5种常用药物对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损模型形成的影响_赵京霞

Effect of Psoriasis Orientated Drugs on Psoriasislike Mice Model Induced by Imiquimod ZHAO Jingxia， DI Tingting， WANG Yan， LIU Xin， LIANG Daiying， LI Ping （ Beijing Institute of Traditional Chinese Medicine， Beijing Hospital of Traditional Chinese Medicine Affiliated Capital Medical University， Beijing 100010 ， China） ［ Corresponding author］ LI Ping， Email： liping411@ 163． com ［ Abstract］ Objective To observe the effects of psoriasis therapeutic options on psoriasislike lesions induced by ImiBalb / c mice were randomly divided into seven groups： control， model， Acitretin quimod in mice． Methods
中国皮肤性病学杂志 2014 年 3 月第 28 卷第 3 期
Chin J Derm Venereol， Mar． 2014 ， Vol． 28 ， No． 3
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达等方面都与人类银屑病的表现十分相似 。本研究以 治疗银屑病的常用药物（ 阿维 A、 地塞米松、 甲氨蝶呤、 雷公藤多苷、 环孢素 ） 进行干预， 观察这些药物对该模 型皮损形成的影响， 为该模型能否作为银屑病药理动 物模型进行评价。 1 材料与方法 1． 1 实验动物 BALB / c 雄性小鼠， 体重 18 ～ 20g， 由 北京华阜康生物科技股份有限公司提供 ， 动物许可证 007 ， 编号 SCXK（ 京） 2009饲养于 SPF 级动物室。 1． 2 主要试剂与药品 咪喹莫特乳膏 （ 四川明欣药 业有限责任公司产品， 批号 101112 ） ， 凡士林 （ 河北兰 炼飞天石化有限公司产品） ， 阿维 A 胶囊 （ 重Байду номын сангаас华邦制 药有限责任公司， 国药准字 20010126 ） ， 醋酸地塞米松 片（ 天 津 力 生 制 药 股 份 有 限 责 任 公 司 ， 国药准字 1011109 ） ， 环孢素软胶囊 （ 华北制药集团新药研究开 发有限责任公司， 国药准字 H1096008 ） ， 甲氨蝶呤片 （ 上海医药集团有限责任公司信谊制药厂， 国药准字 H31020644 ） ， 雷公藤多苷（ 浙江得恩德制药有限公司， 国药准字 Z33020422 ） ； 增殖细胞核抗原 （ proliferating cell nuclear antigen ， PCNA） 抗体（ Abcam 公司） ， CD3 单 克隆抗体 （ Abcam 公司 ） ， 兔、 鼠免疫组织化学二步法 DAB 显色 检测试剂盒（ 中杉金桥生物技术有限公司 ） ， NovaＲED 显 色 液 液（ 中杉金桥生物技术有限公司 ） ， （ Vector Laboratories 公司） 。 1． 3 1． 3． 1 实验方法 实验动物制备 BALB / c 小鼠以戊巴比妥钠 （ 80mg / kg） 经腹腔注射麻醉， 刮除其背部毛发， 形成约
Balb / c 雄性小鼠， 随机分为正常对照组 、 模型组、 阿维 A 组、 地塞米松组、 甲氨蝶呤组、 雷公藤多苷组、 环 孢素组。采用银屑病皮损面积和疾病严重程度 （ PASI ） 评分标准观察银屑病样小鼠模型皮损变化情 况。光镜下观察皮损组织形态学变化 、 测量表皮层厚度； 免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原 （ PCNA） 反映表皮角质形成细胞增殖程度 ； 检测皮损中 CD3 反映 T 淋巴细胞浸润程度。结果 阿维 A 组、 地塞 米松组、 甲氨蝶呤组、 雷公藤多苷组小鼠皮损与同期模型组相比 ， 皮损症状明显改善， 各项指标 PASI 评 分都低于同期模型组小鼠 。 环孢素对该模型皮损的形成呈现一个先抑制后促进的作用 。 环孢素组 PASI 积分高峰出现的时间比模型组晚 2 ～ 3d。HE 染色显示： 与模型组小鼠比较， 阿维 A 组、 地塞米松 组、 甲氨蝶呤组、 雷公藤多苷组小鼠皮肤表皮层较平整 ， 角化不全的细胞明显减少 ， 表皮层厚度明显低 于模型组。而环孢素组与模型组小鼠皮损组织学表现相似 ， 表皮层厚度与模型组相比差异无统计学意 义（ P ＞ 0． 05 ） 。免疫组织化学染色显示 ： 阿维 A 组、 地塞米松组、 甲氨蝶呤组、 雷公藤多苷组皮损组织 中 PCNA 及 CD3 表达均显著低于模型组 ， 差异有统计学意义（ P ＜ 0． 01 或 ＜ 0． 05 ） 。环孢素组与模型组 相比差异无统计学意义 （ P ＞ 0． 05 ） 。结论 临床治疗银屑病药物阿维 A、 地塞米松、 甲氨蝶呤、 雷公藤 多苷可有效干预咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的形成 ， 以上药物对银屑病样皮损的表皮细胞增殖 及 T 淋巴细胞浸润均有抑制作用 ， 因此该模型可作为进行研究银屑病药物研究的药理模型 。但环孢素 A 对由咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型的反应不敏感 。 ［ 关键词］ 银屑病； 咪喹莫特； 阿维 A； 地塞米松； 甲氨蝶呤； 雷公藤多苷； 环孢素 ［ 中图分类号］ Ｒ 758． 63 ［ 文献标识码］ A ［ 文章编号］ 1001 － 7089 （ 2014 ） 03 － 0234 － 05
（ Aci） ， Dexamethasone（ Dex） ， Methotrexate （ MTX ） ， Triptergium wilfordii （ GTW ） ， and Cyclosporine A （ CysA） ． The morphological changes of lesional skin in mice were evaluated according to the psoriasis area and severity index（ PASI） and HE staining． Proliferating cell nuclear antigen （ PCNA ） and CD3 expression were investigated by immunohistochemical staining． Ｒesults Compared with model group， the psoriasislike lesions of Aci， Dex， MTX， GTWtreated groups were alleviated， with decreased PASI scores， epidermal parakeratosis and reduced PCNA， CD3 expression． The morphological changes and PCNA， CD3 expression in CysA group has not shown significant difference． Conclusion The drugs for psoriasis treatment in clinic such as Aci， Dex， MTX and GTW could improve imiquimodinduced murine psoriasislike lesions probably by inhibiting keratinocytes overproliferation， parakeratosis， and T lymphocyte infiltration． However， we did not find the inhibition effect of CysA on the formation of imiquimodinduced psoriasislike lesions in mice． ［ Key words］ Psoriasis； Imiquimod； Acitretin； Dexamethasone； Methotrexate； Triptergium wilfordii； Cyclosporine A
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2014 年 3 月 第 28 卷第 3 期 No ． 3 Mar 2014 ， Vol． 28 ，
5 种常用药物对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损 模型形成的影响
底婷婷， 王燕， 刘欣， 梁代英， 赵京霞， 李萍
［ 摘
要］ 目的
探讨 5 种治疗银屑病的常用药物对咪喹莫特诱导的银屑病样模型皮损形成的影响 。 方法
［基金项目］ 国家自然科学基金资助项目 （ No． 81072810 ） ［作者单位］ 北京市中医研究所 ， 北京 100010 ［通讯作者］ 李萍， Email： liping411@ 163． com
咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损动物模型在皮 损形态、 组织病理结构、 免疫细胞功能以及细胞因子表
继续观察组小鼠观察至 14d 后处死。 小鼠经脱颈处 死。按照九格法各组剪取相对应皮损处组织 ， 固定于 10% 甲醛溶液中用于制备石蜡切片， 进行 HE 染色和 免疫组织化学染色。 1． 3． 4 各组小鼠银屑病样皮损面积和疾病严重程度 （ PASI） 评分 采用数码照相的方法每日记录， 并依据 PASI 评分标准， 给予小鼠皮损处红斑、 鳞屑及浸润增 厚程度 0 ～ 4 的积分， 将 3 者积分相加 得 到 总 积 分。 PASI 评分标准如下： 0 ： 无； 1 ： 轻度； 2 ： 中度； 3 ： 重度； 4 ： 极重度。对各组小鼠积分取平均值后绘制皮损积分趋 势线， 观察各组小鼠皮损的变化情况。 1． 3． 5 IHC 染色观察各组小鼠皮肤 PCNA， CD3 表达 采用免疫组织化学染色， 石蜡切片脱蜡至水化后， 水
浴加热抗原修复 12min， 一抗 4℃ 孵育过夜， 二抗 37℃ DAB 显色， 孵育 30min， 苏木精复染。同步设立阴性对 照。免疫组织化学玻片采用 IPP6． 0 图像分析系统进 行半定量分析， 每组 5 张切片， 每张切片上随机选取 3 个视野， 各指标以光密度总和（ IOD） 表示。 1 ． 4 统计学处理 实验数据以均数 ± 标准差 （ x ± s ） 表示。使用 SPSS15． 0 软件对数据进行分析， 两组间采 用 t 检验进行处理， 多组间比较采用方差分析 （ OneWay ANOVA） ， P ＜ 0． 05 表示差异 检验水准 α = 0． 05 ， P ＜ 0． 01 表示差异有显著统计学意义。 有统计学意义， 2 2． 1 结果 常用药物对咪喹莫特诱导银屑病样小鼠模型皮 损形成的影响 第 8 天时， 与正常对照组小鼠相比， 模 型组小鼠皮肤红斑、 鳞屑现象明显， 皮肤增厚严重， 类 似银屑病样皮损。 阿维 A 组、 地塞米松组、 甲氨蝶呤 组、 雷公藤多苷组小鼠皮损与同期模型组相比红斑色 浅， 鳞屑稀少， 皮肤较光滑， 增厚现象较轻， 皮损症状有 明显的改善（ 图 1 ） ， 各项指标 PASI 评分都低于同期模 型组小鼠（ 图 2 ） 。但环孢素组皮损与模型组相比没有 明显差异， 红斑色深， 鳞屑厚密且分布广泛， 皮肤隆起 皱褶明显。从 PASI 评分趋势图可以看出， 环孢素对该 模型皮损的形成呈现一个先抑制后促进的趋势 。在第 7 天之前， 7d 后， 环孢素组 PASI 评分低于模型组， 环孢 素组 PASI 评分开始走高， 在第 10 天左右达到高峰， 随 之下降。环孢素组 PASI 积分高峰出现的时间比模型 组晚 2 ～ 3d。 2 ． 2 常用药物对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损组 见图 3 ， 表 1 。HE 染色显示： 模型组 表皮棘细胞层增厚， 角质层出现角化不全， 真皮层炎性 织学变化的影响 细胞浸润明显， 类似银屑病样皮损组织学表现。 与模 型组小鼠比较， 阿维 A 组、 地塞米松组、 甲氨蝶呤组、 雷公藤多苷组小鼠皮肤表皮层较平整， 角化不全的细胞