蛋白质的二级结构主要有哪些类型

简述蛋白质一级结构的分析方法。

第一步：前期准备，第二步：肽链的端点测定，第三步：每条肽链aa顺序的测定，第四步：二硫键位置的确定。

●<1>第一步：前期准备

●分离纯化蛋白质：纯度要达到97％以上。

●蛋白质分子量的测定：用于判断分子的大小，估计肽链的数目，有渗透压法、凝胶电泳法（聚丙烯酰胺、SDS）、凝胶过滤法、超离心法等

●aa组成的测定：用于最后核对，氨基酸自动分析仪。

●肽链拆分：非共价键的如氢键、离子键、疏水键、范德华力4种，可用尿素或盐酸胍等有机溶液来拆分。共价键的仅二硫键1种，可用巯基乙醇、碘代乙酸、过甲酸来拆分。

●<2>第二步：肽链的端点测定

●N端测定：Sanger法，DNFB→DNP-肽→水解→乙醚萃取→层析鉴定。

●Edman法，PITC→PTC-肽→PTH-aa→层析鉴定。

●C端测定：肼解法。

●<3>第三步：每条肽链aa顺序的测定

事先要将蛋白质打断成多肽甚至寡肽，再上机分析，而且要2套以上，便于以后拼接。

●常用的工具酶和特异性试剂有：

●胰蛋白酶：－（Arg、Lys）↓－。产物为C端Arg、Lys的肽链。

●糜蛋白酶：表示为－（Trp、Tyr、Phe）↓－。

●CNBr：－Met↓－。

<4>第四步：二硫键位置的确定

包括链内和链间二硫键的位置，用对角线电泳来测，这项工作在AA序测定完毕后进行。在肽链未拆分的情况下用胃蛋白酶水解之，可以得到被二硫键连着的多肽产物。先进行第一向电泳，将产物分开。再用巯基乙醇处理，将二硫键打断。最后进行第二向电泳，条件与第一向电泳完全相同。选取偏离对角线的样品（多肽或寡肽），它们就是含二硫键的片段，上机测aa顺序，根据已测出的蛋白质的aa顺序，把这些片段进行定位，就能找到二硫键的位置。

3．以B-DNA和tRNA为例叙述核酸的二级结构模型。

答：一．Watson-Creck的DNA二级结构模型（B-DNA，线状DNA，自然选择）: 美国Watson 、英国Creck提出：

<1>DNA分子是由2条DNA单链互相缠绕而成，2条链反向平行（一条链为5’→ 3’，另一条链为 3’→ 5’），空间走向为右手螺旋

<2>2条链靠链间的H键结合，H键的产生于碱基之间，符合碱基配对原则：A＝T，G＝C。右手螺旋的维持力主要是碱基堆积力，其次是氢键。

<3>DNA的骨架为磷酸和脱氧核糖，在分子外面，戊糖平面∥螺旋轴，DNA的侧链基团是碱基，在分子内部，碱基平面⊥螺旋轴。螺距34?，直径20?，10bp/圈。分子有一条宽沟称为大沟，还有一条窄沟叫小沟，复制和转录的有关酶就是付在大沟之处的。

<4>遗传信息储存在DNA分子的bp序中。

<5>意义：能够解释DNA的一切物理化学性质；实现了DNA的结构与生物功能之间的统一：精确的自我复制。

二. RNA的二级结构模型

RNA的二级结构通式：茎环结构：RNA局部双螺旋，符合A-DNA模型。

tRNA的二级结构模型

三叶草模型：

AA臂：其3’端具有CCA-OH序列。

功能：携带AA

二氢尿嘧啶环：含有二氢尿嘧啶，稀有碱基

反密码环：具有反密码子，可以和mRNA上的密码子配对，将携带的AA送到恰当的位置

额外环：显示tRNA特异性的地方，是tRNA分类的依据。

TψC环：含有稀有碱基T（本应该在DNA中的）、假尿苷ψ

用化学渗透学说阐述氧化磷酸化的机制

<1>要求线粒体的内膜封闭完好，呼吸链中的电子载体和质子载体在线粒体的内膜上按照顺序交替排列

<2>质子载体有质子泵的功能，它利用电子传递的能量将线粒体内的H+泵到线粒体外，造成内膜内外两侧的H+浓度差，外侧的［H+］高，即外侧的PH<内侧。

<3>H+经过内膜上的ATP酶复合体回到线粒体内，其电能供该酶制造ATP。

试述脂肪酸β-氧化的过程。（20，提示：包括物质代谢、能量代谢和酶的名称。）

<1>脂肪酸的活化与转运：将胞浆中的脂肪酸变成线粒体中的脂酰CoA，由线粒体外膜上的脂酰CoA合成酶和线粒体内膜上的肉毒碱脂酰转移酶共同完成。总的反应式如下表。

能量核算：消耗2分子ATP

<2>线粒体内的β-氧化：分为脱氢、水化、再脱氢和硫解4步。结果是将脂酰CoA降解成为少了2个C的脂酰CoA和乙酰CoA。

<3>脂肪酸完全氧化成CO2和H2O的过程以及能量核算脂肪酸：2n

活化、转运1次：消耗2个ATP

β-氧化n-1次：产生（n-1）*5个ATP

生成n个乙酰CoA，经过n次TCA：产生n*12个ATP 总账：