最新最新免疫胶体金层析法-hcg
胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素_杨秀梅
第41卷第3期上海师范大学学报（自然科学版）Vol．41，No．3 2012年6月Journal of Shanghai Normal University（Natural Sciences）Jun．，2012胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素杨秀梅，邢国杰，徐宽，沈鹤柏，朱龙章*（上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234）摘要：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析方法，建立对人绒毛膜促性腺激素的快速定量检测方法．该检测方法可以在15min内完成对HCG的定量检测，灵敏度可达25mIU/mL，线性范围25 10000mIU/mL．与人促黄体生成素（hLH）、人促甲状腺激素（hTSH）、人卵泡刺激素均无交叉反应，所建立的检测人绒毛膜促性腺激素的胶体金免疫层析方法，能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的人绒毛膜促性腺激素，在异位妊娠的早期诊断及过程监控中具有较为广阔的应用前景．关键词：HCG；胶体金；免疫层析；定量检测中图分类号：O648文献标识码：A文章编号：1000-5137（2012）03-0274-060前言人绒毛膜促性腺激素（human chorionicgonadotropin，HCG）是由胎盘合体滋养细胞分泌的一种糖蛋白激素［1］．HCG的产生与滋养细胞的生长状况和数量有直接关系［2］，正常发育的绒毛所分泌的HCG量很大，每天的滴度不断地快速上升，每48h上升66%以上．如果HCG每2d增加的量＞66%，可以诊断为宫内妊娠；而如果增加的量＜66%，则异位妊娠或宫内孕发育不良的可能性很大［3］．HCG是妊娠时所分泌的特异性激素，可用于协助异位妊娠早期未破裂的诊断．目前较为明确的诊断方法为B超，但是在怀孕5周内B超难以发现胚芽的影像，所以寻找早期诊断异位妊娠的方法显得尤为重要．因此，本文作者试图探讨血清人绒毛膜促性腺激素检测在异位妊娠早期诊断的价值．胶体金免疫层析方法对人绒毛膜促性腺激素的定量检测的研究目前只达到半定量的水平，而本研究则实现了对人绒毛膜促性腺激素的定量检测．这弥补了胶体金免疫层析方法中无法定量的缺陷，这在医学领域将会带来一个新的突破，极具现实意义与医用价值．目前现有的胶体金免疫层析试条只能定性判断是否怀孕，而先兆流产、异位妊娠、药物引流、某些妇产科疾病、术后治疗过程等都需要对HCG指标变化进行跟踪及对HCG进行定量检测［4－5］．孕卵在子宫腔以外的任何部位着床发育，均称异位妊娠［6］．异位妊娠是妇产科常见急腹症之一，当输卵管妊娠流产或破裂时可引起腹腔内严重出血，如不能及时就诊、处理可危及生命［7］．HCG动态定量检测可作为异位妊娠随访监控指标，对早期异位妊娠的诊断具有重要意义［8］．本研究在常规早孕试纸定性检测的基础上，对原有胶体金免疫层析技术进行改进，实现了HCG的定量检测，对异位妊娠的早期诊断及过程监控具有重要的影响．1材料1．1主要材料HCG单克隆抗体、羊抗鼠二抗（上海捷宁生物科技有限公司）；硝酸纤维素膜、吸水纸、玻璃纤维购收稿日期：2011-12-21作者简介：杨秀梅（1985－），女，上海师范大学生命与环境科学学院硕士研究生；朱龙章（1956－），男，上海师范大学生命与环境科学学院教授．*通信作者第3期杨秀梅，邢国杰，徐宽，等：胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素于美国Millipore公司；柠檬酸三钠（上海青析化工有限公司）；氯金酸（国药集团化学试剂有限公司）．1．2主要仪器HM3010单维往复划膜仪；AllegraTM64R台式高速冷冻离心机（美国贝克曼库尔特有限公司）；金标分析仪（中国科学院上海光学精密机械研究所）．2试纸条的制备方法2．1胶体金的制备用柠檬酸三钠还原法［9］制备20nm胶体金．向洗净的锥形瓶中加入98mL的超纯水，再加入1%的氯金酸2mL．将锥形瓶放在恒温搅拌器上加热至沸腾，维持加热状态并加入1%柠檬酸三钠2mL．继续煮沸10min，观察颜色变化，冷却至室温后置于4ħ冰箱待用．2．2结合垫的制备取1mL的胶体金用0．1mol/L的K2CO3溶液调节pH值到8．0 9．0，加入36μgα－HCG抗体，混匀涡旋并静置10min，加入50μL BSA（10%）溶液反应10min后，用离心机在13000r/min下离心15min，弃去上清液，沉淀物用硼酸盐缓冲溶液重悬至原体积后，再次离心弃去上清液，浓缩至原体积的1/10，4ħ保存．选用玻璃纤维作为结合垫材料，将上述制备的胶体金α－HCG抗体复合物重新分散于0．01mol/L PBS（pH=7．4，含5%蔗糖，1%BSA）中，并喷于结合垫上，37ħ烘干2h．2．3样品垫的制备选用玻璃纤维素膜作为样品垫材料，将其放入样品垫处理液（0．01mol/L PBS（pH=7．4），含有1% BSA，0．1%Triton X－100）中浸泡后，37ħ烘干2h备用．2．4硝酸纤维素膜（NC膜）的制备用划膜仪在NC膜的不同位置喷点α－HCG单抗及羊抗鼠IgG抗体，自下至上依次为质控线（C 线）、检测线（T线），37ħ烘干2h备用．2．5试纸条的组装将吸水纸、NC膜、结合垫、样品垫依次贴在带有粘合剂的PVC底板上，并切成4mm宽的试纸条装壳．3实验结果3．1胶体金的表征3．1．1胶体金的紫外扫描对2．1．1所制备的20nm的胶体金进行紫外扫描，测定结果见图1，从图1上可看出所制备的20nm的胶体金的最大吸收峰位于520nm处，这与文献［10］报道的一致，符合实验的要求．图120nm胶体金的紫外—可见扫描曲线572上海师范大学学报（自然科学版）2012年3．1．2用Zeta 电位分析仪对所制得的胶体金进行Zeta 电位、粒径测定对所制备的20nm 胶体金进行Zeta 电位、粒径的测定．测定结果见图2和图3．可以看出，所制备的胶体金的平均Zeta 电位是－25．0mV （图2），胶体金颗粒的平均粒径大约为20．01nm （图3）．图2胶体金的粒径分布曲线图3胶体金的Zeta 电位扫描曲线3．1．3用透射电子显微镜（TEM ）对胶体金进行扫描对所制备的20nm 的胶体金用透射电子显微镜（TEM ）对胶体金进行扫描，扫描结果见下图4，从图4中可以看出胶体金颗粒粒径在20nm 左右，而且粒径分布比较均一，形貌接近于球形，符合实验的要求．图420nm 胶体金的透射电镜图3．2胶体金免疫层析试纸条的构造图将吸水纸、NC 膜、结合垫、样品垫依次贴在带有粘合剂的PVC 底板上，并切成4cm 宽的试纸条，胶体金免疫层析试纸条的构造见图5．图5胶体金免疫层析试纸条构造图3．3检测结果的判读3．3．1定性检测将待测样品滴加到检测卡的加样孔中，静置15min ，观察结果．质控线和检测线均出现红色为阳性，仅质控线出现红色为阴性，质控线不显色为无效．3．3．2定量检测判定将显色后的试纸条放入金标分析仪中进行扫描，读取T /C 比值，大于判定值为阳性［11］．672第3期杨秀梅，邢国杰，徐宽，等：胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素3．3．3定量检测重复性检测6个浓度的HCG 样品，每个浓度检测10次，并用金标分析仪扫描读取信号T /C 值．每个浓度样品10次检测的T /C 值的标准差与平均值的比值即为变异系数．3．4直观检测灵敏度评价将HCG 样品用样品处理液稀释成10、25、100、500、1000、3000、5000、8000、10000mIU /mL．如图1所示500、1000、3000、5000、8000、10000mIU /mL 为强阳性反应；25、100mIU /mL 为弱阳性反应；10mIU /mL 无阳性反应；即肉眼可观察到的最低浓度是25mIU /mL （图6）．1阴性对照；2 10HCG 样品的浓度：10、25、100、500、1000、3000、5000、8000、10000mIU /mL图6胶体金试免疫层析纸条检测HCG 结果3．5定量检测结果3．5．1HCG 标准曲线测定用金标分析仪检测不同浓度的HCG 样品，每个浓度检测3次，取3次T /C 比值的平均值．在最优实验条件下，依据检测体系中待测物浓度与金标分析仪读值T /C 比值在一定条件下呈线性关系的原理，以HCG 样品的浓度为横坐标，金标分析仪读值T /C 比值为纵坐标作图，建立胶体金检测标准曲线．当HCG 样品浓度为25 10000mIU /mL 时，HCG 的浓度与其金标分析仪读值T /C 比值之间呈良好的线性关系（图7），线性回归方程为y =0．0014x +0．6901，相关系数R 2=0．9977，线性良好．图7胶体金免疫层析试纸条检测HCG 标准品系统拟合工作曲线3．5．2试纸条检测卡重复性结果通过实验发现，同一批次的该试纸的重复性良好，可达到98%；不同批次的试纸条的重复性也可达到97%，假阳性率和假阴性率均为0．3．5．3试纸条检测卡稳定性结果经实验验证表明，该试纸条检测卡在4ħ和20ħ条件下，可保存6个月，在37ħ条件下可保存3个星期，检测结果均没有发生变化．3．6试纸条的特异性配制人促黄体生成素（hLH ）、人促甲状腺激素（hTSH ）、人卵泡刺激素（hFSH ）的抗原溶液，以处理液作为空白对照，用HCG 免疫层析试纸检测．结果显示，金标分析仪对其他常见的干扰物均未检出，说明此试纸无交叉反应现象（图8）．772上海师范大学学报（自然科学版）2012年1．空白；2．hLH；3．hTSH；4．hFSH；5．HCG图8检测结果3．7试纸的精密性取3种浓度的HCG标准品（1000、50000、80000mIU/mL）按检测方法平行测定10次，所得结果计算变异系数（CV值），分别为9．79%、8．75%、9．62%．3．8临床检测结果用试纸条检测HCG临床血清样本20份．每个浓度检测3次，取其平均值作标准曲线．定量检测结果如图9所示，得到的相关性曲线方程为y=0．0009x+1．6188，R2=0．9689，线性良好．图920例HCG血清样本检测结果4结论（1）定量检测HCG的金标免疫层析方法的建立．本研究建立了一种快速的定量检测HCG的金标免疫层析方法，此方法具有法操作简单，快速，灵敏度高等特点，克服了传统方法的很多缺点，本方法最具创新的地方就是弥补了纸层析的方法中无法定量的缺陷，利用免疫层析方法定量检测HCG的动态变化从而达到检测和用于术后复查的目的，这在医学领域将会带来一个新的突破，极具现实意义与医用价值．（2）HCG定量检测试纸条的灵敏度和线性范围．研制出的HCG定量检测试纸条的检测灵敏度为25mIU/mL，线性范围：25 10000mIU/mL；与人促黄体生成素（hLH）、人促甲状腺激（hTSH）、人卵泡刺激素（hFSH）没有交叉反应，特异性较好；精密度符合临床应用要求，具有实际应用价值．（3）HCG定量检测试纸条的优势．本研究建立了HCG的标准工作曲线，在线性范围内可以对HCG 样品进行定量检测，经检测发现HCG的浓度与T/C比值具有良好的线性关系．相比ELISA进行定量检测时存在检测时间较长的缺点，本方法可以在15min内完成一定范围内的定量检测，时间缩短3 4h，同时在准确性、重复性、稳定性等方面均比ELISA方法更具优势．872972第3期杨秀梅，邢国杰，徐宽，等：胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素参考文献：［1］王蜜霞，刘军涛，刘儒平，等．基于化学发光磁酶免疫的HCG检测系统研究［J］．仪器仪表学报，2010，31（2）：312－316．［2］阮雅文．血清β－HCG和P联检在异位妊娠辅助诊断的价值［J］．放射免疫学杂志，2011，24（4）：466－467．［3］CONDOUS G，KIRK E，VAN C B，et al．Failing pregnancies of un-known location：a prospective evaluation of the human chorionic gonadotrophin ratio［J］．BJOG，2006，113：521－527．［4］刘军涛，郭宗慧，刘春秀，等．免疫层析试条量化检测系统研究［J］．微纳电子技术，2007，7（8）：379－382．［5］康浴霞．异位妊娠的早期实验室诊断现状［J］．内蒙古民族大学学报，2009，15（2）：123－124．［6］张平花．浅谈异位妊娠的病因及护理对策［J］．价值工程，2011，17（3）：306－308．［7］STEPHAN L，MPSTAFA A．Laparoscopic treatment of ectopic pregnancies：a one hundred cases study European Journal of Obstetrics＆Gynecology and Reproductive Biology［J］．Clinica Chimica Acta，1991，41（3）：187－190．［8］FERRIGNO D，BACCHEN G．Surgical treatment of ectopic prehnancy Best Practice＆Research Clinical Obstetrics＆Gy-naecology［J］．Clinica 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of25mIU/mL to10000mIU/mL was measured．There were no cross-reactions with other hormones，such as hLH，hTSH，Hfsh．The colloidal gold immunochromatographic assay is rapid，specif-ic，sensitive，accurate and suitable for HCG，showing good potential in the early diagnosis of ectopic pregnancy and process moni-toring．Key words：HCG；colloid gold；immunochromatographic assay；quantitative detection（责任编辑：郁慧）。
hcg胶体金免疫层析法
hcg胶体金免疫层析法英文回答：Human Chorionic Gonadotropin (hCG) Colloidal Gold Immunochromatographic Assay.Principle:The hCG colloidal gold immunochromatographic assay is a rapid, qualitative membrane-based immunoassay for the detection of hCG in urine or serum specimens. The test is based on the principle of competitive immunochromatography.A monoclonal antibody specific to hCG is conjugated to colloidal gold particles. When hCG is present in the specimen, it binds to the colloidal gold-labeled antibodies, forming antigen-antibody complexes. These complexes then migrate along the nitrocellulose membrane by capillary action.As the complexes pass through the membrane, theyencounter a second monoclonal antibody specific to hCG immobilized on the test line. The second antibody binds to the antigen-antibody complexes, forming a sandwich complex. The presence of hCG in the specimen is indicated by the appearance of a colored band at the test line.Materials:hCG colloidal gold immunochromatographic test device.Urine or serum specimen.Sample diluent.Test tube or cup.Procedure:1. Remove the test device from its packaging and place it on a flat surface.2. Collect a urine or serum specimen.3. Add 2 drops of the specimen to the sample well on the test device.4. Add 2 drops of sample diluent to the sample well.5. Read the results within 5-10 minutes.Interpretation of Results:Positive Result:Two colored bands appear: one at the control line (C) and one at the test line (T). This indicates that hCG is present in the specimen.Negative Result:Only one colored band appears at the control line (C). This indicates that hCG is not present in the specimen.Invalid Result:No colored bands appear, or a colored band appears only at the test line (T). This indicates that the test is invalid and should be repeated.Limitations:The hCG colloidal gold immunochromatographic assay is a qualitative test and cannot be used to determine the concentration of hCG in a specimen.The test may not detect all cases of pregnancy. A negative result does not rule out pregnancy. If pregnancyis suspected, a quantitative hCG blood test should be performed.The test may be affected by certain medications or medical conditions.中文回答：人绒毛膜促性腺激素 (hCG) 胶体金免疫层析法。
HCG金标免疫试验方法及注意事项
HCG金标免疫试验方法及注意事项1．金标免疫试验的原理将氯金酸(HAuCl4)用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒(胶体金)标记抗体，(或金黄色葡萄球菌A蛋白SPA)。
金标为一种催化剂，经还原剂(如对苯二酸)处理，将显影剂中的银离子还原成不溶性金属银，沉淀在每个金颗粒的周围，银沉淀在光镜下可清楚地显示。
滴金免疫实验原理同一般免疫斑点实验，也是用已知抗原或抗体包被硝酸纤维素膜，再用金标记抗体或抗原进行快速测定。
临床应用的有两种方法：金标一步法(层析法)和金标二步法(斑点渗漏法)。
具体讲即用两个人HCG—β单克隆抗体，一个抗体吸附于硝酸纤维素薄膜(NC膜)上，另一抗体结合于金溶胶颗粒表面。
尿中HCG先与NC膜上的抗体-结合，然后再与金标单抗溶液反应，形成抗体一HCG一金标抗体的加心式复合物．红色的金斑点．胶体金溶液的制备是依所需胶体金颗粒的直径配制A液及B 液，见表4—7。
预热至6 0℃并保持此温度，磁力棒搅拌混合A液及B液，加热至沸，溶液由蓝紫变成橙红色，表明胶体金颗粒形成。
冷后补加重蒸馏水至100ml。
免疫金银染色法用5mm直径胶体金，滴金免疫技术用15mm胶体金。
2．金标免疫试验的方法(1)金标二步法(斑点渗漏法)：中心圆点为一株单抗(金一Ab—Abl一薄膜的红色斑点)，边上小点为抗鼠二抗(金一Ab—Ab2一薄膜的质控点)。
试剂盒包括：渗滤盒和金标记抗HCG一β亚单位单抗体。
渗滤盒为30mm长，6mm厚的正方形塑料盒，中央有8mm直径的圆孔。
盒内紧塞多层吸水填料，填料上为孔径0．45nm的硝酸纤维素薄膜，膜上包被有抗HCG的抗体。
操作方法为先用小吸管向检测盒圆孔中央滴3滴待检尿液。
待渗入；然后加金标记抗HCG—β亚单位单抗液(A试剂)两滴，待渗入后取出滤器；最后加B试剂(PBS)两滴，待干。
结果判断：阳性为小孔中央出现红色斑点，质控点呈蓝色，提示含有HCG。
阴性为小孔中央无红色斑点，仅质控点呈蓝色，提示不含HCG。
人绒毛膜促性腺激素(HCG)检测试纸(胶体金免疫层析法)产品技术要求jinwofu
人绒毛膜促性腺激素（HCG）检测试纸（胶体金免疫层析法）适用范围：用于体外定性检测人尿液中人绒毛膜促性腺激素（HCG）的含量。
1.1 产品型号/规格：笔型/卡型/条型。
完整最小包装规格1人份。
1.2 主要组成成分：本品系由包被有抗HCG单克隆抗体及抗鼠IgG的固相硝酸纤维膜和胶体金标记的抗HCG单克隆抗体包被的玻璃纤维膜、样本垫及吸水纸组成。
2.1 物理性状2.1.1 外观：检测HCG试纸应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固。
2.1.2 宽度：检测HCG试纸的宽度应≥2.5mm。
2.1.3 移行速度：液体移动速度应不低于10 mm/min。
2.2 最低检测限用HCG国家标准品进行检测，应不高于25 mIU/ml。
2.3 特异性：2.3.1 阴性特异性：分别用含500 mIU/ml人促黄体生成素（hLH）、1000 mIU/ml 人卵泡刺激素（hFSH）和1000 μIU/ml人促甲状腺素（hTSH）的0 mIU/ml人绒毛促性腺激素（HCG）液进行检测，结果应均为阴性。
2.3.2 阳性特异性：分别用含500 mIU/ml hLH、1000 mIU/ml hFSH 和1000 μIU/ml hTSH的25 mIU/ml HCG液中进行检测，结果应均为阳性。
2.4 重复性取同一批号的HCG试纸10支，以浓度为25 mIU/ml的HCG液测定，反应结果一致，显色度均一。
2.5 批间差取3个批号的HCG试纸，对重复性进行检测，3个批号HCG试纸的检测结果都应符合2.4项的要求。
2.6 稳定性试剂盒4～30℃避光保存，有效期为24个月，对到效期后的试剂盒，分别检测2.1～2.4项，结果应符合各项的要求。
人绒毛膜促性腺激素测试条胶体金免疫层析法的性能评价
Abstract: Objective: Ev aluate the p erfo rmance ch aracteristics of Human Ch orio nic Gon ad otro pin (HCG) strips b y Co lloid al Gold Immu nochromatographic As say (GICA). Method: Analy ze th e HCG s trip s fro m 7 manufacturers on sens itivity, speciality, the negative percent (%) agreement, the pos itive percent (%) agreement, HOOK effect and stability. Result: Regarding to the sens itivity , 3 of 7 were 12.5mIU/mL, 2 of 7 were 20mIU/mL, 1 of 7 was 5mIU/mL and 1 of 7 was lower than 1mIU/mL; During the speciality test,only 1 of 7 manufacturers showed human Luteinizing Hormone having interference on the test of 0 mIU/mL HCG,and the result dis played weak pos itive; the negative percent (%) agreement and the positive percent (%) agreement of all 7 manufacturers were 100%;there was still no HOOK effect even when the concentration of HCG reached 100,000mIU/mL; as settled under the temperature of( 37±1) C, the stability period of HCG strips could be over 21days. Conclusion: Some critical performance of the HCG strips by GICA from 7 manufacturers showed discrepancy, which is expected to be s tandardized.
绒毛膜促性腺激素(HCG)胶体金试纸条诊断实验
绒毛膜促性腺激素（HCG）胶体金试纸条诊断实验摘要：目的：掌握胶体金试纸条诊断技术的原理，使用方法及结果的判定；掌握绒毛膜促性腺激素（HCG）胶体金试剂盒的制作技术。
胶体金是氯金酸(HAuC14)的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂(柠檬酸钠)的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金。
本实验所用到的双抗夹心法是胶体金检测平台最常用的检测方法，主要用于检测比较大的生物分子及颗粒性抗原。
关键词：胶体金绒毛膜促性腺激素（HCG）免疫金胶体金试剂盒双抗夹心法绒毛膜促性腺激素（HCG）是胎盘合体滋养层细胞所分泌的一种糖蛋白激素，胎盘绒毛膜的合体滋养层产生。
其主要功能就是刺激黄体，有利于雌激素和黄体酮持续分泌，以促进子宫蜕膜的形成，使胎盘生长成熟。
HCG结构中包括α、β两个亚基，α-亚单位为垂体前叶激素所共有，β链为其独有，β亚基被用来制备特异性抗体测定血中的HCG，专用名为β-HCG。
胶体金快速诊断技术具有简捷快速，结果易于判定，特异性好等特点。
该技术操作简单，一般只要5-10min 就会出结果，阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。
该技术大多用单克隆抗体标记，具有很好的特异性。
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等检测。
双抗夹心法需要准备待测抗原的配对抗体，一个抗体用胶体金标记并固定在结合垫上，另一个抗体固定在NC膜的检测线(T线)上。
另外，还需要准备能与金标抗体(即胶体金标记抗体)特异结合的二抗并固定于NC膜的控制线(C线）上。
1.仪器和材料1.1可编程切条机切条机是将试纸板快速切割成一定宽度的单份试纸，适合各类不同规格试纸的研发与生产。
其最大的特点是一根一根切下来，可以随时终止并更改宽度。
免疫胶体金层析法测定HCG的原理
免疫胶体金层析法测定HCG的原理
免疫胶体金层析法是一种常用的免疫学测定方法，也常用于人体生物标志物检测中。
该方法能够通过检测人体中某些特定物质的存在与否来判断人体健康状况，其中HCG（人绒毛膜促性腺激素）是其中的一种。
免疫胶体金层析法是一种基于免疫反应原理而建立的测定方法。
其原理是将待测物与特异性抗体结合，在一定条件下，形成免疫复合物。
通过一系列的处理步骤，可使免疫复合物在试纸上产生可视化的颜色变化。
首先，该方法中的抗原是HCG，该物质是一种促进妊娠细胞生长和分化的激素。
HCG主要是由绒毛膜产生的，其主要功能是维持黄体功能，同时在妊娠初期也是确诊妊娠的重要标志物之一。
接下来，针对HCG的抗体需要选择特异性较高的抗体，通常使用在动物体内免疫制备抗体的方法，如小鼠、兔子等。
这些抗体将会对抗原进行特异性识别和结合。
接着将这些抗体与胶体金颗粒进行结合，在适当的条件下，将待测样品滴加到试纸上。
样品中的HCG将与预先固定的抗体结合，形成HCG-抗体-胶体金复合物。
胶体金具有较小的颗粒直径，形成的复合物在分离膜上具有较高的渗透性。
在试纸上，一般会存在两条线，一条是检测线（Test Line），另外一条是对照线
（Control Line）。
当样品中含有HCG时，它会与胶体金复合物竞争与试纸上预先固定的抗体结合。
如果样品中的HCG浓度高于所设定的阈值，就会出现对应的颜色条纹，表明样品中含有HCG。
胶体金免疫层析法意义
胶体金免疫层析法意义胶体金免疫层析法呀，这可真是个了不起的玩意儿呢！你想想看，它就像是我们在健康领域的一个秘密武器。
咱平时去医院检查，是不是有时候会觉得那些复杂的仪器和检测方法让人有点摸不着头脑？但胶体金免疫层析法可不一样，它简单又好用。
就好比我们找东西，有时候在一大堆杂物里翻半天也找不到，可胶体金免疫层析法就像有一双特别厉害的眼睛，一下子就能把我们要找的东西给揪出来。
它的应用那可广泛了去了。
比如说检测传染病，它能快速地告诉我们有没有感染某种病菌，这多重要啊！能让我们及时采取措施，保护自己和身边的人。
这就好像是一个警惕的小卫士，时刻守护着我们的健康。
而且哦，胶体金免疫层析法操作起来也不难。
不需要特别专业的技能和复杂的设备，这不是给我们带来了很大的方便吗？就好像我们平时用手机一样，简单易懂好操作。
你说，要是没有胶体金免疫层析法，我们得多麻烦呀？每次检测都要大费周章，花费大量的时间和精力。
但有了它，一切都变得轻松多啦。
它就像我们生活中的一个小助手，默默地为我们服务着。
再想想那些需要快速诊断的紧急情况，胶体金免疫层析法的优势就更加明显啦。
能在短时间内给出结果，这可不是一般的厉害呀！这就像是在关键时刻，有个人能迅速地给你指明方向，让你不至于迷失。
胶体金免疫层析法还很稳定呢，不会轻易地受到外界因素的干扰。
这就像一个可靠的朋友，不管什么时候都能给你靠谱的支持。
它的准确性也挺高的呀，虽然不是百分百完美，但已经能给我们提供很有价值的信息啦。
这就好比我们走路，虽然不能保证每一步都走得特别精准，但大致方向是对的呀，这不就够了嘛！总之呢，胶体金免疫层析法在医学领域的作用可太大啦。
它让我们的健康检测变得更加简单、快捷、有效。
我们真应该好好感谢发明这个方法的人呀，他们可真是太了不起啦！胶体金免疫层析法就是我们健康的好帮手，难道不是吗？。
免疫胶体金层析法hcg
原理
• 采用胶体金标记抗体，以硝酸纤维 素膜为载体，使抗原抗体反应和洗 涤在同一渗滤膜上，反应后根据在 膜上的颜色判断结果。
• 以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔 膜毛细管作用，使膜一端的液体慢 慢向另一渗移，犹如层析
positive
HCG 阳性标本
MAX
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色 在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控 线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
negative
HCG 阴性标本
MAX
尿中无HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物
随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体不结合而不显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控 线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
试纸条失效
失效
MAX
hcg单克隆抗体免疫胶体金原理
hcg单克隆抗体免疫胶体金原理下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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• 2. 约3秒后取出，平放，5分钟内观察结果 (时间不能小于5分钟)：两条红线为(+)，提 示尿中含HCG。一条红线为(一)，表示不含 HCG。（时间过短，可能有假阴性）
最新免疫胶体金层析法-hcg
方法学评价
• 该法为定性检测尿中HCG，不能确定其浓度 • 因为该法是用单抗来测定HCG，特异性较高， 黄
试纸条失效
失效
MAX
金标鼠抗人IgG单抗随层析作用向上移动，到达质控线，无羊抗鼠IgG( 二抗)或破坏失效，不结合而 不显色，作为质控对照。
最新免疫胶体金层析法-hcg
大便隐血
最新免疫胶体金层析法-hcg
注意事项
• 1. 将试条有标志线的下端浸入尿液标本中， 深度不可超过标志线（若超过，可能会出 现假阳性）
negative
HCG 阴性标本
MAX
尿中无HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物
随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体不结合而不显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控 线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
最新免疫胶体金层析法-hcg
疸、蛋白、血细胞和浑浊度对结果观察都无影 响。、 • 晨尿中一般含有最高的HCG值，检出率较高。 • 检测时间：HCG一般在受精卵着床后几天才出现 在尿液中，而且要达到一定的量才能被检出，因 此，对于平时月经正常的妇女需在月经推迟后才 可能在尿中检出，二月经周期长或排卵异常的妇 女有可能在停经40-44天才能检出 • 尿液稀释：如果喝水过多使尿液稀释可能会导致 假阴性结果。
← HCG分子 ← 鼠抗人HCG单抗 ← 胶体金颗粒
←胶体金标记鼠抗人HCG单抗
←羊抗鼠IgG
最新免疫胶体金层析法-hcg
positive
HCG 阳性标本
MAX
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色 在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控 线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显最色新，免疫作胶为体质金层控析对法照-hc。g
免疫胶体金层析法
——金标记免疫法测HCG
最新免疫胶体金层析法-hcg
原理
• 采用胶体金标记抗体，以硝酸纤维 素膜为载体，使抗原抗体反应和洗 涤在同一渗滤膜上，反应后根据在 膜上的颜色判断结果。
• 以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔 膜毛细管作用，使膜一端的液体慢 慢向另一端渗移，犹如层析
最新免疫胶体金层析法-hcg