不同菌种_菌株发酵虫草菌丝体的化学成分比较

3 通讯作者简介 :李医明 ( 19662) ,男 (汉族 ) ,江苏盱眙人 ,现任上海中医 药大学教授 ,博士学位 ,主要从事中药化学研究工作.
站 , G1316A 柱温箱 、G1322A在线脱气机 、G1311A 四元泵 ) ,紫外 检测器 ( G1314B ) ; Pharmacia C - 18 (4. 6 mm ×250 mm , 5μm ) 色谱柱 。751分光光度计 ,上海分析仪器厂生产 。 1. 2 试剂 腺苷 (上海生工生物工程公司 ) 、葡萄糖 (国药集团 化学试剂厂 ) ,其他试剂均为色谱纯或分析纯 。虫草菌丝体样 品 : 分别购自浙江和江西的液体发酵蝙蝠蛾拟青霉菌 ( Paecilo2 m yces hepia li)菌丝体样品 3个 ,命名为 PH - 1、PH - 2和 PH - 3。
溶解 ,作为供试品溶液 。 2. 1. 3 色谱条件 Pharmacia C - l8 ( 4. 6 mm ×250 mm , 5 μm )
为固定相 ,磷酸盐缓冲液 0. 01 mol·m l- 1 (pH 6. 5) - 甲醇 ( 17∶
3)为流动相 ,流速 1. 0 m l·m in - 1 ,检测波长为 280 nm。
( 1. S hangha i U n iversity of T rad itiona l Ch inese M ed icine, S hangha i 201203, Ch ina; 2. S hangha i M odern TCM Techn ica l D eveloping Com pany, S hangha i 200051, Ch ina) A bstra ct:O bjective To investigate the chem ical difference of commercial fermentation mycelium from different strains. M eth2
sinensis)菌丝体样品 3个 ,命名为 HS - 1、HS - 2和 HS - 3。
2. 3. 1 供试品溶液的制备 取样品粗粉 0. 5 g,加水 40 m l,摇
2 方法与结果
匀 ,加热回流 30 m in,滤过 ,滤液加水定溶至 50,作为供试品溶
2. 1 腺苷的含量测定 [5 ]
液。
生在蝙蝠蛾科昆虫虫草蝙蝠蛾幼虫上的子座及幼虫尸体的复合 sis Chen (1984) ,菌株 5 Ceph losporium sinensis Chen ( 1985) ,菌株
体 [1 ] ,其性平 ,味甘 , 入肺 、肾经 , 具有益精髓 、补虚损 、保肺 、益 6 Ceph losporium dongchongx iacao Chen ( 1985 ) , 菌 株 7 S cy ta lium
2. 1. 2 供试品溶液的制备 取样品粗粉 1 g,加 90% 甲醇 40 m l, 5～20 m in, 35 ～60%乙腈 ; 20 ～25 m in, 60 ～90%乙腈 ) , 流速
加热回流 30 m in,过滤 ,滤液浓缩至干 ,残渣以 90% 甲醇 1 m l使 1. 0 m l·m in - 1 ,检测波长为 230 nm。结果见图 1～2。
2. 1. 4 标准曲线制定 精密称取适量腺苷标准品 50 mg,置 25
m l容量瓶中 ,加流动相溶解并稀释至刻度 ,摇匀 。精密量取 0. 1,
1. 0, 2. 0, 4. 0, 6. 0, 8. 0 m l置 25 m l量瓶中 ,加流动相稀释至刻度 , 摇匀 , 进样 20μl,测得峰面积 ,以腺苷浓度为横标 ,腺苷峰面积
液体发酵虫草菌丝体的工艺目前已成熟 ,国内有多个厂家从
慢性肾功能不全 、慢性肾炎 、慢性乙肝等 )等冬虫夏草制剂用于 事虫草菌丝体的生产 。由于从冬虫夏草中获得的菌种来源不同 ,
临床 [ 3, 4 ] 。
命名又较为混乱 ,加上菌株在发酵过程中存在变异 ,为考察不同
人工发酵虫草菌丝体主要来源于天然冬虫夏草中提取分离 厂家生产的虫草菌丝体化学成分的一致性 , 本文对应用蝙蝠蛾
2. 1. 1 对照品溶液的制备 取腺苷对照品适量 ,用 90% 甲醇配 2. 3. 2 色谱条件 Pharmacia C - 8 (4. 6 mm ×150 mm , 5μm )为
成 1 mg·m l- 1的对照品溶液 。
固定相 , 流动相为乙腈 - 水梯度洗脱 ( 0～5 m in, 5～35%乙腈 ;
摘要 :目的 考察不同厂家生产的虫草菌丝体化学成分的一致性 。方法 对应用蝙蝠蛾拟青霉菌和中华被毛孢菌发酵的
不同厂家的 6个产品的腺苷和多糖的含量 ,水提取液的 HPLC指纹图谱进行了考察 。结果 不同菌株发酵的虫草菌丝体 中腺苷和粗多糖的含量存在差异 ,但蝙蝠蛾拟青霉菌和中华被毛孢菌两种菌种之间发酵产物腺苷和粗多糖的含量未见 明显差异 ; 不同菌株的蝙蝠蛾拟青霉菌发酵产物非常相似 ,不同菌株的中华被毛孢菌发酵产物也很相似 ,但蝙蝠蛾拟青 霉菌和中华被毛孢菌两种菌种之间发酵产物明显不同 。结论 结果揭示可以用 HPLC指纹图谱的方法对市场中的虫草菌 丝体进行鉴定 ,明确其是否为国家批准使用的蝙蝠蛾拟青霉菌或中华被毛孢菌发酵获得 。
肾 、止血 、化痰等功效 ,主要用于虚劳咳嗽 、咯血盗汗 、阳痿遗精 、 sp. (1985) ,菌株 8 S cytalidium heliali L i (1988) ,菌株 9 Tolypocla2
腰膝酸软等症 。现代药理证明冬虫夏草具有扩张支气管 、控制心 dium sinensis L i (1988) ,菌株 10H irsu tella sinensis L iu, Guo, Yu &
1. 1 仪器 Aglient 1100 型高效液相色谱仪 ( ChemStation 工作
收稿日期 : 2009209209; 修订日期 : 2009212210 基金项目 :上海市中药现代化基金 (No. 08DZ1972102) ;
上海市教委“东方学者 ”计划 (No. 2008) 作者简介 :吴迎春 (19822) ,男 (汉族 ) ,江苏盐城人 ,现任上海中医药大学 助教 ,硕士学位 ,主要从事中药化学研究工作.
率 、镇静催眠 、雄激素样等作用 ,还具有抗癌活性和抑制病菌 、提 Zeng (1989) ,菌株 11 H irsutella hepia li Chen & Shen (1989) ,菌株
高机体免疫功能等作用 ,是我国传统滋补强壮的名贵中药 [2 ] ,在 12 S ynnem a tium sinensis Yin & Shen (1990) ,菌株 13 Ch rysosporium
关键词 :冬虫夏草 ; 蝙蝠蛾拟青霉菌 ; 中华被毛孢菌 ; 高效液相色谱指纹图谱 中图分类号 : R284. 2 文献标识码 : A 文章编号 : 100820805 (2010) 0521060202
Chem ica l Ana lysis of the Comm erc ia l L iqu id Ferm en ta tion Products from D ifferen t Cordyceps Spec ies and Stra in s WU Ying2chun1 , WU X i2m in1 , PAN Yi2feng2 , L I Yi2m ing13
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L ISH IZHEN MED IC INE AND MATER IA MED I. 5
时珍国医国药 2010年第 21卷第 5期
分别购自浙江 、江苏 、山东的液体发酵中华被毛孢菌 ( H irsu tella 2. 3 HPLC指纹图谱比较
中成药和保健品中大量使用 。随着天然虫草在市场上应用的日 sinensis L iang (1990) 。其中有些菌种经后期的重新鉴定 ,其实为
益广泛和无序的疯狂采挖 ,天然虫草的资源正迅速枯竭 。
同一菌种 ,如菌株 10, 11, 12均为菌种 H irsutella sinensis。目前国
我国在 20世纪 80年代初已经开始了人工培养冬虫夏草菌 家批准应用蝙蝠蛾拟青霉菌 ( Paecilom yces hepiali)和中华被毛孢
ods Adenosine, polysaccharide contents and HPLC fingerp rints in 6 samp les of fermentation mycelium from different strains of species Paecilomyces hep iali and H irsutella sinensis were analyzed. Results The result showed that although there was a little difference of adenosine and polysaccharide contents among different fermentation p roducts, the adenosine and polysaccharide con2 tents were not caused by the species difference. The HPLC fingerp rints of different commercial fermentations from the same strain were almost the same. There was, however, obvious difference between the commercial fermentations and the different species. Conclusion It is convenient to identify a commercial p roducts obstained from Paecilom yces hepia lid or H irsu tella sinensis w ith HPLC fingerp rints.