酪蛋白酶解制活性肽的工艺条件
高活性酪蛋白抗氧化肽的制备方法研究
高活性酪蛋白抗氧化肽的制备方法研究
吴丹;赵新淮
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2009(030)021
【摘要】采用木瓜蛋白酶对酪蛋白进行水解,得到抗氧化活性较好的酪蛋白水解物,并且水解物在木瓜蛋白酶作用下进行类蛋白反应制备出高活性酪蛋白抗氧化肽.第
一步制备酪蛋白水解肽时酶添加量为500U/g酪蛋白、温度45℃、底物浓度5%、反应时间2h.第二步类蛋白反应的最优条件为:酶添加量为500U/g水解物、温度30℃,底物浓度50%、作用时间5.5h.毛细管电泳结果确认,类蛋白反应修饰后抗氧
化肽的组成情况发生变化.抗氧化活性分析结果表明,类蛋白反应修饰后的酪蛋白抗
氧化肽对DPPH自由基和ABTS~+·的清除能力显著提高.
【总页数】5页(P283-287)
【作者】吴丹;赵新淮
【作者单位】东北农业大学,乳品科学教育部重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150030;东北农业大学,乳品科学教育部重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150030
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.1
【相关文献】
1.乳酪蛋白源抗高血压活性肽的制备及其生理活性 [J], 宫霞;凌庆芝
2.大孔吸附树脂吸附分离高活性玉米抗氧化肽 [J], 刁静静;曹龙奎
3.两步法制备高活性酪蛋白ACE抑制肽的工艺参数研究 [J], 李亚云;赵新淮
4.抗氧化肽及其抗氧化活性评价方法研究 [J], 徐兆刚;董周永;周亚军;徐艳阳
5.抗氧化肽及其抗氧化活性评价方法研究 [J], 徐兆刚;董周永;周亚军;徐艳阳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酪蛋白磷酸肽的酶水解条件研究
酪蛋白磷酸肽的酶水解条件研究轩诗海;张铁涛【摘要】本研究主要是以粗制的干酪素为原料,采用单因素分析和四因素三水平L9(34)正交试验.确定用碱性蛋白酶从水解的原料-劣质干酪素中提取酪蛋白的最佳条件是温度55℃、pH9.0、时间2.5 h、原料浓度为15%.【期刊名称】《生命科学仪器》【年(卷),期】2011(009)001【总页数】3页(P59-61)【关键词】酪蛋白磷酸肽;干酪素【作者】轩诗海;张铁涛【作者单位】黑龙江省完达山乳业股份有限公司;琼州学院化学系【正文语种】中文近年来，生物活性肽作为保健食品市场的新生力量显示出了强大的市场潜力。
乳源性生物活性肽是生物活性肽中最重要的一类，乳源性生物活性肽的种类繁多，目前已发现的有阿片肽、免疫促进肽、阿片拮抗肽、抗高血压肽、抗血栓肽、酪蛋白磷酸肽和其它一些生物活性肽［1,2］，其中酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphopeptides，CPPs）是发现较早的一种，酪蛋白磷酸肽是蛋白酶水解酪蛋白后形成的一种含成簇磷酸丝氨酸基团的生物活性短肽，因其具有促进矿物质吸收，特别是钙质吸收等多种生物活性而倍受关注。
本研究主要是以粗制的干酪素为原料，采用四因素三水平L9（34）正交试验，确定碱性蛋白酶水解干酪素制备酪蛋白磷酸肽的最佳工艺条件［3,4,5］。
1 材料与方法1.1 原料与主要试剂本试验所用的原料是甘肃华羚乳品集团公司工业精一级干酪素，颜色呈淡黄色，其主要成分见表1-1，其它化学试剂均为分析纯。
1.2 碱性蛋白酶水解干酪素制备CPPs单因素试验为了确定正交试验各因素的水平范围，以水解度为指标，对影响蛋白酶水解的[E]/[S]、pH、温度和时间做单因素分析。
1.2.1 [E]/[S]对水解度影响固定底物浓度为15%，pH为9.0，温度为50℃，水解时间为2.0 h。
选取[E]/[S]为 400 u/g～2000 u/g（相差为400 u/g），对底物进行水解。
酶解酪蛋白制备易于消化吸收肽的工艺研究
酶解酪蛋白制备易于消化吸收肽的工艺研究王彩云;荆莹;石丹;云战友【期刊名称】《中国乳品工业》【年(卷),期】2012(040)003【摘要】为了提高酪蛋白的消化吸收利用率,利用胰蛋白酶对酪蛋白进行水解改性,制备易消化吸收的肽.通过对水解工艺的研究,得到了胰蛋白酶水解酪蛋白的优化工艺条件:E/S为14000U/100mL,温度为50 ℃,pH值为8,水解时间为2.5 h,底物质量分数为8％.利用此工艺得到的酪蛋白水解物的水解度为7.6％,水解物中分子量在2 000～180 u的肽质量分数占80％,其中1 000～180 u的水解物占总水解物的59％.【总页数】4页(P18-21)【作者】王彩云;荆莹;石丹;云战友【作者单位】内蒙古伊利实业集团股份有限公司,呼和浩特010080;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,呼和浩特010080;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,呼和浩特010080;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,呼和浩特010080【正文语种】中文【中图分类】Q936【相关文献】1.酪蛋白酶解制备酪蛋白磷酸肽研究I.过程分析与优化 [J], 齐崴;何志敏;何丽霞2.酪蛋白酶解制备酪蛋白磷酸肽研究Ⅱ.产物分析及反应动力学模型 [J], 齐崴;何志敏;史德青3.贯筋藤酶解山羊乳酪蛋白糖巨肽的工艺研究 [J], 赵存朝;王雪峰;黄梦;魏光强;黄艾祥4.星点设计-效应面法优化复合酶解酪蛋白制备抗凝血肽的工艺研究 [J], 吴雄;夏建开;苗艳丽;陈绍红;张兆霞;郭婉婷;李棂灵5.星点设计-效应面法优化复合酶解酪蛋白制备抗凝血肽的工艺研究 [J], 吴雄; 夏建开; 苗艳丽; 陈绍红; 张兆霞; 郭婉婷; 李棂灵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酪蛋白磷酸肽的生产工艺技术
酪蛋白磷酸肽的生产工艺技术第一节：酪蛋白磷酸肽生产工艺尽管早在50年代，国外就开始了对CPP的研究，但工业化制备的研究工作直到近年才真正开始，而我国在这方面的研究开发也刚起步。
工业生产CPP以酪蛋白或牛乳为原料，所采用的蛋白质酶通常是胰蛋白酶，胰蛋白酶具有较强的专一性，水解使CPP游离，喷雾干燥后成为低纯度产品。
酪蛋白水解后呈现强烈的苦味，可用离子交换树脂脱除或用酶分解苦味成分。
对酪蛋的水解物采用络合分离、凝胶过滤或膜分离等高度特异性方法进行分离精制可获得高纯度CPP-Ⅲ，再用树脂或酶除去或分解其中的苦味成分。
…此处省略,详情请见六鉴网()《酪蛋白磷酸肽市场调研报告》第二节：酪蛋白磷酸肽生产技术研究与进展作为一种具有多种生理功能的活性多肽，CPP的酶法制备是近年来国内外研究的热点。
下面将对酶解过程中的几个关键问题——酶种的选择、水解方式、分离纯化方案、检测方法作一概述。
1、酶种的选择碱性蛋白酶为微生物源酶种，其水解度高，但操作条件苛刻，不利于工业化生产。
首先温度过高，必然增加生产能耗；其次pH值过高，会使反体体系出现多余的盐类。
但碱性蛋白酶切割位点研究较彻底，因此是一种研究酪蛋白水解特性的理想酶种。
胰蛋白酶和胰酶提取自动物胰脏。
其中胰蛋白酶的专一性强，只作用于由精氨酸和亮氨酸组成的肽键，所得肽段长度适中，既富集了磷酸四氨酸基团，又利于产物分离。
其次胰蛋白酶的最适pH在中性偏碱性区域，而在此范围内，酪蛋白也可保持较大的溶解度，有利于反应的进行。
但是胰蛋白酶本身很容易自水解，由原先的β-胰蛋白酶转化成α-胰蛋白酶，再进一步降解为拟胰蛋白酶，乃至碎片，活力也逐步下降甚至丧失。
文献报道，Ca2+对胰蛋白酶有保护作用和激活作用，当pH＜3并且当Ca2+浓度达到0.01mol/L时，胰蛋白酶比较稳定。
此外，胰蛋白酶价格较高，目前主要用于对酪蛋白水解特性的研究。
胰酶是由胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等构成的混合酶体系。
酪蛋白磷酸肽酶解工艺条件的优化研究
制备工艺中所使用的酶。尽管早在 ５ ０年前 ，国外 就 开始 了对 Ｃ Ｐ Ｐ的研 究 ，但 工业 化 制备 的研究 工
作 直到近年才真 正开始 ，而我 国在酪蛋 白磷 酸肤 的 研 究方面 尚未完全 实现产业 化生产 ， 现 有 的生产 中 往 往采 用 单一 酶水 解 ，存 在水 解 度 低 、酶 消 耗 量 大 、底物浪 费 、Ｃ Ｐ Ｐ成本 高的问题 。因此 提高 酶 的 转化率 、研 究生 产天 然 的 Ｃ Ｐ Ｐ ，实 现 大规 模 生产 ， 不断满 足人们对 Ｃ Ｐ Ｐ的需要将是其 发展必然趋 势 。
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酶解酪蛋白生产生物活性肽的研究现状及开发前景
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抗高血压肽 DEB=;AF351=5B?;G5 353=;<5H 血管紧张素转化酶 &E)I ’ 是一种多功能 的 酶 !
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&!’ 基 因 工 程 方 法 $ 采 用 基 因 工 程 技 术 7 让 某 些 功能明确的活性肽在工程细菌或工程动植物中得到 高效表达 7 从 而 达 到 商 业 化 生 产 的 目 的 $ 人 们 在 这 方 面的工作还是初步的! 在转基因鼠的乳汁中得到了 牛 乳 !! 酪 蛋 白 的 表 达 产 物 ! 并 且 进 行 了 纯 化 ! 牛 乳 的"! 乳白蛋白也在转基因鼠的乳汁中得到表达 $8%$ 通 过基因工程的方法生产分子量较大的肽和蛋白质已 被广泛应用! 而许多生物活性肽都是短肽! 所以也 限制了这种方法的使用 $ & "’ 化 学 合 成 方 法 $ 化 学 合 成 法 用 于 生 产 高 价 的药理级肽! 但是此法的成本相当高! 而且副产物 会对人体有害 ! 因此使用受到限制 $ 总之! 目前生物活性肽的研究开发主要采用微 生物蛋白酶的方法! 国内外在植物蛋白和动物蛋白 的开发研究中利用的微生物蛋白酶已建立的良好的 实验依据! 发现微生物蛋白酶大多具有溶解性好(
56.76,89:; )*+,- 水解酪蛋白得到的酪蛋白水解产物中
都分离到了 !#) 酪 蛋 白 & ./0(*12(312 ’ 和 ! ! 酪 蛋 白 &405(*12(*12 ’ 具有降血压作用的肽段 ! 但是此法存 在对菌种依赖性较大! 如果没有优良的发酵菌种! 那么降低生产成本而实现工业化生产必然存在许多 困难* 另外还存在菌种的安全评价和相关产物分析 等问题
$
& ’’ 微 生 物 发 酵 法 $ 此 法 生 产 多 肽 是 近 年 来 逐 步发展起来的很前景的技术! 直接利用微生物发酵 过 程 中 产 生 的 蛋 白 酶 &复 合 ’ 降 解 蛋 白 质 ! 可 达 到 较高的水解度! 从而相对地降低酶法生产活性肽的 成 本 ! 例 如 ! 在 接 种 了 23456.76,89:; 的 牛 乳 和 用 234
α_s-酪蛋白酶法水解制备阿片肽的工艺研究
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左右 ， 酪蛋 白具有较好 的乳化性和稳定性 ，其分子 一
结构 中酪蛋 白磷 酸肽片段含量较 一般 酪蛋 白多 ， 含量
统、 内分泌系统及 免疫 系统 的重要 因素 ， 因此被称 为 神经 免疫肽 。阿片肽在医药和保健领域具有很广泛的 应用前景 ， 其应用 范围包括 ： 阿片肽具 有 明显 的镇痛
提 取 工艺 。
白氨基 酸序列疏水 区的比 一 乳球蛋 白所带 的电荷更
丰富 ，疏水 区在 １４ 、０ １３ １２ １９氨基酸 区段 。 ～ ４ ９ ～ １ 、３ ～９
酪蛋 白约 占总酪蛋白的 １ ％， ０ 相对分子量为 ２ ２０ ５ ３，
—＝ １ ２ ＝＝ ８
第 第期 卷 １
３ １ ｏ
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酪蛋 白酶法水解制备阿片肽的工艺研究
李文秀 －吴莎 李卫 ， ，
（． １ 内蒙古蒙牛乳业股份有限公司 ， 内蒙古 呼和浩特 ０ １０ ；． １５０ ２ 湖北工业大学 膜技术研究所 ， 湖北 武汉 ４ ０ ６ ） ３ ０ ８
关 键词 ：。酪 蛋 白 ； 片肽 ； ； 解 一 阿 酶 水
Ｓｔ ｄｙｏ ｈ ｅ ｒ ｔｏ ｆＯｐ ｏ ｄＰｅ ｔｄ ｓｉ ｚ ｍ ａｉ ｕ ｎｔ ｅＰｒ ｐａ ａ ｉ ｎｏ ｉ ｉ ｐ ｉ ｅ ｎＥｎ ｙ ｔｃＨｙｄ ｏ ｙ ｉ ｆｏ －Ｃａ ｅｎ ｒ ｌ ｓｓｏ ￣ ｓｉ
酪蛋白源降胆固醇肽的酶解制备工艺优化
梁小慧，王孝治，赵佳园，等. 酪蛋白源降胆固醇肽的酶解制备工艺优化[J]. 食品工业科技，2022，43（19）：280−287. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022010165LIANG Xiaohui, WANG Xiaozhi, ZHAO Jiayuan, et al. Optimization of Preparation of Casein-derived Cholesterol-lowering Peptide by Enzymatic Hydrolysis[J]. Science and Technology of Food Industry, 2022, 43(19): 280−287. (in Chinese with English abstract). doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022010165· 工艺技术 ·酪蛋白源降胆固醇肽的酶解制备工艺优化梁小慧1，王孝治1，赵佳园1，金庭飞2，黎 旭2，罗梦帆1，谭东虎1，刘明真1，罗海波1，郭宇星1,*（1.南京师范大学食品与制药工程学院，江苏南京 210000；2.广东益可维生物技术有限公司，广东广州 510000）摘 要：以酪蛋白为原料，采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶以及胰蛋白酶对酪蛋白进行水解，确定制备降胆固醇肽的最佳蛋白酶；通过单因素实验和响应面试验，研究水解pH 、水解温度、酶与底物比、底物浓度和水解时间对酪蛋白水解度和胆固醇胶束溶解度抑制率的影响，确定最佳水解条件；而后通过超滤和凝胶过滤层析确定降胆固醇肽的初步分离工艺。
结果表明：制备酪蛋白源降胆固醇肽的最佳水解工具酶是中性蛋白酶，其最佳酶解条件为反应温度51.3 ℃，酶与底物浓度比6.47%，pH6.34，底物浓度5 g/100 mL ，反应时间3.5 h ，胆固醇抑制率为58.25%±0.59%；Sephadex G-10分离酪蛋白降胆固醇肽条件为上样浓度80 mg/mL ，上样体积2.5 mL ，洗脱速度3.5 mL/min ；经酶解、超滤及层析后制备的酪蛋白源降胆固醇肽峰1和峰2样品在100 μg/mL 的胆固醇溶解度抑制率为24.2%±0.24%和4.3%±0.16%。
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量ｘ０ ｌ ０％
蛋 白酶。胰蛋 白酶专一作用于精氨酸 、赖 氨酸的羧基
形成的肽键 酪蛋 白具有较强 的水解度ｔ ” 。研 究表明 ， 当 分子量处于 ５ ０ ～ ００ ０ ０ｕ １ ０ ０ Ｕ时候 的蛋 白肽具有很 强
生工 物程
食品研究与开发
第１第１ ２０ １期 ０年１ ３ 月 卷
２ １ ＝＝ ０ ＝一
酪蛋 白酶解制活性肽的工艺条件
张虎刚 。 张志翔 万端极 ， ｔ
（． １内蒙古 蒙牛乳 业 （ 团 ） 份有 限公 司 ， 集 股 内蒙 古 呼和浩特 ０ １０ ；． 工业 大学 膜技术 研究 所 ， １５ ０ ２湖北 湖北 武汉
Ｈ一 Ｉ ２恒流 泵上 海沪 西分仪 器厂 ；Ｄ ２型 ｐ Ｚ～ Ｈ计 上海
雷磁仪器 厂 ；８ Ｗ一 ７ Ｈ 型恒温 磁力搅拌器江苏省金 坛市 医疗仪器厂 ；ｎｒｕｅ ８ ０ ｅｔｆｇ １Ｒ离心机 ， 国产 。 ｉ ５ 美 １ 可溶性氮 的测定（ ． ２ 微量扩散 法 ） 取乳酪蛋 白肽 溶液 ５ｍ ， Ｌ 加入 １ ｇ消化催化剂 和 １ ０ ｍＬ浓硫 酸 ， 消化至 黄绿色 ， 出冷 却至室 温 ， 取 加水 定容 。然后取 ５ 加人 到扩散皿外室 ， ｍＬ 并在扩散皿 内 室加入 ２ Ｌ２％硼 酸溶 液 ，再向外室加入 ４ Ｌ４ ｍ ０％ ｍ 浓 ＮＯ ａ Ｈ溶液 ，并迅速盖上玻片。在室温条件下放置 ２ ， ４ ｈ后 用标准的盐酸溶液滴定硼 酸溶液至紫罗兰色。 含 氮量 Ｎ （ ２Ｖ ）Ｎ ｘ ．１ ｘ 释倍 数群 品重 ＝ Ｖ一 ｘ ． Ｏ ４ 稀 ０
牛乳 中蛋 白质含量 为牛乳的 ３％～ ． ３ ５％，主要包
定 含氮量为 １． ％，由湖北工业 大学生物工 程学 院 ３１ ２ 提供 ；胰蛋 白酶 ：上海伯 奥生物科技有 限公司 ； Ｃ ， Ｈ１ Ｎ Ｏ 等其 他 试 剂 均 为分 析 纯 ； Ｄ ３紫 外检 测 仪 ， ａＨ Ｈ 一
括酪蛋 白、 白蛋 白 、 乳 乳球蛋 白 、 铁蛋 白和一些 具重 乳 要生理功能的酶类 ， 中酪蛋 白占蛋 白总量 的 ７ ．％。 其 ８ ８ 在 酪蛋 白中有 ４ 主要形式 ， 种 分别是 １ 酪蛋 白， 【 ０一 ２酪蛋 白 ， ｐ酪蛋 白 ， 酪蛋 白。 水解酪蛋 白的酶类也 有 很多 ， 本文 重点研究一种 动物来源 的蛋 白水解 酶一 胰
关 键词 ： 蛋 白 ；Ｈ值 ； ； 物 浓度 ； 酪 ｐ 酶 底 温度 ； 间 时
Ｃａ ｅｎ Ｓ ｌ ｔｏ ｏ ｅ ｓＣｏ ｉｉ ｎ ｆＡｃ ｉｅＰｅ ｔｄｅＲｅ ｅ ｒ ｈ ｓ ｉ ｏ ｕ ｉ ｎ Ｐｒ ｃ ｓ ｎｄ ｔｏ ｓｏ ｔｖ ｐ ｉ ｓ ａ ｃ
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４０ ６ ） ３ ｏ ８
摘
要： 选用胰蛋 白酶水解牛乳酪蛋 白制备活性肽 。以水解度（ Ｈ）水解速度 ， Ｄ ， 水解时间（） ｔ和分子量分布为指标 ， 探
讨 对 酶 的底 料 浓度 （ ／）底 物 浓度 比 （ ）水 解 温 度 （ ）水 解 时 间 （）４个 因数 对酶 解 效 果 的 影 响 ， 定 最佳 条 件 组 ＥＳ ， Ｓ， Ｔ， ｔ， 确 合 ： 解 温 度 ４ ， 物 浓 度 ： ％ ， 底 物 浓 度 比 ： ％， 解 时 间 ：２ ｒｉ。 水 ｏ℃ 底 ６ 酶 ２ 水 １０ ｎ ａ