咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型的组织学及免疫学特征初步探究
氢分子对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的抑制作用
生物技术进展 2023 年 第 13 卷 第 6 期 945 ~ 953Current Biotechnology ISSN 2095‑2341研究论文Articles氢分子对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的抑制作用朱钧锴1 ， 葛玲智2 ， 张超2 ， 曹璨2 ， 吴嘉惠2 ， 穆震2*1.泰安八十八医院皮肤科，山东 泰安 271000；2.山东第一医科大学第二附属医院皮肤科，山东 泰安 271000摘 要：氢分子是一种新型的气体信号分子，对多种炎症疾病有一定的作用效果。
银屑病是一种慢性炎症性疾病，氢分子有望作为银屑病辅助治疗的新手段。
连续7 d 使用5%咪喹莫特（imiquimod, IMQ ）乳膏诱导小鼠银屑病模型，期间每天2次、每次2 h 将小鼠置于35%的氢分子环境中进行干预。
每天观察小鼠皮损变化并进行银屑病面积和严重程度指数（psoriasis area and severity index, PASI ）评分；第8天，处死小鼠取皮损，苏木精-伊红（hematoxylin -eosin ，HE ）染色并使用Baker 评分评估组织病理学损害程度；免疫组化检测皮损中炎症因子IL -6、TNF -α和IFN -γ的表达；实时荧光定量PCR （real -time quantitative fluorescent polymerase chain reaction, RT -qPCR ）和蛋白免疫印迹检测皮损中炎症因子IL -6、TNF -α和IFN -γ的相对mRNA 水平和蛋白水平的表达；用试剂盒检测皮损组织中氧化指标丙二醛（malondialdehyde, MDA ）含量和抗氧化相关的过氧化氢酶（catalase, CAT ）活力。
结果显示，氢分子干预降低了IMQ 诱导小鼠的PASI 评分（P <0.05）和Baker 评分（P <0.001），改善了组织的病理学变化；氢分子干预组小鼠皮损组织中IL -6、TNF -α和IFN -γ的mRNA 及蛋白表达水平均下降，MDA 的含量下降，CAT 的活力增加（P <0.05）。
咪喹莫特诱导银屑病模型小鼠T细胞免疫功能改变与性别的关系
咪喹莫特诱导银屑病模型小鼠T细胞免疫功能改变与性别的关系杨梅;唐彩红;桂雨晴;陈镜宇;魏伟【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2022(38)4【摘要】目的研究咪喹莫特诱导银屑病模型小鼠T细胞免疫功能改变及角质细胞损伤与性别的关系。
方法将IMQ诱导的银屑病小鼠随机分为雌、雄模型组,设雌、雄正常组涂抹等量凡士林。
银屑病皮损面积和严重程度(psoriasis area and severity index,PASI)评分评价皮损病变程度;HE染色观察皮损皮肤病理变化;Western blot和免疫荧光检测皮损皮肤增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Ki67、角蛋白1(keratin 1,K1)、角蛋白10(keratin 10,K10)及involucrin蛋白水平;计算脾脏指数;免疫组化检测皮损皮肤和脾脏中CD4、IFN-γ、IL-4以及IL-17的表达;流式细胞术检测脾脏中Th1、Th17细胞亚群变化。
结果与雌、雄正常组相比,雌、雄模型组PASI评分增加,皮损皮肤异常增厚与分化,PCNA、Ki67增加,K1、K10及involucrin减少,脾脏指数增大,皮损皮肤及脾脏中CD4、IFN-γ、IL-17水平升高,IL-4的水平降低,脾脏中Th1以及Th17细胞亚群增加。
而雌、雄模结论性别对IMQ诱导的银屑病样小鼠T细胞免疫功能的异常活化及角质细胞的增殖、分化没有影响。
【总页数】9页(P589-597)【作者】杨梅;唐彩红;桂雨晴;陈镜宇;魏伟【作者单位】安徽医科大学临床药理研究所【正文语种】中文【中图分类】R-332;R322.991【相关文献】1.树突状细胞在咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型中的表达及凉血解毒方的干预作用2.他克莫司通过抑制Th17治疗咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型3.养阴凉血中药对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损模型Th相关细胞因子的影响4.性别对咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型建立的影响5.抑制树突细胞MMP-13基因对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样炎症模型的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
化斑解毒方对咪喹莫特诱导银屑病样皮炎小鼠模型抗炎机制探究
环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July 2023,Vol.16,No.71317 ㊃基础研究㊃基金项目:北京市自然科学基金(7192116);北京中医药大学校级课题-李元文名师工作坊;北京市中医管理局课题-中医药继续教育导航工程-继教专委会建设及精品课程制作;北京中医药大学2020年新教师启动基金(2020⁃JYB⁃XJSJJ⁃044);北京中医药大学横向科研项目(HX202119)作者单位:100078 北京中医药大学东方医院皮肤科[于心荟(硕士研究生)㊁李元文㊁任雪雯(博士研究生)㊁邓宇童(博士研究生)㊁王莹(博士研究生)];北京中医药大学东直门医院皮肤科(冯蕙裳);江阴江天药业有限公司(王化龙㊁刘晓东)作者简介:于心荟(1998-),2021级在读硕士研究生㊂研究方向:中医皮肤性病学㊂E⁃mail:yuxinhui9898@通信作者:冯蕙裳(1992-),硕士,住院医师㊂研究方向:中医皮肤病学㊂E⁃mail:fhs1116@化斑解毒方对咪喹莫特诱导银屑病样皮炎小鼠模型抗炎机制探究于心荟 李元文 任雪雯 邓宇童 王莹 王化龙 刘晓东 冯蕙裳【摘要】 目的 观察化斑解毒方对咪喹莫特诱导银屑病样皮炎小鼠模型的抗炎作用㊂方法 采用咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮炎,以随机数字表法将60只小鼠随机分为空白组㊁模型组㊁化斑解毒方低㊁中㊁高剂量组及甲氨蝶呤组,每组10只㊂观察各组小鼠银屑病皮损严重程度指数(psoriasis area and severity index,PASI)评分,苏木素 伊红染色观察组织病理学变化,酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子⁃α(tumor necrosis factor⁃α,TNF⁃α)㊁干扰素⁃γ(interferon⁃γ,IFN⁃γ)㊁白细胞介素⁃23(interleukin⁃23,IL⁃23)㊁白细胞介素⁃1β(interleukin⁃1β,IL⁃1β)表达水平,蛋白免疫印迹法测定核转录因子⁃κB(nuclear factor⁃κB,NF⁃κB)水平㊂结果 (1)模型组与空白组PASI 评分具有统计学差异(P <0.05),各药物组PASI 评分较模型组均降低,差异有统计学意义(P <0.05);(2)模型组TNF⁃α㊁IFN⁃γ㊁IL⁃1β㊁IL⁃23表达水平较空白组显著升高(P <0.05);与模型组相比,各药物组TNF⁃α㊁IFN⁃γ㊁IL⁃1β表达水平显著降低(P <0.05),甲氨蝶呤组㊁化斑解毒方中㊁高剂量组IL⁃23水平显著降低(P <0.05);化斑解毒方低剂量组IL⁃23表达水平与模型组无显著差异(P >0.05);(3)与空白组相比,模型组NF⁃кB 表达水平显著升高(P <0.05);各用药组NF⁃κB 表达水平较模型组显著降低(P <0.05);化斑解毒方各剂量组NF⁃кB 表达水平与甲氨蝶呤组相比无显著差异(P >0.05)㊂结论 化斑解毒方可以明显改善银屑病样皮损症状及病理学改变,并通过调节细胞炎性因子表达改善炎症㊂【关键词】 化斑解毒方; 银屑病; 核转录因子⁃κB; 肿瘤坏死因子⁃α; 干扰素⁃γ; 白细胞介素⁃23; 白细胞介素⁃1β【中图分类号】 R285.5 【文献标识码】 A doi:10.3969/j.issn.1674⁃1749.2023.07.006Study on the anti⁃inflammatory mechanism of Huaban Jiedu Decoction on imiquimod induced psoriasis⁃like dermatitis in miceYU Xinhui ,LI Yuanwen ,REN Xuewen ,DENG Yutong ,WANG Ying ,WANG Hualong ,LIU Xiaodong ,FENG HuichangDongfang Hospital Beijing University of Chinese Medicine ,Beijing 100078,China Corresponding author :FENG Huichang ,E⁃mail :fhs1116@【Abstract 】 Objective To study the anti⁃inflammatory effects of different concentrations of HuabanJiedu Decoction on imiquimod induced psoriasis⁃like dermatitis in mice.Methods Psoriasis⁃likedermatitis was induced by imiquimod.Sixty mice were randomly divided into blank group,model group,low dose group,medium dose group,high dose group and methotrexate group with 10mice in each group.1318 环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July2023,Vol.16,No.7 To observe the psoriasis area and severity index(PASI)and histopathological changes by HE staining.The expression levels of tumor necrosis factor⁃α(TNF⁃α),interferon⁃γ(IFN⁃γ),interleukin⁃23(IL⁃23)and interleukin⁃1β(IL⁃1β)in mice skin tissue homogenates were detected by ELISA.The expression level ofnuclear factor⁃κB(NF⁃κB)was measured by Western blotting assay.Results (1)The PASI scores ofthe model group and the blank group were statistically different(P<0.05).Compared with the modelgroup,the PASI score of each drugged group was lower,and the difference was statistically significant(P<0.05).(2)Compared with the blank group,the expression levels of TNF⁃α,IFN⁃γ,IL⁃1β,IL⁃23inthe model group were significantly increased(P<0.05).Compared with the model group,the expressionlevels of TNF⁃α,IFN⁃γand IL⁃1βin each drug group were significantly decreased(P<0.05),and thelevel of IL⁃23in the methotrexate group and the Huaban Jiedu Decoction medium and high dose groups were significantly decreased(P<0.05).There was no significant difference in the expression level of IL⁃23between the Huaban Jiedu Decoction low dose group and the model group(P>0.05).(3)Compared withthe blank group,the expression levels of NF⁃κB in the model group was significantly increased(P<0.05).The expression level of NF⁃κB in each drugged group was significantly lower than that in the model group(P<0.05).There was no significant difference in the expression level of NF⁃кB between every HuabanJiedu Decoction group and the methotrexate group(P>0.05).Conclusion Huaban Jiedu Decoction can significantly improve the symptoms and pathological changes of psoriasis⁃like skin lesions,and improve in⁃flammation by regulating the expression of inflammatory cytokines.【Key words】 Huaban Jiedu Decoction; Psoriasis; Nuclear factor⁃κB; Tumor necrosis factor⁃α; Interferon⁃γ; Interleukin⁃23; Interleukin⁃1β 银屑病是一种常见的慢性炎症性复发性皮肤疾病,临床表现主要是鳞屑性红斑或斑块,世界范围内发病率约1%~3%[1]㊂免疫异常被视为银屑病发病的重要环节,免疫细胞激活后产生多种炎症细胞因子,促进细胞增殖角化及炎症细胞浸润,导致银屑病的发生发展㊂化斑解毒方是李元文教授通过前期数据挖掘结合多年的临床经验与理论探索总结出的中药方剂[2],临床应用于寻常型银屑病血热证患者具有确切疗效,能够有效减轻患者皮肤炎症反应,但其治疗银屑病的作用机制尚不明确㊂本研究拟通过测定不同浓度的化斑解毒方对咪喹莫特诱导银屑病样皮炎小鼠肿瘤坏死因子⁃α(tumor necrosis factor⁃α,TNF⁃α)㊁干扰素⁃γ(interferon⁃γ, IFN⁃γ)㊁白细胞介素⁃23(interleukin⁃23,IL⁃23)㊁白细胞介素⁃1β(interleukin⁃1β,IL⁃1β)㊁核转录因子⁃κB (nuclear factor⁃κB,NF⁃κB)表达水平的影响,探究其治疗银屑病的抗炎作用,并为化斑解毒方的临床应用提供理论依据㊂1 材料与方法1.1 实验动物SPF级雄性BALB/c小鼠60只,8周龄,体质量约20g,购于斯贝福(北京)生物技术有限公司,动物质量合格证号:110324221101061643;实验动物生产许可证号:SCKX(京)2019⁃0010㊂小鼠于北京中医药大学动物房适应性喂养1周后开始实验㊂1.2 实验药物化斑解毒方组成:白花蛇舌草30g㊁半枝莲15g㊁威灵仙10g㊁苍术10g㊁土茯苓15g㊁生槐花10g㊁玄参20g㊁生地10g㊁香附10g㊁牛蒡子10g㊁知母10g㊁金银花15g㊁猪苓10g㊁白术10g㊁炙甘草6g㊂所用药物为颗粒剂,由江阴天江药业有限公司配制,产品批号2202306㊂甲氨蝶呤片(通化茂祥制药有限公司,产品批号:197220504,规格:2.5mg);咪喹莫特乳膏(四川明欣药业有限责任公司,产品批号40220501,规格: 250mg∶12.5mg)㊂1.3 主要实验试剂与仪器凡士林(德新康,批号:Q/371426DXK027);4%多聚甲醛(Solarbio,批号:P1110);苏木素 伊红(hematoxylin⁃eosin,HE)染色试剂盒(北京中科万邦生物科技有限公司,批号:RY⁃0002);中性树胶封片剂(北京中科万邦生物科技有限公司,批号:FP⁃0001);TNF⁃α㊁IFN⁃γ㊁IL⁃1β㊁IL⁃23酶联免疫吸附试验试剂盒(北京百奥思科生物医学技术有限公司,批号分别为:MD7125㊁MD16214㊁MD124889㊁MD53662);NF⁃κBp65抗体(Abcam,批号: AB32536);辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July2023,Vol.16,No.71319(Affinity,批号:T0021)㊂数码相机(Leica);JT⁃12S脱水机㊁JB⁃P7包埋机(武汉俊杰电子有限公司);电泳仪(美国Bio⁃Rad); Spectramac M3多功能酶标仪(美国MD);紫外分光光度计(美国赛默飞世尔科技公司);ST16R高速冷冻离心机(美国Thermo Sorvall);THZ⁃312台式恒温振荡器(上海精宏实验设备有限公司);化学发光成像系统(美国ChemiDoc MP)㊂1.4 实验方法1.4.1 动物分组与造模 将60只小鼠适应性喂养1周后,全部予背部去毛,面积约2cm×3cm㊂以随机数字表法将60只小鼠随机分为空白组㊁模型组㊁化斑解毒方低㊁中㊁高剂量组及甲氨蝶呤组,每组10只㊂脱毛后24小时确认小鼠脱毛处无损伤后开始造模,空白组小鼠于备皮区每日涂抹凡士林62.5mg,其余各组涂抹等质量5%咪喹莫特乳膏,连续7天㊂1.4.2 给药方法 造模后,各组均以标准饲料喂养并自由饮水,每3天更换垫料㊂造模开始第二日予以干预,每组小鼠以0.1mL/(10g㊃d)灌胃1次,空白组与模型组小鼠予以蒸馏水,化斑解毒方低㊁中㊁高剂量组分别予中药1/2倍㊁1倍及2倍量,甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤片混悬液㊂小鼠灌胃药物剂量根据体表法进行计算,根据标准成年人体质量70kg,则对应小鼠药物剂量约为成人的9.1倍,折算出化斑解毒方中剂量组小鼠每日给药剂量为24.83g/kg,甲氨蝶呤组每日给药剂量为1mg/kg㊂1.4.3 取材方法 在实验第7天进行标本制备,对小鼠予4%水合氯醛(0.1mL/10g)腹腔注射进行麻醉㊂取小鼠背部银屑病皮损集中皮肤(全层创面),面积为2cm×2cm的正方形,空白组取相同部位,所得皮肤组织以90°为范围平均分为4份,3份置于无菌无酶冻存管,置于液氮冷冻后,放于-80℃超低温冰箱保存用于做蛋白检测;1份放于4%多聚甲醛中固定,用于切片染色㊂1.5 观察指标1.5.1 各组小鼠皮损变化情况评价 于模型建立及治疗期间,每日观察各组小鼠皮损变化,并采用数码相机对同一部位拍照记录㊂观察期间无小鼠死亡情况,重复数量为1㊂根据校正后的银屑病样皮损面积和疾病严重程度(psoriasis area and severity index,PASI)评分作为标准,对鳞屑㊁浸润㊁红斑的严重程度进行评分,由轻到重分为5个等级,从0到4进行赋分㊂计算三项评分之和表示皮损严重程度;取每日各组总分平均值绘制趋势线,从而反映小鼠皮损的变化情况㊂1.5.2 皮肤组织HE染色及观察 取固定于4%多聚甲醛中的皮肤组织,修剪至合适大小,二甲苯脱蜡后,用从高到低浓度酒精及蒸馏水洗脱,苏木素水溶液染色10分钟,0.7%盐酸乙醇分化30秒,置于酒精中脱水,酒精伊红染色2分钟,冲洗后先后酒精脱水㊁二甲苯透明㊁中性树胶封片,放置于显微镜下观察并摄片㊂1.5.3 皮肤组织炎症因子水平检测 采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组小鼠皮肤组织匀浆中TNF⁃α㊁IFN⁃γ㊁IL⁃1β㊁IL⁃23水平㊂将试剂盒取出平衡至室温,取出冰箱中冻存的皮肤样本研碎㊂实验操作步骤以ELISA检测试剂盒为准㊂显色后立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度值(OD值),绘制浓度标准曲线计算样品中相应检测目标的浓度㊂以蛋白免疫印迹法检测皮肤标本中NF⁃κB水平㊂取出冻存标本加入裂解液,超声破碎细胞取上清,按照BCA试剂盒说明书对蛋白定量,对蛋白样品进行电泳及转膜㊂将转移膜置于封闭液中封闭1小时,加入用封闭液稀释的一抗工作液4℃孵育过夜,洗净后加入二抗工作液室温孵育60分钟,洗膜后使用显色剂显影,利用化学发光成像系统成像并通过测定主带的光密度值计算上述蛋白在皮肤组织中的表达水平㊂1.6 统计学方法实验所得数据为计量资料,采用SPSS20.0软件对所得数据进行统计分析,数据以均数±标准差(x±s)表示㊂其中,IFN⁃γ㊁IL⁃1β㊁NF⁃кB各组数据符合正态分布且满足方差齐性,采用单因素方差分析(One⁃way ANOVA),组间比较应用LSD法;其余结果指标数据不符合正态分布或不满足方差齐性,故采用Kruskal⁃Wallis检验,组间比较应用Wilcoxon Mann⁃Whitney U秩和检验(Bonferronni法)㊂检验水准a=0.05,P<0.05表示差异有统计学意义㊂2 结果2.1 皮损变化及评分比较空白组小鼠未见皮损,模型组小鼠皮肤存在不同程度红斑㊁浸润㊁鳞屑等皮肤损害㊂与模型组相比,化斑解毒方各剂量组及甲氨蝶呤组小鼠皮肤红斑色泽㊁浸润程度㊁出现鳞屑皮肤面积大小㊁鳞屑厚度均较轻㊂第7天时,化斑解毒方低㊁中㊁高剂量组㊁1320 环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July 2023,Vol.16,No.7甲氨蝶呤组小鼠皮损相比于模型组,红斑面积较小㊁颜色浅,皮肤浸润程度较轻,鳞屑较少㊂见图1㊂注:A 空白组;B 模型组;C 化斑解毒方低剂量组;D 化斑解毒方中剂量组;E 化斑解毒方高剂量组;F 甲氨蝶呤组㊂图1 各组银屑病样皮炎小鼠皮肤表现 皮损评分结果显示,空白组与模型组之间PASI评分存在统计学差异(P <0.05);与模型组相比,化斑解毒方各剂量组及甲氨蝶呤组PASI 评分降低,皮损症状改善(P <0.05)㊂依据PASI 评分绘制化斑解毒方各剂量组与模型组㊁甲氨蝶呤组的7日曲线可观察评分变化㊂见图2,表1㊂图2 各组银屑病样皮炎小鼠PASI 评分变化曲线2.2 皮肤组织学变化HE 染色显示:空白组角质层细胞未见明显异常,基底层细胞连续,血管周围及真皮浅层未见炎症细胞浸润;模型组表现为表皮角化过度伴角化不全,棘细胞数量增加,棘层肥厚,表皮突向下延伸呈棒槌状,真皮内可见毛细血管扩张,血管周围淋巴细胞浸润,类似银屑病的皮损病理表现;与模型组相比,化斑解毒方各剂量组和甲氨蝶呤组小鼠病理损害程度较低,表皮角化不全减轻,棘层厚度变薄,淋巴细胞浸润减少㊂见图3㊂表1 各组银屑病样皮炎小鼠PASI 评分比较(x ±s )组别鼠只PASI 评分(分)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天模型组100.5±0.53 2.3±0.48 2.3±0.59 3.2±1.48 4.8±0.42 6.6±0.707.6±0.70化斑解毒方低剂量组100.5±0.53 1.2±0.79a 1.7±0.68a 2.6±0.97 3.4±1.17a 4.4±0.84a 4.4±0.84a 化斑解毒方中剂量组100.2±0.420.8±0.62a 1.4±0.84a 1.9±0.94a3.0±1.16a 3.5±1.08a4.3±0.95a 化斑解毒方高剂量组100.6±0.27 2.0±0.67 2.4±0.70 2.8±0.79 3.8±0.79a 4.6±0.70a 5.0±0.67a 甲氨蝶呤组100.2±0.421.7±0.48a2.3±0.682.9±0.573.7±1.06a4.4±1.08a4.2±1.03a注:与模型组相比,a P <0.05㊂注:A 空白组;B 模型组;C 化斑解毒方低剂量组;D 化斑解毒方中剂量组;E 化斑解毒方高剂量组;F 甲氨蝶呤组㊂图3 各组银屑病样皮炎小鼠皮肤病理变化比较(HE 染色,×400)环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July 2023,Vol.16,No.71321 表2 各组银屑病样皮炎小鼠皮肤组织中TNF⁃α㊁IFN⁃γ㊁IL⁃1β㊁IL⁃23表达水比较(x ±s ,pg /mL)组别鼠只TNF⁃αINF⁃γIL⁃1βIL⁃23空白组1042.47±3.2218.42±1.2322.53±2.1710.52±1.04模型组10107.35±6.03a 50.64±3.61a 79.86±2.62a 22.96±2.98a 化斑解毒方低剂量组1072.69±2.57ab 31.40±2.49ab 60.55±1.66ab 20.73±3.50a 化斑解毒方中剂量组1055.18±2.55ab 27.64±1.32ab 54.25±1.52ab 13.64±1.04ab 化斑解毒方高剂量组1051.35±1.60abc 24.81±1.49ab 49.31±1.56ab 12.85±1.02abc甲氨蝶呤组1051.72±1.89ab19.26±2.32b45.63±2.54ab11.20±0.66b注:与空白组相比,a P <0.05;与模型组相比,b P <0.05;与甲氨蝶呤组相比,c P >0.05㊂2.3 皮肤组织中TNF⁃α㊁IFN⁃γ㊁IL⁃1β㊁IL⁃23表达情况与空白组相比,模型组小鼠皮肤组织中TNF⁃α㊁IFN⁃γ㊁IL⁃23㊁IL⁃1β表达水平显著升高(P <0.05);与模型组相比,各用药组炎症因子水平均有不同程度降低,其中以甲氨蝶呤组及化斑解毒方高剂量组最为显著;另外,化斑解毒方低剂量组与模型组IL⁃23表达水平无明显差异(P >0.05)㊂见表2㊂2.4 皮肤组织中NF⁃кB 表达水平与空白组相比,模型组NF⁃кB 表达水平显著升高(P <0.05);与模型组相比,各用药组NF⁃кB 表达水平显著降低(P <0.05);化斑解毒方各剂量组NF⁃кB 表达水平较甲氨蝶呤组无显著差异(P >0.05)㊂因空白组中两个数据离散度过大,考虑误差,在统计过程中主动剔除㊂结果见表3及图4㊂表3 各组银屑病样皮炎小鼠皮肤组织中NF⁃кB 表达水平比较(x ±s )组别鼠只NF⁃кB 相对表达量空白组80.53±0.47模型组100.96±0.09a 化斑解毒方低剂量组100.73±0.12abc 化斑解毒方中剂量组100.73±0.08abc化斑解毒方高剂量组100.70±0.12abc 甲氨蝶呤组100.67±0.09ab注:与空白组相比,a P <0.05;与模型组相比,b P <0.05;与甲氨蝶呤组相比,c P >0.05㊂注:A 空白组;B 模型组;C 化斑解毒方低剂量组D 化斑解毒方中剂量组;E 化斑解毒方高剂量组;F 甲氨蝶呤组㊂图4 各组银屑病样皮炎小鼠皮肤组织中NF⁃кB 蛋白表达情况3 讨论银屑病是皮肤科常见且重大的疾病,其发病机制复杂且尚不明确[3]㊂目前普遍认为银屑病的发病主要由免疫细胞介导的炎症反应㊁多种细胞因子失衡及细胞间信号转导通路异常等导致[4]㊂现代医学对轻度银屑病治疗以外用药为主,中㊁重度常联合甲氨蝶呤㊁阿维A 酸㊁环孢素等系统治疗,近年来生物制剂也日益广泛应用于银屑病的治疗[5]㊂中药治疗相对安全且价格适中,探索更为稳定有效的中药方剂有助于解除银屑病患者的困扰,并为银屑病的临床治疗提供更多选择㊂中医学普遍认为,银屑病发生与 血”与 风”两个因素密切相关,病机多为营血亏虚或外邪入里以致血热内蕴,生风化燥,肌肤失养,发为白疕[6]㊂李元文教授认为寻常型银屑病的病因病机在血热瘀阻㊁化燥生风的基础之上,兼有湿邪为患,且多与毒邪相关[7]㊂化斑解毒方在目前常用清热凉血解毒药如生地㊁玄参㊁知母㊁金银花㊁生槐花㊁白花蛇舌草㊁半枝莲㊁土茯苓之外[8],加用健脾化湿之苍术㊁白术㊁猪苓,佐以威灵仙通络,香附理气,旨在宣通中焦之气,气行则血行,气机通畅则瘀血得通㊁风邪自灭,故红斑鳞屑得以消减㊂化斑解毒方临床治疗寻常型银屑病疗效确切,但其治疗的分子层面的机制仍不明确,故本实验通过对不同浓度化斑解毒方的抗炎方面机制进行探究㊂作为由免疫介导的炎症性皮肤病,银屑病的发生发展过程由多种免疫细胞和炎症因子共同作用㊂TNF⁃α是重要的促炎因子,可影响角质细胞的再生㊁诱导表皮中性粒细胞浸润,并可诱导免疫细胞增殖产生不同的趋化因子的细胞因子,加重炎症反应㊂IFN⁃γ能够增强抗原加工和呈递㊁诱导免疫反应,在银屑病患者血清中显著升高,并且可能与银屑病的活动有关[9]㊂IL⁃1β是在早起皮肤1322 环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July2023,Vol.16,No.7损伤中占主导地位的细胞因子,其增多导致早期银屑病炎症加重[10]㊂IL⁃23是银屑病免疫反应机制的上游炎症因子之一,可诱导Thl7细胞分化产生细胞因子,进一步促进角质形成细胞增殖及炎症级联反应[11]㊂本研究中,甲氨蝶呤组㊁化斑解毒方各剂量组TNF⁃α㊁IFN⁃γ㊁IL⁃1β表达水平较模型组显著降低,提示经治疗后细胞炎症因子水平下降,组织炎症缓解,同理甲氨蝶呤组与化斑解毒方中㊁高剂量组的IL⁃23表达水平降低亦提示炎症减轻㊂化斑解毒方高剂量组与甲氨蝶呤组TNF⁃α㊁IL⁃23表达水平无显著差异,提示二者在影响TNF⁃α㊁IL⁃23的作用上效果趋于相同㊂化斑解毒方低剂量组IL⁃23表达水平与模型组无显著差异,提示对此炎症因子作用效果不明显,考虑血药浓度可能未达到起效水平,或与造模用药时间较短等因素有关,具体原因需进一步探究㊂NF⁃кB被认为是免疫及炎症反应的中心枢纽,激活后可诱导下游炎症因子和趋化因子表达,促进组织炎症发生[12]㊂NF⁃кB在银屑病过程中表达水平升高[13],并可调控细胞凋亡,影响银屑病炎症进展[14]㊂本研究结果显示,与空白组相比,模型组NF⁃кB表达水平显著升高,提示在咪喹莫特诱导银屑病样皮炎小鼠中NF⁃кB过度激活;与模型组相比,各用药组NF⁃кB显著下调,提示化斑解毒方的抗炎作用可能与抑制NF⁃кB表达有关,且下调情况在化斑解毒方各组间呈现一定的量效差异㊂化斑解毒方各剂量组NF⁃кB表达水平与甲氨蝶呤组无统计学差异,提示化斑解毒方可有效抑制银屑病皮损中的NF⁃кB表达,从而改善炎症反应㊂综上所述,化斑解毒方在改善银屑病皮损症状及组织病理学表现上有确切治疗作用;同时在分子层面上,化斑解毒方能够通过降低TNF⁃α㊁IFN⁃γ㊁IL⁃1β㊁IL⁃23的表达水平㊁抑制NF⁃кB在组织细胞中的表达减轻炎症反应,起到抗炎作用,且化斑解毒方的抑制炎症作用与使用剂量呈正相关㊂但是,本研究所检测的只是银屑病炎症反应相关的部分细胞因子,没有涉及细胞通路及其他治疗机制方面的研究;且咪喹莫特诱导的小鼠模型不能完全代表人类银屑病的发展及转归过程㊂因此,探究化斑解毒方的作用机制仍需经过其他分子水平研究及临床实验进一步验证㊂参考文献[1] 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[2] 李雪,杭小涵,邓宇童,等.银屑病中医治疗 枢机”之窥见[J].北京中医药,2021,40(8):826⁃829.[3] 中华医学会皮肤性病学分会银屑病专业委员会.中国银屑病诊疗指南(2018完整版)[J].中华皮肤科杂志,2019,52(10):667⁃710.[4] Griffiths C E M,Armstrong A W,Gudjonsson J E,et al.Psoriasis[J].Lancet,2021,397(10281):1301⁃1315. [5] Armstrong A W,Read C.Pathophysiology,clinical presentation,and treatment of psoriasis:A review[J].JAMA,2020,323(19):1945⁃1960.[6] 王晓瑾,张建英,张守亮,等.中医药防治银屑病的机制研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(21):243⁃253. 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银屑病样皮损的组织病理研究
ｃ ａ ｌ Ｐ ｓ ｏ ｉ ｒ ａ ｓ ｉ ｓ Ａ ｒ ｅ ａ ａ ｎ ｄ Ｓ ｅ ｖ ｅ ｉ ｒ ｔ ｙ Ｉ ｎ ｄ ｅ ｘ （ Ｐ Ａ Ｓ Ｉ ） ． Ｔ ｈ ｅ ｎ ， ｔ ｈ ｅ ｓ ａ ｍ ｐ ｌ ｅ ｓ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｔ ｈ ｅ ｂ ａ ｃ ｋ ｓ ｋ ｉ ｎ ｗ ｅ ｒ ｅ ｓ ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｈ Ｅ ｏ ｆ ｒ ｈ ｉ ｓ ｔ ｏ ｌ ｏ ｙ ｇ ａ －
Ｈｉ ｓ ｔ ｏ ｐ ａ ｔ ｈｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ｓ ｔ ｕ ｄｙ ｏ ｎ ｐ ｓ ｏ ｒ ｉ ａ ｓ ｉ ｓ － ｌ ｉ ｋ ｅ ｓ ｋ ｉ ｎ ｉ ｎｆ ｌ ａ ｍｍ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
ＴＡＮＧ Ｄｏ ｎ ｇ － ｍｅ ｉ ， ＺＨＯＵ Ｂｉ ａ ｏ， ＦＵ Ｌｉ － ｘ ｉ ｎ， ＧＵＯ Ｚ ｈ ｅ ｎ ｇ － ｈ ｏ ｎ ｇ， ＹＡＮ Ｈｅ ｎ ｇ － ｘ ｉ ｕ
成 功 建 立 的鉴 定标 准 ， 也 为 进 一 步 的 银 屑 病 新 药研 究奠 定 了 良好 的基 础 ． 关键词 ： 咪喹莫特 ； 银屑病 ； 动物模型 ； 病 理 研 究
中图分类号 ： Ｑ ９ ５— ３ ３ ； Ｒ一 ３ ３ ２
文献标志码 ： Ａ
文章编号 ： ２ ０ ９ ５ － ４ ２ ７ １ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ２ － ０ １ ５ ６ － ０ ４
Ｍａ ｒ ． ２ ０ １ ５ Ｖｏ １ ． ４１ Ｎｏ ． ２
第４ １卷 第２期 ｎ ｍｄ ｚ ｋ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ２． ０ ０ ５
银 屑 病样 皮 损 的组 织 病 理 研 究
唐 冬梅 ， 周 彪。 付丽新 。 郭政红 ， 严 亨秀
化不全 ， 出现 Ｍ ｕ ｎ ｒ ｏ小脓肿 ， 棘 层肥大等银 屑病样病理 变化． 经本 实验 室常规 方法处理 的切 片， 组织 不完整 ， 结构 不 易
银屑病及银屑病相关动物模型
银屑病及银屑病相关动物模型银屑病（Psoriasis）, 俗称“牛皮癣”，是最为常见的慢性AID，常发于青壮年人群，在世界范围内发病率约1-3%。
银屑病发病顽固且持续，最显著特征为皮肤表面红肿及白色鳞屑的覆盖，其病因尚不明确，目前认为是遗传和环境因素共同作用导致，如感染、压力、肥胖、吸烟等因素都可能对于疾病产生诱发作用。
目前临床上尚无根治银屑病的特效药物，故治疗银屑病主要以控制症状为主，如外用维生素D3类似物、糖皮质激素和维A酸，系统性使用糖皮质激素、甲氨蝶呤，以及免疫抑制剂如环孢素A、他克莫司等。
近年来随生物制药的发展，多种抗体类药物也对于银屑病具有较好疗效。
科学研究中银屑病的实验动物模型主要分为自发形成、基因工程改造、病灶原位移植和直接诱发四类，受限于模型建立难度和成本，直接诱发类模型使用最为广泛，以下介绍两种基于小鼠的银屑病直接诱发模型。
（一）咪喹莫特诱导小鼠银屑病皮损模型咪喹莫特（Imiquimod，IMQ）是T oll样受体7/8的抑制剂，临床上用来治疗病毒感染。
使用IMQ乳膏在小鼠背部连续涂抹5~7天，会出现皮肤增厚、红斑、鳞屑等类银屑病样症状。
该模型稳定、易建立、操作简单且应用广泛。
a. PASI评分根据PASI评分标准对小鼠背部皮肤炎症情况评分（包括银屑，红斑，肥厚），记录累积评分、体重与皮肤厚度变化。
对照组空白乳膏处理未表现炎症特征，模型组IMQ处理之后，逐渐表现出皮肤炎症特征及厚度增加，第5天PASI评分达到最高值，体重在IMQ处理的第3天下降到最低点，而后逐渐恢复，阳性药抗体可降低PASI评分与皮肤厚度的增加。
图1: 模型条件下小鼠背部皮肤PASI评分持续升高，体重下降，皮肤厚度增加；IL17A抗体可显著逆转皮肤病变b. 形态学检查IMQ连续处理5天后对于小鼠背部皮肤外观形态进行观察，并利用H&E染色分析组织病理学变化。
图片中可见，小鼠皮肤出现红斑，鳞屑与厚度增加；H&E 染色结果显示IMQ处理促进了炎性细胞的浸润，表皮细胞的增生；免疫组化结果显示银屑病相关PD marker IL-6在皮肤中表达水平增加。
咪喹莫特诱导银屑病小鼠模型的研究进展
咪喹莫特诱导银屑病小鼠模型的研究进展刘爱民;李伟玲;吴盘红;赵巍;李静文;徐茗圆【摘要】银屑病是一种免疫介导的慢性炎症性皮肤病,在对银屑病复杂的发病机制的研究中,银屑病动物模型的建立显示出重要作用.目前对银屑病动物模型建构主要集中于动物天然组织、局部药物诱导、以及基因水平研究,其中Toll样受体(TLR)激动剂的局部诱导是运用最为广泛的模型之一.本文搜索并整理分析近年文献,将目前运用TLR激动剂构建银屑病动物模型的研究现状作一综述.【期刊名称】《中国中西医结合皮肤性病学杂志》【年(卷),期】2018(017)004【总页数】3页(P380-382)【关键词】咪喹莫特;银屑病;小鼠模型【作者】刘爱民;李伟玲;吴盘红;赵巍;李静文;徐茗圆【作者单位】河南省中医院,河南郑州450000;河南中医药大学第二临床医学院,河南郑州450000;河南省中医院,河南郑州450000;河南省中医院,河南郑州450000;河南中医药大学第二临床医学院,河南郑州450000;河南中医药大学第二临床医学院,河南郑州450000;河南中医药大学第二临床医学院,河南郑州450000【正文语种】中文【中图分类】R758.63银屑病是临床常见的以红斑，鳞屑为主要表现的慢性复发性疾病，组织病理学上，角质形成细胞过度增殖、炎症细胞浸润及新生血管生成为其3大主要的病理特征[1]。
银屑病罕见于任何非人类动物，且自然出现的比例极少见[2]，其发病机制复杂，易于反复而目前尚无确切的治愈方法，因此建立合适的动物模型显得尤为重要。
自20世纪90年代初以来，已经开始使用银屑病皮肤炎症的小鼠模型，以阐明构成人类疾病的机制[3]。
随着医学的发展以及银屑病的研究的不断深入，对动物模型的建构有了更深一步的认识。
理想的银屑病动物模型应当包括表皮的过度增生，T细胞的浸润、改变的血管状态和对目前的抗银屑病疗法的反应性。
众多建模方式中，局部诱导运用广泛，咪喹莫特为其中的代表药物，本文就其运用现状及优势和不足之处进行归纳。
咪喹莫特诱发银屑病的机制研究新进展
咪喹莫特诱发银屑病的机制研究新进展临床报道咪喹莫特能诱发人银屑病，实验研究发现咪喹莫特能诱导鼠类银屑病样皮肤改变，且发现有不同的作用机制参与此过程。
本文对咪喹莫特诱导鼠类银屑病样皮肤变化过程中发现的作用机制进行综述，为探究银屑病复杂的发病机制和治疗提供新思路。
标签：咪喹莫特；银屑病；机制；炎症咪喹莫特（imiquimod）是由美国3M公司开发研制的咪唑喹啉胺类免疫应答调节剂，1997年最先在美国上市并成为FDA批准的第一个外用治疗外生殖器疣的免疫调节药物。
临床报道发现该药能诱发人类银屑病。
实验研究发现该药能诱导鼠类银屑病样皮肤变化，有不同的作用机制参与发病过程。
咪喹莫特是Toll 样受体（Toll-like receptor，TLR）激动剂。
TLR的激活有助于宿主免疫反应的发生，引起免疫调节因子的转录，进而引起一系列的炎症反应和免疫损伤；TLR 的激活可促进抗微生物肽的释放和获得性免疫反应的发生，促进获得性免疫反应的一种途径是通过增加树突状细胞（dendritic cell，DC）上共刺激分子的表达来活化T淋巴细胞，另一途径是影响细胞因子的产生和释放；TLR的激活可以引起细胞凋亡；TLR的激活可以促进氧化酶的表达和抑制抗氧化酶的表达；TLR 的激活还能活化对氧化还原敏感的细胞信号转导途径，从而促进炎细胞因子和趋化因子的表达。
本文对TLR激动剂——咪喹莫特诱导银屑病样皮肤变化的作用机制进行了综述。
1 IL-23/IL-17炎性反应轴辅助性T细胞17（Th17细胞）是一种新发现的CD4+效应T细胞，因分泌白细胞介素17（IL-17）而得名。
Th17细胞的生成通路称为IL-23/IL-17炎症反应轴[1]。
DC分泌白细胞介素23（IL-23）和抗肿瘤坏死因子α（TNF-α），两者都作用于Th17细胞使其分泌IL-17和TNF-α，而IL-17和TNF-α可以刺激角质形成细胞产生抗菌肽（S100A7、LL-37）、中性粒细胞趋化因子（CXCL1、2、3、5）、白细胞介素8（IL-8）和趋化因子20（CCL20）。
2021银屑病的神经免疫学研究进展范文2
2021银屑病的神经免疫学研究进展范文 神经免疫学论文（专业范文8篇）之第四篇 摘要：银屑病是一种慢性炎症性皮肤病,其病因尚未完全阐明。
心理应激因素通过中枢神经系统、外周神经系统和皮肤下丘脑-垂体-肾上腺素轴,参与对银屑病的神经免疫调节。
神经免疫调节机制的探究对心理应激诱导银屑病发病机制的阐明有重要意义。
关键词：银屑病,应激,神经免疫学 银屑病是一种慢性炎症性疾病,银屑病的多基因遗传方式提示诸多因素参与其发生发展。
近年多项研究提示,40%～80%银屑病患者在经历应激事件时病情加重,50%中至重度银屑病患者认为抑郁情绪与银屑病病情病情加重有关[1]。
本文就神经免疫系统的调节机制在银屑病发病中的作用进行综述。
1中枢神经系统 下丘脑、垂体后叶和肾上腺释放的激素分别为:促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(GC)。
正常情况下,下丘脑—垂体—肾上腺轴(HPA)存在负反馈闭合调节环路[2]。
Vegas等[3]学者用罗彻斯特小鼠(自发性银屑病样皮损动物模型)研究发现,在应激下小鼠背根神经节内促炎神经肽,如P物质(SP)、钙调素基因相关肽(CGRP)、神经生长因子(NGF)和促炎细胞因子表达升高,但银屑病样皮损的发生反而减少。
研究者推测,这一现象可能由应激后糖皮质激素的分泌增加介导。
随后研究发现,糖皮质激素受体阻滞剂可以逆转这种现象,这表明糖皮质激素分泌的增加可以减少银屑病样皮损的发生。
据此推测银屑病患者应激后病情恶化可能源于其本身HPA轴的缺陷以及糖皮质激素分泌减少,从而无法抵消慢性应激的促炎作用。
近期研究[4]发现银屑病患者HPA轴功能障碍,以及明显降低的血糖皮质激素浓度(包括基线水平和压力诱导后水平),均可以印证这一推测。
内源性促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)是HPA轴的重要化学递质。
应激状态下,中枢来源的CRF通过无髓C纤维或有髓Ad-神经纤维传入神经释放到达皮肤[5]。
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咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型的组织学及 免疫学特征初步探究
黄钟洲， 陈小彦， 徐敏， 艾雪忱， 唐增奇， 郭庆
（ 中山大学孙逸仙纪念医院皮肤科，广东 广州 510120）
［摘要］ 目的： 研究咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型的皮肤组织学及免疫学特征。方法： 将 20 只 BALB / c 小鼠随机分为造模组和对照组，每组 10 只。所有小鼠背部剃毛后，造模组小鼠于背部皮肤及 单侧耳部每日涂抹共计 62. 5 mg 的 5% 咪喹莫特乳膏 1 次，连续 7 d，空白组小鼠涂抹等量凡士林。每 日记录小鼠 PASI 评分及耳部厚度，并于末次涂药 24 h 后处死，取背部皮肤进行多聚甲醛固定，行 HE 染色及 Ki-67 免疫组化分析。取脾脏称重，以流式细胞术检测脾脏中的 Th 细胞亚群。结果： 造模组小 鼠于第二天逐渐出现红斑、鳞屑、皮肤增厚及耳部肿胀，其 PASI 评分随造模时间延长而增加。造模组 小鼠皮损出现银屑病样病理改变，其表皮厚度明显增加（ t = 15. 12，P ＜ 0. 001） ，且 Ki-67 阳性率明显上 升，每个高倍镜视野下阳性细胞数目明显增加（ t = 10. 50，P ＜ 0． 001） 。造模组小鼠脾脏重量和细胞计 数较对照组明显增加，且 Th1、Th17 细胞亚群的比例及绝对计数较对照组明显上升（ P 值均 ＜ 0. 05） ， Th2 细胞比例及计数无明显变化（ P 值均 ＞ 0． 05） 。结论： 咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型可较好地 模拟寻常型银屑病的临床、组织病理和免疫学特征，是一种有效的银屑病模型。 ［关键词］ 银屑病动物模型； 咪喹莫特； Ki-67； Th1 细胞； Th17 细胞 ［中图分类号］ Ｒ758. 63 ［文献标识码］ A DOI： 10． 3969 / j． issn． 1674 － 8468． 2019． 02． 001
Histopathologic and immunological features of Imiquimod induced psoriatic mouse model HUANG Zhong-zhou，CHEN Xiao-yan，XU Min，AI Xue-chen，TANG Zeng-qi，GUO Qing （ Department of Dermatology，Sun Yat-sen Memorial Hospital，Sun Yat-sen University，Guangzhou 510120，China） Corresponding author： GUO Qing，E-mail： guoqingzsy@ 163． com ［Abstract］ Objective： To investigate the dermatopathologic and immunological features of Imiquimod induced psoriatic mice model． Methods： Twenty BALB / c mice were grouped in IMQ-model group and control group randomly，each had 10 mice． The IMQ-model mice received a daily topical dose of 62. 5 mg of IMQ cream（ 5% ） on the shaved back and left ear for 7 consecutive days． The control group mice were treated similarly with vaseline． The Psoriasis Area and Severity Index score and thickness of left ear were measured daily． The dorsal skin samples were evaluated using H＆E section and immunohistochemistry test of Ki-67． The spleens were weighed and the splenocyte were counted． Flow cytometry was used for detection of T-helper-cell subsets． Ｒesults： Erythema，scaling，skin thickening and ear swelling appeared on day 2 and deteriorated gradually． The cumulative score kept increasing by day 7． Histologically，the skin of IMQ-model mice showed
通信作者： 郭庆，E-mail： guoqingzsy@ com
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J Diagn Ther Dermato-Venereol，Apr． 2019． Vol． 26，No． 2
epidermal proliferation and proinflammatory cells infiltration resembling psoriasis vulgaris． The thickness of epidermis （ t = 15. 12，P ＜ 0. 001） and expression of Ki-67 （ t = 10. 50，P ＜ 0. 001） were increased in IMQ-model． The weight of spleen and cell-counting of splenocytes increased significantly in IMQ-model group． Compared with control group，the splenic Th1 and Th17 cells showed rise in both proportion and number （ all P ＜ 0. 05） ，but the Th2 cells did not show significant change（ both P ＞ 0. 05） ． Conclusion： Imiquimod induced psoriatic mouse model could resemble psoriasis vulgaris closely，which allowed further exploration of psoriasis． ［Keywords］ psoriatic model animal； imiquimod； Ki-67； Th1； Th17
皮肤性病诊疗学杂志 2019 年 4 月 第 26 卷第 2 期
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【引文格式】黄钟洲，陈小彦，徐敏，等． 咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型的组织学及免疫学特征初步探究［J］． 皮肤性 病诊疗学杂志，2019，26（ 2） ： 61 － 66． DOI： 10． 3969 / j． issn． 1674 － 8468． 2019． 02． 001．