高免疫原性T细胞抗原表位预测方法的研究
TERT多表位疫苗的制备及其免疫原性初步研究
合 免疫 诱 导 的分 泌 ＩＮｙ的 淋 巴 细胞 数 量 显 著 高 于 其 它 各 组 （ Ｆ－ Ｐ＜０ ０ ）另 外 ，Ｃ ．１ ； Ｐ Ｔ＋Ｐ Ｇ诱 导 的 分 泌 ＩＮｙ的 淋 巴细 胞 数 显 Ｃ Ｆ－
著高于分泌 Ｉ ４的数量 ；Ｃ ＋Ｐ Ｇ联合免疫诱 导了显 著的脾 细胞杀 伤活性 （７ ８ 。结论 ： Ｉ 厂 ＰＴ Ｃ ６ ．％） 含多个 Ｃ ４ Ｄ 和 Ｃ ８ Ｔ细胞 表位 Ｄ 的 ｍＴ Ｒ ｅＥ Ｔ的 Ｄ Ａ疫 苗 Ｐ Ｔ和多表位肽疫苗 Ｐ Ｇ联合免疫 能够诱导强烈 的 Ｔ ｌ Ｃ Ｌ细胞免疫应答 。 Ｎ Ｃ Ｃ ｈ和 Ｔ ［ 关键词］ Ｔ Ｒ ；Ｉ Ｅ Ｔ ＣＭ Ｔ细胞表位 ；Ｄ Ｔ细胞表位 ； ｅ Ｅ Ｔ 细胞免疫 Ｃ８ ｍＴＲ；
Ｐｒ ｐ ｒ ｔ ｎ ａ ｄ ｐｒｍ ａ ｙ ｉ ｍ ｕ ｏ ｅ ｉ ｉ ｖ ｌ ａ ｉ ｎ ｏ ｕｌ ｅ ｉｏ ｅ ｖ ｃ ｉ ｅ ｃ ｎ ｉ ｅ ａ ａ ｉ ｎ ｉ ｒ ｍ ｏ ｎ ｇ ｎ ｃｔ ｅ ａ ｕ ｔｏ ｆｍ ｔ ｐ ｔ ｐ ａ ｃ ｎ ａ ｄ － ｙ ｉ
（ 河北 医科 大学 免疫教研 室， 石家庄 ００ １） ５０７
中 国图 书 分 类 号 Ｒ ９ ．１ ３２ １ 文献 标 识 码 Ａ 文章编号 １０．ｓ ｘ ２ｌ ）００８ ．６ ００４４ （ｏｏ １． ５０ ８
［ 摘
要 ］ 目的 ： 制备端粒酶逆转 录酶（ Ｅ Ｔ 的多表位 （ ｅ Ｅ Ｔ 肽疫苗和 Ｄ Ａ疫苗 ， ＴＲ） ｍＴＲ） Ｎ 免疫小 鼠， 对其免疫原性 进行初步
ｄ ｔ ｒ ｍ ａ ｅ ｆ ｏ ＴＥＲＴ
丙型肝炎病毒多表位抗原的原核表达及免疫原性分析
丙型肝炎病毒多表位抗原的原核表达及免疫原性分析作者：孙文佳, 赵红玲, 刘龙丁, 董承红, 纳锐雄, 赵树栋, 李琦涵【摘要】目的: 研究丙型肝炎病毒(HCV)十表位抗原HCVe在大肠杆菌中的非融合表达及其免疫原性分析。
方法: 在大肠杆菌DH5α中表达非融合蛋白HCVe, 纯化该蛋白后利用Westerb blot分析其抗原反应性。
免疫小鼠, 检测其免疫特异性。
结果: HCVe十表位抗原能在原核表达系统中高效表达。
Western blot和ELISA分析表明HCVe十表位抗原能与HCV病人阳性血清特异性结合, 并可诱发小鼠产生特异性HCV抗体。
结论: 表达的HCVe十表位抗原具有特异的抗原反应性及免疫原性。
【关键词】丙型肝炎病毒; 多表位抗原; 体液免疫丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus, HCV)是经血液途径传播的一类肝炎病毒。
目前全球约有1.7亿～2.0亿HCV感染者, 此感染者中70%～85%可发展成为慢性感染, 病程长达20～30年[1], 约有30%可发展成为进展性肝病, 包括肝硬化或肝癌[2]。
目前, 对HCV 慢性感染尚无高效的特异性治疗方法, 标准治疗方案是聚乙二醇干扰素α联合利巴韦林治疗24～72周, 由于干扰素和利巴韦林副作用巨大, 使部分患者无法耐受而提前终止治疗[3]。
因此迫切需要研发一种有效疫苗来预防HCV感染。
由于HCV复制力差、感染力弱, 基因组高度变异, 并且缺乏有效的细胞和动物感染模型, 因此采用传统方法研制丙肝疫苗难以达到目的[4]。
以抗原表位预测和人工合成抗原表位基因为基础的多表位疫苗是近年来新的研究趋势[5], 表位肽虽然微小, 但免疫原性强, 可以克服主要组织相容性复合体(major histocompability complex, MHC)分子的遗传限制, 同时多表位疫苗在诱生细胞免疫和克服免疫应答中的不利因素方面有着独特优势, 为特异性免疫治疗和基因治疗奠定了基础, 因此多表位疫苗成为HCV预防和治疗性疫苗的研究突破点。
利用DNAStar软件预测热带无爪螨主要致敏原Blo t 5的抗原表位
利用DNAStar软件预测热带无爪螨主要致敏原Blo t 5的抗原表位王晓哲;肖正泮;韦双双;王大勇;裴业春【摘要】利用DNAStar Protean软件对热带无爪螨主要致敏原Blo t 5的二级结构和表面特性进行分析,如理化性质、亲水性、表面可及性、可塑性等,预测Blo t5蛋白的B抗原表位和T抗原表位.实验结果表明,Blo t5蛋白的二级结构以α螺旋为主,存在6个潜在的B抗原表位位点,可能的B抗原表位区域有:18-31,39-48,56-77,86-101,105-112,117-133氨基酸残基或其附近.含有7个潜在的T细胞抗原表位区域:32-37,40-44,57-65,70-79,86-95,100-104,115-120氨基酸残基或其附近.笔者应用Protean软件预测了热带无爪螨主要致敏原Blot 5的抗原表位,为进一步研究Blot 5致敏原的结构与功能,研制针对热带螨的预防性和治疗性疫苗、开发相应的诊断试剂盒奠定了基础.%The secondary structure and surface properties of Blot 5 allergen from Blomia tropicalis,such as physical and chemical characters,hydrophilicity,surface probability,flexible regions and antigenicity,were analyzed by using the DNAStar Protean software to predict B-cell and T-cell epitopes of Blot.5.The secondary structure of Blot 5 was rich in alpha helix,and the Blo t 5 contained six potential B cell epitopes located at 18-31,39-48,56-77,86-101,105-112,117-133 amino acid residues or nearby.There were seven potential T cell epitopes located at 32-37,40-44,57-65,70-79,86-95,100-104,115-120 amino acid residues or nearby.The epitopes of the major allergen Blot 5 from B.tropicalis were predicted by using the Protean software.The results can provide a base for the studies of structure and function of the allergen Blot 5,anddevelopment of preventive and therapeutic vaccines for Blomia tropicalis and diagnostic kits for detection of allergens induced by B.tropicalis.【期刊名称】《热带生物学报》【年(卷),期】2017(008)001【总页数】6页(P107-112)【关键词】热带无爪螨;抗原表位;Blo t 5;DNAStar 软件【作者】王晓哲;肖正泮;韦双双;王大勇;裴业春【作者单位】海南大学热带农林学院动物科技学院,海口570228;海南大学热带农林学院生物学院,海口570228;海南大学热带农林学院生物学院,海口570228;海南大学热带农林学院生物学院,海口570228;海南大学热带农林学院动物科技学院,海口570228【正文语种】中文【中图分类】R384.4尘螨是支气管哮喘发生的重要诱因之一，对尘螨敏感的人口比例高达10%，而在过敏性哮喘病人中，这个比例超过90%(美国过敏、哮喘和免疫学会网站数据，ACAAI)。
免疫学第二章 抗原
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再次免疫应答的条件：体内同时存在半
抗原激活B记忆细胞（半抗原的特异性），
载体激活T记忆细胞。
主要决定于载体。
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2．2 决定免疫原性的因素
2.2.1 化学分子组成
多数是蛋白质。
含大量芳香族氨基酸（酪氨酸、苯
丙氨酸），尤其是含酪氨酸的免疫原性
更强；有些弱抗原（例如胶原）连接了
酪氨酸残基可增强免疫原性。
一般，颗粒性的抗原（细菌、细 胞）用量少，可溶性的蛋白或多糖抗原 用量适当加大，并加佐剂。
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2.2.7 机体方面的因素
（1）遗传因素：动物的不同种类、品系、个体 对同一种免疫原应答差别很大。
如应用合成的抗原二硝基苯-多聚-左旋-赖 氨酸（DNP-poly-L-L）在荷兰猪品系2（GP strain 2）可以引起应答，而对品系13（GP strain 13）则不能引起应答。
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功能性决定簇： 与抗体结合、直接启动应答的抗原决定簇。 隐蔽决定簇： 位于蛋白的深层，当蛋白质结构改变或变性 才显示出来触发应答的抗原决定簇。 变性的自身抗原可导致自身免疫病（暴露了 隐蔽决定簇）。
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载体决定簇和半抗原决定簇 完全抗原产生的抗体产生分别针对载体决 定簇和半抗原决定簇的抗体。
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超抗原的生物学意义
参与某些病理过程 SAg（金葡菌毒素）刺激大量 T细胞激活，使巨噬细胞、肥大细胞产生多种细胞 因子或其他介质（TNF、IL-1、IL-2）引起疾病。 SAg与自身免疫应答 SAg的强大刺激可激活体内 自身反应性T细胞，诱发自身免疫性疾病（如类风 湿性关节炎）。 SAg与免疫抑制 T细胞因过度激活而被耗竭。 与抗肿瘤效应 CTL被大量激活而对肿瘤发挥杀伤 作用。
【国家自然科学基金】_t细胞表位预测_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140802
科研热词 表位 预测 表位预测 肝素酶 细胞毒性t细胞 细胞毒性t淋巴细胞表位 日本脑炎病毒e蛋白 抗原表位 抗原 慢性粒细胞白血病 可溶性hla四聚体 免疫原性 丙型肝炎病毒 t细胞 p210bcr-abl ctl b细胞表位
2008年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
科研热词 表位 限制性 酶联免疫斑点技术 遗传算法 逆转录聚合酶链反应 表达 表位预测 表位,t淋巴细胞 肿瘤-睾丸抗原 肾综合征出血热 肝细胞癌 肝炎病毒属 肝炎,丙型 结合肽 细胞毒t淋巴细胞表位 潜伏膜蛋白 流感病毒 核方法 染色与标记 支持向量机 抗原表位 尤文肉瘤 多肽合成 分子动力模拟 免疫应答 交叉相关系数 交叉抗原反应 t细胞表位 t细胞 t淋巴细胞,细胞毒性 spanx-c hla-a抗原 hla-a*0201 ews-fli1 eb病毒 ctl表位 ctl
科研热词 抗原表位 生物信息学 t细胞表位 三维结构 b细胞表位 agb1 金黄色葡萄球菌 进化分析 表位预测 表位鉴定 表位肽 表位 血凝素 蛋白互作 结核分枝杆菌 细胞毒性t淋巴细胞 神经氨酸酶 生物信息学分析 河流弧菌 小麦过敏原 刚地弓形虫 分离鉴定 克隆测序 亲环蛋白 二级结构 乳胶过敏原 中国龙虾 wt1蛋白 triabd27k pan s 1 ompu基因 hev b 1 h1n1流感病毒 dna疫苗 clfa cd4+t细胞 cd4+t cell
医学免疫学-第三章 抗原
第一节 抗原的性质与分子结构基础
一. 抗原的基本特性:
免疫原性
（Immuogenicity)：抗原 刺激机体产生免疫应答， 诱生抗体或致敏淋巴细胞 的能力。
免疫反应性
（immunoreactivity）：抗 原与其诱生的抗体或致敏 感淋巴细胞特异性结合的 能力。
T immunoreactivity
抗原的特异性：是指抗原刺激机体产生免疫应答及其与
应答产物发生反应所显示的专一性，即某一种特定抗原只 能刺激机体产生特异性的抗体或致敏淋巴细胞，且仅能与 该抗体或对该抗原应答的致敏淋巴细胞特异性结合。
特异性是免疫应答最重要的特点。 T,下，有针对性地清除病原体/异物
胸腺依赖性抗原（TD-Ag）
B细胞 A
无应答
B细胞
T细胞 B
浆细胞
2．胸腺非依赖性Ag（thymus independent
antigen TI-Ag）：此类Ag刺激机体产生抗体时， 不需要T细胞辅助,又称T细胞非依赖抗原。
TI-Ag
B细胞
浆细胞
TI－Ag可分为TI-1和TI-2抗原。
内源性抗原（endogenous antigen）：在抗原提呈细胞内 合成的抗原
如：病毒抗原，肿瘤抗原 抗原肽-MHCI类分子 主要 被CD8+ T细胞识别
外源性抗原（exogenous antigen）
来自抗原提呈细胞外的抗原，如APC通过各种方式吞噬 的各种病原体 抗原肽-MHCII 由CD4+ T识别
2．化学性质：天然的抗原多是大分子的有机物。
蛋白质是良好免疫原。
糖蛋白、脂蛋白和多糖类、脂多糖都有免疫原性，但脂类 和哺乳动物的细胞核成分如DNA、组蛋白是难以诱导免 疫应答。
(半抗原)和T细胞表位(载体)
根据抗原与机体亲缘关系分类
* 异种抗原（xenoantigen）
* 同种异型抗原（allogeneic Ag）：如ABO血型抗原、
* 自身抗原（ autoantigen）：自身组织在创伤、感染、电
离辐射和药物等影响下，可以发生变性而成为具有免疫
原性的物质 * 异嗜性抗原（heterophilic antigen） 一类与种属无关， 存在于人、动物及微生物之间的共同抗原，又称 Forssman抗原
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其他分类方法 * 完全抗原和半抗原
* 天然抗原、人工抗原和基因工程抗原
* 外源性抗原 指非APC自身所产生的抗原。
内源性抗原 指免疫效应细胞的靶细胞自身所
产生的抗原。
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主要内容
一、抗原的概念和特性 二、决定抗原免疫原性的条件 三、抗原的特异性与交叉反应性
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抗原决定基及抗原结合价
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四、抗原的种类及其意义
五、几种重要的抗原及佐剂
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抗原刺激机体免疫应答的过程
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抗原的属性
免疫原性(immunogenicity)
刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞的特性。
抗原性(antigenicity)
抗原能够与其所诱生的抗体或致敏淋巴细胞特 异性结合的特性 。
或5-7个核苷酸 构象表位、线性表位
抗原分子任意部位 抗原分子表面
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交叉抗原（cross antigen）
抗原异质性（heterogeneity）
第2章-抗原
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（二）佐剂的作用机理
1．改变抗原的物理性状，延缓其降解和排除 延长抗原 在体内的滞留时间以更有效地刺激免疫系统。
2．刺激单核－巨噬细胞系统，增强其对抗原的处理和递 呈能力。
3．刺激淋巴细胞的增殖与分化。
（三）佐剂的应用
1．增强特异性免疫应答 可用于预防接种及动物的抗血清制备。
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第三节 抗原的种类及其医学意义
1. 根据对T细胞的依赖性分类
◆ 胸腺依赖抗原（TD抗原）：亦称T细胞依赖抗原 ◆ 胸腺非依赖抗原（TI抗原）：亦称T细胞非依赖抗原
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TI-1抗原: 具多克隆激活作用，成熟与不成熟的B细 胞均可对其发生反应，主要代表为细菌脂多糖。
TI-2抗原: 表面为多个重复表位，但只能刺激成熟的 B细胞，该类抗原包括肺炎荚膜多糖、聚合鞭毛 素等。
物抗原、变应原或过敏原、耐受原等 (4) 根据理化性质：颗粒性抗原与可溶性抗原，蛋白抗原、
多糖抗原及多肽抗原等
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第四节 其它非特异性免疫刺激剂 (nonspecific immunostimulator)
一、佐剂(adjuvant)
将其预先或与抗原一起注射给机体可增强免疫应答或 改变应答类型的物质。
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1. 抗原异质性与共同表位
抗原异质性(heterogeneity)即抗原物质的非均一性, 同一分子 表面可存在不同的表位。
共同表位 (common epitope) : 即不同的抗原上存在
的相同或相似的抗原决定基.
2. 交叉反应的意义
(1) 诱发自身免疫病：异嗜性抗原 (2) 诊断：排除交叉反应；利用交叉反应 (3) 治疗：终止免疫耐受
一、抗原的理化性质
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高免疫原性T细胞抗原表位预测方法的研究T细胞抗原表位是T细胞抗原上具有特殊功能的肽段,能够特异性地被T细胞识别,从而激起T细胞免疫应答。
因此,研究T细胞抗原表位不仅有助于了解传染性疾病、自身免疫性疾病、过敏反应以及肿瘤等疾病的免疫应答机理,而且对计算机辅助疫苗设计起到推动作用。
生物信息技术的迅猛发展为研究T细胞抗原表位提供了有效途径。
针对目前T细胞抗原表位的研究现状,本文选择了其中的几个热点问题进行了研究。
主要工作如下：(1)结合序列信息和结构信息预测抗原表位是抗原表位预测工作的发展方向。
HLA-A2分子是人群中普遍存在的一种MHCI类分子,选择HLA-A2结合的抗原肽作为研究对象,对抗原肽的氨基酸理化性质以及其与MHC结合时的能量项进行了挖掘。
为了避免使用的特征存在冗余,影响到分类的效率和性能,利用最大相关最小冗余(MRMR)的方法对特征进行了筛选,最终筛选出了50个具有较高辨识能力的特征,构建了一个针对HLA-A2类分子抗原肽的预测方法。
预测结果表明筛选出的特征能够有效地识别HLA-A2类分子结合的抗原肽。
(2)I-Ag7分子和HLA-DQ8分子是小鼠和人类体内与Ⅰ型糖尿病有关的MHC Ⅱ类分子。
为预测这两类MHC分子限制性抗原表位,开发了GPS-MBA软件包。
将吉布斯取样算法进行了改进,获得了抗原表位的核心序列,又使用GPS算法对这些核心序列进行打分,构建出预测模型。
经过了全面的评测和比较,发现GPS-MBA 的性能要优于同类型软件。
使用此软件可以预测出大量潜在的Ⅰ-Ag7和HLA-DQ8抗原表位。
另外,设计了Ⅰ型糖尿病的抗原表位数据库(TEDB),其中包含了所有的经过实验验证或预测出的与Ⅰ型糖尿病有关的抗原表位。
(3)为了验证阴性选择假说、研究抗原表位的免疫原性,分别针对人类和小鼠两个宿主,分析了外源T细胞抗原表位和非抗原表位肽段与宿主蛋白质序列之间的相似性。
利用序列比对的方法,发现仅仅有极少量抗原表位与宿主蛋白质序列相似,这个数量低于非抗原表位肽段与宿主蛋白质序列相似的数量。
这个结果表明,外源T细胞抗原表位与宿主蛋白质序列相似性低,提示了使用与宿主蛋白质序列相似性低的抗原表位做疫苗可以有助于降低交叉免疫反应的概率、增强疫苗免疫原性、触发抗原特异性免疫应答。
(4)为了进一步开发蛋
白酶体酶切位点预测软件,以便提高预测抗原表位的准确度,开展了对现有预测软件的评估共作。
日前已经有多种方法和软件对蛋白酶体酶切位点进行预测,比较常用的软件有PAProC、MAPPP与NetChop。
使用统一的数据集对这三个软件进行性能评测,结果表明NetChop软件与另两个软件相比性能更好。