DEL红细胞膜D抗原表位分析

ｓｔｕｄｙ．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００５，４５（４）：５２７—５３８．
４ Ｗａｇｎｅｒ Ｔ，Ｋｏｒｍｏｃｚｉ ＧＦ，Ｂｕｃｈｔａ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉ—Ｄ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ
ｂｙ ＤＥＬｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００５，４５（４）：５２０一５２６．
邵超鹏，Ｌｅｇｌｅｒ ＴＪ．ＲＨＤ放散型相关的等位基因的鉴定．中国免
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｐｉｔｏｐｅ ｍａｐｐｉｎｇ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ
Ｔｈｅ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｍａｙ ｈａｖｅ ｇｒｏｓｓｌｙ ｃｏｍｐｌｅｔｅ【）ａｎｔｉｇｅｎ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ＤＥＬ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｃａｒｒｙｉｎｇ Ｒ日Ｄ１２２７４ ａｌｌｅｌｅｓ．
Ｄ—ｐｏｓｉｔｉＶｅ，Ｄ—ｎｅｇａｔｉｖｅ，Ｄｅｌ ａｎｄ ｗｅａｋ Ｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ． Ｖｏｘ Ｓａｎｇ，２００２，８３（２）：１５６ １ ６１．
３ Ｇａｓｓｎｅｒ Ｃ，Ｄｏｅｓｃｈｅｒ Ａ，Ｄｒｎｏｖｓｅｋ ＴＤ。ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ＲＨＤ ｉｎ
ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ Ｄ一， Ｃ／Ｅ＋ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ： ａ Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ
ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗｉｔｈ ９ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉ—Ｄ ｍｏｎｏｃｌｏｎａＩ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｄ ｅｐｉｔｏｐｅｓ
ｔｈｒｏｕｇｈ ａ ｍｏｄｉ“ｅｄ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ—ｅｌｕｔｉｏｎ ｔｅｓｔ．Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ Ｒｈ—ｐｏｓｉｔｉｖｅ，Ｒｈ—ｎｅｇａｔｉｖｅ，ａｒｌｄ ｐａｒｔｉａｌ ＤＶａ
２ 结果
３名个体均为以往采用人源抗一Ｄ血清通过常规
吸收放散试验证实为Ｒｈ血型Ｄ放散型，本次研究通
过改良的微量吸收放散技术，同样采用人源抗一Ｄ血 清，并以Ｒｈ阴性、部分Ｄ表型ＤⅦ（Ｈｕｓ）和ＤＶＩⅢ型
样本各一份作为对照，结果显示Ｄ放散型样本与以往
试验结论一致，对照样本亦未见矛盾结果，说明经过改 良的微量吸收放散试验简便可行。
（Ｈｕｓ）ａｎｄ ＤＶＩ ＩＩＩ ｄｏｎｏｒｓ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｔｅｓｔｅｄ ａｓ ｃｏｎｔｒ０１ｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｌｌ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｏｆ Ｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｗｅｒｅ
ｔｅｓｔｅｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｉｎ ａｌｌ ３ ＤＥＩ。ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｗｉｔｈ Ｒ．ＨＤｌ２２７Ａ ａｌｌｅｌｅｓ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒ０１ ｓａｍｐｌｅｓ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ａ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｆｏｒ Ｒｈ ｂｌｏｏｄ ｇｒｏｕｐ ＤＥＬ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｄ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ ３ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ ３ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｋｎｏｗｎ Ｒｈ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ Ｒ爿
ｌ材料方法
１．１研究对象３名个体均为深圳市血液中心的无
作者单位：５１８０３５深圳市血液中心
万方数据
偿献血者，汉族，女性，年龄３０～３８岁，均经间接抗人 球蛋白试验确认为Ｒｈ阴性，并通过吸收放散试验鉴 定为Ｄ放散型，同时进行ＲＨＤ基因全长编码区序列 分析［２’６］，以及进行个体尺ＨＤ合子型分析［２’６’…。其中 １名个体Ｒｈ表型为Ｄ＋Ｃ＋ｃ＋Ｅ—ｅ＋（ＤＣｃｅｅ），２名为 Ｄ＋Ｃ＋ｃ—Ｅ—ｅ＋（ＤＣＣｅｅ），合子型分析显示基因型分别 为Ｄ＆／ｄｆＰ、ＤＩ％／Ｄ＆、ＤＩ％／矗＆。对照样本Ｒｈ阳性、 Ｒｈ阴性、部分Ｄ表型ＤＶａ（Ｈｕｓ）和ＤＶＩⅢ型亦经 ＩＡＴ、吸收放散试验鉴定，以及进行尺ＨＤ基因全长编 码区序列分析和ＲＨＤ合子型测定，分别见文献聃］。 １．２人抗一Ｄ单克隆抗体 本实验室使用的抗体均为 人抗一Ｄ单克隆抗体，共９种，其中克隆株Ｐ３ｘ２４９、 Ｐ３ｘ２９０、Ｐ３ｘ３５、Ｐ３ｘ２４１、ＨＭｌ０、Ｐ３ｘ２１２一１１Ｆ１ 和 Ｐ３ｘ２１２—２３Ｂｌｏ为Ｄｉａｇａｓｔ公司产品（Ｄｉａｇａｓｔ，Ｌｏｏｓ Ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅ，Ｐ３ｘ２９０和ＨＭｌｏ分别为德国和香港 友人赠送）；单克隆抗体ＬＨＭ７０／４５和ＥＳＤｌ为 ＤｉａＭｅｄ公司产品（ＤｉａＭｅｄ，Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ，Ｃａｎａｄａ）。 人抗一Ｄ血清购自中国医学科学院输血研究所。９张人 抗一Ｄ单克隆抗体分别特异性针对Ｄ抗原１～９表位 （无第７表位），各表位的亚位点分别于表１中用小数 点表示，详见表１。 １－３微量吸收放散试验 由于上述稀有抗体获赠量 或所能购买的量均很小，不足完成多份样本及对照样
进一步证实本文的结论具有重要的临床意义，因 为根据免疫学的基本原理，若ＤＥＬ红细胞膜表达完整 的Ｄ抗原，ＤＥＬ个体将可能不会被Ｄ抗原免疫产生 同种免疫反应，即ＤＥＬ患者可以输注Ｒｈ阳性红细 胞，ＤＥＬ女性妊娠Ｒｈ阳性胎儿将可能不会面临发生 新生儿溶血病的风险。临床约三成的Ｒｈ阴性患者（可 能为Ｄ放散型）将无需等待Ｒｈ阴性血液，不仅缓解了 Ｒｈ阴性血源紧张的局面，而且这些患者更不会因为等 待Ｒｈ阴性稀有血液而延误治疗。当然，本文的结果和 结论尚需进一步采用更多、更全面的抗Ｄ抗原不同表 位的单克隆抗体进行证实，尽管要获得足够的抗Ｄ抗 原不同表位的单克隆抗体试剂十分困难；同时还必须 完整阐明分子生物学原理；并通过临床观察，如ＤＥＬ 女性妊娠Ｒｈ阳性胎儿同种免疫反应跟踪观察等。
【关键词】Ｒｈ血型；Ｄ放散型；抗原表位； 单克隆抗体
Ｅｐｉｔｏｐｅ ｍａｐｐｉｎｇ ｆｏｒ Ｒｈｅｓｕｓ Ｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｏｆ ＤＥＬ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ＳＨＡｏ Ｃ＾盘Ｄ一户Ｐ九ｇ，５Ｕ ｙ“一ｇｉ咒ｇ，ＸｊＯⅣＧ Ｉ矿Ｐ起，ＺＨＡⅣＧ ｙ；押一ｇ已，ＬＪ Ｚ＾ｅｎ，Ｚ日ｏＵ Ｄ以行，５＾Ｐ卵ｚ＾Ｐ” ＢＺｏｏｄ Ｉ！■以抬ｒ，５＾Ｐ以ｚ＾Ｐ卵５ １８０３５，Ｃ＾ｉ孢ｎ
测结果全部为阳性（见表１），这一结果提示携带 ＲＨＤｌ２２７Ａ等位基因中国汉族Ｄ放散型个体的红细
胞膜可能具有完整的Ｄ抗原表达，但进一步结论需要
采用更多、更全面的抗Ｄ抗原不同表位的单克隆抗体
进行测定。
、
表１不同人抗一Ｄ单克隆抗体与Ｄ抗原变异体的反应格局
（：童） 人抗Ｄ单抗 检测Ｄ表位
Ｄ ｖ１Ⅲ
ＤＥＬ Ｒｈ（一）Ｒｈ（＋）＊
国外医学输血及血液学分册２００６年第２９卷第３期
·１９５·
４参考文献
１ ｗａｇｎｅｒ ＦＦ，Ｆｒｏｈｍａｊｅｒ Ａ，Ｆｌ。ｇＥＬ ＷＡ．ＲＨＤ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ
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９种单克隆抗体的ＩＡＴ试验检测Ｒｈ阳性红细胞
均为阳性，而微量吸收放散试验结果则显示Ｒｈ阴性 红细胞则全部为阴性，２例部分Ｄ表型样本ＤⅥ（Ｈｕｓ）
和ＤｖｌⅢ型的检测结果与以往报道的各自Ｄ抗原表位
的缺失情形基本一致［１１；３名携带ＲＨＤｌ２２７Ａ等位基 因的Ｄ放散型个体的红细胞膜Ｄ抗原，与９种抗Ｄ抗
原不同表位的人抗一Ｄ单克隆抗体的微量吸收放散检
国外医学输血及血液学分册２００６年第２９卷第３期
ＤＥＬ红细胞膜Ｄ抗原表位分析
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·论著·
邵超鹏 苏宇清 熊文 张印则 李桢 周丹
【摘要】 目的 分析Ｒｈ血型Ｄ放散型（ＤＥＬ）红细胞膜Ｄ抗原表位（ｅｐｉｔｏｐｅ ｍａｐｐｉ“ｇ）。方法 采用 微量吸收放散技术通过９种抗Ｄ抗原不同表位的人抗一Ｄ单克隆抗体，检测３名已知Ｒｈ表型和ＲＨ基因 型的Ｄ放散型个体的红细胞膜Ｄ抗原表位，分别以Ｒｈ阳性、Ｒｈ阴性、部分Ｄ表型ＤＶａ（Ｈｕｓ）和ＤＶＩⅢ型 样本作为对照。结果 ３名携带ＲＨＤｌ２２７Ａ等位基因的Ｄ放散型个体，红细胞膜Ｄ抗原９个抗原表位均 检测为阳性，而对照样本检测结果各不相同。结论携带ＲＨＤｌ２２７Ａ等位基因的中国汉族Ｄ放散型个体 红细胞膜可能表达基本完整Ｄ抗原。
＊采用间接抗人球蛋白试验；？表示结果判度无法认定。
３讨论 ＤＥＬ发现于１９８４年，首个等位基因ＲＨＤｌ２２７Ａ
万方数据
（ＥＭＢＬ／ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ ＡＦ３９０１１０）发现于２００１年。 ２００２年作者实验室通过大样本调查发现中国汉族 ＤＥＬ个体均携带ＲＨＤｌ２２７Ａ等位基因［２。。由于中国 汉族Ｒｈ阴性人群中ＤＥＬ常见，因此对其深入研究对 我国临床输血以及Ｒｈ同种免疫的防治具有重要意 义。
红细胞膜Ｄ抗原包含许多不同的抗原表位 （ｅｐｉｔｏｐｅｓ），其经典的划分方法是分为８个Ｄ抗原表 位，即ｅｐｉｌ～ｅｐｉ９（取消了第７表位）［１１｜，其后国际输血 协会归纳和总结各实验室制备的新的抗一Ｄ单克隆抗 体，在此８个表位的基础上，进一步细分不同的亚位 点，共３０个Ｄ抗原表位［１ ２｜，本文所选择的９个单克隆 抗体则覆盖全部８个粗分Ｄ抗原表位。结果３份ＤＥＬ 个体的红细胞均与全部９个单克隆抗体反应，显然提 示ＤＥＬ可能拥有基本完整的Ｄ抗原，但这一结论却 与ＤＥＬ分子机制的研究结果相矛盾。最新分子研究表 明［１３’１“，ＤＥＬ基因转录后发生错误剪切，使成熟的 ｍＲＮＡ完整失去基因第９外显子对应的序列，翻译截 断的ＲｈＤ蛋白。作者认为血清学结果与分子生物学矛 盾最可能的解释是，ＲｈＤ蛋白对应基因第９外显子的 氨基酸序列为跨膜区，因此并没有完全影响ＤＥＬ红细 胞膜Ｄ抗原决定簇或表位的形成。
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｒｈ ｂｌｏｏｄ ｇｒｏｕｐ； ＤＥＬ； ａｎｔｉｇｅｎ ｅｐｉｔｏｐｅ； ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ
Ｒｈ血型是人类最复杂的红细胞血型系统，在Ｉ临床 输血中其重要性仅次于ＡＢＯ血型，Ｒｈ血型Ｄ抗原则 是引起严重新生儿溶血病的主要红细胞抗原。Ｄ抗原 有多种变异体，如弱Ｄ型、部分Ｄ型、Ｄ放散型（ＤＥＬ） 等。ＤＥＬ红细胞膜Ｄ抗原非常弱，常规间接抗人球蛋 白试验（ＩＡＴ）测定为阴性，只有通过敏感的吸收放散 技术才能检出。ＤＥＬ在不同民族中表型频率差别较 大，如在高加索人中约为ｏ．１６％［１］，黑人中尚未观察 到，而在中国汉族Ｒｈ阴性人群中比例高达２６％左 右［２］。目前国际上共发现５种Ｄ昱￡等位基因［１‘４］，但有 数据表明中国汉族人群中只存在一种等位基因 ＲＨＤｌ２２７Ａ＿２’５ｊ。过去十六、七年间，Ｒｈ血型分子生物 学研究取得了一系列重大突破，而２００５年则几乎成为 ＤＥＬ研究的热点年，国内、国抗原性质等。 本文主要研究以中国汉族人群为主、携带ＲＨＤｌ２２７Ａ 等位基因的ＤＥＬ型，其红细胞膜Ｄ抗原的表位图谱， 并与正常Ｄ抗原及部分Ｄ表型抗原比较。