免疫胶体金层析法hcg课件
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免疫学实验胶体金免疫层析技术课件
农牧业
畜牧兽医站 , 商检 传染病（禽流感,链球菌等） 系统 , 边检口岸 , 农 牧类院系和研究所 病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究 有害物质超标 机构
环境
食品安全 食品安全检测中心, 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）,大肠 各监管部门 杆菌,黄曲霉素
胶体金
胶体金（colloidal gold）也称金溶胶（goldsol），是金盐被 还原成原子金后形成的金颗粒悬液。
胶体金免疫层析试纸条的构成
样品垫
金标垫
膜
吸收垫
衬板
胶体金免疫层析试纸条类型：
GICA有三种反应模式：夹心法，间接法，竞争抑制法。 夹心法反应原理
B 阳性
C 阴性
间接法反应原理
B 阳性
C 阴性
竞争抑制法反应原理
阴性
弱阳性
阳性
检测线颜色强度与SD浓度负相关
目的：掌握间接试纸卡的检测原理，操
胶体金免疫层析技术
（colloidal gold immunochromatography assay, GICA）
胶体金免疫层析技术
20 世纪 80-90 年代在酶联免疫吸附试验、 乳胶凝集试验、单克隆抗体技术、胶体金免疫 技术和新材料技术基础上发展了新型体外诊断 技术——胶体金免疫层析技术（colloidal gold immunochromatography assay, GICA）。
传染病乙肝五项hivsars等标志物afp肌钙蛋白粪便血红蛋女性妊娠hcg早孕毒品吗啡k粉摇头丸冰毒农牧业畜牧兽医站商检系统边检口岸牧类院系和研究所传染病禽流感链球菌等病毒烟草花叶病毒犬细小病毒等环境环保监测部门研究机构有害物质超标食品安全食品安全检测中心各监管部门农兽药残留磺胺类瘦肉精等大肠杆菌黄曲霉素胶体金colloidalgold也称金溶胶goldsol是金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液
《免疫胶体金技术》课件
该技术适用于现场快速检测和应急响 应，为及时诊断和治疗提供了有力支 持。
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
胶体金技术简介 ppt课件
稳定性好：金标试剂稳定，可长期室温保存
检测标本种类多：既可用于测血清/血浆/全血，又可用于测 尿或唾液,或处理后的组织等固体样品
6
免疫层析法应用领域
类别 人类医学
农牧业 环境 食品安全
应用领域
检测的物质
各级医院,血站,CDC,防 疫站,诊断中心；家庭
自检；商检系统；边检 口岸；公安系统.
女性妊娠（hCG,LH等)
传染病（乙肝五项、艾滋,、梅毒、流感等） 肿瘤标志物（AFP、、粪便血红蛋白等）
心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶）
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）
畜牧兽医站, 商检系统, 传染病（禽流感、兽瘟疫等）
边检口岸,农牧类院系
和研究所
病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究机 有害物质超标 构
喷点法与浸泡法的比较 (AJQ3000喷头)
1.释放快慢 2.液体量不同，干燥快慢，边缘
效应 3.生产方便性
20
样品垫
材料选择
各成分的作用 1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSA\PVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100
21
吸水纸
吸水效率 进口与国产纸的差异
一步法
固相系统,常温保存
开发周期长,使用方便
20-40nm 胶体金 大孔径膜 侧向流动
免疫渗滤法
多步法
液体/固相系统 液体需要冷冻保存 开发周期短,使用不方便
10-15nm 胶体金 小孔径膜 竖向流动
4
免疫层析法技术优势:简单/现场/快速
1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内）
胶体金免疫层析技术演示课件
15
临床上将缺铁性贫血分为以下三个阶段：
铁缺乏阶段 潜在性缺铁期
血清铁蛋 白含量
转铁蛋白 红细胞游离 饱和度 原卟啉（FEP）
血红蛋白
<12ng/ml
缺铁性红细胞生成 <12ng/ml <15%
缺铁性贫血
<12ng/ml <15%
>4.5μg/L >4.5μg/L
4/36
北京易斯威特生物医学科技有限公司
5
什么是缺铁性贫血
当机体对铁的需求与供给失衡，导致体内贮存铁耗尽 （ID），继之红细胞内铁缺乏（IDE），最终引起缺 铁性贫血（IDA）。IDA是铁缺乏症（包括ID，IDE 和IDA）的最终阶段，表现为缺铁引起的小细胞低色 素性贫血及其他异常。
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胶体金免疫层析法检测试剂盒的特点
操作方便，读取结果的时间短：一般只需要一个加样步骤，得 到结果时间最短的只需要3~5分钟，最长的也不会超过30分钟 。
灵敏度和特异性好，受外界影响少：高度特异的抗原抗体反应 保证该检测结果保持很高的特异性和灵敏度。
成本低廉，所需样本很少：一般只需要不到100μl样本即可得到 检测结果。
情商受损：情感淡漠，不开心、紧张、易疲劳；兴趣少， 不容易逗乐，不合群，注意力难集中。
身体发育受影响：听视觉神经反应迟缓；细胞、体液免 疫功能降低，易感染；延缓运动神经的发育，运动功能 受损。小儿长期贫血不仅会影响生长发育，还可诱发一些感
染性疾病。
更重要的一点是：胎儿及婴幼儿时期铁缺乏，甚至无法
被日后的补铁所逆转。
北京易斯威特生物医学科技有限公司
10
什么是铁蛋白（Ferritin）
胶体金免疫层析试验.ppt
《临床免疫学检验技术》 第十四章 胶体金免疫分析
胶体金免疫层析试验
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
第步
打开包装取出试 纸条
第步
插入待检样本中
第步
观察结果
• 临床免疫学检验技术
胶体金免疫层析试验
(goldimmunochromatography assay, GICA)
目录
试纸条长什么样子？ 它是怎么工作的？ 它有哪些结果？
分离
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
蛋白质层析方向
Ag
金标抗体
样品垫 胶体金区
T
C
硝酸纤维膜
三、结果判定
组成 工作原理 结果判定 临床应用
层析方向
S
G
T
C
抗人-HCG抗体 抗人-HCG抗体
阳性结果 B
阴性结果
S
G
T
C
B
C
结果判定
T
MAX
C
C
C
T
T
T
阳性
阴性
无效
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
2 结果判定
HCG夹心法
阳性
阴性
C
C
T
T
胶体金免疫 层析实验
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
1. 胶体金免疫标记技术
胶体金免疫标记技术是以胶体金作为示踪物或显示剂应 用于抗原抗体反应的一种免疫标记技术
抗原抗体复合物
免疫标记技术
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
2. 蛋白质层析技术
蛋白质分离技术
固相与液相组成
蛋白质理化性质不同
胶体金免疫层析试验
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
第步
打开包装取出试 纸条
第步
插入待检样本中
第步
观察结果
• 临床免疫学检验技术
胶体金免疫层析试验
(goldimmunochromatography assay, GICA)
目录
试纸条长什么样子？ 它是怎么工作的？ 它有哪些结果？
分离
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
蛋白质层析方向
Ag
金标抗体
样品垫 胶体金区
T
C
硝酸纤维膜
三、结果判定
组成 工作原理 结果判定 临床应用
层析方向
S
G
T
C
抗人-HCG抗体 抗人-HCG抗体
阳性结果 B
阴性结果
S
G
T
C
B
C
结果判定
T
MAX
C
C
C
T
T
T
阳性
阴性
无效
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
2 结果判定
HCG夹心法
阳性
阴性
C
C
T
T
胶体金免疫 层析实验
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
1. 胶体金免疫标记技术
胶体金免疫标记技术是以胶体金作为示踪物或显示剂应 用于抗原抗体反应的一种免疫标记技术
抗原抗体复合物
免疫标记技术
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
2. 蛋白质层析技术
蛋白质分离技术
固相与液相组成
蛋白质理化性质不同
免疫胶体金技术 ppt课件
Stop heating when a deep red color is obtained.
ppt课件
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Synthesis and properties of different particle size
胶体金粒径 (nm)
1%柠檬酸三钠加 入量(ml)
16
2
24.5
1.5
41
1
71.5
0.7
定其pH即可.
ppt课件
16
蛋白 与胶体金结合的最佳pH测定
取若干1.5ml的试管，分别加入1ml胶体金 用K2CO3将pH分别调为3，4，5，6，7，8，9，10； 去96孔培养板，按pH从高到低分别将上述胶体金分别取
100ul加入孔中，重复三次； 每孔分别加入20ul浓度为10%的NaCl溶液，混合，室温下
a). ionic attraction between the negatively charged gold and the positively charged protein
b). hydrophobic attraction between the antibody and the gold surface c). Sulfur binding (Cysteine and Methionine)
H2AuCl4
O O
OH
O
Cit-
O O
O H2O, 100OC
Cit-
CitCit-
ppt课件
Turkevich, et. al. Discussions Faraday Soc. 1951, No. 11 585-75.
ppt课件
9
Procedure of Colloidal Gold Synthesis
实验六胶体金免疫层析技术PPT课件
胶体金的制备及性质
01
详细介绍了胶体金的制备方法和性质特点，包括其光学性质和
稳定性等。
胶体金在生物医学领域的应用
02
探讨了胶体金在免疫分析、生物传感器和药物载体等方面的应
用和研究进展。
胶体金标记技术
03
介绍了胶体金标记技术的原理、操作方法和注意事项，以及其
在免疫分析中的优势和局限性。
THANKS FOR WATCHING
的准确性和可靠性。
图像分析
通过观察不同时间点的试纸条照片， 分析颜色变化和显色情况，判断实 验结果的准确性。
统计学分析
运用统计学方法对实验数据进行处 理和分析，得出更具有科学性和客 观性的结论。
结果讨论与解释
结果解释
根据实验结果和数据分析，对实 验原理、操作步骤和误差来源进
行深入探讨和解释。
结果讨论
在临床诊断中，胶体金免疫层析技术常用于检测妊娠、糖尿病、肝炎等疾病的标志 物。
03
实验材料与方法
实验材料
01
02
03
抗原
用于制备胶体金的特异性 抗原，如病毒、细菌、毒 素等。
抗体
用于与抗原结合的特异性 抗体，通常为多克隆抗体 或单克隆抗体。
胶体金
制备胶体金所用的金盐， 如氯金酸。
实验材料
硝酸纤维素膜
行性和实用性。
与传统检测方法相比，胶体金免 疫层析技术具有更高的灵敏度和 特异性，且操作简便，适用于现场快速Leabharlann 测和临床应用。技术优缺点分析
快速
检测时间短，可在几分钟内得到结果 。
简便
操作简单，不需要复杂的仪器和设备 。
技术优缺点分析
灵敏度高
能够检测低浓度的目标物质。
胶体金免疫层析技术ppt课件
EASYSWEET-培训资料
6/36
孕妇发生缺铁性贫血的后果
增加心输出量和胎盘血流量，加重心脏 负担。
胎儿缺氧，生长发育受阻。
影响免疫、消化等多系统的正常功能
多种妊娠并发症。
胎儿先天铁储存不足，婴幼儿期易缺铁。
严重的会因血红蛋白携带氧气早
产，甚至死胎。
体内储铁缺乏的诊断 指标为：
血清铁蛋白<12ng/ml。
xx
13
铁蛋白在缺铁性贫血中的作用
缺铁性贫血的症状是在一个较长时间内逐渐形成的。铁 耗竭期，贮存铁耗尽，血清铁蛋白减低，此时并无贫血，若 缺铁进一步加重。贮存铁耗尽，血清铁蛋白和血清铁下降， 总铁结合力增高，出现缺铁性贫血。
铁蛋白缺乏是缺铁性贫血的初期阶段，在这个阶段及时 调整就能够避免后期的贫血出现。
②贫血合并感染
③其它原因的贫血
① IDA恢复期，铁储备先行增高；但受红细胞生命周期影响，血红蛋白尚未恢复正常；
受多因素影响的即时循环铁暂时减低。
②贫血合并感染
③其它原因的贫血
受多因素影响的即时循环铁减低，注意定期观察铁蛋白变化
正常
体内储备的铁耗竭，ID期。
减低
体内储备的铁耗竭，受多因素影响的即时循环铁也同时减低
减低
减低
正常
IDA缺铁性贫血期，但受多因素影响的即时循环铁正常。
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胶体金免疫层析法检测试剂盒的特 点
操作方便，读取结果的时间短：一般只需要一个加样步骤，得 到结果时间最短的只需要3~5分钟，最长的也不会超过30分钟。
灵敏度和特异性好，受外界影响少：高度特异的抗原抗体反应 保证该检测结果保持很高的特异性和灵敏度。
成本低廉，所需样本很少：一般只需要不到100μl样本即可得到 检测结果。
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←羊抗鼠IgG
2/16/2021
免疫胶体金层析法hcg
2
positive
HCG 阳性标本
MAX
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控
线与2/羊16/抗202鼠1 IgG(二抗)结合而显色免，疫作胶体为金质层析控法对hcg照。
2/16/2021
免疫胶体金层析法hcg
8
3
negative
HCG 阴性标本
MAX
尿中无HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体不结合而不显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控 线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
2/16/2021
• 2. 约3秒后取出，平放，5分钟内观察结果 (时间不能小于5分钟)：两条红线为(+)，提 示尿中含HCG。一条红线为(一)，表示不含 HCG。（时间过短，可能有假阴性）
2/16/2021
免疫胶体金层析法hcg
7
方法学评价
• 该法为定性检测尿中HCG，不能确定其浓度 • 因为该法是用单抗来测定HCG，特异性较高， 黄
免疫胶体金层析法hcg
4
试纸条失效
失效
MAX
金标鼠抗人IgG单抗随层析作用向上移动，到达质控线，无羊抗鼠IgG( 二抗)或破坏失效，不结合而 不显色，作为质控对照。
2/16/2021
免疫胶体金层析法hcg
5
大便隐血
MAX
2/16/2021
免疫胶体金层析法hcg
6
注意事项
• 1. 将试条有标志线的下端浸入尿液标本中， 深度不可超过标志线（若超过，可能会出 现假阳性）
原理
• 采用胶体金标记抗体，以硝酸纤维 素膜为载体，使抗原抗体反应和洗 涤在同一渗滤膜上，反应后根据在 膜上的颜色判断结果。
• 以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔 膜毛细管作用，使膜一端的液体慢 慢向另一端渗移，犹如层析
2/16/2021
免疫胶体金层析法hcg
1
← HCG分子 ← 鼠抗人HCG单抗 ← 胶体金颗粒 ←胶体金标记鼠抗人HCG单抗
疸、蛋白、血细胞和浑浊度对结果观察都无影 响。、 • 晨尿中一般含有最高的HCG值，检出率较高。 • 检测时间：HCG一般在受精卵着床后几天才出现 在尿液中，而且要达到一定的量才能被检出，因 此，对于平时月经正常的妇女需在月经推迟后才 可能在尿中检出，二月经周期长或排卵异常的妇 女有可能在停经40-44天才能检出 • 尿液稀释：如果喝水过多使尿液稀释可能会导致 假阴性结果。