色谱法分离原理教案
色谱法的分离原理
色谱法的分离原理色谱法是一种用于分离混合物中成分的分析技术。
它基于不同成分在固定相和流动相之间的不同相互作用力而实现分离。
色谱法可以分为两大类：一类是液相色谱法（Liquid Chromatography, LC），另一类是气相色谱法（Gas Chromatography, GC）。
下面将分别从液相色谱法和气相色谱法的分离原理进行介绍。
液相色谱法分离原理：液相色谱法是基于样品与液相载体在固定相表面上的相互作用力而进行分离的。
液相色谱法涉及两种基本类型的分离机制：吸附色谱和分配色谱。
1.吸附色谱：吸附色谱利用物质在固定相表面吸附的差异实现分离。
固定相通常是多孔吸附剂，具有大量活性表面。
当样品溶液通过固定相时，各组分与固定相之间的相互作用力不同，导致各组分在固定相上的吸附速率不同。
吸附速率较快的组分会滞留更少的时间在固定相上，因此会更早地被洗出。
吸附色谱广泛应用于分离极性化合物。
2.分配色谱：分配色谱基于样品组分在两种不相溶的液体流动相之间的分配差异实现分离。
固定相是一种多孔材料，比如固定相经过表面改性的多孔硅胶柱。
当样品溶液通过柱子时，样品中的各组分会被分配到液相和固定相之间，各组分在两相中的分配系数不同，导致各组分的迁移速率差异。
分配色谱广泛应用于分离中性有机化合物。
气相色谱法分离原理：气相色谱法是一种基于样品在气相载体中迁移速率的不同实现分离的方法。
它是通过将样品蒸发成气体并通过固定相柱进行分离的。
气相色谱法涉及两种基本类型的分离机制：分布系数和不饱和反应。
1.分布系数：在气相色谱法中，物质在流动相（气态）和固定相（涂覆在柱子上的材料）之间的分布行为是分离的基础。
各组分的分布系数不同，导致了在固定相中的不同保留时间和分离。
2.不饱和反应：气相色谱法中还存在不饱和反应的分离机制。
不饱和反应是指样品组分与固定相表面之间发生的特定化学反应。
这种化学反应会影响组分的迁移速率，从而实现分离。
需要注意的是，色谱法的具体分离原理和分离机制会受到多种因素的影响，包括载体的特性、流动相和固定相的选择、操作条件等。
柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝
柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝实验目的1. 了解柱色谱的分离原理及应用。
2. 掌握柱色谱法的实验操作技术。
实验原理甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂，它们的结构式如下:甲基橙亚甲基蓝由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同。
极性小，吸附能力弱，解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来;而极性大，吸附能力强，解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。
本实验以中性氧化铝作为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
主要装置装柱装样品亚甲基蓝先被洗脱甲基橙后被洗脱实验步骤1. 取口径10mm，长200mm洁净干燥的层析柱一支，在活塞处涂上一层薄薄的凡士林，向一个方向旋转至透明，竖直安装在铁架台上。
关闭活塞，向柱中倒入95%乙醇至柱高4/5处，通过一个干燥的玻璃漏斗慢慢地加入10g中性氧化铝，待氧化铝粉末在柱内有一定沉积高度时，打开柱下活塞，调节流速约1滴/秒，并用木棒轻轻敲打柱身下部，使氧化铝装填紧密。
装满100mm高度后在上面加一层石英砂(约5mm)。
在此过程中应始终保持吸附剂沉积面上有一段液柱。
2. 打开柱下活塞放出柱中乙醇，待液面降至刚好与石英砂平面相切时，立即关闭活塞，向柱内滴加10滴甲基橙和亚甲基蓝的混合物。
打开活塞，待液面降至刚好与石英砂平面相切时，用少量95%乙醇沿加样处冲洗柱内壁。
再打开活塞将液面降至与石英砂平面相切。
依上法重复操作直至柱壁和顶部的淋洗剂均无颜色。
3. 用95%乙醇作为洗脱剂，打开柱下活塞，控制流出速度为1滴/秒。
观察柱中色带下行情况。
随着色带向下行进逐渐分为两个色带，下方的为蓝色，上方为黄色。
当蓝色带(亚甲基蓝)到达柱底时更换接收瓶接收(在此之前接收的无色淋洗剂可重复使用)。
当蓝色带接收完后更换接收瓶接收空白带，并改用蒸馏水继续洗脱甲基橙。
当空白带接完后再换接收瓶接收黄色带(甲基橙)。
仪器分析第十一章色谱法分离原理
• ⑨保留值与分配系数K之间的关系 • 当某一组分的色谱峰最高点出现时，说明 该组分恰好有一半的量洗脱在保留体积的 流动相中，刚好流出色谱柱，其余一半则 仍留在柱内。 • 根据物料等衡原理得： • VRcm=Vmcm+Vscs • VR=Vm+(cs/cm)Vs VR=Vm+KVs • 又VM≈Vm ∴ VR=VM+KVs
• • • •
A—涡流扩散项 B—分子扩散项系数 C—传质阻力项系数 ū—流动相的平均线流速．即单位时间内流 动相在色谱柱中流动的距离．cm/s • 由上式，要降低H的数值，提高柱效，需降 低式中各项系数值。
• 1.涡流扩散项A • 在填充色谱柱中，流动相（载有组分分子） 通过填充物的不规则空隙及填充物颗粒时， 不断改变流动方向，形成紊乱的类似“涡 流”的流动。由于填充物颗粒大小的不同， 以及填充的不均匀性，使组分分子通过填 充柱时，有许多长短不等的路径。因此， 同一组分的不同分子，到达柱尾出口处的 时间有先有后，形成了一个统计分布，色 谱峰变宽。如图所示
K=cs/cm
当K与浓度无关 时，分配等温 线是线性的。 K为常数时所进 行的色谱过程 为线性色谱。
分布等温线方程参见 教材479-481页
典型的分配等温线
• 二、色谱图及相关术语 • 1.色谱图
色谱流出曲线
• 2.相关术语 • (1)基线：色谱柱中仅有流动相通过时，检 测器响应信号的记录值。稳定的基线应是 一条水平直线。 • (2)峰高：色谱峰顶点与基线之间的垂直距 离，以h表示。 • (3)保留值 • ①死时间tM：不被固定相吸附或溶解的物 质进入色谱柱时，从进样到色谱图上出现 峰极大值所需的时间。
• A=2dp • —填充不规则因子（包括固定相颗粒大小、 几何形状及装填紧密程度）。 • dp—填充物颗粒的平均直径。 • 注：A与流动相的性质、线速度和组分性质 无关。
07第七章色谱法分离原理
<一> 分离度Rs： 定义：相邻两组分色谱峰保留值之差与该两
组分色谱峰基线宽度平均值之比。
定义式： RS1 2 tRY 22tY R1 1 2tY R2 2 Y t1 R1
RS
2t'R2 t'R1 Y2 Y1
① 当Rs＜1时，两色谱峰总是有部分重叠；
保留体积VR：在保留时间内通过色谱柱的流动相 体积。即将组分从柱中带出所需的 流动相体积。 VR=tR×F0
调整保留体积 V R'： 某组分的保留体积扣除死体 积后的剩余体积，称为该组
分的调整保留体积。
=VVRR' -VM
相对保留值 r21： 某组分2与组分1的调整保
留值之比。
r21
t'R t'R
③ 在溶质浓度低时，Cs 基本上正比于Cm，曲 线近似直线。
2.线性洗脱色谱： ●在色谱中，分配系数K为常数时所进行的色谱
过程，即称为 线性洗脱色谱。 结论：CS值大，则K值大，溶质进入固定相的
量就多。 推论：溶质流过色谱柱时，分配系数K值大的组
分通过色谱柱所需时间长，而K值小的组 分通过色谱柱所需时间短。当样品中各 组分在两相的分配系数K不同时，就能实 现差速迁移，达到分离的目的。
色谱柱分离理混论塔板数
合组分的能力
色谱柱的柱效随理论塔板数n的增加而增加， 随板高H的增大而减小。
3．塔板理论对色谱的解释：
第一，当溶质在柱中的平衡次数，即理论塔板数 n
第二大，即于当在5样0t时R品一，进定可入时得色，到谱若基柱色本后谱对，称只的要峰各形组曲分线在；两相 间峰的越分窄配，系则数n有值微越小大差，异，经过反复多次 的H分越配小平，衡柱后效，能仍越可高获。得良好的分离；
高中生物教材分离教案设计
高中生物教材分离教案设计一、实验目的：通过本实验，使学生了解各种生物分离技术的原理和应用，培养学生的实验操作能力和观察分析能力。
二、实验材料：1. 离心管2. 玻璃棒3. 手套4. 滤纸5. 手套6. 色谱纸7. 色素混合物三、实验步骤：1. 将色素混合物滴在色谱纸上，并用玻璃棒将其均匀涂抹。
2. 将色谱纸竖直放置在离心管中，加入适量溶剂。
3. 将离心管放置于离心机中进行离心分离。
4. 观察色素在色谱纸上的分离情况。
四、实验原理：色谱法是一种利用物质在固定相上的分布差异进行分离的方法。
在色谱分析中，固定相起到分离作用的是色谱柱上的填料；溶剂称为流动相，流动相指进入固定相中承载需要分离的成分的液体。
不同成分对流动相和固定相之间的相互作用不同，会在固定相中呈现不同的停留时间。
通过观察分离效果可以了解各种色素的相对流动速度，从而进行进一步的鉴别和分析。
五、实验注意事项：1. 操作时需戴手套，注意实验室安全。
2. 操作过程中要小心谨慎，避免溶剂的溅洒。
3. 实验结束后及时清理实验仪器和场地。
六、实验效果：通过本次实验，学生可以清楚地观察到不同色素在色谱纸上的分离情况，了解色谱法的原理和应用，培养学生的实验操作能力和观察分析能力。
七、拓展延伸：1. 可以尝试利用其他分离技术，如凝胶电泳、纸层析等方法进行分离实验。
2. 可以讨论不同分离技术的原理和应用领域，拓展学生的知识面。
通过本实验，学生将深入了解生物分离技术的原理和应用，培养实验操作能力和观察分析能力，为将来的生物学学习打下良好基础。
色谱法分离原理讲课文档
三 区域宽度
宽度越窄，其效率越高，分离的效果也越好。
区域宽度通常有三种表示方法：
标准偏差：峰高0.607 倍处峰宽处的一半。 半峰宽W1/2：峰高一半处的峰宽。 W1/2=2.354 峰底宽W：色谱峰两侧拐点上切线与基线的交点间 的距离。 W= 4
第12页，共79页。
四 色谱峰面积A
色谱峰与峰底基线所围成区域的面积叫峰面积。 对于对称的色谱峰
3.萃取法 是利用组分在水相和有机相（互不相溶）中 的分配素数不同进行而分离。
第2页，共79页。
一 色谱分析法简介
色谱法创始于20世纪初，1906年 俄国植物学家Tsweet将碳酸钙放在竖 立的玻璃管中，从顶端倒入植物色素 的石油醚浸取液，并用石油醚冲洗。
Michael Tswett(1872-1919),a Russian
第6页，共79页。
3.按色谱过程的分离机制分类 可分为分配色谱法(partition chromatography)、
吸附色谱法(adsorption chromatography)、离子交 换色谱法(ion exchange chromatography，IEC)、空 间排阻色谱法(steric exclusionchromatography， SEC)及亲合色谱法(affinity chromatography)等类 型。
第21页，共79页。
K与组分性质、固定相性质、流动相性质及 温度有关，与两相体积、柱管特性和所用仪器 无关。
实验条件固定时，K主要取决于固定相性质。 某组分的K = 0时，表明组分不被保留—即惰
性组分
第22页，共79页。
2. 分配比：
在一定温度和压力下，组份在两相间的分配 达平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比， 称为分配比。它反映了组分在柱中的迁移速率。 又称保留因子。也叫容量因子或容量比。
《色谱分离法》课件
按分离机制分类
吸附色谱法
利用固体吸附剂对不同组分的 吸附能力差异进行分离。
分配色谱法
利用固定相和流动相之间的分 配平衡实现分离。
离子交换色谱法
利用离子交换剂对不同离子的 亲和力差异进行分离。
空间排阻色谱法
利用凝胶的分子筛效应，根据 分子大小进行分离。
03 色谱分离法的操作流程
CHAPTER
样品前处理
度法、荧光光谱法等。
检测灵敏度设置
根据待分离物质的浓度设置合适 的检测灵敏度，以提高检测准确
性。
收集结果
根据检测结果将各组分分别收集 起来，并进行后续处理和利用。
04 色谱分离法的优缺点
CHAPTER
优点
分离效果好
色谱分离法可以将混合物中的各组分 进行高效分离，得到较为纯净的单一 组分。
适用范围广
在药物分离纯化中的应用
药物分离纯化是色谱分离法应用的重 要领域之一。通过色谱分离法，可以 将混合药物中的有效成分与杂质进行 分离，提高药物的纯度和药效。
在药物分离纯化中，色谱分离法可以 用于中药、西药、生物药物等的分离 纯化，如大黄素、紫杉醇、蛋白质等 物质的分离纯化。
在食品检测中的应用
01
色谱分离法在食品检测中也有广 泛应用，主要用于食品中农药残 留、添加剂、有害物质的检测。
1950年代
出现了气相色谱法，利用气体 作为流动相，广泛应用于气体
和挥发性化合物的分析。
1960年代
出现了高效液相色谱法，利用 高分离效能的色谱柱和高压泵 ，提高了分离速度和灵敏度。
色谱分离法的应用领域
医药工业
用于药物生产和质量控制，以 及生物样品的分离和纯化。
食品工业
色谱法分离原理
第十四章色谱法分离原理一．教学内容1.色谱分离的基本原理和基本概念2.色谱分离的理论基础3.色谱定性和定量分析的方法二．重点与难点1.塔板理论，包括流出曲线方程、理论塔板数(n)及有效理论塔板数(n e f f)和塔板高度(H)及有效塔板高度(H e f f)的计算2.速率理论方程3.分离度和基本分离方程三．教学要求1.熟练掌握色谱分离方法的原理2.掌握色谱流出曲线（色谱峰）所代表的各种技术参数的准确含义3.能够利用塔板理论和速率理论方程判断影响色谱分离各种实验因素4.学会各种定性和定量的分析方法四．学时安排4学时第一节概述色谱法早在1903年由俄国植物学家茨维特分离植物色素时采用。
他在研究植物叶的色素成分时，将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。
这种方法因此得名为色谱法。
以后此法逐渐应用于无色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义.但仍被人们沿用至今。
在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相；自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相；装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为色谱柱。
当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。
从不同角度，可将色谱法分类如下：1.按两相状态分类气体为流动相的色谱称为气相色谱（G C）根据固定相是固体吸附剂还是固定液（附着在惰性载体上的一薄层有机化合物液体），又可分为气固色谱（G S C）和气液色谱（GL C）。
液体为流动相的色谱称液相色谱（LC）同理液相色谱亦可分为液固色谱（L SC）和液液色谱（L LC）。
超临界流体为流动相的色谱为超临界流体色谱（SF C）。
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第十四章色谱法分离原理一．教学内容1.色谱分离的基本原理和基本概念2.色谱分离的理论基础3.色谱定性和定量分析的方法二．重点与难点1.塔板理论，包括流出曲线方程、理论塔板数(n)及有效理论塔板数(n e f f)和塔板高度(H)及有效塔板高度(H e f f)的计算2.速率理论方程3.分离度和基本分离方程三．教学要求1.熟练掌握色谱分离方法的原理2.掌握色谱流出曲线（色谱峰）所代表的各种技术参数的准确含义3.能够利用塔板理论和速率理论方程判断影响色谱分离各种实验因素4.学会各种定性和定量的分析方法四．学时安排4学时第一节概述色谱法早在1903年由俄国植物学家茨维特分离植物色素时采用。
他在研究植物叶的色素成分时，将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。
这种方法因此得名为色谱法。
以后此法逐渐应用于无色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义.但仍被人们沿用至今。
在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相；自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相；装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为色谱柱。
当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。
从不同角度，可将色谱法分类如下：1.按两相状态分类气体为流动相的色谱称为气相色谱（G C）根据固定相是固体吸附剂还是固定液（附着在惰性载体上的一薄层有机化合物液体），又可分为气固色谱（G S C）和气液色谱（GL C）。
液体为流动相的色谱称液相色谱（LC）同理液相色谱亦可分为液固色谱（L SC）和液液色谱（L LC）。
超临界流体为流动相的色谱为超临界流体色谱（SF C）。
随着色谱工作的发展，通过化学反应将固定液键合到载体表面，这种化学键合固定相的色谱又称化学键合相色谱（CB PC）.2.按分离机理分类利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法，称为吸附色谱法。
利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法称为分配色谱法。
利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的方法，称为离子交换色谱法。
利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方法，称为凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法。
最近，又有一种新分离技术，利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行分离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白质的分离。
3.按固定相的外型分类固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱。
固定相呈平板状的色谱，称为平板色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。
4.按照展开程序分类按照展开程序的不同，可将色谱法分为洗脱法、顶替法、和迎头法。
洗脱法也称冲洗法。
工作时，首先将样品加到色谱柱头上，然后用吸附或溶解能力比试样组分弱得多的气体或液体作冲洗剂。
由于各组分在固定相上的吸附或溶解能力不同.被冲洗剂带出的先后次序也不同，从而使组分彼此分离。
这种方法能使样品的各组分获得良好的分离，色谱峰清晰。
此外，除去冲洗剂后，可获得纯度较高的物质。
目前，这种方法是色谱法中最常用的一种方法。
顶替法是将样品加到色谱柱头后，在惰性流动相中加入对固定相的吸附或溶解能力比所有试样组分强的物质为顶替剂（或直接用顶替剂作流动相），通过色谱柱，将各组分按吸附或溶解能力的强弱顺序，依次顶替出固定相。
很明显，吸附或溶解能力最弱的组分最先流出，最强的最后流出。
此法适于制备纯物质或浓缩分离某一组分；其缺点是经一次使用后，柱子就被样品或顶替剂饱和，必须更换柱子或除去被柱子吸附的物质后，才能再使用。
迎头法是将试样混合物连续通过色谱柱，吸附或溶解能力最弱的组分首先一纯物质的状态流出，其次则以第一组分和吸附或溶解能力较弱的第二组分混合物，以此类推。
该法在分离多组分混合物时，除第一组分外，其余均非纯态，因此仅适用于从含有微量杂质的混合物中切割出一个高纯组分（组分A），而不适用于对混合物进行分离。
第二节色谱流出曲线及有关术语（一）色谱流出曲线和色谱峰由检测器输出的电信号强度对时间作图，所得曲线称为色谱流出曲线。
曲线上突起部分就是色谱峰。
如果进样量很小，浓度很低，在吸附等温线（气固吸附色谱）或分配等温线（气液分配色谱）的线性范围内，则色谱峰是对称的。
（二）基线在实验操作条件下，色谱柱后没有样品组分流出时的流出曲线称为基线，稳定的基线应该是一条水平直线。
（三）峰高色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以（h）表示。
基线（a）峰高（h）（四）保留值1.死时间t不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，它正比于色谱柱的空隙体积，因为这种物质不被固定相吸附或溶解，故其流动速度将与流的比动相流动速度相近。
测定流动相平均线速ū时，可用柱长L与t值计算，即ū= L/t2.保留时间tr试样从进样到柱后出现峰极大点时所经过的时间，称为保留时间3.调整保留时间tr´某组分的保留时间扣除死时间后，称为该组分的调整保留时间，即tr ´= tr-t由于组分在色谱柱中的保留时间tr包含了组分随流动相通过柱子所须的时间和组分在固定相中滞留所须的时间，所以tr实际上是组分在固定相中保留的总时间。
保留时间是色谱法定性的基本依据，但同一组分的保留时间常受到流动相流速的影响，因此色谱工作者有时用保留体积来表示保留值。
4.死体积V指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总和。
当后两相很小可忽略不计时，死体积可由死时间与色谱柱出口的载气流速Fc o （cm3·mi n-1）计算。
V0= tFc o式中Fc o为扣除饱和水蒸气压并经温度校正的流速。
仅适用于气相色谱，不适用于液相色谱。
5.保留体积Vr指从进样开始到被测组分在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相的体积。
保留时间与保留体积关系：Vr = trFc o6.调整保留体积Vr'某组分的保留体积扣除死体积后，称为该组分的调整保留体积。
V r'= Vr -V= tr'Fc o7.相对保留值r2,1某组分2的调整保留值与组分1的调整保留值之比，称为相对保留值。
r2,1= tr2'/ tr1´= Vr2'/ Vr1'由于相对保留值只与柱温及固定相性质有关，而与柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关，因此，它在色谱法中，特别是在气相色谱法中，广泛用作定性的依据。
在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标准（s），然后再求其它峰（i）对这个峰的相对保留值，此时可用符号α表示，即α=tr '(i) / tr'(s)式中tr'(i)为后出峰的调整保留时间，所以α总是大于1的。
相对保留值往往可作为衡量固定相选择性的指标，又称选择因子。
(五)区域宽度色谱峰的区域宽度是色谱流出曲线的重要参数之一，用于衡量柱效率及反映色谱操作条件的动力学因素。
表示色谱峰区域宽度通常有三种方法。
1.标准偏差σ即0.607倍峰高处色谱峰宽的一半。
2.半峰宽W1/2即峰高一半处对应的峰宽。
它与标准偏差的关系为W1/2=2.354σ3.峰底宽度W即色谱峰两侧拐点上的切线在基线上截距间的距离。
它与标准偏差σ的关系是W = 4 σ从色谱流出曲线中，可得许多重要信息：(i) 根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含组分的最少个数；(i i) 根据色谱峰的保留值，可以进行定性分析；(i ii) 根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析；(i v)色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据；(v) 色谱峰两峰间的距离，是评价固定相（或流动相）选择是否合适的依据。
色谱分析的目的是将样品中各组分彼此分离，组分要达到完全分离，两峰间的距离必须足够远，两峰间的距离是由组分在两相间的分配系数决定的，即与色谱过程的热力学性质有关。
第三节色谱法基本原理（一）分配系数K和分配比k1.分配系数K分配色谱的分离是基于样品组分在固定相和流动相之间反复多次的分配过程，而吸附色谱的分离是基于反复多次的吸附-脱附过程。
这种分离过程经常用样品分子在两相间的分配来描述，而描述这种分配的参数称为分配系数K。
它是指在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度之比值，即K=溶质在固定相中的浓度/溶质在流动相中的浓度=C s/ C m分配系数是由组分和固定相的热力学性质决定的，它是每一个溶质的特征值，它仅与两个变量有关：固定相和温度。
与两相体积、柱管的特性以及所使用的仪器无关。
2.分配比k分配比又称容量因子，它是指在一定温度和压力下，组分在两相间分配达平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比。
即k=组分在固定相中的质量/ 组分在流动相中的质量=m s/ m mk值越大，说明组分在固定相中的量越多，相当于柱的容量大，因此又称分配容量或容量因子。
它是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数。
k值也决定于组分及固定相热力学性质。
它不仅随柱温、柱压变化而变化，而且还与流动相及固定相的体积有关。
k= ms/m m=C s V S /C m V m式中cs ,cm分别为组分在固定相和流动相的浓度；Vm为柱中流动相的体积，近似等于死体积。
V s为柱中固定相的体积，在各种不同的类型的色谱中有不同的含义。
例如：在分配色谱中，Vs表示固定液的体积；在尺寸排阻色谱中，则表示固定相的孔体积。
分配比k 值可直接从色谱图中测得（推导过程教材P.296 ~297）。
k= (tr –t) / t= t'r/ t= V'r/V4.分配系数K与分配比k的关系K= k .β其中β称为相比率，它是反映各种色谱柱柱型特点的又一个参数。
例如，对填充柱，其β值一般为6~35；对毛细管柱，其β值为60~600。
4.分配系数K及分配比k与选择因子α的关系对A、B两组分的选择因子，用下式表示：α=t'r (B) / t'r(A) = k（A）/ k（B）=K（A）/K（B）通过选择因子α把实验测量值k与热力学性质的分配系数K直接联系起来，α对固定相的选择具有实际意义。
如果两组分的K或k 值相等，则α=1，两个组分的色谱峰必将重合，说明分不开。
两组分的K或k值相差越大，则分离得越好。
因此两组分具有不同的分配系数是色谱分离的先决条件。
图中KA >KB，因此，A组分在移动过程中滞后。
随着两组分在色谱柱中移动距离的增加，两峰间的距离逐渐变大，同时，每一组分的浓度轮廓（即区域宽度）也慢慢变宽。