任务一大肠杆菌病实验室诊断方案设计及所需培养基的制备教案.
细菌及细菌类疾病的实验室诊断—大肠杆菌病实验室诊断方案(动物微生物技术课件)
大肠杆菌病纤维渗出物中的细菌
伊红美蓝培养基、麦康凯培养基 上大肠杆菌菌落Βιβλιοθήκη 大肠杆菌培养物涂片革兰氏染色
大肠杆菌生化特性
动物微生物应用技术
大肠杆菌病实验室 诊断方案
大肠杆菌病实验室诊断方案
病料 病料中细菌的形态学检查
病料中细菌的分离培养 18小时后
涂片革兰氏染色 糖发酵试验
纯培养 生化试验
H2S试验
MR试验
动物致病性试验
10日龄小鸡，皮下注 射0.2ml/只
大肠杆菌病实验室诊断结果
剖检（采集病料） 纤维素渗出物的涂片染色 分离培养（麦康凯或伊红美
(完整版)大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。
2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。
液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。
大肠杆菌实验报告
大肠杆菌实验报告大肠杆菌实验报告引言：大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌在正常情况下对人体没有害处，但某些菌株可能引起食物中毒和其他健康问题。
本实验旨在探究大肠杆菌的特性和其对环境的适应能力。
实验目的：1. 了解大肠杆菌的形态和结构特征；2. 探究大肠杆菌的生长条件和适应能力；3. 研究大肠杆菌在不同环境下的生长情况。
实验材料和方法：1. 实验材料：- 大肠杆菌培养基- 灭菌培养皿- 灭菌试管- 灭菌移液管- 微量移液器- 恒温培养箱- 显微镜2. 实验步骤：1. 准备培养基：将大肠杆菌培养基按照说明书配制好，并灭菌处理。
2. 接种：使用微量移液器，将大肠杆菌接种到灭菌培养皿中。
3. 培养：将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，并设置适当的温度和湿度条件。
4. 观察生长情况：每隔一段时间，观察培养皿中大肠杆菌的生长情况，并记录下来。
5. 形态和结构观察：取一部分培养物放在载玻片上，使用显微镜观察大肠杆菌的形态和结构特征。
实验结果：1. 大肠杆菌的形态和结构特征：在显微镜下观察，大肠杆菌呈现为短杆状，长度约为2-4微米，直径约为0.5微米。
细菌的表面有许多纤毛，这些纤毛有助于细菌的运动和附着。
大肠杆菌呈现为革兰阴性菌，其细胞壁主要由脂多糖和蛋白质组成。
2. 大肠杆菌的生长条件和适应能力：大肠杆菌在适宜的环境条件下能够迅速生长和繁殖。
它对温度、pH值和营养物的要求较为宽容。
一般来说，大肠杆菌的最适生长温度为37摄氏度，pH值在6.5-7.5之间。
此外，大肠杆菌对葡萄糖等简单糖类具有较高的利用能力，能够利用这些营养物进行代谢和生长。
3. 大肠杆菌在不同环境下的生长情况：大肠杆菌在不同环境条件下的生长情况可能有所不同。
例如，在高温环境下，大肠杆菌的生长速度会加快，而在低温环境下则会减慢。
此外，在酸性环境中，大肠杆菌的生长可能受到抑制。
然而，尽管大肠杆菌对环境的适应能力较强，但在极端条件下，如高温、高盐度等，它的生长可能会受到抑制或甚至死亡。
大肠杆菌的分离与鉴定实验方案计划书
大肠杆菌的分离与鉴定实验方案计划书五组韩立闯王跃霖周伟2015年6月一、项目1、葡萄球菌的分离与鉴定2、大肠杆菌的分离与鉴定二、要求1、以小组为单位，以上项目任选一个2、预制定可行的实验方案，包括以下内容：①实验目的②所需要的实验仪器、玻璃器皿、试剂、耗材、培养基。
③理论依据及实验原理。
④实验内容、方法步骤⑤注意事项⑥参考文献3、实验小组成员要认真对待本次实验，小组成员之间互相沟通，相互交流，团结一致，积极、主动完成实验教学。
实验方案实验设计流程图该实验可分为以下几个小实验1、划线分离细菌2、增菌培养3、细菌的纯培养4、细菌的光镜下观察5、细菌生化实验实验1、2在第一天做，实验3在第二天做，实验4、5在第三天做，第四天观察发酵管培养结果。
实验一划线分离细菌一、实验目的1、学会细菌划线分离操作2、学会分辨不同细菌在培养基上长出菌落的不同形态特征而分离细菌二、实验原理细菌在平板上划线时，不断被稀释，再经过培养即可得到由单个细菌产生的菌落。
大肠杆菌与沙门氏菌在SS或麦康凯琼脂上长出不同颜色的菌落。
其中大肠杆菌长出的呈均匀红色的菌落，沙门氏菌长出细小无色透明，光滑圆整的菌落。
从而可以分离出两种细菌。
三、材料和仪器混合菌液10ml x3接种环1支x3酒精灯1个x3SS或麦康凯琼脂平板1块x3标签若干恒温培养箱四、实验步骤1、点燃酒精灯，该实验的细菌移植操作均在酒精灯旁边近火焰处完成。
2、火焰灼烧接种环灭菌3、在接近火焰处，左手拿培养皿底，右手拿接种环，从混合菌液中沾取菌种在SS或麦康凯琼脂平板上划线。
4、划线操作如下：沾取混合菌液后，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3~4条，再转动培养皿约70°，灼烧接种环，冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，同样操作作第三、第四次划线操作。
5、划线完毕后，盖上培养皿盖，倒置于培养箱37℃，24h培养。
五、注意事项1、该实验操作需要在酒精灯旁完成，全程注意无菌操作，避免杂菌污染。
实验一大肠杆菌的分离和培养
细菌
2.微生物涉及五类 放线菌
真菌
原生动物
(二)培养基
• 1.分类(按物理形态分) • (1)液体培养基 • (2)固体培养基
①常用旳固体培养基: 琼脂固体培养基.
②微生物在固体培养基 表面生长,能够形成 肉眼可见旳菌落.
2.培养基内所含旳基本物质
• (1)水 • (2)碳源 • (3)氮源 • (4)无机盐
a.灼烧灭菌
注意合用范围
微生物旳接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰旳充分燃烧层灼烧
b. 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h
能耐高温旳需要保持干 燥旳物品( 玻璃器皿)
c.高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min
一般用于培养基旳灭菌
二、试验操作 • （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
• 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板
• （二）分离纯化大肠杆菌
• 接种措施有：
• 划种未接 种旳培养基放入37℃恒温箱中培养12h 和24h后，观察并统计
三、课题延伸：菌种旳保藏
• 1、斜面保藏 • （临时保存） • 2、甘油保藏
（长久保 存）
试验1：大肠杆菌旳培养和分离
角烧瓶旳液体培养基中，三角烧瓶在37℃摇床振荡培养 12h。 • (4) 划线分离：将摇床上培养12h旳菌液在固体培养基旳 平板上连续划线，然后将盖好旳培养皿倒置，放在37℃ 恒温培养箱中进行培养。 • (5)单菌落接种培养：在无菌操作下将单菌落用接种环取 出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h, 4℃冰箱保存。
设备及用具：
灭菌锅或高压锅、250ml旳三角瓶、封口膜和橡皮圈、 直径90mm旳培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培 养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有 酒精棉球旳广口瓶、镊子、有棉塞旳试管 （15mm×120mm）5支
大肠杆菌检测实验报告
一、实验目的1. 掌握大肠杆菌检测的基本原理和方法；2. 学会使用国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数；3. 提高微生物实验操作技能，为后续相关实验奠定基础。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性菌，广泛存在于人类和动物肠道中，属于条件致病菌。
本实验采用国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数，主要利用大肠杆菌在LB培养基上生长繁殖的特性，通过计数菌落数来估算大肠杆菌的浓度。
三、实验器材1. 培养箱；2. 移液管（10只）；3. 锥形瓶（250ml，12只）；4. 大试管（5只）；5. 试管架；6. 平皿（45个）；7. 大烧杯（500ml，1个）；8. 电子天平；9. 纱布；10. 脱脂棉；11. 灭菌锅；12. pH计或pH试纸；13. 电炉；14. 石棉网；15. 铁架台；16. 量筒（100ml，1个）；17. 橡皮手套；18. 超净台。
四、实验药品1. 磷酸盐缓冲液；2. 蒸馏水；3. LB培养基；4. 琼脂；5. 5%NaOH；6. 5%HCl。
五、实验步骤1. 培养基制备（1）称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中；（2）用量筒量取125ml的蒸馏水加入锥形瓶中，制成培养基；（3）用棉花堵住锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢；（4）将培养基放入灭菌锅中，在121摄氏度下灭菌20min；（5）灭菌后放入超净台中备用。
2. 样本处理（1）取适量样本（如食品、水等）；（2）用无菌生理盐水进行梯度稀释；（3）取适量稀释液加入平皿中，制成平板；（4）将平板放入培养箱中，在37摄氏度下培养24h。
3. 菌落计数（1）观察平板，找出菌落数在30-300之间的平板；（2）用移液管吸取适量菌液，加入锥形瓶中；（3）在锥形瓶中加入适量的5%NaOH溶液，充分振荡；（4）将锥形瓶放入培养箱中，在37摄氏度下培养24h；（5）观察锥形瓶中的菌落生长情况，记录菌落数。
《大肠杆菌的培养和分离》实验设计
《大肠杆菌的培养和分离》实验设计实验目的：1. 掌握大肠杆菌的培养方法和分离技巧。
3. 培养和分离大肠杆菌是许多生物技术实验的基础，通过本实验的学习，同学们可以更好地开展相关生物技术实验工作。
实验原理：大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，在微生物学及相关学科的研究中具有重要意义。
为了能够更好地开展生物技术实验，需要掌握大肠杆菌的培养方法和分离技巧。
在培养大肠杆菌时，我们一般选用LB培养基（Luria-Bertani培养基），它是一种营养丰富的培养基，可以满足大肠杆菌的营养需求。
在制备LB培养基时，需将适量的蛋白胨、酵母提取液和纯化水混合均匀后加热至沸腾约1分钟，然后加入适量琼脂糖，搅拌均匀后装入烧瓶中。
分离纯化大肠杆菌时，需要将样品（如肠道内容物、污水等）进行稀释，使其细菌浓度达到一定范围，然后在LB培养基上进行平板培养。
在培养过程中，需要控制培养温度、时间和氧气浓度等因素，以促进大肠杆菌的生长和繁殖。
随着时间的推移，大肠杆菌会在平板上生长成大量的细菌菌落，此时，我们可以将单个细菌菌落挑选出来进行分离纯化，以得到单一纯化的大肠杆菌。
实验材料与仪器：材料：LB培养基、螺旋细胞均一器、平板培养基、霉菌试验纸、吸管、医用酒精、胶体金离子分离剂等仪器：高压灭菌器、移液管、显微镜、细胞计数板实验步骤：1. 制备LB培养基。
2. 取样和稀释。
取样品（如肠道内容物、污水等），取适量于吸管中，并将其进行稀释，使其细菌浓度达到一定范围。
3. 平板培养。
将LB培养基倒入平板中，恰好覆盖平板的整个表面。
待培养基凝固后，使用螺旋细胞均一器将取样液均匀滴在培养基表面上。
将平板置于37℃恒温箱中，控制温度和氧气浓度等因素，待大肠杆菌细菌菌落生长到足够数量时，进入下一步。
4. 分离纯化。
将平板上的大肠杆菌细菌菌落挑选出来，使用吸管将细菌菌落转移到新的平板中进行分离纯化。
一般建议选择较小的细菌菌落进行挑选，这样可以减少细菌间的竞争，提高挑选单一菌株的成功率。
高中生物《实验一大肠杆菌的培养和分离》教案1浙科版
浙科版《生物技术实践》（选修1）教学
第一部分微生物的利用
一、课标内容：
进行微生物的分离和培养
二、教学要求
本部分“实验2：分离以尿素为氮源的微生物”与“实验3：观察土壤中能水解纤维素的微生物”不作要求，只要求学生做1个实验，即“实验1：大肠杆菌的培养和分离”。
2实验建议
在大肠杆菌的培养和分离的实验中，要特别强调无菌操作，这是进行微生物实验中必备的操作要求，也是本模块多数实验的基本要求，应该让学生形成无菌操作的行为习惯。
无菌操作，既包括各种器皿必须是无菌的，也包括各种培养基也必须是无菌的，同时还要求在接种时，不能带有其它杂菌，所以在实验过程中，应时刻让学生保持这种无菌意识。
在菌落和菌种种类的辩认时，要教会学生能大致区分细菌、放线菌与酵母菌菌落，有些用肉眼不能判断的菌落也可借助显微镜进行观察推断。
实验1-大肠杆菌的培养与分离
病毒(小黑点)寄 生于人体细胞上
一、课题目标： 了解有关微生物及培养基的基础知识，进行 无菌技术的操作，进行微生物的培养。 二、课题重点和难点： 无菌技术的操作。 三、技能目标： 掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划 线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无 菌操作，成功地培养微生物。
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝 固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养 基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板 还能用来培养微生物吗？为什么？
细菌的结构
基本结构
细胞壁 细胞膜 细胞质 （液泡、储存性颗粒 、核质） 拟核 荚膜、鞭毛、菌毛芽 孢
特殊结构
芽孢
有些细菌在一定的条件 下，细胞里面形成一个 椭圆形的休眠体，叫做 芽孢。
芽孢的壁很厚，对干旱、 低温、高温等恶劣的环 境有很强的抵抗力。 有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又 轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜） 的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌
以活结形式扎紧，以便使用时容易 解开。
用记号笔注明培养基名称、配制日 期、配制人或实验组。
培 养 基 制 备 的 一 般 程 序
调配 溶化 矫正pH 过滤澄清 分装
灭菌
鉴定 保存
二、无菌技术
获得纯净培养物的关键
防止外来杂菌的入侵
1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂 菌污染的方法。 无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还 是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到 “无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进 行无菌操作，才可能成功地培养微生物。
大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培植之阳早格格创做一、菌种冻存液的造备含有脚量细菌的液体培植基离心后正在重淀中加进等量40%苦油，-80o C冻存.两、培植基造备LB培植基配圆（胰化蛋黑胨（Trypton）：10 g/L；酵母提与物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH ）液体培植基胰化蛋黑胨氯化钠 10.0g火 1000mlpH固体培植基正在液体培植基的前提上再加进％－％的琼脂三、仄板的造备1）称与胰化蛋黑胨10.0g，酵母粉 5.0g，NaCl 10.0g，加进800mL两次火溶解，并用玻璃棒搅拌匀称，安排，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）.2）分拆正在锥形瓶中，每瓶量出有宜太多，出过瓶底一指安排.如需固体培植基正在分拆后的液体培植基内加进约2%的琼脂（150mL液体培植基加进2.5g琼脂）.3）正在锥形瓶心依次覆盖戴滤纸通气小孔的塑料膜战硬量纸，用皮筋捆佳.所有锥形瓶如上述支配.用暗号笔证明培植基称呼、配造日期.4）下压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min.5）灭菌后的培植基与出置电热饱风搞燥器内60oC烘搞，待锥形瓶的启心纸搞燥后与出.液体培植基可曲交保存或者使用，此时加有琼脂的培植基出有会凝固，可正在预先紫中杀菌30min以上的无菌支配台上，将培植基倒进培植皿内，每个培植皿培植基约10-15mL（曲径90mm），正在培植皿中薄度约莫4mm安排.将仄皿叠搁正在无菌支配台上，搁置10min安排，待琼脂基原凝固可涂仄板. 6）若仄板出有曲交使用，灭菌后将培植基正在锥形瓶中保存，待需造备仄板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温热却20min至出有烫脚可造备仄板.四、交种大肠杆菌1）与真验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管心用酒粗灯灼烧，挨启离心管.2）交种要领一：用灭菌枪头蘸与冻存液正在仄板边沿上划横条，每三讲为一组，转动仄皿一圈，末尾中间划之字；交种要领两：用移液枪吸与100uL溶液于仄板上，用酒粗灯灭菌薄的涂抹棒划十字，涂布仄板.3）果真验普遍皆央供挑与单菌降，故涂仄板符合思量冻存液内细菌数量，若菌量过大应适合密释.普遍要领一赢得单菌降的大概性比较大.涂仄板应正在酒粗灯附近举止，若冻存液涂完的仄板应倒置，预防仄皿盖上爆收火蒸气.五、大肠杆菌的培植1）将交种佳的仄皿倒置搁进37℃的恒温培植箱中培植，约莫十几小时后少出菌降.2）挑与死少状态佳，特性明隐的单个菌降，交种于新陈灭菌的LB液体培植基中37℃，220rpm/min恒温振荡培植9-12h.菌降特性：乳红色，圆形，菌降边沿整齐，表面光润，表面战反里颜色普遍.。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
任务一大肠杆菌病实验室诊断方案设计及所需培养基的制备教案
授课内容大肠杆菌病实验室诊断方案设
计及所需培养基的制备
授课时数 2
授课教师授课班级
授课类型技能课授课场地教学做一体化实验室教学材料PPT及各种试验器材教学方法举例、讲授、示教、操作教学重点相关实训的操作及结果判定
教学难点培养基的灭菌
教学目标会制备实验室常用的培养基
教学内容及过程 导入新课：（0.5学时）
组织学生汇报大肠杆菌病的实验室诊断方案，并进行讨论。
教学内容（约17学时）
任务一大肠杆菌病实验室诊断方案设计及所需培养基的制备（约2学时）
一、大肠杆菌病实验室诊断方案设计介绍
二、实习周作业：提交综合试验论文---大肠杆菌病的实验室诊断报告
1.事先讲清楚综合试验论文的书写要求，提交电子版，实验结果拍照片并插入论文相应位置
2.强调对试验结果的记录和分析
三、所需培养基的制备
（一）说明所需制备的培养基类型及用途，布置任务
1.细菌分离培养---麦糠凯琼脂平板（1个/人）
2.细菌的纯培养---普通营养琼脂平板（1个/人）
3.细菌的生化试验---H
2
S试管斜面（1支/人）
4.细菌的敏感药物筛选---MH琼脂平板（1个/人）
5.菌种保存---营养琼脂试管斜面（1支/人）
（二）讲授各类培养基制备的方法并示教
配料→溶化→分装灭菌→冷却→无菌检验→冷藏备用。
（三）学生操作该试验
（四）点评各实验组培养基制备情况，收集培养基冷藏保存
习题作业 1.试述普通营养琼脂平板的制备步骤？
课后反思事先给各实验组分配好制作的培养基类型及数量注：标记★的内容为重点，标记◎的内容为难点。