高效液相色谱样品前处理
液相色谱前处理
液相色谱前处理液相色谱的样品前处理部分和液相色谱使用注意事项刘鹏 1233351 环境工程一、样品的前处理1.液体样品的前处理技术（1）液液萃取法：利用溶液中各组分在所选用的萃取剂中的溶解度差异，用液相萃取剂从溶液中提取出某种组分。
（2）顶空法（静态顶空，吹扫捕集法）：利用待测物的易挥发性，静态顶空法直接抽取样品顶空气体进行色谱分析，吹捕法利用载气尽量吹出样品中待测物后，用冷冻捕集或吸附剂捕集的方法来收集待测物。
（3）超临界流体萃取法：利用超临界流体密度高、黏度小、对压力变化敏感的特性，在超临界状态下萃取待测样品，通过减压、降温或吸附收集后分析。
（4）膜萃取：膜对待测物的吸附作用，先由高分子膜萃取样品中的待测物，再用气体或液体萃取高分子膜中的待测物。
（5）固相萃取：先用固相吸附剂吸附待测物，再用溶剂洗脱待测物。
（6）固相微萃取技术：利用待测物在样品及萃取涂层之间的分配平衡，将萃取纤维暴露在样品或其顶空真中萃取。
（7）液相微萃取法：包括大体积的水溶液及小体积的不溶于水的有机液液萃取，将疏水性的目标有机物转移到一滴有机溶剂中。
2.气体样品的前处理技术（1）样品衍生化：将样品制成衍生物，不仅可以提高从样品基体中萃取和预分离待测化合物的能力，而且可以通过降低样品的极性或改变样品组分的选择性来改善液相色谱分离，还可以改变样品中不同化合物的相对检测器响应，因而可在有谱带重叠的情况下，检测和定量待测组分中的某些组分。
分为紫外衍生化、荧光衍生化、电化学衍生化、柱后或柱前衍生化。
（2）固相萃取：先用固相吸附剂吸附待测物，再用溶剂洗脱待测物。
（3）膜萃取：膜对待测物的吸附作用，先由高分子膜萃取样品中的待测物，再用气体或液体萃取高分子膜中的待测物。
（4）液相微萃取法：包括大体积的水溶液及小体积的不溶于水的有机液液萃取，将疏水性的目标有机物转移到一滴有机溶剂中。
（5）液液萃取法：利用气体样品中各组分在所选用的萃取剂中的溶解度差异，用液相萃取剂从溶液中提取出某种组分。
反相高效液相色谱法的样品制备技巧
反相高效液相色谱法的样品制备技巧反相高效液相色谱法（RP-HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于化学、药学、环境科学等领域。
在进行RP-HPLC分析前，样品制备是一个关键的步骤，它直接影响到后续的分析结果。
本文将介绍一些反相高效液相色谱法的样品制备技巧，帮助读者提高分析的准确性和效率。
1. 样品的选择在进行RP-HPLC分析前，需根据目标化合物的性质选择合适的样品。
首先要考虑溶解性，通常选择合适的有机溶剂，如甲醇、乙醇或氯仿。
其次，还需考虑样品的纯度，如有需要，可通过预处理方法提高样品的纯度。
2. 样品的前处理在进行RP-HPLC分析前，有些样品需要进行前处理，以去除样品中的杂质和干扰物。
一种常见的前处理方法是固相萃取（SPE），它可以有效地去除有机样品中的杂质。
另外，还可以通过液液萃取、蒸馏、浓缩等方法进行前处理。
3. 样品的溶解样品的溶解是进行RP-HPLC分析的前提条件，因此需要选择合适的溶剂和溶解条件。
溶剂的选择应根据样品的性质和溶解度来确定，同时还需注意选择不会影响分析结果的溶剂。
溶解的温度和时间也需要控制好，通常在室温下充分溶解即可。
4. 样品的过滤样品中的杂质和颗粒物会对分析结果产生影响，因此需要对样品进行过滤。
常用的过滤方法包括滤纸、膜过滤和进样器过滤器等。
选择合适的过滤器材料和孔径，可以有效去除样品中的杂质。
5. 样品的稀释有时，样品的浓度过高会导致RP-HPLC分析结果不准确，因此需要对样品进行适当的稀释。
稀释的目的是使样品在浓度范围内，使目标化合物的峰色强度适中，避免超出检测范围或饱和。
6. 样品的进样在进行RP-HPLC分析时，样品的进样方式也很重要。
常见的进样方式包括定量进样和选择性进样。
定量进样是指按照一定的体积或质量加入样品，适用于测定目标化合物的含量。
选择性进样是指选择性地进样，可用于分析复杂体系中不同成分的含量。
7. 样品的保存对于未立即进行分析的样品，应选择合适的保存方式。
高效液相色谱仪流动相及样品的预处理
第２ ３期
Ｓ ＩＮ Ｅ＆Ｔ Ｃ Ｎ Ｌ ＧＹＩ Ｆ ＭＡ Ｉ ＣＥ Ｃ Ｅ Ｈ Ｏ Ｏ ＯＲ ＴＯＮ Ｎ
Ｏ环保论坛０
科技信息
高效液相色谱仪流动相及样品的预处理
武 开 业
（ 林市 环境监 测总 站 榆
陕西
榆林
７９０ ） １ ０ ０
【 摘 要】 液相 色谱法是一种快速有效 的有机化合物分析技术 ， 在分析测定有机化合物方 面， 以其快速 、 灵敏 、 选择性好的特点， 倍受分析 工 作者青睐， 是环境监测、 卫生防疫、 油化工、 石 食品生产等行业作为水质分析的标 准仪器。 是， 但 由于液相 色谱分析技 术涉及 的样品种类繁多、 样 品组 成 及其 浓度 复 杂 ， 品 物理 形 态 多 变 ， 液相 色谱 仪 的 正 常分 析 测 定 造 成 一 些干 扰 因素 ， 果 不 注 意 流动 相 及 样 品 的预 处理 ， 对 日常的 样 对 如 会
３ 固 相 萃取 Ｓ Ｅ 技 术 Ｐ
固相 萃 取 技 术 是 基 于 同 液 相 色 谱 同 样 技 术 开 发 的分 离 复 杂 样 品 高 效 液 相 色谱 法 是 在 经 典 色谱 法 的基 础 上 ． 引用 了气 相 色 谱 的理 ０ ８ ％的成 本 及 工 作 量 在 论 ， 技 术 上 ， 动相 改 为 高 压 输送 （ 高输 送 压 力 可 达 ４９１７ ａ； 在 流 最 ． ０Ｐ ） 色 中 的不 同组 份 的 一 种 方 法 ，一 般 实 验 室 中 ６ — ０ 若 降 谱 柱 是 以 特殊 的方 法 用 小粒 径 的填 料 填 充 而成 ． 而 使 柱 效 大 大 高 于 样 品制 备 上 ． 采 用 固相 萃 取 技 术 可 以 加 速 样 品 的 制备 时 间 ， 低 样 从 经典液相色谱 （ 每米塔板数可达几万或几 十万 ） 同时桂后连有高灵敏 品前 处 理 的 成本 ， 高 分析 的 准确 性 及 回收 率 ， 容 易 自动 化 ， 少样 ： 提 更 减 度的检测器， 可对 流 出物 进 行连 续 检 测 。 品处 理 步 骤 ． 低 对 不 稳定 样 品的 影 响 。 降 高 效 液相 色 谱 仪 主 要 由 色谱 泵 及 控 制 器 、 样 器 、 谱 柱 、 测 器 进 色 检 各 种 固相 萃 取 小柱 可 以分 为 以下 三 类 ：
高效液相色谱法的标准曲线法流程
高效液相色谱法的标准曲线法流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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高效液相色谱法检测酸牛乳中纳他霉素含量的几种前处理方法比较
纳他 霉 素 （ ｔｍ ｃ ），也 称 游 链 霉 素 ，是 一 Ｎａ ｙｉ ａ ｎ 种 天然 的多烯 大环 内酯 类抗 生 素 ，是 由纳塔 尔链 霉 菌 （ｔｐｏ ｙｅ ａａ ｎｉ 经 过 发 酵 得 到 的一 种 Ｓｒ ｔｍ ｃｓ ｔｅｓ ） ｅ Ｎ ｌ ｓ 次级 代谢 产 物 。他 微溶 于 水 、 甲醇 ，溶 于稀 酸 、冰 醋酸 及二 甲苯 甲酰胺 ，难溶 于 大部 分有 机溶 剂 ，在
了几种方法的回收率、检 出限及通过滤膜难 易程度。结果表 明：方法的回收率为 ６％ １３ ６ ０％，检 出限为
００ ． ２ ｍｇ／ｋ ｇ～０． ３ ｍｇ／ｋ 。 ０ ｇ
关键 词
纳他 霉素 ；前处理 方 法 ；比较
Ａ ｓ ａ ｔ Ｄ ｆ ｒｎｃｎ ｅｔ ｔ ｎ ｏｎ ｔ ｃ ｓ ｎ ａｄ （６ ｍｇ Ｌ ２ ｍｇＬ ．ｍ ／ ，６ ｍ ／ ，１．ｍ ／ ） ｂ ｔ ｃ ｉｅｅｔｏｃｎｒ ｉ ｓｆａ ｍｙｉ ｔ ｄｒｓ ０ ４ ／ ，１ ８ ／ ，３ ｇ Ｌ ． ｇＬ ２ ｇ Ｌ ｒ ａｏ ａ ｎａ ． ２ ４ ８
１９ 我 国卫生部 正式批 准纳他 霉 素作 为食 品 防腐 ９７年 剂 。至今 该产 品 已经在 ５ ０多个 国家得 到 广泛使 用 ，
ｐ Ｈ值 高于 ９ 或低 于 ３时 ，其 溶解 度会 有所提高 ， 主要应用于乳制品、肉制品、发酵酒 、饮料果汁 、 在大 多数食 品的 ｐ Ｈ范 围内非 常稳定 ，是 一种 天然 、 方便 食 品 、烘烤 食 品等 的生 产和保 藏 。 广谱 、高效安全 的酵母 菌及霉菌等丝状真菌抑制 纳他 霉 素 的测 定 方法 主要 有生 物 效价 法 、微 孔 剂。它不仅能够抑制真菌 ，还能防止真菌毒素的产 板生物检测法 、紫外分光光度计法 、元 素分析法 、 生 。纳 他 霉 素对 人 体 无 害 ，很 难 被 人 体 消 化 道 吸 比色分析 法 、薄层 色谱 法 和液 相 色谱 法等 。生 物 效
样品的前处理方法
三种不同型号的ASE
ASE100↑
ASE200 ↓
ASE300 ↑
ASE的突出优点
• 快速，15分钟 • 溶剂用量少 • 萃取效率高 • 样品基体影响小 • 可同时选用四种溶剂萃取 • 安全，全自动 • ASE建立了环境, 药物, 聚合物, 食品, 和化妆品
工业的大量应用
ASE工作流程
加样品
加溶剂
加热 加压
时间 (min) 0.5–1
5
溶剂
静态萃取 新溶剂冲洗
5 循环
0.5
氮气吹扫
1–2
萃取结束 准备分析
Total (min) 12–18
泵
吹扫阀
炉体
萃取池
静态阀
氮气瓶
收集瓶
食品安全评价中ASE的应用
• 水果和蔬菜中的农药 • 动物组织中的二噁英和多氯联苯 • 粮食中的农药 • 粮食中的毒枝菌素 • 熏肉中的多环芳烃 • 葡萄干中的杀真菌剂 • 咸肉中的硝酸盐/亚硝酸盐 • 一些正在发展的方法
研磨
• ⑤对具有坚韧细胞壁的微生物，常用自溶、冷热 交替、加砂研磨、超声波和加压处理等方法。
细胞破碎方法的分类
3.生物大分子的提取
• 提取生物大分子样品时条件的选择：
（1）溶剂
常用的溶剂有水、稀酸、稀碱、稀盐等，也 可以采用不同比例的有机溶剂，如：乙醇、丙 酮、氯仿、四氯化碳
选择溶剂时要注意物质的溶解性，如极性物 质易溶于极性溶剂；碱性物质易溶于酸性溶剂 ；温度升高时一般溶解度相应增大；远离等电 点时溶解度增大
–固相萃取样品小柱
样品预处理的过程
去除微粒
• 过滤 – 可重复使用过滤装置/过滤膜 • 有机(0.22μm)/无机(0. 22 μm) • 膜片可更换 – 一次性使用的膜 • 使用方便简单，交叉污染小 • 有更小内径，可用于微量样品的处理
高效液相色谱法标准操作规程
高效液相色谱法标准操作规程1. 目的建立高效液相色谱法标准操作规程，规范高效液相色谱法检验操作，保证检验操作规范化。
2. 范围适用于高效液相色谱法检验操作。
3. 术语或定义N/A4. 职责质量控制部对本规程的实施负责。
5. 程序5.1依据《中国药典》2020年四部及2019年版《中国药品检验标准操作规范》。
5.2 简述高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
5.3 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。
5.3.1色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等) 也有使用。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换色谱系统使用离子交换填充剂; 分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。
孔径在15nm(lnm=10A)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在3～10μm之间。
粒径更小(约2μm)的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm) 。
使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。
当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。
hplc提高分离度的方法
hplc提高分离度的方法高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析分离技术，可以用于分离和鉴定复杂的化合物混合物。
提高HPLC分离度可以提高分析的准确性和精确度。
以下是提高HPLC分离度的一些方法：1.优化流动相选择：流动相的组成对HPLC分离度有很大影响。
优化流动相组成可以提高分离度。
常见的流动相组成包括溶剂和缓冲液。
选择适当的溶剂对于溶解目标化合物是很重要的。
另外，选择合适的缓冲液可以提供目标化合物所需的pH值和离子强度，改善分离度。
2.改变柱温和流速：柱温和流速也会影响分离度。
提高柱温可以增加目标化合物的动力学，从而提高分离度。
然而，柱温过高可能导致一些化合物不稳定。
流速对于分离度也有影响。
流速过高可能导致分离度减小，因为化合物没有足够的时间在柱中相互分离。
因此，调整柱温和流速可以优化分离度。
3. 使用适当的柱：柱是HPLC系统中最重要的组成部分之一，对分离度有很大影响。
选择适当的柱可以改善分离度。
一般来说，柱的长度越长，分离度越高，但也会增加分析时间。
柱的粒径越小，分离度也越高。
常见的柱填料有C18、C8、Phenyl和CN等。
根据目标化合物的特性选择合适的柱填料可以提高分离度。
4.使用尽可能高的检测波长：选择适当的检测波长可以提高灵敏度和分离度。
不同的化合物在不同的波长下可能有不同的吸光度，因此选择合适的波长可以最大化化合物的吸光度，提高分离度。
5.优化样品前处理：样品前处理是HPLC分析的重要步骤之一，可以通过去除干扰物来提高分离度。
常见的样品前处理方法包括稀释、净化、提取和前衍生化等。
选择适当的样品前处理方法可以减小干扰物的影响，从而提高分离度。
6.使用梯度洗脱方法：梯度洗脱方法利用不同流动相的混合来实现目标化合物的分离。
通过优化梯度洗脱条件，可以提高分离度。
梯度洗脱方法通常会增加HPLC分析时间，但可以提高分离效果。
7.使用溶剂修饰剂：溶剂修饰剂是一种常用的提高分离度的方法。
添加少量的溶剂修饰剂可以改变流动相的性质，从而提高分离度。
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高效液相色谱样品前处理
1.高效液相色谱法分析样品为什么要进行样品前处理
(1)样品浓度调节：某些待测组分在样品中的浓度过低或过高，造成仪器检测困
难，因此需要提前对样品进行浓缩或稀释。
(2)避免污染，保护仪器：某些样品的酸碱度、离子强度等易造成系统污染和缩
短仪器使用寿命
(3)消除干扰：基体或共存物质的干扰
(4)介质置换：样品介质不适合后续的分离和检测，需要提前进行介质置换。
2.高效液相色谱法分析样品前处理的遵循原则
(1)去除基体杂质，消除干扰因素；
(2)完整保留待测组分，处理过程中尽可能避免待测组分发生化学反应或被污
染；
(3)方法简单易行、重现性好、成本低。
3.高效液相色谱法分析样品前处理技术
干扰物质，然后用洗脱液将待测组分
分离出来。
染分析
微波辅助萃取利用高频电磁波的作用，使样品中待
测组分从胞内释放出来，并在低温下
溶解于萃取溶剂中，过滤，达到分离
的目的。
天然药物、农药残留、有
机金属化合物等物质的提
取
超声波辅助萃取利用超声波的机械效应、空化作用以
及热效应等，破坏样品细胞组织，加
大细胞内的传质效率，从而促进待测
组分的释放和提取。
蛋白质、多糖、烟碱等物
质的提取
超临界流体萃取采用二氧化碳作为流体，在超临界条
件下，二氧化碳使样品的各组分依次
萃取出来，当恢复常温和常压时，溶
解在二氧化碳中的待测组分立即以液
体状态与气态流体分离。
多用于天然物质的提取
迪信泰检测平台以液相/气相为依托，采用HPLC/GC及LC-MS等检测平台，致力
于为各科研院所，高校，药企，生物工程类企业提供生物、食品、药物、环境等多领域的物质检测服务。