食品中转基因成分检测(大豆)
实验三 PCR-荧光探针法鉴定转基因大豆
实时荧光定量PCR Quantitative Real-Time PCR
（一）Real-time qPCR原理
实时定量PCR原理
• 实时定量PCR技术（real-time quantitative PCR） 是指在PCR反应体系中加入荧光染料，实时监测 荧光染料 整个PCR过程中荧光信号的累积强度，并利用特定 数学原理对未知模板进行定量分析的方法。
基因组DNA分离纯化中的注意事项
保证基因组DNA的完整性和纯度 提高DNA的洗脱效率 DNA的储存
（二）转基因大豆鉴定 — CaMV35S基因核酸检测试剂盒杂交试剂盒
• 采用实时荧光PCR技术，针对CaMV35S基因核 酸序列设计特异性引物和荧光探针，通过实 时荧光PCR（Taqman探针法）对转基因成分 CaMV35S基因进行检测。
特异性高 多重PCR检出
要求反应的特异性 不能进行多重PCR
Probe设计要求高 Probe合成费用高
常用于mRNA表达量分析等
常用于SNP解析，病毒、病原菌检测
（三）Real-Time qPCR主要概念
非探针 扩增曲线
化学原理
实时定量PCR
两个重要图形
探针
熔解曲线
Real-Time qPCR曲线的意义
106 105 104 103 102 10
荧光强度---循环数曲线
初始模板量对数---C(T)循环数标准曲线
三、实验内容
• 大豆DNA提取 • PCR-荧光探针法检测CaMV35S基因
四、实验材料和用品
大豆 大豆DNA提取试剂盒 CaMV35S基因核酸检测试剂盒 仪器：荧光定量PCR仪 台式离心机等
DePure Plant DNA Kit 基于硅胶 柱纯化方式。样品经液氮或研磨仪匀 浆后，在裂解液中裂解，DNA 释放到 裂解液中。经高盐溶液沉淀去除多糖 等杂质后，加入乙醇，转移至柱子中 过滤，DNA 被吸附到柱子的膜上，而 蛋白质则不被吸附而去除。柱子经 Buffer GW2 洗涤去除盐分，最后 DNA 经 Buffer AE洗脱。
食品中的转基因成分分析
食品中的转基因成分分析随着科技的不断进步，转基因技术在农业领域的应用越来越广泛，其中最常见的应用便是在食物生产中。
转基因食品指的是通过人为手段将外源基因导入到食品作物中，以改变其遗传特性。
然而，关于转基因食品是否安全以及对人体健康的影响一直存在争议。
本文旨在对食品中的转基因成分进行分析，以了解其对人体的潜在影响。
一、转基因食品的定义及分类转基因食品即含有经过转基因技术改造的成分的食品。
根据转基因食品的来源不同，可以将其分为植物类、动物类和微生物类三大类别。
植物类转基因食品是最常见的一类，在市场上出现的大部分转基因食品都属于该类别。
二、转基因食品的检测方法为确保食品安全，转基因食品需要进行严格的检测与监管。
目前，常见的转基因食品检测方法主要包括基因组学方法、蛋白质组学方法和组织学方法。
其中，最常用的是基因组学方法，即通过PCR、构建转基因事件特异性引物和探针等手段来检测目标基因是否存在。
三、食品中常见的转基因成分及其检测1. 转基因大豆成分大豆是许多食品加工的重要原材料之一，而转基因大豆在市场上极为常见。
转基因大豆中常见的转基因成分包括BT、RR和HT等，这些成分能够帮助作物抵抗病虫害和耐受除草剂。
检测转基因大豆成分可使用PCR方法，该方法可以准确快速地鉴定大豆中是否含有转基因成分。
2. 转基因玉米成分玉米也是转基因食品中使用最广泛的原材料之一。
转基因玉米中常见的转基因成分包括BT、RR、MON810、GA21等。
这些转基因成分能够赋予玉米抗虫和除草剂耐药性。
检测转基因玉米成分的方法包括PCR、蛋白质组学方法和组织学方法等。
3. 转基因番茄成分转基因番茄是改良后的番茄品种，通常具有更好的抗病性和耐贮藏性。
转基因番茄中常见的转基因成分包括FLAVR SAVR番茄和紫花草甘蓝素等。
检测转基因番茄成分一般采用PCR方法，通过目标基因的扩增来检测番茄中是否含有转基因成分。
通过上述示例可见，转基因食品的检测方法相对成熟，可以在一定程度上保证食品label的准确性和安全性。
转基因大豆检测方法及标准概述
转 基 因 大 豆 是 商 品 化 最 早、 推 广 应用速度最快、种植面积最广的转基 因粮食作物。由于转基因大豆产品可 能存在潜在的环境污染、食用安全及 生态风险，对人类健康和自然环境带 来不利影响 [1]，因此需要加强对转基 因大豆产品的有效监督、监测和管理。
1 转基因大豆检测技术研究进展
农业农村部公告第 111 号 -9-2018
SN/T 3767.16-2014
SN/T 3767.17-2014
SN/T 3767.18-2014
SN/T 3767.19-2014
3 讨论与建议
目 前， 我 国 转 基 因 大 豆 的 检 测 方 法主要以 PCR 方法为主。PCR 实验成 败的关键在于模板 DNA 的提取质量， 对于不同加工过程的产品，应选择不 同 的 DNA 提 取 方 法， 同 时 采 用 紫 外 分光光度计给出 DNA 的浓度及 A260 nm/A280 nm 的比值，以判断其是否 适合进行 PCR 检测。实验中还应该注 意污染问题，建议实验过程中注意添 加阴性和空白对照。实验室的布局以
及检测工作应严格遵循国家标准中转
基因通用标准的规定。
参考文献 [1] 王南 , 李海燕 . 转基因大豆概况
及其安全性 [J]. 吉林农业 ,2016(19):118. [2] 王颢潜 , 陈锐 , 李夏莹 , 等 . 转基
因产品成分检测技术研究进展 [J]. 生物 技术通报 ,2018,34(3):31-38.
农业部 1485 号公告 -8-2010
GB/T 19495.4-2018
农业部 1782 号公告 -1-2012
GB/T 19495.5-2018
农业部 1782 号公告 -4-2012
食品中的转基因成分检测方法
食品中的转基因成分检测方法转基因技术是现代生物技术领域的一项重要技术，通过在食品作物中引入外源基因，可以提高作物的产量、抗病虫害能力以及改善其品质。
然而，随着转基因食品的广泛应用，人们对于食品中是否存在转基因成分的关注与日俱增。
因此，开发准确可靠的转基因成分检测方法成为食品安全监管和消费者权益保护的重要任务之一。
一、PCR方法PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的转基因成分检测方法。
它通过扩增目标DNA片段，然后进行特定基因的检测，以确定食品样品中是否存在转基因成分。
PCR方法的原理是利用DNA聚合酶在模板DNA的引导下，不断扩增目标基因区段，最终可以从食品样品中获得足够数量的转基因 DNA 片段。
PCR方法具有高灵敏度、高特异性、操作简便等优点，因此被广泛应用于转基因食品的检测领域。
二、荧光定量PCR方法荧光定量PCR是PCR方法的一种改进形式。
通过引入特定的荧光探针，可以实现对转基因成分的快速、准确的定量检测。
该方法利用特定荧光探针与目标DNA结合，产生荧光信号，并通过荧光实时监测的方式，定量检测样品中的转基因成分含量。
荧光定量PCR方法具有灵敏度高、准确性强、操作简单快速等优点，被广泛应用于食品安全监管和质量控制。
三、基因芯片技术基因芯片技术是一种高通量、高灵敏度的转基因成分检测方法。
该技术通过将大量的特异性的探针固定在芯片上，可以同时检测多个基因。
食品样品的DNA与芯片上的探针发生特异性的杂交反应，然后通过荧光或其他信号检测出转基因成分的存在和含量。
基因芯片技术具有多重检测、高通量、高灵敏度等特点，能够更全面、准确地检测食品中的转基因成分。
四、下一代测序技术下一代测序技术是近年来快速发展的高通量测序技术。
它可以对DNA样本进行高效、全面的测序，并通过比对分析，检测出其中存在的转基因成分。
相较于传统的PCR方法，下一代测序技术具有高通量、高灵敏度、高分辨率等特点，能够准确检测出转基因成分的存在和含量，对于食品检测具有重要的应用前景。
论转基因食品检测方法
如今转基因食品受到了多个国家的重视，转基因食品包括对植物基因升级改造的农作物，和对转基因植物进一步加工得到的供消费者食用的食品。
随着人们对食品安全的关注，人们对转基因食品抱有不同态度，在赞叹科学技术发展的同时，也在担忧转基因食品的安全性，对转基因食品存在一定偏见。
1 我国转基因农作物种植现状转基因作物是通过基因工程改变农作物的基因组，形成新的生物体。
将转基因生物体进一步加工即为转基因食品。
其中最常见如转基因豆油、转基因玉米等。
目前我国转基因食品种植面积约为280万公顷，在全世界排名第八，主要种植转基因棉花、番茄、玉米等。
随着转基因农作物进入市场，其安全性引起了社会公众的关注。
转基因食品的安全争议主要集中在：①种植农作物是否会增加杂草和病虫害问题，种植废弃物是否会污染环境。
②转基因食品对人体健康的影响，是否存在副作用和毒害物质，导致后代不育等。
现阶段我国对转基因生物的管理十分严格，为了保护公民的健康和合法利益，避免生态环境受到威胁，我国针对转基因生物安全设定了多条管理办法，严格要求各企业对转基因产品做出标志，在市场监管中严格管理。
2 转基因食品检测面临的困难检测转基因时面临着诸多挑战，首先是检测复合转基因品系，如今复合转基因已经出现由五个转化体杂交得来的品系，以转基因玉米为例，已经培育出Bt11与MIR604、GA21、论转基因食品检测方法□ 温善萍 蒋小英 赵玉芬 浙江医药股份有限公司昌海生物分公司摘 要：本文简单介绍了几种常见的检测方法，并以转基因大豆为例，详细分析了荧光PCR 检测、定性PCR 检测的应用。
以期利用先进检测技术，保证转基因食品安全，推动农业事业发展。
关键词：转基因；食品安全；检测方法；PCR 检测TC1507以及MIR162杂交的品种，现阶段检测技术并不能对转基因品系进行区分。
检测转基因材料含量降低的食品时，尤其是深加工食品，由于DNA 经过了严重降解，并不能保证完整检出。
此外部分正处于田间试验阶段或者研发阶段的转基因作物，在非法途径下转到市场或田地，对于其并不具备较完善的检测方法进行检测，容易发生漏检的情况。
转基因大豆食用安全性探究及检测
摘要由于基因工程技术的迅速发展，于是食品工业中产生了转基因食品，但是转基因食品的食用安全性一直受到人们的质疑。
本文对转基因大豆进行了概述，并介绍了转基因大豆在食用中可能产生的安全性问题以及一些与转基因大豆安全性相关的实验探究，然后总结了转基因大豆的一些检测技术。
最后对转基因大豆食用安全性的评价方法作了展望。
关键词：转基因大豆安全性基因AbstractAs the rapidly development of genetic engineering technology technology，it is applied to the food industry to produce a genetically modified food but the genetically modified food safety has been questioned．This paper describes the safety problems in the consumption of transgenic soybean and some security exploration experiments about transgenic soybeans，and summarizes the safety evaluation of these issues and testing methods．Keywords:transgenic soybean; security; gene目录1 转基因大豆概述 (1)2 转基因大豆的安全性 (1)2.1 外源基因毒性 (1)2.2 抗药性 (1)2.3 过敏性 (2)2.4 产生有毒物质 (2)2.5 转基因大豆营养组成及生物利用率的变化 (2)2.6 抗营养因子的变化 (2)3 转基因大豆食用安全性的实验探究 (2)3.1 转基因与非转基因大豆营养及次生物质的比较 (2)3.2 转基因大豆对雄性鼠生殖系统的安全性评估 (2)3.3 转基因大豆膳食纤维食用安全性研究 (3)3.4 摄食转基因大豆罗非鱼各组织中转基因成份的检测研究 (3)4 转基因大豆检测技术 (3)4.1 蛋白质检测 (4)4.2 核酸检测 (4)5 展望 (5)参考文献 (6)转基因大豆食用安全性探究及检测技术转基因技术是指将外源基因通过生物、物理或化学手段导人其他生物基因组，以获得外源基因稳定遗传和表达的遗传改良体的技术。
如何检测转基因大豆
PCR检测转基因大豆：[目的]定性检测转基因大豆。
[方法]以非转基因大豆和CP4-EPSPS 转基因大豆为材料,以大豆内源基因Lectin和外源基因5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(CP4-EPSPS)为检测的目的片段,建立PCR反应体系。
采用改进CTAB法提取大豆基因组DNA, 并对所提DNA进行PCR扩增和电泳检测,确定转基因大豆的PCR检测限。
实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立：采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R 的定量PCR检测方法。
该方法的检测灵敏度 <0 0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10 0倍用巢式和半巢式PCR检测转基因大豆Roundup Ready及其深加工食品：用从转基因大豆(Glycinemax )颗粒中提取的DNA作为模板,经过稀释,形成不同浓度梯度的DNA溶液,然后用巢式和半巢式PCR进行扩增反应。
结果表明,巢式和半巢式PCR均可以扩增DNA浓度为10-14g/μL的溶液。
用巢式和半巢式PCR对市场的食品原料和深加工食品进行检测,可以从大豆油、酱油、面酱、大豆磷脂、豆腐、豆浆等食品原料和深加工食品的17个品牌的食品中检测出大豆内标基因(housekeepinggene)。
ELISA方法定量检测转基因大豆及其产品的研究：以美国、阿根廷、巴西转基因大豆等为材料,建立了ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4 EP- SPS蛋白的方法,成功检测出美国转基因大豆含量为3.768%、阿根廷转基因大豆含量为2.820%、巴西转基因大含量为1.920%,转基因豆粉、转基因豆粕和中国大豆未检测到CP4 EPSPS蛋白。
此方法具有简便、快速、稳定等优点,其检测灵敏度可达到0.0075%,并且稳定性良好,为抗草甘膦转基因大豆中CP4 EPSPS蛋白的定量检测提供了有效的手段。
转基因大豆检测技术研究进展
转基因大豆检测技术研究进展[摘要]大豆的转基因研究是国内外植物分子生物学研究的热点之一。
转基因大豆已成为世界大豆主产国大豆产业发展的主要动力。
由于转基因产品的安全性在世界范围内引起广泛关注，对转基因检测技术的要求也越来越高，因此,对转基因大豆检测技术的研究成为近年来研究的热点。
重点介绍以蛋白质和核酸为目标的检测技术，如EI。
ISA、PCR和基因芯片技术的最新进展，并对不同方法的优缺点进行比较，为转基因大豆快速检测方法的选择、改进和后续研究提供参考。
[关键词]转基因大豆；检测技术；蛋白质；核酸Abstract：Soybean transformation research is a/hot spot0in the area of plant molecular genetics. Transgenic soybean has become the important power of soybeans industry development in the worlds' major producers of soybean. The different points on potential ecological risks and the impact of transgenic products on human health attracted worldwide attention． With the increase of transgenic products， the transgenic detection technology requirements should be established and perfected． The advance in detection techniques of transgenic soybean were summarized focusing on the protein and nucleic acid for target detection technology，such as new research on ELISA，PCR and gene chip techn0109y，and their characteristic were compared to provide references for transgenic soybean fast detection selection，improvement and subsequent research．Key words：transgenosis soybean；detection technology；protein；nucleic acid.转基因大豆，是指利用转基因技术，通过基因工程方法导入外源基因所培育的具有特定性状的大豆品种。
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食品中转基因成分检测第12章ELISA方法定量检测抗农达® (RoundupReady®) 转基因大豆F．Eyquem食品中转基因成分检测 第12章2ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 目 录第12章ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆引言 3酶联免疫吸附分析 (ELISA) 技术 7 实验部分 10参考文献 20食品中转基因成分检测 第12章3ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 引言本章介绍一种用免疫学技术检测转基因植物的方法，这种方法是基于对转化事件中转入基因产生的新蛋白的检测。
但是，值得注意的是，基因修饰并不总是直接特异地对应于产生新蛋白，蛋白表达量水平也并不总是足够用于检测的目的。
另外，某些蛋白可能仅在植物的特定部位表达 (如：组织特异性启动子)，或者在不同部位或不同生理时期其表达量水平也不一样。
有报道称植物中转基因产物表达量水平占总可溶性蛋白的0~2%，甚至在一些强启动子植物中也是如此 (Longstaff ，1995)。
然而，在许多情况下，文献资料报道的转入基因蛋白表达量水平 (如：批准的GM 作物) 一般低于2%的表达上限 (henner ，1997)。
免疫学分析是一种用抗体作为检测试剂的分析测定系统。
抗体是一种从动物血清中分离得到的特异性蛋白，它可特异性地结合于诱导它们产物的底物，即抗原。
抗体的制备是通过将待检测的底物 (如：CP4 EPSPS ，是一种产生农达除草剂抗性的蛋白) 注射到动物如兔子或者老鼠体内，然后动物体内的细胞会将此底物识别为外来物质并产生抗体与之对抗。
抗体经过纯化，并用可检测的标记与之连接，然后可作为检测目标底物的试剂。
免疫学检测方法发展和应用的先决条件是：得到可直接和待检测新蛋白作用的高特异性抗体。
另外，目标样品或蛋白不能有明显的降解。
在对复杂基质中的抗原进行定量的检测中，抗体是一个很有用的生物学工具。
所有的免疫学分析都是基于抗原和抗体之间的特异性结合。
抗体-抗原相互作用当免疫学家将抗体的本质确定为蛋白质时，对于抗体的大多数描述都包括：这些分子具有将抗原从溶液中沉淀出来的能力，尽管现在抗体沉淀性质已经很少用于实验性分离和检测抗原，除了在一些自身免疫疾病中抗体也很少在体内沉淀抗原。
抗体沉淀反应的作用，如图1所示，地说明了抗体分子基本和普遍的特性。
这个实验同时说明了其他的一些问题：·血清抗体 (IgG) 在与抗原反应时是二价的，它与抗原可以发生交联 (cross-link)； ·抗原与抗体反应时一般是多价的；食品中转基因成分检测 第12章4ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 ·血清抗体在自然情况下都以多克隆形式存在；·抗体可以高度特异性地识别抗原分子的结构。
图1. 单抗原及其抗体系统的沉淀曲线以抗体沉淀量和逐渐增加的抗原浓度 (抗体总量恒定) 作沉淀曲线，可分为3个区域 (图1) ：“抗体过量区”，在这个区域，抗体沉淀被抑制，可在上清液中检测到过量的抗体。
“等价区”，在这个区域，沉淀量达到最大，抗原抗体形成大的不溶性抗原抗体复合物 (蓝色显示)，上清液中检测不到抗原和抗体的存在。
抗原抗体沉淀反应能很好地描述多克隆抗体和多价抗原之间的相互作用，但一般地，它不适合于描述抗原和单克隆抗体之间的相互作用，除非抗原表现出多种一致的抗原决定簇 (如，在多糖中发现的重复碳架结构)，只有在这时，特异性的单克隆抗体才能交联并沉淀抗原。
尽管如此，单克隆抗体有更简练的方法来描述其生物学特征，这些方法提供了关于抗体抗原相互作用的一些详细信息，如平衡常数和动力学开关速率。
抗体能非常有效的用来检测和分离抗原。
化学修饰可以改变抗体的结构但是不破坏它们与抗原结合的能力，使得抗体的相对稳定性增强，从而使抗体的应用也大大加强。
抗体食品中转基因成分检测 第12章5ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 可以通过化学方法，用荧光、磁性、放射性或其它化合物进行标记，使其在不同的实验条件下实现对抗原的检测和分离。
如何制备单克隆抗体抗原对于人体来说是外源物质，如致病性细菌和病毒，以及其它侵染性物质，它们可被人体的免疫系统作为入侵者而被识别。
抗体是我们体内抵御这些侵染性物质的天然防线，可以识别抗原并有助于破坏抗原蛋白。
抗体非常有用的两个性质是，首先，它们是高度特异的；即每个抗体只能特异地结合和攻击一个特定的抗原。
其次，有些抗体一旦被一种疾病激活，它将持续对这种疾病产生抗性。
利用抗体的第二个特点就可以发展疫苗。
疫苗是一种弱化或者灭活的细菌或病毒，当它们被接种到人体中时，可以激活人体产生抗体抵御它所携带的抗原。
抗体的特异性使单克隆抗体技术变得价值非凡。
抗体不仅仅可以用于医疗，抵御疾病；它们也可以帮助诊断一系列的疾病，检测药物、病毒和细菌产物、以及血液中其它不常见或不正常的物质。
由于这种抗病物质 (即抗体) 的多样化使用，抗体的纯化质量一直以来都是科学研究所关注的焦点。
抗体制备传统的方法是向实验动物注射抗原，等抗体形成后，从动物的血清中回收抗体 (含有血清的抗体称为抗血清)。
这种制备方法存在两个问题：它产生的抗血清中包含有其它一些不需要的物质，而且这种方法所产生的抗体的量是非常少的。
通过使用一种能在自然条件下产生抗体的细胞，和一类在培养条件下可以持续生长的细胞，单克隆抗体技术可以产生大量的高纯度的抗体。
如果我们能将这种“不死”的特性，和这种可以产生我们需要的抗体物质的特性结合起来，实际上，我们就得到了一个连续工作的生产抗体的工厂。
在单克隆抗体技术中，有连续繁殖能力的肿瘤细胞，和产生抗体的哺乳动物细胞融合。
这种融合细胞称为“杂交瘤细胞”，它可持续产生抗体。
因为它们都是来源于同一类型的细胞-杂交瘤细胞，这些抗体就被称为单克隆抗体；另一方面，由传统方法产生的抗食品中转基因成分检测 第12章6ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 体是来源于多种类型的细胞，因此它们称为多克隆抗体。
下边介绍一个单克隆抗体制备的例子。
单克隆抗体的制备骨髓瘤细胞是一种骨髓中的肿瘤细胞，它可以在细胞培养中不停的生长。
当骨髓瘤细胞和产生抗体的哺乳动物脾细胞融合，其结果产生杂交的细胞，称为杂交瘤细胞，它可以产生大量的单克隆抗体。
这种细胞融合的产物集合了两个不同类型细胞的特性：持续生长的能力和产生大量高纯度抗体的能力。
因为选择性的杂交细胞只产生一种特异性抗体，其纯度比传统方法产生的多克隆抗体高很多。
在对抗疾病方面，它们与传统的药物相比具有更高效的潜力，因为药物不仅攻击外来物质，同时也会攻击人体自身的细胞，有时也产生一些不期望的副作用如过敏反应。
单克隆抗体仅仅攻击目标分子，它不会产生副作用，或使副作用大大减少。
食品中转基因成分检测 第12章7ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 酶联免疫吸附分析 (ELISA) 技术定义酶联免疫吸附分析 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA) 是指：应用一个酶标记的免疫反应物 (抗原或抗体) 和一个免疫吸附剂 (结合在固体支持物上抗原或抗体) 的酶免疫分析，通过不同的方法 (如：在标记的反应物和未标记的未知样品之间的竞争结合)，可用于测定未知样品的浓度。
ELISA (Clark and Adams ，1977) 依赖于抗原抗体之间的特异性反应。
ELISA 中的关键试剂是抗体，它是免疫系统应答于外来物质 (抗原) 侵染而产生的一种可溶性蛋白。
对于转基因的检测，抗原则是新产生的蛋白。
在转基因植物中，插入的基因会产生新蛋白。
可以用ELISA 的方法来评估此蛋白在转基因植物中表达量的水平。
关于特异性抗体的生产和应用的信息，在许多报道转基因植物发展的文章中可以找到 (Mohapatra et al.，1999)。
至今，商业化的能够直接应用于批准的转基因作物插入基因蛋白产物的特异性抗体还很少：有一些抗体是针对于nptII 基因产物NPTII 或APH (3') II ，和针对gus 基因的产物。
下图是进行ELISA 检测的3种不同方法：食品中转基因成分检测 第12章8ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 基于ELISA 的抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆特异性检测的方法由Lipp 等 (2000) 建立、测试和验证。
此方法的建立是基于CP4-EPSPS (5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶，此酶来源于Agrobacterium sp .strain CP4) (Padgette et al.,1995) 蛋白特异性抗体的使用。
CP4-EPSPS 蛋白赋予Roundup Ready®大豆抗农达®除草剂的特性。
初步结果表明，此方法 (操作中使用商业化的ELISA 试剂盒) 可以检测大豆原料中的转基因成分含量范围在0.3%到5%之间。
原理下图表示的是用于检测CP4-EPSPS 蛋白的三明治式ELISA 示意图：微量滴定板的表面包裹着特异性单克隆捕获抗体。
当加入含有待检测蛋白的样品时，捕获抗体与抗原结合。
样品中没有结合的成分可被洗脱除去。
食品中转基因成分检测 第12章9ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 洗脱之后，加入一种与辣根过氧化物酶 (HRP) 共价偶联的多克隆抗体，该抗体可与CP4 EPSPS 蛋白的另一个抗原位点特异结合洗脱后，加入辣根过氧化物酶的显色底物四甲基联苯胺 (TMB)。
辣根过氧化物酶可催化底物产生颜色反应，颜色信号与抗原浓度在线性范围内呈一定的比例。
显色一定时间后，加入终止液终止反应。
在450 nm 波长处测量每一孔的光密度。
食品中转基因成分检测 第12章 10ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 试验部分(转基因食品成分检测，大豆试剂盒使用说明 (1999)。
Srategic Diagnostics, Inc., Rev. 052099, Vers.1.8.) 1引言下面的程序详细描述了基于ELISA 法检测农产品原材料及其加工产品中抗农达®大豆表达的CP4 EPSPS 蛋白，如大豆粉和大豆蛋白分离物。