高效液相体积排阻色谱法分析黄秋葵多糖的单糖组成
黄蜀葵多糖的分析
黄蜀葵多糖的分析
高素莲;张秀真;陈均
【期刊名称】《分析测试学报》
【年(卷),期】2002(021)006
【摘要】采用热水浸提-乙醇沉淀、鞣酸除蛋白、过氧化氢和活性炭脱色、微晶纤维素柱色谱分离纯化工艺制备黄蜀葵根和茎中的多糖;用苯酚-硫酸比色法测定该多糖的糖含量为93.8%;薄层色谱法鉴定黄蜀葵多糖是由半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖组成;红外光谱法鉴定黄蜀葵多糖的糖键是α-吡喃糖苷键,且紫外扫描无核酸和蛋白特征吸收峰;比旋光度为[α]25D+122.2°～+123.0°(0.3,H2O).
【总页数】3页(P72-74)
【作者】高素莲;张秀真;陈均
【作者单位】安徽大学化学化工学院,安徽合肥,230039;安徽大学化学化工学院,安徽合肥,230039;安徽大学化学化工学院,安徽合肥,230039
【正文语种】中文
【中图分类】Q949.757.3;O629.12
【相关文献】
1.黄蜀葵茎叶多糖的乙酰化修饰及其免疫调节活性研究 [J], 潘欣欣;江曙;朱悦;钱大玮;严辉;段金廒
2.黄蜀葵多糖的分子质量测定及单糖组成分析 [J], 王雪梅;汪莹莹;吴迷迷;张秀珍
3.黄蜀葵花、茎、叶多糖与黄酮含量比较 [J], 陈云香;刘国钢;陈敏;时维静;王茜;窦金凤
4.湘西产黄蜀葵籽油化学成分的GC-MS法分析 [J], 朱满香;郑杰;王建霞;刘一涵;田云刚;郭洪伟;魏华
5.黄蜀葵多糖提纯及结构与活性的研究进展 [J], 李爽;袁菱;杨青;童德银
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秋葵茎的成分筛查及多糖活性研究
秋葵茎的成分筛查及多糖活性研究目的以秋葵茎为原料,筛查秋葵茎中有效成分,并测定多糖、黄酮、蛋白质等有效成分的含量。
然后优化秋葵茎中多糖的提取和纯化工艺方法,并分析纯化后秋葵茎多糖的单糖组成,最后考察纯化秋葵茎多糖体外的抗氧化活性和体内降糖、保肝活性。
方法采用化学定性分析方法确定秋葵茎中的有效成分;采用苯酚-硫酸法、HPLC法、凯式定氮法、EDTA滴定法测定了秋葵茎中的多糖、黄酮、蛋白质、水溶性维生素、钙等成分含量;采用超声波辅助提取秋葵茎中的多糖,探讨了料液比、超声功率、超声温度及超声时间四个因素对秋葵茎多糖提取率的影响,结合正交实验设计确定了秋葵茎中多糖提取的最佳工艺;应用乙醇-硫酸铵双水相体系对秋葵茎中的粗多糖进行纯化;柱前衍生HPLC色谱法分析了秋葵茎多糖的单糖组成;以维生素C为对照,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH）法和羟自由基（·OH）法对纯化秋葵茎多糖的抗氧化活性进行研究。
采用四氧嘧啶腹腔注射法制造糖尿病小鼠模型,将造模成功的糖尿病小鼠分为五组,阴性对照组、阳性组（二甲双胍组）、秋葵多糖低、中、高剂量组,用正常小鼠做对照,灌胃给药,测定各组小鼠的体重、空腹血糖值、血清中丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-P<sub>X</sub>）含量,研究秋葵茎多糖的降糖活性;采用0.2%的CCl<sub>4</sub>橄榄油溶液造小鼠急性肝损伤模型,将造模成功的急性肝损伤小鼠分为五组,阴性对照组、阳性组（联苯双酯组）、秋葵多糖低、中、高剂量组,用正常小鼠做对照,灌胃给药,测定各组小鼠的体重,并摘眼球采血,分离血清后测定谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、球蛋白（GLB）、白蛋白（ALB）和总蛋白（TP）的含量,同时取肝脏测定肝组织匀浆中的谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-P<sub>X</sub>）和丙二醛（MDA）含量,研究秋葵茎多糖保肝作用。
高效液相色谱法对黄精多糖分子量及组成的测定
#" 结果与讨论
# ! !" "#" 的纯度和相对分子质量的测定结果 ! ! 采用高效液相 色 谱 法， 利用凝胶色谱柱测定多 糖的相对分子质量。测定结果表明黄精干燥根的提 取物为均匀 单 一 的 对 称 峰， 表 明 *$* 为 均 一 产 品。 *$* 的数均相 对 分 子 质 量 （ !2 ） 为 ) ")% ， 相对分子 质量 （ !6） 为) &!) ， K 均相对分子质量 （ !B ） 为 ) !’) ， 分散系数为 $* "&’ ； *$* 的峰 形较 窄 （ 见图 $ ） ， 表明 *$* 相对分子质量的分布范围较小。
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采用液质联用方法检测黄秋葵荚果黄酮类物质含量
采用液质联用方法检测黄秋葵荚果黄酮类物质含量谢进;黄艳宁;徐瑞;曹亮;范海珊;朱校奇【摘要】The ultra-performance liquid chromatography?triple quadrupole mass spectrometry(UPLC?QqQ?MS)was applied to establish the rapid detection method for Abelmoschus esculentus flavonoids. This methodcan apply to qualify the products of A. esculentus. Rutin, baicalin, quercetin, baicalein, naringenin were selected as the standard compounds. The chromatographic separation was done on a ACCHROM UNITARY C18(2.1 mm× 150 mm,5 μm)in gradient elution with a mobile phas e of acetonitrile(A)and formic acid aqueous solution(B)(0.1%,W/W)asfollows:80%B-60%B(0-4 min),60%B(4-10 min),60%B-55%B(10-12min),5%B(12.1-18 min),5%B-80%B (18-20 min),80%B(20.1-25 min). The mass spectrometry condition: The capillary voltage was 4 000 V. The gas temperature was 330℃. The gas velocity was 12 L·min?1.The spray pressure was 275.8 kPa.The MS parameters were set up as:collision energy,34 eV for baicalein,22 eV for naringenin,30 eV for quercerin,18 eVfor baicalin and 34 eV for rutin. The results showed good linearity for five flavonoids with R2values ranging from 0.998 4-0.999 8. Extraction of A. esculentus was prepared by Ultrasonic method with 75% ethanol,1: 10ratio of material to liquid,ultrasonic 75 min. The recoveries rang from 87.23% to 101.91%(RSD varied from 0.61% to 6.61%). The content of these flavonoids in fruit seed of A.esculentus were detected.The method is rapid and has high sensitivity,high accuracy and good specificity. It provides thebasic experimental method for the flavonoids of A. esculentus.%采用超声提取方法,利用液质联用仪建立快速的黄秋葵黄酮类物质提取检测方法,使其能应用于黄秋葵相关产品的品质检测.选定黄芩素、柚皮素、槲皮素、黄芩苷和芦丁这五种黄酮类物质,确定液相色谱、质谱条件和检测线性范围等,从而确定黄秋葵荚果黄酮类物质的提取检测方法.色谱条件:色谱柱为华谱unitary C18(2.1 mm× 150 mm,5 μm);流动相:A为乙腈,B为含0.1%甲酸的水;洗脱梯度:80%B~60%B(0~4 min),60%B(4~10 min),60%B~55%B(10 ~12 min),5%B(12.1~18min),5%B~80%B(18~20 min),80%B(20.1~25 min).质谱条件:毛细管电压为4000 V,气体温度为330 ℃,气体流速为12 L· min-1,喷雾器压力为275.8 kPa.优化得到黄芩素、柚皮素、槲皮素、黄芩苷和芦丁这五个标样的裂解能量为34、22、30、18、34 eV;五个标样在11 min内完全分离,线性范围为0.5~400 μg·L-1,线性相关系数均大于0.99.黄秋葵荚果采用超声波法提取黄酮(75% 的乙醇,1 : 10的料液比,超声75 min),通过实验得到整个提取检测过程中黄芩素、柚皮素、槲皮素、黄芩苷和芦丁的回收率分别为(93.65 ± 3.66)%、(98.79 ± 204)%、(100.66 ±1.83)%、(87.23 ± 6.61)%、(101.91 ± 0.61)%,并对黄秋葵果荚中这5种黄酮物质的含量进行了测定.该方法重复性好、灵敏度高、专一性强,为黄秋葵黄酮类物质的研究提供了实验基础.【期刊名称】《广西植物》【年(卷),期】2017(037)012【总页数】6页(P1592-1597)【关键词】超高效液相色谱—三重四级杆质谱联用;黄秋葵荚果;黄酮类物质【作者】谢进;黄艳宁;徐瑞;曹亮;范海珊;朱校奇【作者单位】湖南省农业科学院农业环境生态研究所,长沙410125;湖南省农业科学院农业环境生态研究所,长沙410125;湖南省农业科学院农业环境生态研究所,长沙410125;湖南省农业科学院农业环境生态研究所,长沙410125;湖南省农业科学院农业环境生态研究所,长沙410125;湖南省农业科学院农业环境生态研究所,长沙410125【正文语种】中文【中图分类】Q946黄秋葵(Abelmoschus esculentus)学名咖啡黄葵，又称羊角豆、补肾果，在我国北方还称为洋辣椒，属于锦葵科秋葵属，为一年生草本植物，原产非洲，我国从印度引进，已有70多年的栽培历史。
柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成
柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远 陈 君 李 萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘 要 报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。
采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。
对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。
关键词 单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱 2001207204收稿;2002201209接受1 引 言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。
已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。
由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。
12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1～3。
Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。
本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。
2 实验部分2.1 仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。
衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。
色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。
单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。
黄秋葵多糖含量检测方法的探索
１１ １ 循环 水 式多 用 真 空泵 （ 州 长城 科 工 贸有 限公 司生 郑
糖浓度 （ ／￣） ｍｇｒ ， 图１ 苯酚一 硫酸 法测定 多糖 含量的标 准 曲线
产 ） Ｒ一 ０ ； ２ ０旋转蒸 发仪 （ ｕｈ 公 司生 产 ） Байду номын сангаас Ｘ Ｏ Ｂ ｅｉ ； Ｃ Ｓ ０超 声波 破碎仪（ 国 Ｓｎｃ＆ ｔｒ ｌ公 司生产 ） 美 ｏｉ Ｍａ ｉ ｓ ｓ ｅａ 。
摘要： 借助超声辅 助提 取技 术快速检测黄秋葵可溶性 多糖含 量 ， 超声功率 为 １０Ｗ， ０ 提取 时间为 ３ ｉ ； ０ｍ ｎ 多糖检测 波长为 ４ ０ｎ 换 算因子，＝１５ ； ９ ｍ， ．６ 多糖平均 回收率为 ９ ．５ ，Ｄ为 ４ ３ ％ （， ５ 。本 方法省时 、 ４５％ Ｓ ． １ １＝ ） ７ 准确 、 重现性好 ， 可
１３ ． 方法
１ ３ ３ 换 算 因 子 的测 定 称 取 干 燥 至 恒 重 的 精 制 多糖 ． ． 取 花后 ６ｄ的嫩果 ，０℃ ８
１３ １ 黄秋葵多糖的提取与精制 ．．
５ ｇ置 于 １０ ｍ ０ｍ ， ０ Ｌ容量瓶 中 ， 加水 至刻度 ， 摇匀得精 制多糖
溶液 ， 质量浓度为 ０ ５ｍｇｍ 。按 “ ． ． ． ” ． ／ Ｌ １３ ２ ３ 的方法测吸光度
江苏农业科 学
祝 子坪 ， 李
２１ ０ ２年第 ４ Ｏ卷第 ２期
一 ２ １一 ４
娜．黄秋葵 多糖含量检测方法 的探 索［］ Ｊ ．江 苏农业科 学，０ ２，０ ２ ：４ —２ ２ ２ １ ４ （ ）２ １ ４
黄秋葵 多糖 含量检测方法 的探索
祝子 坪 ，李 娜
（ 台州学 院生命科学学 院， 浙江 临海 ３ ７ ０ ） １０ ０
(色谱)高效液相色谱法分析生漆多糖中的单糖组成
Xylos e 1. 59 2. 56 4. 12 98. 8 3. 93
0 0
G l ucuronic aci d / / / /
18. 22 16. 50 32. 70
3. 5 讨论 本文 采用氨 基色谱 柱, 漆 多糖中 的葡萄 糖醛酸
因在固定相 上产生吸附作用而不 出峰。而图 1-b 上
的峰 1 经实验证 明为葡 萄糖醛 酸内酯 的峰, 这是漆 多糖 在三氟乙酸 水解时, 葡萄 糖醛酸 极易发 生内酯 化[ 7, 8] 的缘故。湖北毛坝大木漆多糖中的鼠李糖含量
容至 1. 0mL 。( 2) 漆多糖完 全酸水解产物制备: 取漆 多 糖 50mg , 酸 处 理过 程同 ( 1) , 干 燥 后加 水 定 容至 1. 0mL 。
回收率测 定 准确 称取上 述标准单 糖配成
1. 0mL 溶 液, 依次量 取 0. 1, 0. 2, 0. 5mL 分别 加入 3
3. 4 回收率与定量分析 对 2. 3 项 所得 的样 品溶 液进 行回 收实 验, 单糖
加入量折 算成 0. 1mL 标准溶 液的单糖 量, 测 定结果 取平均值( 见表 2) 。
Damu Lacquer Polysaccharide( L PS) ( b)
不同 品种 和来源 的漆 多糖 中单糖 含量 ( 摩 尔百
份毛 坝大 木漆 多 糖样 品 50mg 中, 干 燥, 按“样 品配
制”方法处理后, 加水定容至 1. 0mL 。
样品测定 用
-B on dap akLeabharlann NHTM 2
色谱
柱
和示差
折光检测器 ( 25℃水浴 恒温) , 以乙腈 ∶水∶甲 醇( 70
∶25∶5, V / V ) 作流 动相, 流 速 1. 6mL / min, 进 样量
柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成
柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成王媛媛;张晖;杨俊松;宗智慧【摘要】Objective To establish a precolumnderivatization procedure with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone ( PMP )-high performance liquid chromatography ( HPLC ) method for the determination of the monosaccharide composition of nine polysaccharides.Methods The nine polysaccharides were hydrolyzed, derivatized by PMP and analyzed by HPLC with the Inertsil ODS-SP C18 column(260mm ×4.6mm,5μm).The mobile phase was the 20%triethylamine-buffer solution withKH2PO4(pH=6.9),and the flow rate was 1.0 ml/min.The UV absorbance was detected at a wavelength of 254 nm,and the injection volume was 10μl with the column temperature 30℃.Results The method was successful in the separation of the mixture monosac-charide standards.The calibration line of each monosaccharide had a good relationship.And the precision, stability and reproducibility were also good.The nine polysaccharides were composed of different monosac-charide and the contents had some difference.Conclusion The method was accurate and stable for the deter-mination of the monosaccharide composition and content of nine polysaccharides.%目的：建立1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（ PMP）柱前衍生化-高效液相色谱法（ HPLC）对甘草多糖等9种多糖的单糖组成成分进行分析。
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第 12 期
裘雅渔，等： 高效液相体积排阻色谱法分析黄秋葵多糖的单糖组成
29
黄秋葵多糖经 TFA 水解 8 h 为其合适的水解时间。
（ a） 干燥
（ b） 无干燥 1 － 葡萄糖，2 － 阿拉伯糖，3 － 甘露糖，4 － 半乳糖，
水溶性成分。药理学研究表明，这种由水溶性纤维果 胶、半乳聚糖和阿拉伯树胶等组成的黄秋葵粗多糖，具 有保护肠胃、肝脏和皮肤粘膜作用［1 ～ 3］，并能刺激中枢 神经，加速血液循环及促进新陈代谢和全身血 管 活 化［4］，可防治因血管供血不足造成的心脏病、中风、骨 质疏松及老年痴呆等疾病［5］，因此对黄秋葵粗多糖的 成分研究很有必要。由于粗多糖由各种基本的中性单 糖组成的，因此对单糖组成测定是控制多糖质量标准 和提供多糖基本信息的最重要环节之一［6-8］。而单糖
建立的方法测定，黄秋葵多糖由木糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、半乳糖及阿拉
伯糖 7 种单糖组成，其摩尔比分别为 0． 57∶ 1． 00∶ 0． 53∶ 3． 50∶ 1． 75∶ 1． 25∶ 1． 70。该
HPSEC-ＲID 方法是简单、快速、灵敏、方便的分析技术，具有良好的重复性，可用于
黄秋葵多糖的单糖组成的质量控制。
Abstract： A method of analysis the monosaccharide composition of Okre polysaccharides with good reproducibility is established in thhi paper． The method is to base on HPSEC-ＲID method and chromatographic conditions that inc1ude Polyspher CH PB （ 7． 8 mm × 300 mm，made in Germany） column． The mobile phase is pure water at 40℃ of the column and the ＲID detector is 80℃ ． The method of HPSEC-ＲID analysis showed that Okra polysaccharides consists of xylose，mannose，rhamnose，glucose，fructose，galactose and arabonose with the molar ratios of 0． 57∶ 1． 00∶ 0． 53∶ 3． 50∶ 1． 75∶ 1． 25∶ 1． 70． It was proved that the HPSEC-ＲID method is simple，rapid，sensitive，convenient，and can be applied to the quality control of the monosaccharide composition of Okra polysaccharides． Key words： Okra polysaccharides； monosaccharide composition； HPSEC-ＲID
以单糖的浓度 X （ Wi /Ws） 与峰面积 Y（ Ai /As ） 作 图，得回归方程与相关系数。求出各单糖的斜率 b，即 定量较正因子，
f0 fVs = （ Wi / Ws） / （ Ai / As） 式中，Ai、As 分别为 Gly（ 丙三醇） 和标准单糖的 HPLC 峰面积。 1． 4． 3 摩尔比的计算
精确称取黄秋葵多糖样品 20． 0 mg 于安瓿中，分 别加入 2 mol / L TFA、2 mol / L H2 SO4 以及其混酸溶液 2． 0 mL，充氮气封管，110 ℃ 油浴分别水解 2、4、6、8 和 10 h。冷 却 至 室 温，反 应 混 合 物 1 000 r / min 离 心 5 min，取上清液用 0． 3 mol / L NaOH 溶液中和到约 pH 7． 0。 1． 3 HPLC 分析方法
关键词： 黄秋葵多糖； 单糖组成； 高效液相体积排阻色谱法
中图分类号： Ｒ 284． 1
文献标志码： A
文章编号： 1006 － 7167（ 2014） 12 － 0027 － 04
Analysis of Monosaccharide Composition in Okra Polysaccharides by High Performance Liquid Chromatography
QIU Ya-yu1 ， LI Qiao-ling1 ， CHENG He-yong2 （ 1． Department of Chemistry，Zhejiang University，Hangzhou 310027，China； 2． Department of Materials，Hangzhou Normal University，Hangzhou 310058，China）
第 33 卷 第 12 期 2014 年 12 月
实验室研究与探索
ＲESEAＲCH AND EXPLOＲATION IN LABOＲATOＲY
Vol． 33 No． 12 Dec． 2014
高效液相体积排阻色谱法分析黄秋葵多糖的单糖组成
裘雅渔1， 李巧玲1， 程和勇2
（ 1． 浙江大学 化学系，浙江 杭州 310027； 2． 杭州师范大学 材料系，浙江 杭州 310058）
本研究采用高效液相渗透色谱方法，用示差折光 质量型检测器和磺化的聚苯乙烯二乙烯基苯阳离子交 换树脂（ Pb2 + ） 柱（ 交联度为 6% ） ，用去离子水做流动 相建立适于黄秋葵多糖单糖组成测定的 HPSEC 新方 法，达到灵敏度适宜、安全
1 实验部分
采用 WATEＲS 2690 色谱系统，WATEＲS 2410 示 差折光检测器，检测器温度 40 ℃ ； 柱温 80 ℃ ； 色谱柱 为 Polyspher CH PB （ 7． 8 mm × 300 mm，made in Germany） ； 流速 0． 6 mL / min； 流动相为去离子水； 进样 体积 50 μL 。 1． 4 分析原理与方法 1． 4． 1 定量校正因子
以 Gly（ 丙三醇） 为内标，测定 7 种单糖的定量较
正因 子 （ fVs ） 。 精 密 称 取 各 标 准 单 糖，并 配 制 成 2 mmol / L的母液，用 时 稀 释 为 5 个 不 同 浓 度 的 单 糖 溶 液，并进行 HPLC 分析 （ 线性范围 1 ～ 10 mmol） 。 1． 4． 2 相关系数与回归方程
摘 要： 采用高效液相 （ HPSEC-ＲID） 体积排阻色谱法，建立了 7 种常见单糖的分
离模式，成功地用于黄秋葵多糖的单糖组成分析。应用体积排阻色谱法，色谱柱为
Polyspher CH PB （ 7． 8 mm × 300 mm，made in Germany） ，流动相为去离子水，柱温
80℃ ，示差折光检测器（ 检测器温度 40℃ ） ，流速 0． 6 ml / min 内标为丙三醇。根据
1． 1 仪器和试剂 WATEＲS 2690 液 相 色 谱 仪 （ 美 国 WATEＲS 公
司） ； PＲE-PACKED COLUMN ＲT POLYSPHEＲ CH PB 分析糖 柱 （ 德 国 MEＲCK 公 司） ； 旋 转 蒸 发 仪 （ 瑞 士 BUCHI 公 司 ） ； EZ-DＲY 冷 冻 干 燥 机 （ 美 国 Filter 公 司） 。三氟乙酸（ TFA，Merck 公司） ； 甲醇（ 色谱纯，天 津市科密欧化学试剂） ； 乙腈 （ TEDIA 公司） ； 葡萄糖 （ Glc） 、阿拉伯糖（ Ara） 、甘露糖（ Man） 、半乳糖（ Ga1） 、 鼠李糖（ Ｒha） 、木糖 （ Xy1） 、果糖（ FＲU） ，丙三醇（ Gly） 均购自 Sigma 公司，其他试剂均为分析纯。黄秋葵多 糖由本教研室制备。 1． 2 黄秋葵多糖水解
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实验室研究与探索
第 33 卷
存在互变异构体、差向异构体、结构相似等特征［9］，且 往往同一待测样品，如多糖、寡糖、糖肽、糖蛋白等可能 含有许多类型的单糖［10-11］，所以单糖分析有其自身的 特点，必须具有高效的分离技术，方可实现系列单糖的 有效分离。罗利攀等用 GC-MS 方法［12］对不同产地的 红景天多糖进行单糖组分分析，虽然 MS 检测器灵敏 度很高，但需要对单糖进行衍生化处理，过程繁琐且衍 生化是否充分大大影响测定结果； 王松柏等用毛细管 电泳法［13］测定防 风 粗 多 糖 的 单 糖 组 分 研 究 同 样 存 在 柱前衍生 的 缺 点； 其 他 诸 如 用 HPLC 反 相 柱 方 法 测 定［14］绞股蓝粗多 糖 的 单 糖 组 成 存 在 分 离 度 较 差 且 流 动相需用到大量乙腈等有毒试剂的明显缺点。
多糖水解样品的制备通常要经复杂的干燥过程， 方可进行下一步的分析。本样品制备方法省略干燥过 程，而将多糖水解液直接用 NaOH 中和（ 约中性） ，这 对于发展多糖的定性定量在线分析技术有重要的实际 意义。该制备方法的特点是： ① 简化工艺，避免干燥 损失。② 该多糖水解样品制备过程对多糖的组成测 定无影响。图 1 是黄秋葵多糖经 TFA 水解后，水解液 经传统的干燥过程和未经干燥过程的 HPLC 图，图中 未发现有明显吸收峰改变。③ 对多糖的含量、单糖组 成等定量分析更有意义，因此过程几乎无糖损失，多糖 水解液可直接进行在线大批量分析监测。 2． 3 黄秋葵多糖样品的单糖组成分析 2． 3． 1 多糖水解时间对分析结果的影响
以 Gly 为内标，得到各单糖的峰面积与内标的峰 面积比，乘以 f / m （ m 为单糖的相对分子质量） ，所得 的值之比为摩尔比，即：
ＲVs = fVs （ Ai / As ） / m