项（1）玻璃器皿必须彻底清洗，最好是经过硅化处理的玻璃器皿，或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器皿，再用双馏水冲洗后使用。
否则影响生物大分子与金颗粒结合和活化后金颗粒的稳定性，不能获得预期大小的金颗粒。
（2）试剂配制必须保持严格的纯净，所有试剂都必须使用双馏水或三馏水并去离子后配制，或者在临用前将配好的试剂经超滤或微孔滤膜（0.45µm）过滤，以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。
（3）配制胶体金溶液的pH以中性（pH7.2）较好。
（4）氯金酸的质量要求上乘，杂质少。
最好是进口的。
（5）氯金酸配成1％水溶液在4℃可保持数月稳定，由于氯金酸易潮解，因此在配制时，最好将整个小包装一次性溶解。
（三）胶体金标记蛋白的制备胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。
如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。
除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。
1．待标记蛋白溶液的制备将待标记蛋白预先对0.005Mol/L pH7.0 NaCl溶液中4℃透析过夜，以除去多余的盐离子，然后100 000g4℃离心1h，去除聚合物。
2．待标胶体金溶液的准备以0.1Mol/L K2CO3或0.1Mol/L HCl调胶体金液的pH值。
标记IgG时，调至9.0；标记McAb时,调至8.2；标记亲和层析抗体时，调至7.6；标记SPA时，调至5.9～6.2；标记ConA时，调至8.0；标记亲和素时，调至9～10。
由于胶体金溶液可能损坏pH计的电板，因此，在调节pH时，采用精密pH试纸测定为宜。
3．胶体金与标记蛋白用量之比的确定（1）根据待标记蛋白的要求，将胶体金调好pH之后，分装10管，每管1ml。
（2）将标记蛋白（以IgG为例）以0.005Mol/L pH9.0硼酸盐缓冲液做系列稀释为5µg/ml～50µg/ml，分别取1ml，加入上列金胶溶液中，混匀。
对照管只加1ml稀释液。
（3）5min后，在上述各管中加入0.1ml 10％NaCl溶液，混匀后静置2h，观察结果。
（4）结果观察，对照管（未加蛋白质）和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的各管，均呈现出由红变蓝的聚沉现象；而加入蛋白量达到或超过最低稳定量的各管仍保持红色不变。
以稳定1ml胶体金溶液红色不变的最低蛋白质用量，即为该标记蛋白质的最低用量，在实际工作中，可适当增加10％～20％。
4．胶体金与蛋白质（IgG）的结合将胶体金和IgG溶液分别以0.1Mol/L K2CO3调pH至9.0，电磁搅拌IgG溶液，加入胶体金溶液，继续搅拌10min，加入一定量的稳定剂以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀。
常用稳定剂是5％胎牛血清（BSA）和1％聚乙二醇（分子量20KD）。
加入的量：5％BSA使溶液终浓度为1％；1％聚乙二醇加至总溶液的1／10。
5．胶体金标记蛋白的纯化（1）超速离心法：根据胶体金颗粒的大小，标记蛋白的种类及稳定剂的不同选用不同的离心速度和离心时间。
用BSA做稳定剂的胶体金—羊抗兔IgG结合物可先低速离心（20nm金胶粒用1 200r/min，5nm金胶粒用1 800r/min）20min，弃去凝聚的沉淀。
然后将5nm胶体金结合物用6 000g，4℃离心1h；20nm～40nm胶体金结合物，14 000g，4℃离心1h。
仔细吸出上清，沉淀物用含1％BSA的PB液（含0.02％NaN3），将沉淀重悬为原体积的1／10，4℃保存。
如在结合物内加50％甘油可贮存于-18℃保存一年以上。
为了得到颗粒均一的免疫金试剂，可将上述初步纯化的结合物再进一步用10％～30％蔗糖或甘油进行密度梯度离心,分带收集不同梯度的胶体金与蛋白的结合物。
（2）凝胶过滤法：此法只适用于以BSA作稳定剂的胶体金蛋白结合物的纯化。
将胶体金蛋白结合物装入透析袋，在硅胶中脱水浓缩至原体积的1／5～1／10。
再经1 500r/min离心20min。
取上清加至Sephacryl S-400（丙烯葡聚糖凝胶S-400）层析柱分别纯化。
层析柱为0.8 cm×20cm，加样量为床体积的1／10，以0.02Mol/L PBS液洗脱（内含0.1％BSA，0.05％NaN3，pH8.2者用IgG标记物），流速为8ml/h。
按红色深浅分管收集洗脱液。
一般先滤出的液体为微黄色，有时略混浊，内含大颗粒聚合物等杂质。
继之为纯化的胶体金蛋白结合物，随浓度的增加而红色逐渐加深，清亮透明，最后洗脱出略带黄色的为标记的蛋白组分。
将纯化的胶体金蛋白结合物过滤除菌、分装,4℃保存。
最终可得到70％～80％的产量。
6．胶体金蛋白结合物的质量鉴定（1）胶体金颗粒平均直径的测量：用支持膜的镍网（铜网也可）蘸取金标蛋白试剂，自然干燥后直接在透射电镜下观察。
或用醋酸铀复染后观察。
计算100个金颗粒的平均直径。
（2）胶体金溶液的OD520nm值测定：胶体金颗粒在波长510nm～550nm之间出现最大吸收值峰。
用0.02Mol/L pH8.2 PBS液（含1％BSA，0.02％NaN3）将胶体金蛋白试剂作1︰20稀释，OD520＝0.25左右。
一般应用液的OD520应为0.2～0.4。
（3）金标记蛋白的特异性与敏感性测定：采用微孔滤膜免疫金银染色法（MF－IGSSA）。
将可溶性抗原（或抗体）吸附于载体上（滤纸、硝酸纤维膜、微孔滤膜），用胶体金标记的抗体（或抗原）以直接或间接染色法并经银显影来检测相应的抗原或抗体，对金标记蛋白的特异性和敏感性进行鉴定。
（四）胶体金标记技术在免疫学中的应用胶体金标记技术由于标记物的制备简便，方法敏感、特异，不需要使用放射性同位素，或有潜在致癌物质的酶显色底物，也不要荧光显微镜，它的应用范围广，除应用于光镜或电镜的免疫组化法外，更广泛地应用于各种液相免疫测定和固相免疫分析以及流式细胞术等。
1．液相免疫测定：将胶体金与抗体结合，建立微量凝集试验检测相应的抗原，如间接血凝一样，用肉眼可直接观察到凝集颗粒。
利用免疫学反应时金颗粒凝聚导致颜色减退的原理，建立均相溶胶颗粒免疫测定法（Sol particle immunoassay ,SPIA）已成功地应用于PCG的检测，直接应用分光光度计进行定量分析。
2．金标记流式细胞术：胶体金可以明显改变红色激光的散射角，利用胶体金标记的羊抗鼠Ig抗体应用于流式细胞术，分析不同类型细胞的表面抗原，结果胶体金标记的细胞在波长632nm时，90度散射角可放大10倍以上，同时不影响细胞活性。
而且与荧光素共同标记，彼此互不干扰。
3．胶体金固相免疫测定法（1）斑点免疫金银染色法（Dot－IGS／IGSS）是将斑点ELISA与免疫胶体金结合起来的一种方法。
将蛋白质抗原直接点样在硝酸纤维膜上，与特异性抗体反应后，再滴加胶体金标记的第二抗体，结果在抗原抗体反应处发生金颗粒聚集，形成肉眼可见的红色斑点，此称为斑点免疫金染色法（Dot－IGS）。
此反应可通过银显影液增强，即斑点金银染色法（Dot－IGS／IGSS）。
（2）斑点金免疫渗滤测定法（dot immuno－gold filtration assay,DIGFA）此法原理完全同斑点免疫金染色法，只是在硝酸纤维膜下垫有吸水性强的垫料，即为渗滤装置。
在加抗原（抗体）后，迅速加抗体（抗原），再加金标记第二抗体，由于有渗滤装置，反应很快，在数分钟内即可显出颜色反应。
此方法已成功地应用于人的免疫缺陷病病毒（HIV）的检查和人血清中甲胎蛋白的检测。
1.免疫胶体金技术原理：胶体金用于标记的原理胶体金是一种负电荷的疏水胶，靠静电粒子相互排斥作用来维持稳定的胶体体系，其颗粒散在、红色，直径从几纳米到几十纳米不等。
由于不同直径的胶体金的光散射各异，所以其溶胶颜色的深浅相应发生显著的变化，这就是胶体金用于被动凝集试验的基础。
同时由于胶体金金颗粒对蛋白质有很强的吸附功能，可与SPA ,IGg,毒素、糖蛋白、酶、抗生素和激素等多种物质非共价结合，从而使其成为免疫反应的优良标记物。
而且金颗粒还可催化银离子还原成金属银，因此在胶体金免疫测定时加入银染色液，能放大反应信号，大大增加测定的灵敏度。