西藏灵芝多糖的提取工艺研究
一种灵芝多糖的提取方法[发明专利]
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专利名称：一种灵芝多糖的提取方法专利类型：发明专利
发明人：迟宗磊,藏伟功,丁振洋
申请号：CN201410628578.1
申请日：20141111
公开号：CN104292357A
公开日：
20150121
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种灵芝多糖的提取方法。
一种灵芝多糖的提取方法，包括下述的步骤：选择晒干的灵芝，粉碎后过40-80目筛，得灵芝粉，在灵芝粉中加水并搅拌均匀，灵芝粉与水的重量比例为1：5-10，在水中浸泡8-16小时，加入纤维素酶酶解，再加入碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶，在微波条件下酶解，酶解后浓缩并脱色，离心，取上清液浓缩醇沉，再离心，采用乙醇清洗沉淀，冷冻干燥后并粉碎，得灵芝多糖。
采用本发明的方法从灵芝中提取多糖，采用酶作用条件温和，采用各种不同的酶将灵芝中的脂肪、纤维素酶解，将其中的多糖提取出来，提高了灵芝的利用率，采用本发明的方法得到多糖不仅得率高，而且纯度也高。
申请人：济南凯因生物科技有限公司
地址：250100 山东省济南市历城区华信路389号巨匠大厦401
国籍：CN
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灵芝多糖实验报告
一、实验目的本研究旨在通过实验方法提取和鉴定灵芝中的多糖成分，探究灵芝多糖的提取工艺，并对提取得到的灵芝多糖进行初步的生物活性分析。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：- 灵芝子实体（赤芝或紫芝）- 乙醇、水、硫酸、蒽酮等化学试剂- 蒸馏水、无水乙醇、丙酮等溶剂- 蛋白酶、DNase等酶类- 小鼠、细胞等实验动物和细胞系2. 实验仪器：- 电子天平- 超声波清洗器- 烘箱- 离心机- 恒温水浴锅- 分光光度计- 高效液相色谱仪- 荧光显微镜等三、实验方法1. 灵芝多糖的提取：- 将灵芝子实体洗净、晾干，粉碎成粉末。
- 采用乙醇提取法，将灵芝粉末与95%乙醇按一定比例混合，在超声波清洗器中提取2小时。
- 将提取液过滤，滤液在烘箱中浓缩至一定浓度。
- 将浓缩液用无水乙醇沉淀，离心分离，收集沉淀物。
2. 灵芝多糖的鉴定：- 采用硫酸-蒽酮法对提取得到的沉淀物进行含量测定。
- 采用高效液相色谱法对提取得到的灵芝多糖进行结构分析。
3. 灵芝多糖的生物活性分析：- 采用小鼠腹腔巨细胞吞噬实验，检测灵芝多糖的免疫调节活性。
- 采用细胞实验，检测灵芝多糖对肿瘤细胞的抑制作用。
四、实验结果1. 灵芝多糖的提取：- 采用乙醇提取法，从灵芝子实体中提取得到多糖含量为10%左右。
2. 灵芝多糖的鉴定：- 硫酸-蒽酮法检测结果显示，提取得到的灵芝多糖含量较高。
- 高效液相色谱法分析结果显示，提取得到的灵芝多糖主要由葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖等单糖组成。
3. 灵芝多糖的生物活性分析：- 小鼠腹腔巨细胞吞噬实验结果显示，灵芝多糖能够显著提高小鼠腹腔巨细胞的吞噬功能。
- 细胞实验结果显示，灵芝多糖对肿瘤细胞具有抑制作用。
五、实验讨论1. 灵芝多糖的提取工艺：- 本实验采用乙醇提取法，结果表明该方法能够有效地提取灵芝中的多糖成分。
- 在实验过程中，提取溶剂的浓度、提取时间、料液比等因素对提取率有显著影响，需要进一步优化。
灵芝子实体多糖的分离纯化、结构解析及免疫活性研究的开题报告
灵芝子实体多糖的分离纯化、结构解析及免疫活性研究的开题报告一、研究背景灵芝是一种具有悠久历史和广泛应用价值的中草药，其子实体中含有丰富的多糖类物质，已被证明具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等多种生物活性。
然而，当前关于灵芝子实体多糖的分离纯化、结构解析及免疫活性研究仍存在一定的不足和难点，需要进一步深入研究。
二、研究目的本研究的主要目的是探究灵芝子实体多糖的分离纯化方法，以及对其进行结构解析和免疫活性评价，为进一步研究灵芝多糖的功能机制提供科学依据。
三、研究内容及方法1. 多糖分离纯化方法的研究利用超滤、离子交换层析、凝胶渗透层析等方法，对灵芝子实体多糖进行分离纯化，并考察不同条件下各种分离方法的分离效果和纯化效率。
同时，优选出分离纯化方法，为后续步骤的开展提供基础保障。
2. 结构解析利用现代色谱分离技术（如薄层色谱、高效液相色谱）、光谱学技术（如红外光谱、质谱、紫外光谱）等手段，对灵芝子实体多糖的分子结构进行解析，探究其化学组成、分子量、单糖组成等信息。
同时，对多糖的空间构型和分子排布等方面进行综合研究，为后续的免疫活性评价提供依据。
3. 免疫活性评价采用体外免疫细胞实验模型，评价灵芝子实体多糖的免疫活性。
主要从增强免疫功能、抗氧化、抗肿瘤等多个方面进行评价，以探究多糖的作用机制，并为未来发展具有更广泛应用价值的多糖药品提供理论依据。
四、研究意义和预期结果本研究的成果将有助于完善灵芝多糖的分离纯化、结构解析和免疫活性评价方法，提高多糖的效价和利用价值，为开发新型药物、食品等领域提供科学依据。
预期结果为：系统研究灵芝子实体多糖的分子结构、性质及其免疫活性，初步探索灵芝的作用机制。
灵芝粗多糖的提取工艺
灵芝粗多糖的提取工艺
灵芝多糖的提取工艺主要包括以下几个步骤：
1. 材料准备：选择新鲜的灵芝或者灵芝干燥品作为原料，将其进行切碎或研磨，以增加提取效果。
2. 提取溶剂的选择：常用的提取溶剂有水、乙醇、甲醇等。
具体选择溶剂需要根据灵芝多糖的性质和应用需求来确定。
3. 提取方法：常用的提取方法有水煮提取法、连续提取法、酸提取法、超声波提取法等。
不同的提取方法对灵芝多糖的提取效果有所差异。
4. 温度和时间控制：提取温度和时间对灵芝多糖的提取效果也有影响。
一般来说，较高的温度和较长的提取时间可提高灵芝多糖的提取率，但同时也可能损失一部分活性成分。
5. 过滤和浓缩：将提取好的液体进行过滤去杂质，然后使用浓缩设备，如旋转蒸发器、真空浓缩器等，将溶剂去除或浓缩。
6. 干燥和粉碎：将浓缩后的灵芝多糖进行干燥，使其转化为粉末或颗粒状。
7. 质量控制：对提取得到的灵芝多糖进行质量检测，包括测定灵芝多糖的含量、
分子量、结构等。
需要注意的是，提取灵芝多糖的工艺可以根据具体需要进行调整和改进。
不同的提取工艺可能会有不同的影响，因此在实际操作过程中，需要根据实际情况来选择适合的提取工艺。
西藏野生灵芝粗多糖提取工艺研究
西藏野生灵芝粗多糖提取工艺研究杨晓梅;鲍隆友;耿向永;蔡灵男【摘要】采用正交试验,对影响灵芝多糖提取的4个主要因素(料水比、提取温度、提取时间、醇析浓度)进行了最佳工艺条件研究.结果表明,提取灵芝子实体粗多糖采用水提醇沉法,最优工艺条件为:料水比1:50,提取温度90℃,提取2次,每次提取2 h,90%乙醇醇析,3 000 r/min离心30 min取沉淀,sevage法除游离蛋白,离心取上层液即为灵芝粗多糖溶液.苯酚-硫酸法测定灵芝子实体粗多糖含量约为0.734%,这一含量在全国灵芝子实体多糖含量中处于中等水平,还有待于进一步的研究和开发利用.【期刊名称】《长江蔬菜》【年(卷),期】2010(000)022【总页数】5页(P41-45)【关键词】西藏;野生;灵芝;粗多糖;提取【作者】杨晓梅;鲍隆友;耿向永;蔡灵男【作者单位】西藏农牧学院动物科学技术学院,西藏林芝,860000;西藏农牧学院动物科学技术学院,西藏林芝,860000;西藏农牧学院高原生态研究所;西藏农牧学院动物科学技术学院,西藏林芝,860000【正文语种】中文灵芝是我国中医药宝库中的灿烂瑰宝，几千年来备受中华民族的珍爱和崇拜。
其中灵芝多糖又以其特有的医学功效成为灵芝的主要活性成分，其含量已成为衡量灵芝质量的重要指标之一[1]。
多糖由多种醛糖和酮糖通过糖苷缩合而成，是一种天然多聚体，其分子量从几百到数十万，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高度醇而溶于热水。
根据多糖的这种化学特性，灵芝多糖的一般提取过程是：技术处理→分离纯化→含量测定。
本试验以西藏野生灵芝（Ganoderma lucidum）为材料，探究在西藏高海拔条件下灵芝粗多糖的提取工艺，以期为西藏野生灵芝的开发利用奠定基础。
1．1 试验材料新鲜灵芝采自西藏林芝地区林芝县、米林县。
试验试剂有葡萄糖（成都化学试剂厂生产）、浓硫酸（四川省德阳市化学试剂厂生产）、苯酚（成都化学试剂厂生产）。
灵芝多糖的研究综述
学院：生工院姓名：学号：灵芝多糖的研究进展综述摘要：灵芝多糖是灵芝的主要成分，许多药理和临床研究表明：它是一种对正常细胞无毒副作用，能够激活免疫细胞、提高机体免疫功能的调节剂，具有降血糖、抗肿瘤、抗氧化等多种生物活性的物质。
灵芝多糖结构非常复杂，其中包括分子量、单糖组成和糖苷键类型等，都对其活性影响极大，本文列举了灵芝多糖结构通用的检测方法。
传统提取灵芝多糖的方法如热水浸提法、碱提取法，有提取时间长、提取效率不高的缺点，而利用超声波辅助提取多糖受到人们的关注，并且与传统提取方法做了比较，显示了这种方法的广阔应用前景。
关键词：灵芝多糖；生物活性；提取灵芝古称瑞草，是担子菌纲多孔菌科灵芝属药用真菌，古人都认为灵芝是扶正固本、滋补强壮的珍贵药品，因而对其药性十分推崇。
林[1]等通过采用整体、细胞和分子水平的实验技术和方法，发现灵芝在免疫系统的调节，通过增强宿主免疫调节功能达到抗肿瘤作用、抗病毒作用；通过提高氧化酶的活性清除体内自由基，从而达到抗衰老的作用[2]。
此外，灵芝多糖在降血脂等方面也有着极其重要的医学作用。
随着近年来对灵芝研究的不断深入，对灵芝多糖的提取工艺也越来越纯熟，人们发现灵芝多糖是灵芝的主要活性物质之一，其重要性不言而喻。
本文综述了目前在灵芝多糖结构组成、生物活性、提取方面的研究情况，并对灵芝多糖的发展利用前景做了展望。
1 灵芝多糖的结构组成对于所有的生物大分子来说，其化学结构与其生物功能关系息息相关，灵芝多糖的生物活性同样依赖于其化学结构。
因此，要了解灵芝多糖的作用机理，必须对其化学结构进行研究。
现代科学对于灵芝多糖的化学结构的研究，主要还是集中于其单糖的组成、多糖分子量、单糖连接方式等方面。
近年来，随着研究的不断深入，对灵芝多糖的化学结构已经有了一定的了解，灵芝多糖结构主要由多糖的单糖组成、糖苷键构型、连接键及连接次序、聚合度、分支度等。
虽然灵芝多糖化学结构由于灵芝种类的不同而有所差异，但其化学结构的某些方面是固定不变的。
灵芝多糖的研究及其提取工艺
灵芝多糖提取工艺1、灵芝多糖简介灵芝多糖是一种从灵芝孢子粉或灵芝中提取的物质。
不溶于高浓度的酒精 , 微溶于低浓度的酒精及冷水 , 在热水中能全部溶解。
目前已分离到的有200多种，其中大部分为β–葡聚糖，少数为α–葡聚糖，多糖链由三股单糖链构成，是一种螺旋状立体构形物，其立体构形和DNA、RNA相似，螺旋层之间主要以氢键固定，分子量从数百到数十万，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。
灵芝多糖都存在于灵芝的细胞壁内壁。
灵芝多糖中除含有葡萄糖外 , 大多还含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖、鼠李糖等单糖 , 但含量较少。
单糖间糖苷键连接有1,3、 1,4 和 1, 6 数种。
大多为β型结构 , 少数为α- 型结构。
α-型多糖没有药理活性 ( 药效 ) 。
多数多糖链有分枝 , 部分多糖链含有小分子肤链。
多糖链分枝密度高或含有肤链的其药理活性也高。
灵芝多糖在水溶液中多糖链一般由三股糖链组成 , 在 o. 1 摩 / 升氢氧化纳溶液中时多糖链的三股糖链离解为单股单糖链。
多糖的药理活性与单糖间糖苷键的结合形式有关。
单糖间以β- 1 , 3 、 1, 6 或β-1,4 、 1, 6-糖苷键连接是有效的即具有药理活性 , 而纯β_-1 ,4- 糖背键连接的则没有药理活性。
此外 , 多糖的药理活性还与其立体构形有关 , 若螺旋形立体结构被破坏 , 其活性则大大下降。
淀粉、纤维素、糊精也是多糖 , 但其构形与灵芝多糖 ( 或其他真菌多糖 ) 不同。
淀粉、纤维素等多糖没有螺旋形立体结构 , 单糖间的连接全是β- 1,4-连接。
纤维素是β-型多糖 , 淀粉、糊精是α-型多糖。
由于其构形不同 , 所以淀粉、糊精、纤维素都没有药理活性。
灵芝多糖是灵芝的最有效成分之一 ,已分离到的灵芝多糖有 200 多种 , 其中有数十种的结构已被搞清 , 分子量已被测定。
现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤、抗辐射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白质能力，延长寿命，灵芝多糖还具有刺激宿主非特异性抗性、免疫特异反应以及抑制移植肿瘤生理活性的特性。
灵芝多糖超声提取工艺流程
灵芝多糖超声提取工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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西藏灵芝多糖的提取工艺研究目的优化西藏灵芝多糖的提取工艺。
方法以蒽酮-硫酸法作为灵芝多糖含量的测定方法，以多糖提取得率为考察指标，对浸提过程中的温度、时间、次数以及料液比4个因素进行单因素试验和正交试验。
结果灵芝多糖的最佳提取条件为提取温度100 ℃，浸提时间2 h，浸提次数3次，料液比为1∶30。
结论该提取工艺条件稳定，重现性好，可为西藏灵芝多糖的大生产提供参考依据。
[Abstract] Objective To optimize the extraction process for polysaccharides from Ganoderma lucidum of Tibet. Methods Anthrone-sulphuric acid method was used to dectect the content of polysaccharides，extraction rate of polysaccharides was took as inspection indicator，four factors such as temperature，time，number of times and ratio of material to liquid in the leaching process was conducted single-factor test and orthogonal test. Results The optimum temperature of extracting was 100℃，the optimum times of extracting was 2 times，the optimum extracting time was 2 h and ratio of material to liquid was 1∶30 of Ganoderma lucidum polysaccharides. Conclusion The condition of extracting process are stable and it is reproducible，which can provide reference for preparation of polysaccharides from Ganoderma lucidum of Tibet.[Key words] Ganoderma lucidum of Tibet；Polysaccharides；Extraction process；Content determination西藏灵芝Ganoderma lucidum Sheng H. Wu，Y. Cao& Y. C. Dai是广义赤芝Ganoderma lucidum （Curtis）P. Karst.的复合群成员，是目前我国普遍使用的食药用赤芝品种。
本公司选取了3个种属的灵芝[西藏灵芝、西藏野生灵芝（松杉灵芝）Ganoderma tsugae Murrill和紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang]在西藏基地进行试种植。
为了确定西藏灵芝、西藏野生灵芝（松杉灵芝）和紫芝3个品种的哪一种更适宜在本公司的西藏基地生长，开展了灵芝多糖的提取工艺优化研究，比较不同品种灵芝的生长形态和多糖含量，为西藏基地种植灵芝提供选种依据。
1 材料与仪器1.1 材料西藏灵芝、松杉灵芝、紫芝（广州白云山汉方现代药业有限公司），D-无水葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所，0833-9501），95%乙醇（医用级），水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
1.2 仪器R-201旋转蒸发仪（上海申科机械研究所），YZG-1000A型真空干燥机（常州市范群干燥设备有限公司），BS210S型电子天平（德国赛多利斯），UV-2550型紫外分光光度计（日本岛津公司），LXJ-IIB低速大容量多管离心机（上海棱谱仪器仪表有限公司）。
2 方法与结果2.1 3种灵芝的形态比较和多糖含量的检验多糖含量检验方法参照中国药典2010年一部灵芝项下测定方法[1]。
3种灵芝的形态比较和多糖含量检验结果见图1、表1。
从图1和表2可知，在西藏种植的紫芝可能由于水土不服，发育不良，菌盖不完整，多糖含量也未符合中国药典标准，远低于另外两种；松杉灵芝的菌盖很薄，孢子粉弹射很少，但多糖含量高于另外两种灵芝；西藏灵芝的生长形态最好，多糖含量符合中国药典标准。
2.2 提取工艺研究[2-14]多糖常用热水浸提法提取。
影响热水浸提法的因素有提取温度、提取时间、料液比和提取次数等，本研究对这4个因素分别进行了单因素和正交试验，优化最佳的提取工艺参数。
2.2.1 料液比考察精密称取灵芝粗粉4份，每份5 g，分别置250 ml圆底烧瓶中，按照料液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40加水回流提取1 h，滤过，滤液分别定容至250 ml，取适量滤液，测定多糖的含量，观察不同料液比对多糖提取得率的影响（图2）。
从图2可知，随着料液比的增加，多糖提取得率增高，但当料液比大于1∶30时，多糖提取得率增高不显著。
2.2.2 提取时间的考察精密称取灵芝粗粉4份，每份5 g，置150 ml圆底烧瓶中，分别加水125 ml，回流提取1、1.5、2、2.5 h，滤过，滤液分别定容至250 ml，取适量滤液，测定多糖的含量，观察不同提取时间对多糖提取得率的影响（图3）。
从图3可知，随着提取时间的延长，多糖提取得率逐渐增高，提取2 h即可将灵芝子实体中多糖提取较完全，这是因为浸渍有利于溶剂浸入细胞壁内，使之充分溶胀，利于有效成分进入溶剂相中，时间太长，可能引起结构的变化和破坏，甚至使其中的五碳环或六碳环裂解，导致多糖含量下降。
2.2.3 提取温度的考察精密称取灵芝粗粉3份，每份5 g，置于250 ml烧杯中，加水200 ml，分别设定温度为60、80、100℃，加热回流提取1次，滤过，滤液分别定容至250 ml，取适量滤液，测定多糖的含量，观察不同提取温度对多糖提取得率的影响（图4）。
从图4可知，提取温度对提取工艺有很大的影响，温度升高，多糖得率迅速增高，而且多糖的溶解性较差，生产上通常需要沸水才能使其提取完全，因此，考虑到企业机械化生产的需要，提取温度采用100℃。
2.2.4 提取工艺的正交试验精密称取灵芝粗粉9份，每份10 g，设定提取温度为100℃，分别按表2 L9（34）正交试验因素水平表的条件进行提取，滤过，滤液定容成500 ml，取适量滤液，测定多糖的含量，计算多糖转移率。
以多糖转移率为指标，对料液比、提取时间和提取次数3个因素进行考察，以确定灵芝多糖的最佳提取条件。
多糖转移率=被提取出来的多糖量（g）/药材量（g）/药材的多糖含量（%）×100%，正交试验设计结果见表3，表4。
从表3正交试验结果可知，不同的因素水平组合对多糖提取有一定的影响，其中转移率最高为99.38%，最低为23.20%。
由表4方差分析表可知，以D因素项为误差项进行方差分析，结果C因素对结果有显著差异，A、B因素对结果影响甚微。
由直观分析可知，A、B、C 3因素对多糖转移率的影响大小为A1∶30时，多糖提取得率增高不显著；多糖提取得率随提取时间增加而增高，但提取超过2 h后，多糖提取得率呈现平缓趋势；提取温度升高，多糖提取得率也显著增高。
正交试验结果表明：西藏灵芝多糖的最佳提取工艺条件为料液比为1∶30，提取时间为2 h，提取次数为3次。
在灵芝培养基中，随着灵芝菌丝体的生长和成熟，灵芝多糖的含量逐步增加，直到开伞期达到最高值，从孢子弹射期后，含量急剧下降[15-16]。
本公司在西藏种植的3种灵芝多糖含量大小为松杉灵芝>西藏灵芝>紫芝，其中，松杉灵芝由于已完全开伞，而且几乎没有孢子粉，包子无弹射，因此多糖含量最高，而紫芝由于发育不良，菌伞没开，因此多糖含量最低，因此，在种植灵芝时，应根据不同目的，需要的是孢子粉还是灵芝多糖，其采收期也应有所不同。
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