精子形态分析及染色
精子形态学染色液(巴氏法)
精子形态学染色液(巴氏法)简介：细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法，Papanicolaou Stain 最初仅用于检测阴道上皮雌激素水平以及生殖道念珠菌、滴虫等病原体。
橘黄G6与EA36或EA50联合使用，可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色。
目前大多数实验室采用成品染液，所以每种染液应注意其改良后的最佳条件。
最终胞浆染色应透明可见，核染色质应很容易辨别出来。
目前改良的巴氏染色液含有多种离子，具有多色性染色效能。
染色后胞质鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。
Leagene 精子形态学染色液(巴氏法) 因精子及细胞内不同等电点的蛋白质在相同的酸度下带不同的电荷，能选择性地结合相应的染料而着色。
胞核由酸性物质组成，它与碱性染料的亲和力较强；而胞浆则相反，它含有碱性物质和酸性染料的亲和力较大细胞质染色特别采用针对于精子染色的改良EA50染色液，细胞核染色采用Leagene 自主研发的无毒改良型苏木素染色液，特别适用于精子的染色，亦可用于胸水、腹水、痰液等细胞样本的染色。
组成：自备材料：1、 固定液(如95%乙醇-乙醚固定液)2、 系列乙醇3、 0.5%盐酸乙醇分化液操作步骤(仅供参考)：1、 细胞涂片用等量95%乙醇-冰乙酸固定液固。
2、 80%的乙醇浸泡1min 。
3、 70%的乙醇浸泡1min 。
4、 50%的乙醇浸泡1min 。
编号 名称DA0191 4×20ml DA0191 4×100ml Storage 试剂(A): Lea 苏木素染色液 20ml 100ml RT 避光 试剂(B): 蓝化液20ml 100ml RT 试剂(C): 橘黄G6染色液 20ml100ml RT 避光使用说明书1份5、 蒸馏水或自来水浸泡或冲洗。
6、Lea 苏木素染色液染色。
7、自来水冲洗。
8、盐酸乙醇分化液分化或盐酸水溶液分化。
9、自来水冲洗。
10、蓝化液中蓝化4min 。
精液检验
精液检验一、精液常规检验(一)肉眼观察1．英文或缩写：Visual Inspection of Sperm。
2．标本采集：留取一次射精的全部精液，立即送检。
3．正常参考值与临床意义：外观：正常标本质地均匀，呈灰白色。
如精子浓度太低，可显得清澈，有红细胞时呈棕色，若长时间未排精，则标本可呈淡黄色。
精液量：用刻度离心管检验精液全量。
正常参考值为2-6ml，<1.5ml 或>8.0ml 可认为异常。
前列腺和精囊腺的病变，特别是结核性病变可造成精液量减少，甚至无精液排出。
精液的变化：刚射出的精液呈稠厚胶冻状，5 分钟后逐渐液化，若室温下 60 分钟不液化视为异常。
粘稠度：将一根玻璃棒插入标本，然后观察提起玻棒时形成丝的长度，丝长度不应超过2cm。
若大于2cm，则为粘稠度增高。
酸碱度：将一滴精液均匀涂在精密 PH(5.5-9.0)试纸条上，与标准带比较。
读出 pH 值。
pH 值检验应在射精 1 小时内完成。
正常参考范围 7.2-8.0。
如 pH 小于 7.0少精症，可能是输精管、精囊腺或附睾发育不全。
4．注意事项：精液的采集是精液检验的一个主要步骤，必须为受检者说明如何收集和转送标本；标本采集最好在禁欲48 小时后，但不长于7天；须用手淫法采集精液，并射入一个洁净的广口容器内，容器须洁净，无毒性；标本采集后1小时内保温送检。
(二)显微镜检验1．英文或缩写：Microscope Examination of Sperm。
2．标本采集：留取一次射精的全部清液，立即送检。
3．正常参考值与临床意义：精子活力分级：精子活力即精子的运动能力，直接反映精子质量，可受时间、温度、精液的液化程度等影响。
WHO 把精子活力分四级，即：(1)快速前运动，活动良好。
(2)慢或呆滞的前向运动，活力一般。
(3)非前向运动，活力不良。
(4)不动。
精子活率：精子活率指精子总数中活精子所占比例。
取液化精液 1 滴，置于精子计数板平台上，盖上盖玻片，数 100 个精子活动精子的数目。
精子形态检验报告
精子形态检验报告1. 引言精子形态检验是男性生育力评估的重要指标之一，它描述了精子的外形和结构，对于评估男性生育能力和诊断不孕症起着至关重要的作用。
本文将对精子形态检验的方法、结果和临床意义进行详细介绍。
2. 检验方法精子形态检验通常采用经典的巴斯氏涂片染色法。
具体的操作步骤如下：1.取新鲜精液标本，约1-2毫升；2.将精液样本放置于离心管中，离心速度为3000转/分钟，离心时间约10分钟；3.倒掉上清液，留下沉淀；4.加入一定量的称量无毒巴斯氏染色溶液，用酸性醇溶液或碘胶清洗染色后，将沉淀再次离心；5.倒掉上清液，将染色后的精液沉淀挤入载玻片上，加入一滴背景液；6.覆盖玻片，使用显微镜进行观察；7.根据预定标准，对于所检测的100个精子，计算形态正常的精子比例。
3. 检验结果根据我们的检测结果，您的精子形态正常的比例为XX%，属于正常范围。
正常形态的精子应当具备头部和尾巴的完整结构，并且比例应在40%以上。
4. 临床意义精子形态异常可能意味着存在生殖系统疾病或其他不孕症原因。
常见的精子形态异常包括头部畸形、尾巴畸形、双头精子、无尾精子等。
精子形态异常对受精过程的影响多种多样，可能导致受精能力下降，从而影响夫妻受孕。
对于形态异常的发现，建议尽早咨询专业医师进行评估和治疗。
医生可能会根据具体情况建议辅助生殖技术，如体外受精或微孵化等，提高受孕成功率。
5. 注意事项•精子形态检验结果需要结合其他指标综合分析，不能单独作为判断不孕原因的唯一依据；•精子形态检验结果可能受多种因素影响，如抽烟、饮酒、药物使用等，请在检验前向医生咨询；•精子形态检验需要在专业的实验室进行，确保操作的准确性和结果的可靠性。
6. 结论精子形态检验是男性生育力评估的重要指标之一，正常形态比例对于受孕能力具有重要意义。
通过精子形态检验，可以提供辅助诊断和治疗不孕症的依据，判断男性生育能力，并为临床医生选择合适的治疗方法提供参考。
请用户一定要密切配合医生的建议，定期进行生育力的评估和检查，以提高受孕成功的机会。
精子的形态结构与化学组成课件(共18张PPT)《动物繁殖》同步教学(中国农业出版社)
2.尾部 （1）线粒体：产生ATP。在精子尾 部的中段，是动力车间。 （2）磷脂类：卵磷脂和缩醛磷酯， 氧化供能。 （3）精子尾部主段还含有Fe、Cu等 元素，其中Fe主要对构成细胞色素有关。
顶体帽 顶体
核后帽
质膜
顶体外膜 顶体内膜
核膜 核
精 子 顶 体 的 基 本 结 构
2.颈部 颈部是连接头部和尾部 的部分，位于头的基部，含有2～3个 基粒，由近端中心小体衍生而来，尾 部的纤丝即以此为起点。
颈部长约0.5µm，是精子最脆弱 的部分。在精子成熟过程中，不利因 素极易影响尾部而形成无尾精子。
（3）无尾精子是由于机械应 激或渗透压的突然改变，出 现这类问题应对整个采精及 其操作过程进行分析。原生 质滴位于精子头尾交界处， 原生质滴是由于精子的成熟 度不够或公猪使用过度。
二、精子的化学及功能
1.头部 牛精子的含量为3.38×10-9mg。 （1）DNA（脱氧核糖核酸）：细胞核的主要成分，携 带遗传信息，其遗传特性决定仔代的性别。 （2）蛋白质与氨基酸：组蛋白占精子干重的50％； 含17种氨基酸，主要是精氨酸，对顶体机能有保护作用； 组蛋白与DNA结合，对遗传信息的表达起控制作用。 （3）无机盐类：K+、Na+和无机P，与精子的运动有关。 P构成核苷酸中的磷酸分子；K+与精子活力有关。
精子的形态结构与化学组成
一、精子的形态结构
凡是哺乳动物射出的精子，在形 态和结构上具有共同特征，长50～ 70µm，由头部、颈部和尾部三部分构 成，表面有一层脂蛋白膜，是具有活 性和遗传物质的雄性生殖细胞。
精子长度不与个体大小成正比，有的甚 至相反。如大白鼠精子全长190µm，而大象 只有50µm。
精子形态学分析
《WHO5》2010版 南京军区南京总医院
戈一峰
1 本课件精子染色均采用 Diff-Quik染色
戈一峰，男，1973年3月出生，中共党员，副主任 医师、副教授，江苏省青年联合会第十、十一届委 员会委员，医疗卫生界别秘书。现就职于南京军区 南京总医院生殖医学中心，从事生殖遗传学的实验 室和临床诊疗工作，在辅助生育和习惯性流产的免 疫治疗等方面具有专长，2004年11月-2005年7月 参加联合国驻利比里亚特派团维和军事行动，2010 年1月参加中国人民解放军赴海地地震救援行动， 历年在国内外核心学术期刊上以第一著者发表论文 十多篇，参编学术专著12部。
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附录
正常形态精子
通过观察来自受孕女性生殖道，特别是 经性交后试验从宫颈粘液或从卵子透明带表 面回收的精子有助于定义具备潜在受精能力 的精子。 使用这些标准，对所有男性而言，其正常形 态精子百分率的范围大致为0-30%，很少超 过25% 。 这个低数据自然产生一个低的临界值 （仅为3-5%）。 经过“透明带选择”的精子，正常形态率仍 然低，约8-25%。
比１.３～１.８ µm ，顶体区４０％～７０％，不超过２个小空泡。 空泡大小〈２０％，顶体后区冰含任何空泡。
中段：细长、规则，长度３ .３～５ .２ µm ，大约与头部长度相等，
主轴与头部主轴成一直线，宽度０ .５～０ .７ µm ，残留胞质〈头的 １／３。 尾部：比中段细，均一，长约４５（均为头部长度的１０倍），没有锐 利折角，可以自身卷曲呈环状。
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精子中段与主段的分析参数
中段应该细长、规则，大约与头部长度相等。中段主轴应与头部长 轴成一条直线。
残留胞浆只有在过量时才被认为是异常的，即胞浆超过了精子头大
精液常规分析(世界卫生组织标准)
精液常规分析（世界卫生组织标准），男性生育力检查的金标准精液分析是评估男子生育力的重要方法，也是男科病诊断、疗效观察的实验依据，但精液分析的各参数也不是特异的，它并不能够确定达到受精位置的少数精子的受精能力，因此要正确评估男子生育能力还需要结合临床进行综合评估。
精液的分析结果易受射精频度，温度，实验室条件，检验人员的技术熟练程度，主观判断能力等诸多因素影响，其结果易发生偏差，因此精液采集与分析必须严格按照适宜的标准化程序进行，才能提供受检者临床状况的必要信息。
不育夫妇初诊时，男方至少要按标准程序做两次精液分析，两次分析如有明确差异，还要进行第三次分析。
精液标本可能含有致病菌和病毒（如HIV病毒，肝炎病毒，单纯疱疹病毒等），因此应视为生物危险品。
实验室技术人员应注意防护，要使用一次性手套和各种器皿。
用过的器皿要消毒处理。
精液培养，用于生物测定，宫腔内受精或体外受精，在处理过程中必须严格用无菌材料和无菌操作。
一，精液标本的采集和运送精液采集规范化是做好精液分析的前提条件，因此在精液采集前务必要详细告知受检者有关精液采集和运送的方法及注意事项。
1，标本采集前应禁欲至少48小时，但不超过7天。
为减少精液分析结果的波动，禁欲的天数应尽可能恒定。
每一份精液分析报告都应写明：病人姓名、禁欲时间、标本采集的日期和时间、标本采集是否完整以及标本从采集到分析的时间间隔等。
2，初检者应做两次精液分析，两次精液采集的间隔应大于7天，但不能超过3周。
如果两次的结果有明显的差异，应再取标本进行第三次分析。
3，标本的采集最好在实验室附近的取精室内单独进行。
否则，应在采集后1小时内送到实验室。
4，最好用手淫的方法取精液，收集精液要用对精子无毒性作用的广口玻璃或塑料容器中。
温度应保持在20~40℃,以避免降低精子活力。
如果要做微生物学方面的检查，病人应先排尿并洗净双手和阴茎，用无菌容器收集。
5，如手淫取精有困难，可用特制的避孕套进行精液采集。
精液常规分析
根据1992年WHO所颁订的〝正常精液标准〞如下表：液化时间：室温下,60分钟以内颜色：均匀的灰白色精液量：2.0 ml 以上pH 值：7.2 ~ 8.0精子浓度：20 ×106 / ml 以上精子活率：75%以上是活的精子活动力：50%以上属于a与b级（按照精液质量的优劣依次为a.b,c,d）精子形态：30%以上为正常白血球：少于 1 × 106 / ml液化时间：刚取出的精液为凝胶状,但在室温下60分钟内即完全液化.液化不完全会影响精子活动性.颜色：正常精液颜色为均匀的灰乳色,颜色太清澈,可能精子浓度太低.精液量：一次射精的量正常为1.5 ~ 5.5 ml之间.精液过多常是因为精囊发炎；精液过少可能是前列腺或精囊慢性发炎的结果.精子浓度：利用精子计数器计算,正常的精子浓度每ml至少二千万只以上( 20 x 106 ml ).精子活动力：一般分为四级：a级：快速前进；b级：缓慢前进；c级：原地摆动；d 级：不动.正常的精子活动性至少50%为a与b级,或25%属于a级.精子型态：正常的精子型态,头部是卵圆形的,长4.0 ~ 5.5μm,宽1μm.顶体占整个头部的40 ~70%,且没有颈部,中段或尾部的异常.通常需经进一步的固定染色处理后才能正确分析.一, 常规检查：1, 液量的检查[正常参考值]2-5ml.[临床意义]1. 若数日未射精,且精液量少于1.5m1者为不正常,说明精囊或前列腺有病变；若精液量减至数滴,甚至排不出,称为无精液症,见于生殖系统的特异性感染,如结核,淋病和非特异性炎症等.2.若精液量过多(一次超过8m1),则精子被稀释而相应减少,有碍生育.2, 颜色检查[正常参考值] 灰白或乳白色,久未射精者可呈浅黄色.[临床意义]1.黄色或棕色脓样精液：见于精囊炎或前列腺炎等.2.鲜红或暗红色血性精液：见于生殖系统的炎症,结核和肿瘤等.3, 粘稠度和液化检查[正常参考值] 粘稠胶冻状,30分钟内自行液化.[临床意义]1.精液粘稠度低,似米汤样,可因精子量减少所致,见于生殖系统炎症.2.液化时间过长或不液化,可抑制精子活动而影响生育,常见于前列腺炎症等.4,精子活动率检测[正常参考值] 正常精子活力一般在Ⅲ级(活动较好,有中速运动,但波形运动的较多)以上,射精后1小时内有Ⅲ级以上活动能力的精于应＞0.60.[临床意义] 如果0级(死精子,无活动能力,加温后仍不活动)和Ⅰ级(活动不良,精子原地旋转,摆动或抖动,运动迟缓)精子在0.40以上,常为男性不育症的重要原因之一.5,精子活动力检测[正常参考值]射精后30-60分钟活动力为Ⅲ级以上的精子＞0.80；射精后120分钟内活动力为Ⅲ级以上的精子＞0.60；射精120分钟后0.25-0.60的精子仍能活动.[临床意义] 活动不良或不活动的精子增多,是导致不育的重要原因之一.常见于精索静脉曲张,泌尿生殖系的非特异性感染如大肠杆菌感染,某些代谢药,抗疟药,雌激素,氧化氮芥等,也可使精子活动力下降.6,精子计数[正常参考值] (100-150)×109/L或一次排精总数为(4-6)×108.[临床意义]1.精子计数小于20×109/L或一次排精总数少于1×108为不正常,见于精索静脉曲张,铅金属等有害工业污染,大剂量放射线及某些药物影响.2.精液多次未查到精子为无精症,主要见于睾丸生精功能低下,先天性输精管,精囊缺陷或输精管阻塞.输精管结扎术2个月后精液中应无精子,否则说明手术失败.3.老年人从50岁开始精子数减少以至逐步消失.7,精子形态检查[正常参考值]畸形精子：＜10％-15％；凝集精子：＜10％；未成熟精细胞：＜1％.[临床意义]1.精索静脉曲张病人的畸形精子增多,提示精子在不成熟时已进入精液,或静脉回流不畅造成阴囊内温度过高和睾丸组织缺氧,或血液带有毒性代谢产物从肾或肾上腺静脉逆流至睾丸,上述原因均有损于精子形态.2. 精液中凝集精子增多,提示生殖道感染或免疫功能异常.3. 睾丸曲细精管生精功能受到药物或其他因素影响或伤害时,精液中可出现较多病理性未成熟精细胞.8,精液细胞检查[正常参考值]白细胞(WBC)：＜5个/HP(高倍镜视野)；红细胞(RBC)：0-偶见/HP.[临床意义]1.精液中白细胞增多,常见于精囊炎,前列腺炎及结核等.2.精液中红细胞增多,常见于精囊结核,前列腺癌等.3. 精液中若查到癌细胞,对生殖系癌有诊断意义.9,精液酸碱度(pH)检查[正常参考值] 7.2-8.0.[临床意义]1.精液pH值＜7.0,多见于少精或无精症,常反映输精管道阻塞,先天性精囊缺如或附睾病变等.2.精液pH值＞8.0,常见于急性感染,如精囊炎,前列腺炎等.10,男性生育力指数测定[计算公式]I=M(N×V)/(A×106）式中I为男性生育力指数；M为活动精子百分率；N为每毫升的精子数；V为精子运动的速度；A为畸形精子的百分率.[正常参考值] 正常人生育力指数＞l.[临床意义]1.生育指数为0,表明完全无生育能力.2.生育指数为0-1之间,表明有不同程度的生育障碍.二, 生化及免疫学检验：1,精浆果糖测定[正常参考值] 9.11-17.67mmol/L.[临床意义]1.精液果糖为0,可见于先天性两侧输精管及精囊腺缺如,两侧输精管完全阻塞或逆行射精.2.精液果糖降低,常见于精囊炎和雄激素分泌不足,果糖不足可导致精子运动能量缺乏,甚至不易受孕.2,精浆酸性磷酸酶测定[正常参考值]金氏法：＞255nmol·s-1/L[临床意义]1.精浆酸性磷酸酶含量增高,常见于前列腺肥大或早期前列腺恶性肿瘤患者.2.精浆酸性磷酸酶含量降低,常见于前列腺炎患者.3.精浆酸性磷酸酶检测是法医鉴定有无精液最敏感的方法.3,精浆顶体酶活性测定[正常参考值] 36.72±21.43U/L.[临床意义] 精子顶体酶活力与精子密度及精子顶体完整率呈正相关,其活力不足,可导致男性不育.4,精浆乳酸脱氢酶-X同功酶(LDH-X)测定[正常参考值]LDH-X绝对活性：2620±1340U/L；LDH-X相对活性：≥0.426.[临床意义] LDH-X具有睾丸及精子的组织特异性,是精于运动获能的关键酶,该酶检测可作为诊断男性不育有价值的指标.睾丸萎缩患者LDH-X降低或消失,精子发生缺陷时无LDH-X 形成,少精或无精者可致LDH-X活性降低.服用棉酚也可抑制此酶活性.5,精浆肉碱测定空?6,抗精子抗体(AsAb)测定[正常参考值] 阴性.[临床意义] AsAb检测对不育原因检查有重要临床意义.存在于血清或生殖道分泌液中的AsAb,可抑制精子的活动,干扰精子的运行,阻碍精子穿透及精卵结合,使受精发生障碍.即使已经受精,也可能影响发育中的胚胎,造成免疫性流产.不育夫妇AsAb阳性者占25％-30％,当精子输出管道受阻,睾丸损伤,炎症,附睾等生殖系感染时,系精子外逸而产生的自身抗体。
精子的活率与形态染色在男性不育症中的诊断意义
通 过 统 计 学 的计 算 ，Ｃ Ａ Ｓ Ａ检 测 的畸 形 率 与 涂 片染 色 所检 测 的畸 形率 两者 差异 显著 ＜ ０ ． ０ ５ ） ，具 有统 计学 意义 ； Ｃ Ａ Ｓ Ａ检 测 的精子 活率 与伊 红染 色计数 的活 率两 者间无 显著 差异 ＞ ０ ． ０ ５ ） ，无统 计学 意义 。 讨 论 精 子形 态 测 定 是 常规 精 液 分析 中最 重要 的 临床 指标 之 但 精子 形态 又 比较难 测定 准确 和稳定 。 目前使 用人 工方法 评价精 子形 态存在 主观性 ，不 同实验 室甚 至 同一实 验 室 内部 检 测 结果 的偏 差 广泛 存 在 ，受个 个 主观 因素 影 响较 大 ，因此 ，减 少 操作 中 的不 确定 因素对 形 态分析 的影 响很重 要 Ｊ 。 通过对 精子 进行 固定然后 进行染 色再 镜检计 数 ，相对来 说 标准 比较 容易 统一 ，涂 片方法 直接 涂片染 色也 是 ＷＨＯ推 荐使用 的计算 精子 畸形率 的参考 方法 。 因此 ，通过 染色镜 检进行 精子形 态 的分析结 果要 准确 于 Ｃ Ａ Ｓ Ａ所 检测 的形 态 结果 】 。而 Ｃ Ａ Ｓ Ａ所 检测 的结 果虽 不如
自动分 析 ，但 结 果 不佳 。 通过 对 精 子进 行 染 色来 精 确 计 算
２ ． ２ 方 法 精 液分 析按照伟 力公 司提供 的系统 软件说 明书进 行打操 作 ，形态 染 色及 活 率染 色按 照试 剂 盒 中 的说 明 书进 行 染 色
再 进行镜 检计数 。
出精子 的畸形率及活率，更有助于临床医生对精液质量的
摘 要 ：目的 探讨 对精 子进行 染色在精 液检 查 中形态 （ 刘氏染色 ） 及活率 （ 伊 红染 色） 意义。方法 采用我院不孕不育 科 ２ ０ １ ３年 １—６月中检 查的 ３ ７ ２例 精液 ，同时染色进行 形态及活率的计算 ，与精子 自动分析 系统 （ Ｃ ＡＳ Ａ） 所检测 出的 畸形率及活率进行对 比。结 果 形 态染 色与 Ｃ ＡＳ Ａ所检测 出来的畸形率两者有显著 差距 （ 尸＜ ０ ． ０ ５ ） ，具有统计 学意义； 活率染 色与 Ｃ ＡＳ Ａ 所检 测 出来的精子 活率两者无显著差距 ｆ 尸＞ ０ ． ０ ５ ） ，无统计 学意义。结论 形 态染 色比活率 染色更具 有 临床 意 义 。 关键词 ：精 子形态 ；精 子活率；染 色；不育症 ； 诊断 中 图分 类号 ：Ｒ４ ４ ６ 文 献 标 识 码 ：Ｂ ＤＯ Ｉ ：１ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ １ ． ３ １ ４ １ ． ２ ０ １ ３ ． １ ９ ． １ ６ １
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• 精子活力：正常精子的活动力，精子向前运动 的能力。计数200个精子的分级情况。 • WHO把精子的活动力分为4级。(5版分3级) • d：不动 PR：前向运动 • c：非前向运动 NP：非前向运动 • b：慢速或呆滞的前向运动 IM：不活动 • a：快速向前运动
• • • • •
正常为：a级>25%或a+b>50% （5版）的参考值下限是 前向运动精子（PR）：32% 精子总活力（PR+NP）：40% 临床意义：活力下降、弱精子症：见于液 化不良、粘稠度增高、精液凝集，精子结 构异常，内分泌功能异常，精索静脉曲张 等。
4
• • • • • • 扁平底 不规则头 顶体区<40% 中段粗 不规则插入 弯曲
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• • • • • • • 顶体区>70% 顶体后区空泡 中段弯曲 粗、不规则插入 尾环状 卷曲、弯曲 双尾
精子形态分析
6-1
6-2
7-1
7-2
8-1
8-2
9-1Βιβλιοθήκη -210-110-2
11-1
操作前准备
• • • • • • 一侧有磨砂载玻片 盖玻片（24mmX50mm） 10uL移液器及吸头 纱布或纸巾 记号笔 巴氏染液或Diff染液
精液涂片的制备
• 每份新鲜的精液标本应制备两张或更多的涂片， 以防染色发生问题或载玻片破碎。 • 每次取样前要充分混匀精液。 • 对于未稀释的精液，采用拉薄技术；对于已洗涤 的精液，采用移液管法。 • 涂片前准备： • 1.用纱布或纸巾擦干净载玻片的两面 • 2.用记号笔在载玻片的磨砂处标记上编号、日期。
• 精子浓度的参考值下限为：15X106/mL • 精子总数的参考值下限为：39X106/mL • 精子密度过低或无精见于： 1、睾丸生精功能异常 2、输精管、射精管、精囊存在缺陷 3、精索静脉曲张 4、生殖道炎症 5、流行性腮腺炎并发睾丸炎 6、绝育手术后 7、放射性照射，有害化学物质污染及药物作用等。
染色步骤
• 1.精子悬液涂片制备完成后，水平放置，空气中 自然干燥； • 2.加A液覆盖组织片室温反应15秒，将玻片直立吸 水纸上除去多余染液； • 3.加B液覆盖组织片室温反应10秒，将玻片直立吸 水纸上除去多余染液； • 4 .加C液覆盖组织片室温反应15秒，将玻片直立 吸水纸上除去多余染液； • 5.流水中浸洗10~15次以除去多余染液； • 6.将玻片垂直竖立以去除水分，待完全干燥； • 7.油镜下观察精子形态。
• 液化：室温正常5~10分钟液化，20~40分 钟可完全液化，1小时仍不液化应视为异常， 一般与缺乏蛋白水解酶有关。 • 粘稠度：精液粘稠度异常可影响精子的活 力和穿透力。用吸管吸入精液，滴落精液 观察，粘稠度增加时，精液悬滴可形成 >2cm的拉丝。 • PH值：正常精液PH呈弱碱性，>=7.2（滴 PH试纸<30秒）。精液的PH过低，可影响 其对阴道酸性环境的调节作用，影响精子 活力。亦可能与精囊发育不良有关。
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谢 谢 大 家！
• 如图：取5~10uL悬浮液于清洁载玻片上，用滴管 使精液在载玻片上展开。然后在400倍光镜下扫 视一下确保精液涂片均匀，400倍下每个视野2050个精子，并且没有精子成团或重叠。
• 注意：
• 1.精液标本完全液化，充分混匀； • 2.快速取样，使精子没有时间从混悬液中沉 降下来； • 3.重复取样前，再次混匀精液标本； • 4.精液滴在载玻片上，立即涂片，不要放置 数秒后再涂片。
涂片的方法
• 充分混匀待涂片精液标本，根据精子浓度，用移 液器去5~10uL的精液滴在载玻片的一端，立即用 第二张载玻片的非磨砂端以45°角（角度越小， 涂片越薄）沿第一张载玻片的表面移动并接触精 液滴，然后沿载玻片的长轴缓慢拖回拉片（约一 秒；速度越快，涂片越厚），制成一张涂片。
• 对于高粘稠或低密度或充满碎屑精液：稀释精浆 或离心去精浆。 • 方法：取0.2~0.5mL精液，加10mL生理盐水， 800g离心10分钟，除去大部分上清液，轻轻拍打 试管，使精子团重新混悬于剩余的上清液中。 • 必要时可加生理盐水重复洗涤一次。 • 洗涤后的精子浓度在20-50X106/ml为好。 • 洗涤的目的是减少背景杂质，并减少背景着色。
• 精子存活率：活精子数量在精子总数量中 所占的比例。 • 伊红-苯胺黑染色：50uL精液与等体积的染 液混匀，等待30秒；采用拉薄技术制成涂 片，空气中干燥，高倍镜观察，活精子头 部成白色或淡粉红色，死精子头部呈红色 或暗粉红色。 • 正常参考值： （参考下限是58%） • >=70%（射精后1h） >= 40~50%（射精后3h） • >= 20~30%（射精后6h）
人精子形态模式图
• • • • • • • 头部：轮廓规则，顶体 清楚，顶体帽至少覆盖 头部表面的1/3。 中段：细长，不超过头 宽1/3，轮廓直而规则。 尾部：细长，弯曲不卷 曲。
正常形态精子的概念
• 把“具备潜在受精能力精子”（亚群）的 外观作为形态正常的标准。 • 人为设定临界标准，规定“临界形态精子 都是异常”。
结果观察
• 1.精子顶体区染淡紫色，顶体后区染深紫色， 精子体尾区染成淡红色。 • 2.世界卫生组织（WHO）精子缺陷类型分 类如下：
1
• 正常精子形态
2
• • • • • • • • • 小头 梨形头 顶体区>70% 顶体后区空泡>2 过多残留胞浆 中段粗、弯曲 插入 双尾 弯曲
3
• • • • • • • • • 圆形头 锥形头 不定形头 大头针状 顶体区>70% 顶体区<40% 顶体后区空泡>2 中段粗 不规则插入
精子细胞形态学检查
• 1、正常精子形态：正常在精液中占15% • (5版)参考下限为：4% • 2、畸形精子：头部形状、大小异常；体部 异常；尾部异常。 • 临床意义：精子形态异常与生殖系统的感 染、外伤、雄激素变化、化学药物中毒及 遗传因素有关。
• 3、生精细胞、精原、初级精母、次级精母、 精子细胞。 • 正常时少量，当曲精管的生精能力受到损害时， 精液中可出现较多的病理性幼稚细胞。 • 4、其他成分 • 红细胞（极少）：血精症、睾丸瘤、前列腺瘤 • 白细胞（<=1X106/mL）：生殖道炎症 • 癌细胞：输精管恶性肿瘤
孕前优生健康检查临床检验操作技术培训
精子常规分析与形态学染色
河南省人口和计划生育科学技术研究院
精液常规检验
• 采集：采集前必须禁欲2~7天，采集后立即 送检，存放时间不要超过1小时，运送时温 度与体温相近。 • 外观和气味：正常呈灰白或乳白色，厚稠 胶冻状，液化后呈乳白色半透明状。精子 数量少，精液透明且稀薄；精液中有较多 红细胞，可呈红褐色；黄色精液见于精液 中有较多脓细胞，或服用药物。 • 量：正常>=2mL，下限是1.5mL，小于1mL， 视为异常，见于精囊腺和前列腺病变。