灵芝多糖的分离与纯化
《食品工业科技》 Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ １９９８·Ｎｏ·３
灵芝多糖的分离与纯化
罗立新 姚汝华 少奇
（华南理工大学生物工程系，广州５１０６４１） Ｑ牛ｆ
行研究，采用冷、热水、冷、热碱液分别从灵芝菌丝体和子
实体中提取灵芝多糖，使多糖获得初步分级。还比较了浸提温度、加水比、浸提次数、提取时间等
因素对粗提的影响，选定了适宜的提取工艺，并选用层析法纯化了多糖，使多糖纯度达到９６％以
上。
关键词灵芝多糖分离纯化
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ
ｓｔｕｄｉｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ．Ｔｗｏ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｆｒｕｉｔ ｂｏｄｙ ａｎｄ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ
ｍｙｃｅｌｉａ ｏｆ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ Ｌｕｃｉｄｕｍ（ＧＬ）ｂｙ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｃｏｌｄ／ｈｏｔ ｗａｔｅｒ ａｎｄ ｃｏｌｄ／ｈｏｔ ａｌｋａｌｉ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ ｆａｃｔｏｒｓ，ｅ，ｇ，ｔｉｍｅ ａｎｄ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，
ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ａｄｄｉｎｇ ｗａｔｅｒ，ｅｘｔｒａｃｔ ｔｉｍｅｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ，ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｅｘ—
ｔｒａｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ，ｔｈｅ ｃｒｕｄｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗａｓ ｆｕｒｔｈｅｒ ｇｒａｄｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｃｏｌｕｍｎ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ａｓ ａ ｒｅｓｕｌｔ，ＧＬＰ ｗａｓ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｕｐ ｔＯ ９６ ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ Ｌｕｃｉｄｕｍ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
１前言 灵芝是滋补强壮、扶正固本的珍贵药品［１］，灵
芝及其多糖广泛应用在医药、食品等领域 ］，市场
需求量与日俱增。但目前灵芝多糖的生产几乎都是
从子实体中提取，灵芝野生资源稀缺，人工栽培的
周期长（２～３个月以上），占地面积大，又受季节限
制，从而影响了灵芝的充分利用；而利用深层培养
技术生产灵芝，周期短（７～ｌＯｄ左右）、成本低、产
量大，具有工业化生产前景。灵芝菌经深层培养产
生了大量的菌丝体和发酵液，它们的化学组成复
杂，种类繁多，灵芝多糖是其中的有效组分之一。选
取合适的分离纯化方法，提取灵芝多糖是本研究的
最终目的。本文对提取工艺进行了深入研究，使多
糖获得了分级分离。实验结果表明，灵芝菌丝体完
全可以取代子实体，作为灵芝多糖生产的新资源。
２材料与方法
２．１菌种与试剂
赤芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ Ｌｕｃｉｄｕｍ）ＡＳ．５．６５，由中科
院微生物研究所提供；
广东省自然科学基金资助项目（Ｂ６—１２８—２２８）
·４· 赤芝子实体，从市场购得；
ＤＥＡＥ—Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ一２５、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ一２００均为
Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司产品，其余试剂均为国产分析纯试
剂。
２．２上清液胞外多糖的提取工艺流程 发酵液 ！ 墨 透析液 上清液
沉淀物 丙酮、乙醚洗涤 Ｐ２Ｏ５干燥 胞外多糖
２．３菌丝体胞内多糖的提取口 工艺流程（见下页）
２．４粗多糖的纯化［ｄ
粗多糖经Ｓｅｖａｇ法 和蛋白酶法联合脱蛋白
后，经ＤＥＡＥ—Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ一２５（Ｃ１一型）柱层析，用
ＮａＣ１溶液进行梯度洗脱，再经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ一２００柱
层析纯化，即得纯多糖。 ２．５多糖的纯度鉴定
采用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ一２００柱层析法［６］。
２．６多糖的糖含量测定
以苯酚～硫酸法 测定多糖的总糖含量，以葡
萄糖为标准。 Ｐ Ｇ
Ｐ 维普资讯 http://www.cqvip.com ３结果与讨论 ３．１ 发酵液胞外多糖的粗提 将发酵完毕的发酵液进行离心分离 ］，上清液
在不大于９０￣Ｃ条件下浓缩，再将浓缩液置透析袋
中，流水透析直至透析液无还原糖为止，加入了３
倍体积的９５ 乙醇，５～１０’Ｃ下静置１２ｈ以上，沉
淀粗多糖，沉淀物分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤
后，真空抽干，然后置Ｐ Ｏ 干燥器中进一步干燥，
上清液 得到胞外粗多糖干品。ｌｌ发酵液可得胞外粗多糖
７６０ｍｇ，经测定其多糖含量为６９．２ ，蛋白质含量
为２０．６ 。 ３．２菌丝体胞内多糖的粗提 将离心分离得到的菌丝体在６０￣Ｃ干燥、粉碎，
每升发酵液得干菌体１５．１ｇ，再按上面介绍的方法
把胞内多糖分成水溶性、冷碱提水溶、热碱提水溶
三个组分。
（热碱提水溶多糖） 堕 查鎏 塑
３．２．１ 菌丝体水溶多糖的提取 。
３．２．１．１ 热水浸提温度的影响 分别在５Ｏ、６Ｏ、
７Ｏ、８Ｏ、９Ｏ℃五个温度下进行浸提，测定多糖含量，
结果见图１。
ＴｅｌＮ￣ｒＪｕｍ（－ｃ） 图１ 浸提温度对多糖提取的影响
从图１可看出，热水浸提温度对提取工艺有很
大的影响，５Ｏ℃浸提下的多糖得率比８Ｏ℃浸提时
低约５Ｏ ；当温度升至８Ｏ℃以上时，多糖得率的增 幅趋于平缓。而且温度过高，有可能破坏多糖的结
构。因此，采用８Ｏ～９０℃作为热水浸提温度。
３．２．１．２浸提加水比的影响分别在１Ｏ、２Ｏ、３Ｏ、
４Ｏ、５Ｏ等加水比下进行浸提，然后测定多糖的含 量，结果见图２。
从图２中看出，加水比是影响浸提的另一重要
因素，加水比从１０：１增至４０：１时，多糖浸提几 乎达到完全。再增大加水比，对多糖的浸出无明显
提高，反而会增加下一步浓缩工艺的负担，因此，选
用４０：１的加水比较合理。
图２加水比对多糖提取的影响
３．２．１．３提取时间的影响 不同提取时间下提取
液的多糖含量见表１。
表１提取时间对多糖溶出的影响
提取时间（ｈ） １ １．５ ２．０ ２．５ ３．０ 多糖含量（ｍｇ） ２９０ ２８５ ２７８ ２７０ ２６４ 相对提取率（ ） １００ ９８．３ ９５．７ ９２．９ ９０．９
从表１可知，提取１ｈ即可将菌丝体中的多糖
提取较完全。时间太长，可能引起糖结构的变化和
破坏，甚至使其中的五碳环或六碳环裂解，导致多
糖的含量下降。因此，提取时间采用１ｈ。
·５· 维普资讯 http://www.cqvip.com ３．２．１．４提取次数的影响 １５．１ｇ菌体匀浆后
用６００ｍｌ水分别提取４次，提取液浓缩至２５０ｍｌ，
测其多糖含量，结果见表２。
表２ 菌丝体水溶多糖四次提取的结果
提取次序 多糖含量（ｍｇ） 提取率（ ） １ ２９６ ８４．５ ２ ４１ １１．６ ３ １２ ３．４ ４ ２ ０．５
从表２可见，第一次提取得列８５ 左右的糖，
两次提取共得９５ 以上的糖，以后的实验中将采
用二次提取。
３．２．１．５ 乙醇浓度的影响 不同乙醇浓度下，提
取液的多糖含量如表３。从表３可看出。９５ 的乙
醇沉淀多糖，提取完夺 以后采用９５ 乙醇浓度来
沉淀多糖。
表３ 不同乙醇浓度沉淀多糖的结果
乙醇浓度（ ） 多糖含量（ｒａｇ） 提取牢（ ） ６０ ２８６ ８１．７ ７５ ３０２ ８６．３ ８Ｏ ３０９ ８８．４ ９５ ３５０ １ｏ０
综合上述因素，菌丝体水溶性多糖的提取工艺
如下：菌丝体干燥、粉碎后，在８Ｏ～９０ Ｃ水浴中水
煮抽提２次，每次１ｈ，浓缩后，取上清液，透析，加
入３倍体积９５ 乙醇沉淀，干燥即得粗多糖，１１发
酵液可得菌丝体１５．１ｇ，水溶粗多糖５２０ｍｇ，其多
糖含量为６７．３ ，蛋白质含量为１９．５ ，粗多糖得
率为３．４４ｇ／１００ｇ干菌体。
３．２．２菌丝体中冷碱提水溶多糖的提取 提取水溶性多糖后剩下的残渣，再用不同浓度
的碱，在２５℃常温下提取两次，每次１ｈ，用９５％乙
醇沉淀，测定其多糖含量，结果见表４。从表４可
见，选用０．５ＭＮａＯＨ作为溶剂，效果较好，冷碱提
水溶多糖１８０ｍｇ，其多糖含量为６８．９ ，蛋白质含
量为１８．２％，粗多糖得率为１．１９ｇ／１００ｇ千菌体。
３．２．３菌丝体中热碱提水溶多糖的提取
将冷碱提取后剩下的残渣，再用不同浓度的碱
在６５ Ｃ下提取两次，每次１ｈ，然后用９５ 乙醇沉
淀，测定其多糖含量，结果见表５。
表４冷碱提取多糖的结果
ＮａＨＣＯ３ ＮａＯＨ 提取剂 ０．１Ｍ ｒ０．５ＭＩ１．０Ｍ ０．１ＭＩｏ．５Ｍ Ｊ１．０Ｍ 多糖含量（ｍｇ） ３４ ｌ １１３ ｌ １０４ ３７｛１２４ ｌ １０６ 相对提取率（ ） ２７ ４ｌ ９１ ｌ；ｇ３．９ ２９．８ｌ １００ Ｉ ８５．５
·６· 表５热碱提取多糖的结果
ＮａＨＣＯ ３ ＮａＯＨ 提取剂 ０１Ｍ［０．５Ｍ［１．０Ｍ ０．１Ｍ［０．５Ｍ［１．０Ｍ 多糖含量（ｍｇ） ２８ ｌ ７７ ｌ ６９ ３２『８２ ｌ ７１ 相对提取率（ ） ３４．２１ ９３．９１ ８４．２ ３９．０Ｉ １００ Ｉ ８６．６
从表５得知，选用０．５Ｍ ＮａＯＨ作为溶剂，效
果最好。热碱提水溶多糖１２５ｒａｇ，其多糖含量为
６５．６ ，蛋白质含量为１ ７．４ ，粗多糖得率为
０．８３ｇ／１００ｇ干菌体。
３．３粗多糖的纯化
将粗多糖样品溶于热水，按Ｓｅｖａｇ法用丁醇：
氯仿：１：４混合振摇，脱去蛋白质，反复操作多
次，直至丁醇氯仿层不浑浊为止。菌丝体和发酵液
多糖脱蛋白较容易，不需蛋白酶处理，直接用Ｓｅ—
ｖａｇ法就可以基本除去杂蛋白；而子实体多糖中所
含蛋白较多，需先用蛋白酶处理，再用Ｓｅｖａｇ法除
蛋白。
除去杂蛋白的粗多糖，称取１ｇ，溶于大约１０ｍｌ ０．１ｍｏｌ／１ ＮａＣ１中，加入ＤＥＡＥ—Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ ２５层
析柱（２．５×２０ｃｍ）内，层析柱预先用０．１ｍｏｌ／１ Ｎａ—
ｃ１平衡，上样后先用０．１ｍｏｌ／１ ＮａＣ１洗至无糖检出
为止，然后采用梯度洗脱，即用５００ｍｌ ３．９ｔｏｏｌ／１
ＮａＣ１对５００ｍｌ ０．１ｍｏｌ／１ ＮａＣ１进行洗脱，分部收
集，每管收集８ｍｌ，流速１．７０ｍｌ／ｍｉｎ，用苯酚一硫
酸法跟踪检测，结见图３。合并含糖部分，透析除去
氯化钠，浓缩至最小体积，加入３倍量乙醇，经无水乙
醇、丙酮、乙醚洗涤，真空干燥，得到灰白色粉未。
图３多糖的ＤＥＡＥ—Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ一２５柱层析
取样品５０ｒａｇ溶于最小体积的０．１ｍｏｌ／１ ＮａＣ１
中，加样于Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ一２００层析柱（２．０×２０ｃｍ），
用０．１ｍｏｌ／１ ＮａＣ１液洗脱，流速１０ｍｌ／ｈ，每管收集
５ｍｌ，测定含糖部分，合并相同峰，经透析，乙醇沉
淀，丙酮、乙醚洗涤，真空干燥，得到白色的多糖纯
品，见图４。
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《灵芝孢子壳聚糖分离纯化及应用的研究》
《灵芝孢子壳聚糖分离纯化及应用的研究》
摘要：
本文以灵芝孢子壳聚糖为研究对象，详细介绍了其分离纯化的方法、纯化后的性质及其在各个领域的应用。通过对灵芝孢子壳聚糖的深入研究，为灵芝资源的综合利用提供了新的思路和方法。
一、引言
灵芝作为一种珍贵的中药材，具有广泛的药理作用和保健功能。灵芝孢子壳聚糖作为灵芝的主要成分之一，具有优良的生物相容性和生物活性，被广泛应用于医药、保健、食品等领域。然而，由于灵芝孢子壳聚糖的分离纯化技术难度较大，其应用受到了一定的限制。因此，本文旨在研究灵芝孢子壳聚糖的分离纯化方法及其应用，为灵芝资源的综合利用提供新的思路和方法。
二、灵芝孢子壳聚糖的分离纯化
2.1 原料准备
选用优质的灵芝孢子为原料，经过清洗、干燥、粉碎等预处理，得到灵芝孢子粉末。
2.2 提取
将灵芝孢子粉末加入适量的溶剂中，进行提取。常用的溶剂有水、乙醇、丙酮等。提取过程中需控制温度、时间、溶剂浓度等参数，以保证提取效果。 2.3 分离纯化
提取液经过浓缩、沉淀、离心等步骤，得到灵芝孢子壳聚糖的粗品。然后采用透析、凝胶过滤、离子交换等技术进行分离纯化，得到纯度较高的灵芝孢子壳聚糖。
三、灵芝孢子壳聚糖的性质
经过分离纯化的灵芝孢子壳聚糖具有较高的纯度和良好的生物相容性。其分子量分布较窄，具有较好的溶解性和稳定性。此外，灵芝孢子壳聚糖还具有优良的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。
四、灵芝孢子壳聚糖的应用
4.1 医药领域
灵芝孢子壳聚糖在医药领域具有广泛的应用。它可以用于制备药品、保健品等。其生物相容性和生物活性使其在抗肿瘤、抗炎、抗氧化等方面具有较好的疗效。
4.2 保健食品领域
灵芝孢子壳聚糖可以用于制备保健食品，如营养补充剂、功能性食品等。其优良的生物活性和营养价值使其在提高人体免疫力、延缓衰老等方面具有较好的作用。
4.3 化妆品领域
灵芝孢子壳聚糖还可以用于制备化妆品，如面膜、精华液等。其良好的保湿性、抗氧化性和生物相容性使其在护肤、美容等方面具有较好的效果。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析
一、多糖的提取方法
（一）溶剂提取法
1、水提法
水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.
2、酸碱提法
有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法
超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.
（二）生物酶提取法
酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法
超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取
微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能
细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化
（一）多糖的分离
灵芝多糖研究实验报告
灵芝多糖研究实验报告
灵芝多糖研究实验报告
实验目的：
1. 测定灵芝多糖的含量；
2. 研究灵芝多糖对人体免疫功能的影响。
实验材料：
1. 灵芝提取物；
2. 高效液相色谱仪；
3. 免疫功能检测试剂盒；
4. 实验动物，如小鼠。
实验步骤：
1. 提取灵芝多糖：取一定量的灵芝样品，加入适量的水，用超声波浸泡2小时，过滤获得灵芝提取液；
2. 测定灵芝多糖含量：用高效液相色谱仪测定灵芝提取液中多糖的含量；
3. 灵芝多糖对人体免疫功能的影响：将实验动物分为实验组和对照组，实验组给予灵芝多糖，对照组不给予。观察两组动物的免疫功能指标，如白细胞计数、淋巴细胞活性等。
实验结果：
1. 测定灵芝多糖含量：灵芝提取液中多糖的含量为X g/L（样品浓度）。
2. 灵芝多糖对人体免疫功能的影响：实验组动物的白细胞计数为X（单位），对照组动物的白细胞计数为X（单位）。实验组动物的淋巴细胞活性为X（单位），对照组动物的淋巴细胞活性为X（单位）。
结论：
1. 灵芝中含有一定量的多糖，通过高效液相色谱仪可以测定其含量；
2. 灵芝多糖可以提高人体免疫功能，表现为增加白细胞计数和提高淋巴细胞活性。
讨论：
本实验结果表明灵芝多糖对人体免疫功能具有一定的影响，但还需要进一步研究来确定具体的机制和效应。此外，本实验只使用了动物作为实验对象，将来还可以考虑人体试验的进行，以进一步验证实验结果。此外，对于灵芝样品的提取方法，还可以考虑使用其他技术来进行提取，以提高多糖的得率和提取效果。
感想：
通过本次实验，我对灵芝多糖的研究有了更深入的了解。灵芝多糖作为一种天然产物，具有重要的药用价值。通过研究其免疫功能，可以为人类的免疫调节和疾病治疗提供有益的启示。希望未来能有更多的研究报道，以推动灵芝多糖的应用和发展。
多糖提取工艺流程
第一部分：野生灵芝菌种的分离、扶壮、保藏和培养
前言
采集吉林长白山野生灵芝，经过菌种分离，鉴定为GANODERMA（英文名称）多孔菌科真菌赤芝 Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.) Karst．的菌种。经过纯化扶壮培养，成为一支优良的灵芝菌种，为灵芝菌丝体发酵培养和灵芝多糖的提取奠定了基础。
实验室流程：（百级净化超净工作台)菌种分离菌种接种
（恒温培养箱）菌种培养扶壮
（恒温恒湿冷藏柜）优良菌种保藏 （百级净化超净工作台)菌种分离菌种接种 （摇床）发酵菌种摇瓶培养（用于接种菌种罐）
第二部分：灵芝菌丝体液体发酵培养
前言
液体发酵培养不同于灵芝子实体栽培，周期短，产量高，无污染，灵芝多糖含量高，节省木材和耕地。是一种灵芝多糖理想的工厂化现代科技生产方式。经过摇瓶培养的灵芝菌种接种于种子罐，待生长良好，在接种于扩大的发酵罐中，通过通气恒温培养，长成成年灵芝菌丝体，生长完全后，进行离心分离喷雾干燥，就得到相当于灵芝子实体的灵芝菌丝体粉，多糖含量达到15%左右。进一步提取加工得到高含量的灵芝多糖。
灵芝菌丝体发酵工艺流程:（配料罐）培养液的配制 （菌种罐）菌种的发酵培养
（发酵罐）灵芝菌丝体发酵培养 （离心机）灵芝菌丝体固液分离
（浓缩液配制罐)灵芝菌丝体配制成浓缩液 （喷雾干燥塔）浓缩液喷雾干燥，得到灵芝菌丝体粉
第三部分：灵芝菌丝体多糖的提取分离
前言
灵芝菌丝体粉，是大部分不溶解于水，食用以后象灵芝子实体一样，只有少部分成分被吸收，通过现代提取手段，将灵芝菌丝体经过提取罐的水提取，经过真空浓缩，在经过醇沉工艺，加工成可以全部被人体吸收，灵芝多糖含量提高到30-40%灵芝菌丝体提取物。极大的提高了功效，减少了服用量。
灵芝多糖的研究进展
1 灵芝多糖的研究进展
摘要：灵芝多糖(GLP)是灵芝中的一种重要活性成分，具有很大的开发利用价值，近年来以其独特的保健功能成为研究的热点。灵芝的菌种筛选，发酵培养基组成和特点，发酵工艺和条件控制，以及灵芝多糖的提取、精制和纯化方法等，各个生产工艺对其含量和活性影响很大。已有实验证实，灵芝多糖的生物保健功能体现在降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、调节免疫以及活血化瘀等多方面。本文综述了目前在灵芝菌种筛选、发酵培养、提取分离纯化和医疗保健方面的研究情况,并对灵芝多糖的发展利用前景做了展望。
关键词：灵芝多糖；发酵；提取；纯化
Studies on Polysaccharides from Ganoderma lucidum
Liu Lili (Major of processing and storage of aquatic products , Class 3,Grade
2011)
Instructor Professor Wu Hongmian
(Institute of Food Science and Technology, Guangdong Ocean University,
Zhanjiang ,Guangdong,524088)
Abstract: Ganoderma lucidum polysaccharides (GLP) is one of the important active ingredient
of ganoderma lucidum with a great development and utilization value, in recent years, with its
unique health care function, it has became the research focus. The strains filtration of ganoderma
灵芝多糖
灵芝多糖
【导读】灵芝多糖是灵芝所含有的一种物质，目前已分离到的有200多种，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。灵芝多糖在国外亦在进行广泛、深入研究，同时人们发现灵芝多糖有很重要的药用价值。那么本文就为大家详细介绍灵芝多糖。
灵芝多糖是灵芝所含有的一种物质，目前已分离到的有200多种，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。灵芝多糖在国外亦在进行广泛、深入研究，同时人们发现灵芝多糖有很重要的药用价值。
灵芝多糖是灵芝的最有效成分之一，因此，也特别受到医学界重视，对它的研究报道也最多。已分离到的灵芝多糖有 200 多种，其中有数十种的结构已得出研究成果，分子量已被测定。
灵芝多糖有多方面的药理活性 : 能提高机体免疫力，加速血液微循环，提高血液供氧能力，降低机体静止状态下的无效耗氧量，消除体内自由基，提高机体细胞膜的封闭度，抗放射，提高肝脏、骨髓、血液合成 DNA,RNA，蛋白质的能力，延长寿命等。灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关。
灵芝多糖的作用
灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关，而灵芝多糖的作用很多，我们具体来看一下。
1、 能提高机体免疫力，加速血液微循环，提高血液供氧能力，降低机体静止状态下的无效耗氧量，消除体内自由基，提高机体细胞膜的封闭度，抗放射，提高肝脏、骨髓、血液合成 DNA,RNA，蛋白质的能力，延长寿命等。
2、对心血管疾病、气喘、过敏、神经衰弱、胃热等有显著效果。
3、具有降血压、降血脂、解血瘀、改善血液循环、皮肤美容等作用。
灵芝多糖胶囊价格
灵芝多糖胶囊含有人体所需的多种微量元素和氨基酸，具有防癌、解毒、美容养颜、降低胆固醇和防止糖尿病等作用。那么，作为一种珍贵的营养保健品，灵芝多糖胶囊的价格是多少呢？
下面妈网为大家介绍一下各大品牌的灵芝多糖胶囊价格：
灵芝多糖的研究现状
安徽农业科学，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｈｕｉ Ａｇｒｉ．Ｓｃｉ．２００８，３６（２０）：８６５１—８６５２，８７３９ 责任编辑李菲菲责任校对卢瑶
灵芝多糖的研究现状
杨占涛，刘超，李月，黄平，徐永航（山东大学威海分校海洋学院，山东威海２６４２ｏ９）
摘要灵芝多糖是从灵芝属灵芝中提取的多糖物质，是目前最有开发前途的药品资源之一。综述了灵芝多糖的提取、分离纯化、结构分
析、生物活性等方面的研究现状，并展望了灵芝多糖的发展前景。
关键词灵芝多糖；提取；分离纯化；结构分析；生物活性
中图分类号￥５６７．３ １ 文献标识码Ａ 文章编号０５１７—６６１１（２００８）２０—０８６５１—０２
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｔａｔｕｓ ｏｆ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ Ｌｕｃｉｄｕｍ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
ＹＡＮＧ Ｚｈａｎ—ｔａｏ ｅｔ ａｌ （Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｏｃｅａｎｏｌｏｇｙ，Ｗｅｉｈａｉ Ｂｒａｎｅｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｉｈａｉ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ
２６４２（）９１
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕａｉｄｕｍ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ＧＬＰ）ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ｛ｈｅ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ ａｎｄ ｗａｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｐｈａｒｍａ—
ｅｅｕｔｉｅａｌ ｒｅＳＯｕｒｃｅｓ．．ｒ｝ｌｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｓｔａｔｕｓ ｏｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＧＬＰ ｗｅｒｅ ｏｕｔｌｉｎｅｄ
ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｆｏｒｃａｓｔｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ．
灵芝多糖的提取
近年来，药理学和免疫学的多方研究表明，灵芝多糖芝扶正固本最有效的成分之一，具有广泛的药理活性，排毒、抗放射，提高肝脏、骨髓合成dna、bna的能力，抗肿瘤增强机体免疫等效果。因此多糖的提取为广大科研人员药研制者所重视，他们不断研究和探索灵芝多糖提取的方为弄清灵芝多糖的化学成分提供有力的理论依据，同时为许多疾病患者带来福音。
一、灵芝茵丝体多糖的提取
（一）材料
1.菌种：湖南省食用菌研究所提供的韩国灵芝母种。
2.种子培养基：玉米粉2％ 大米粉2％
蔗糖2％ 磷酸二氢钾o.1g
硫酸镁0.05％ ph值自然
3.发酵培养基：麦麸浸出液10％ 葡萄糖2％
硫酸铵0.2％
磷酸二氢钾0.2％ ph值自然
（二）方法
1.种子培养：
2.发酵培养生产菌丝体。
3.测定干、湿菌丝体。
将发酵液进行离心，然后取其沉淀物，加人60％蔗糖，进行高速（3000转／分）密度梯度离心5分钟，取上层菌丝体，洗净蔗糖再压干，即得湿菌体，然后再将湿菌体于高温下烘干即为干菌体。分别称取其重量。
4.多糖的提取。
（1）菌丝体预处理。取适量的灵芝湿菌体，用乙醇等有机溶剂进行处理，以除去湿菌体中的脂类物质，同时使糖苷酶失去活性，防止多糖的降解。
（2）用热水提取多糖。取上面经预处理的灵芝湿菌体，放人1：20的热水（95℃）中浸提，一次3小时，连续浸提3次，合并3次的水浸提液减压、浓缩至一定体积，再用3倍体积的95％乙醇混合，静置10－12小时，再离心，最后加入75％的乙醇反复洗涤，以沉淀多糖。此沉淀物为粗多糖，其中混杂有蛋白质、色素、低聚糖等小分子杂质，一般要经过纯化。 （3）多糖的纯化，去蛋白质和deae纤维素柱层析。去蛋白质一般采用sevag法：加入0.2倍多糖溶液体积的氯仿和0.04倍体积的正丁醇混合振荡半小时进行分离，直至氯仿与水的界面无沉淀为止，且要重复处理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白质。多糖纯化一般采用硼酸型deae纤维素柱层析法：取脱蛋白后的多糖，分别以0.025mol／l、0.1mol/l的硼砂，0.1mol/l的氢氧化钠溶液进行洗脱，然后用0.2％恿铜硫酸液比色测定吸收度，收集有多糖的洗脱液，再浓缩脱盐即得所需的多糖。
灵芝菌发酵培养基的优化及灵芝胞外多糖的分离纯化
灵芝是我国古代劳动人民用之已久的一类珍贵的药
用真菌，具有补中、固肾、补肺、止血的功用，对多种慢性
病有一定疗效。灵芝多糖对肉瘤Ｓｌｓｏ，肿瘤ＡＨ—Ｂ，埃利希
氏腹水瘤及腺瘤具有明显的抑制活性，并能迅速恢复和 提高机体免疫能力，治疗爱滋病的报道更引人瞩目，掀起
了一场“灵芝研究热”口１。
灵芝及其多糖广泛应用在医药、食品等领域，市场需
求量与日俱增，但目前灵芝多糖的生产几乎都是从子实 体中提取，灵芝野生资源缺乏，人工栽培的周期长（２－３
个月以上），占地面积大，又受季节限制，从而影响了灵芝
的充分利用，而利用深层培养技术生产灵芝，周期短（７— １０ ｄ）、成本低、产量大，具有工业化的生产前景。选取合
适的培养基、适当的分离纯化方法，提取灵芝多糖是本研
究的最终目的。我们对发酵培养基优化及灵芝多糖提取 的工艺进行了深入研究，不仅多糖获得了分级分离，而且 对多糖组成成分也进行了分析。
１灵芝培养基的优化 １．１菌株
菌株：紫芝Ｇ９卵由中国食品发酵工业研究院提供
１．２最优化培养基的筛选 将保存的菌种从４℃的冰箱中取出，在２８ ｃＩ＝下活 化，然后在无菌操作台上用接种针将母种接至ＰＤＡ培养
基上，置于培养箱中（２８℃以下）培养１周。然后将其接 维普资讯 顾 寸 ＿ 般 拍 顾 ｒ＿ 茸ＩＩ｝ 时 ０ ０ 灵芝茵发酵培养基的优化及灵芝胞外多糖的分离纯化 ＰｌＮ ＹＵ ＦＡ ＪＩＡＯ
种至种子培养基中，放置于摇床上（２８ ｏＣ，１２０ ｒ／ｍｉｎ）发酵 １周。下摇床后，将种子接到正交实验培养基中发酵１周
（见表１）。 表１ 正交实验优化培养基
接种熏：８毫升／瓶；摇床转速：１２０ ｒ／ｒａｉｎ；温度．２８ ｏＣ；其余成分： ＫＨ２ＰＯ，０．１％，Ｖｉｔ Ｂｌ ０．００５％，ＭｇＳＯ４‘７Ｈ２Ｏ ０．０５％。
将１周后的发酵液离心（２０。【＝，３ ０００ ｒ／ｍｉｎ）１０ ｒａｉｎ， 离心后的上清液在水浴锅中浓缩（６Ｏ℃），浓缩液中加入 等体积８５％３２业酒精沉淀，放置于冰箱中过夜。然后将浓
灵芝多糖 2
灵芝多糖
灵芝多糖(Ganoderma lucidum Polysaccharide)目前已分离到的有200多种，其中大部分为β –葡聚糖，少数为α –葡聚糖，多糖链由三股单糖链构成，是一种螺旋状立体构形物，其立体构形和DNA、RNA相似，螺旋层之间主要以氢键固定，分子量从数百到数十万，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。
目录1详细介绍▪ 灵芝多糖的医疗保健价值
▪ 灵芝多糖的功效
2灵芝多糖提取▪ 灵芝菌丝体多糖的提取
▪ 灵芝子实体多糖的提取
3医疗保健价值4特性5赤芝多糖6灵芝多糖质量参数概述
灵芝多糖灵芝多糖大多为异多糖，即除含有葡萄糖外，大多还含有少量阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖等其他单糖。灵芝多糖在国外亦在进行广泛、深入研究。
拉丁学名：Ganoderma lucidum (Leyss.: Fr.) Karst.
使用部位：子实体
规格：灵芝多糖10%-50%
性 温 ，味 淡。归心、肺经。
1详细介绍编辑
灵芝多糖灵芝多糖是由三股单糖链构成的、具有螺旋状立体构形 (三级结构) 的葡聚糖，其立体构形与脱氧核糖核酸 (DNA) 、核糖核酸 (RNA) 相似，是一种大分子化合物，其分子量从数千到数十万，它是一种从灵芝孢子粉或灵芝中提取的物质。不溶于高浓度的酒精，微溶于低浓度的酒精及冷水，在热水中能全部溶解。灵芝多糖都存在于灵芝的细胞壁内壁。灵芝多糖中除含有葡萄糖外，大多还含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖、鼠李糖等单糖，但含量较少。单糖间糖苷键连接有 1,3、 1,4 和 1,6 数种。大多为β型结构，少数为α -型结构。α -型多糖没有药理活性(药效)。多数多糖链有分支，部分多糖链含有小分子肤链。多糖链分枝密度高或含有肤链的其药理活性也高。灵芝多糖在水溶液中多糖链一般由三股糖链组成，在 o. 1 摩 / 升氢氧化纳溶液中时多糖链的三股糖链离解为单股单糖链。