克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 PPT课件
抗原受体基因重排克隆性分析淋巴瘤辅助诊断技术的发展和应用现状
Ａ Ｇ的种 系（ｅｍｉｅ 或称胚 胎 的（ｍｂ ｏｉ） 型均 由不连 续 的 Ｄ Ａ 片段 组成 ， 括 可变 区（ａｉ ｌ Ｒ ｇｒｌ ） ｎ ｅ ｒ ｎｃ 构 ｙ Ｎ 包 ｖｒ ｂ ａｅ
ｒｇ ｎ ， 、 ｅｉ ｓＶ） 变异 区（ ｉ ｒ ｔ， ） 连 接 区（ｏｎ ｇ Ｊ 和恒定 区（ ｏ ｓ ｎ， ， Ｊ Ｃ 区存在 于 各种 类 型 Ａ Ｇ ｏ ｄｖ ｓｙ Ｄ 、 ｅｉ ｊｉｉ ， ） ｎ ｃｎｔ ｔＣ） Ｖ、、 ａ Ｒ 中， Ｄ 区仅存在 于 ＩＨ 和 Ｔ Ｒ 及 ＾链基 因中。Ａ Ｇ基 因重排是 淋 巴细胞 完成发育分 化成 熟 的正常 生理 而 ｇ Ｃ１ ｙ ３ Ｒ
过 程， 早在 骨髓 淋 巴细胞 分化 阶段 ，Ｒ Ａ Ｇ基 因即发生重 排 ， 形成 Ｖ（ ） 连 续 Ｄ Ａ 片段 （ １ ， 而产生相 应 ＤＪ Ｎ 图 ）从
的抗 原 受体合 成。
基 因 Ｖ、 、 Ｄ Ｊ片段 的数 量愈 多， 产生 的组 合数也愈 多。该 步骤 可 产生许 多不 同的 Ｄ Ａ序 列， Ｎ 从而编 码 出 不 同的蛋 白质 ， 虽然 它们 的差别及 其微 小 ， 却具 有独立特 异性 。基 因重排 过程使种 系 中承载 的相对有 限的 但
李 挺 ， 幼立 祖
（ ． 京 大学 第 一 医 院 病理 科 ， 京 １北 北
Ｃ ｒｅ ｎｖ ｒ ｔ ， Ｓ ｏｎ ｌ Ｕ ｉ ｓ ｙ Ｕ Ａ） ｌ ｅｉ
１０ ３ ；． ｅａｔ ｅｔ ｆ ｅ ａ ｐｔ ｌｇ， ｅＭｅ ｏｉ ｏｐ ａ， ｉ ｄ ａ Ｃ ｌ ｇ ００ ４２ Ｄ ｐｒ ｎ ｍ ｔ ａ ｏｏｙ ｔ ｔ ｄｓ Ｈ ｓｉ ｌＷｅ ｌ ｉ ｌ ｏｌ ｅ ｍ ｏＨ ｏ ｈ ｈ ｈ ｔ ｔ ｌＭｅ ｃ ｅ
遗传 学信息 转变为大量 的基 因片段 ， 而再编码 为 Ｉ和 Ｔ Ｒ分子 的抗原结 合部位 。这 些不连接 片段 的重新 从 ｇ Ｃ 洗牌和连接从 统计学水 平上 阐释 了人体 免疫 系统 发 生的抗 原 受体 的多变性 。据估 计 ， 因重排机 制 可产 生 基
TCR基因重排检测在T细胞淋巴瘤病理诊断中的作用
TCR Gene Rearrangement in the Pathologic Diagnosisof T-cell LymphomaDissertation Submitted toNorth China University of Science and Technology in partial fulfillment of the requirementfor the degree ofMaster of MedicinebyJia Wen(Pathology and Pathophysiology)Supervisor:Ph.D Ma XiaobingJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。
论文作者签名：日期：2015年6月10日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。
作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。
作者签名：导师签名：签字日期：2015年6月10日签字日期：2015年6月10日√摘要摘要目的探讨T细胞抗原受体（T cell receptor，TCR）基因重排在T细胞淋巴瘤中的特异性及其在病理诊断中的价值。
由于淋巴瘤在临床病理诊断中难度较大，仅凭HE和免疫组织化学特点得出的结论易造成误诊和漏诊。
在恶性淋巴瘤的分类中，T细胞淋巴瘤是一种临床上相对少见且异质性较高的肿瘤，准确做出诊断给病人的治疗和预后带来不可或缺的价值。
基因克隆简介ppt课件
5’3’-
5’3’-
GAATTC CTTAAG
G AATTC CTTAA G
-3’ -5’
-3’ -5’
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（4）粘性末端的意义 ①连接便利
i）不同的DNA双链： 只要粘性末端碱基互补就可以连接。 这比连接两个平齐末端容易的多。
ii）同一个DNA分子内连接： 通过两个相同的粘性末端可以连接成环 形分子。
pBR322质粒
pBR322质粒是由三个不同来源的部分组成的：第 一部分来源于pSF2124质粒的氨苄青霉素抗性基 因（ampr）；
第二部分来源于pSC101质粒的四环素抗性基因 （tetr）；
第三部分则来源于ColE1的派生质粒pMB1的DNA
复制起点（ori）。
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PstI
ScaI
Ampr
HindIII BamHI
④ lacZ的a肽互补 1）a-肽（ lacZ’ ）：
b-半乳糖苷酶N端的一段氨基酸片断 （11-41氨基酸），该段基因序列连接到 pUC载体上。
受体菌基因组的b-半乳糖苷酶基因的 缺失a肽（氨基端有缺失），不能形成 活性酶，不能分解Xgal
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⑤ 载体lacZ’与a互补
pUC质粒载体上的lacZ’ 编码a肽与这个 缺失突变的b-半乳糖苷酶“互补”，又 能分解Xgal。产生蓝色物质。
15
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2. DNA 连接酶 3.1 DNA连接酶（ligase)的发现
从细菌DNA环化现象推测，必定存在一种能 把两条DNA双链连接到一起的酶。
DNA复制一定有断口。 17
3.2 DNA ligase的特点
1. 两种DNA连接酶
（1）大肠杆菌连接酶 只能连接粘性末端。
（2）T4噬菌体的连接酶 不但能连接粘性末端， 还能连接齐平末端。
淋巴瘤ppt课件
05
淋巴瘤的预防和健康宣教
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
预防措施
保持健康的生活方式
均衡饮食、适量运动、保持正常体重 、避免长时间压力等，这些都有助于 降低淋巴瘤的风险。
避免暴露于有害物质
如某些化学物质、辐射等，应尽量减 少暴露，以降低患淋巴瘤的风险。
影像学诊断
超声检查
利用高频超声探头对淋巴结进行扫描，观察淋巴结的大小、形态、血流情况等， 辅助诊断淋巴瘤。
CT和MRI
通过断层扫描或磁场成像，观察淋巴结的结构和与周围组织的毗邻关系，有助于 判断淋巴瘤的分期和扩散情况。
实验室诊断
血常规检查
检测淋巴瘤是否侵犯骨髓，导致白细 胞、红细胞或血小板的异常。
淋巴瘤PPT课件
汇报人：可编辑
2023-12-24
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
• 淋巴瘤概述 • 淋巴瘤的诊断 • 淋巴瘤的治疗 • 淋巴瘤的预后和随访 • 淋巴瘤的预防和健康宣教
目录
CONTENTS
01
淋巴瘤概述
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
开展公益活动
组织公益活动，如健康讲 座、义诊等，向公众普及 淋巴瘤的知识和预防方法 。
建立信息平台
建立一个集知识普及、交 流互动于一体的信息平台 ，方便公众获取淋巴瘤的 相关信息和交流心得。
THANKS
感谢观看
他们更好地应对疾病。
倡导健康生活方式
鼓励公众保持健康的生活方式，如均 衡饮食、适量运动、避免不良习惯等 ，以降低患淋巴瘤的风险。
《基因克隆与表达》课件
2 留下问题和展望
引发学生对基因克隆与表达的思考和问题，并展望该领域的未来发展。
什么是基因克隆与表达
解读基因克隆与表达的定义， 了解其在基因研究中的作用。
基因克隆和表达的重要 性
探讨基因克隆与表达在科学 研究和应用中的重要价值。
课程大纲介绍本课程的内容和学习 Nhomakorabea 标，为后续的学习做好准备。
基因克隆
基因克隆是获取目标基因及其背后的DNA片段的过程。PCR、限制性酶切和连接反应是基因克隆中常用的关键 技术。
2 重组蛋白表达
探讨重组蛋白表达的步骤以及在基因工程和生物医药领域中的可行表达体系选择。
3 基因治疗
介绍基因治疗的原理和在疾病治疗中的应用前景。
结论
在基因研究和应用中，基因克隆和表达起着至关重要的作用。通过了解相关技术和应用，我们可 以更好地理解基因的功能和探索其在生物科学中的潜力。
1 基因克隆和表达的重要性再强调
PC R
探讨聚合酶链式反应（PCR）在 基因克隆中的原理、步骤和应 用。
限制性酶切
介绍限制性酶切的原理及其在 基因克隆中的应用。
连接反应
讨论连接反应在基因克隆中的 原理、步骤和应用。
基因表达
基因表达是指利用转化和重组蛋白表达系统来实现基因功能研究和基因治疗的过程。
1 转化
深入解析转化的原理、步骤和转化后的检测方法。
《基因克隆与表达》PPT 课件
这是一份专业的《基因克隆与表达》PPT课件，将带你深入了解基因克隆和表 达的重要性以及相关技术。通过本课件，你将掌握基因克隆和表达的关键步 骤和应用。
简介
基因克隆与表达是研究基因结构和功能的重要方法。本课程将介绍基因克隆与表达的基本概念、原理和技术， 并探讨其在生物科学研究和应用中的重要性。
淋巴瘤ppt课件
分型：
（1）1966年 Rappaport 结节型、弥漫型
（2）1982年 美国NCI Working Formulation (IWF)
低、中、高度恶性和杂类
（3）1985年成都工作会议分类 低、中、高度恶性、杂类
（4）1994年淋巴组织肿瘤欧美修改分类 （REAL）
（5）2001年 WHO造血与淋巴组织肿瘤分型
原发性渗出性淋巴瘤
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结内边缘区淋巴瘤
伯基特淋巴瘤
B细胞淋巴瘤，不能分类型,，
（1）边缘区淋巴瘤：
边缘带系指淋巴滤泡及滤泡外套之间的地带，此 部位发生的淋巴瘤系B细胞来源，CD5＋，表达bcl-2。 属于“惰性淋巴瘤”。表现为全身性淋巴结肿大。
（2）滤泡性淋巴瘤(FL)：
发生于生发中心，B细胞来源,CD19+,CD20+,CD5-, bcl-2+,伴t(14,18)及BCL-2重排,也为“惰性淋巴瘤”， 1、2级不易治愈，3级有侵袭性，强烈化疗效果好。
累及基因 MYC/IgH基因 MYC/IgLκ基因 MYC/IgLλ基因 Bcl-2/IgH CCND1/IgH Blc-6 MYC/TCRα
功能 转录因子 转录因子
凋亡抑制 G1-S 凋亡抑制 转录因子
注：染色体易位导致癌基因异常表达，抑癌基因失活，调控紊乱， 细胞增殖失控，分化受阻，凋亡抑制。
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（4）弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL):
组织学特征为大B淋巴细胞弥漫浸润，是最常见的侵袭性 NHL,免疫学表达CD19,CD20,CD22,CD79,目前的标准治疗方 案是R-CHOP，年龄在60岁以上者75%可获得完全缓解，5年 无病生存率在50%左右。
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2024年淋巴瘤课件-(带目录)
淋巴瘤课件-(带目录)淋巴瘤课件一、引言淋巴瘤，一种起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤，近年来在我国发病率逐年上升。
淋巴瘤的发病机制复杂，涉及遗传、环境、免疫等多个方面。
本课件旨在对淋巴瘤的病因、病理、临床表现、诊断和治疗等方面进行详细阐述，以提高大家对淋巴瘤的认识和防范意识。
二、淋巴瘤的病因与发病机制1.遗传因素：家族性淋巴瘤的发病率较高，遗传因素在淋巴瘤的发生中具有重要作用。
部分基因突变与淋巴瘤的发病密切相关，如BCL2、BCL6、C-MYC等基因。
2.环境因素：长期接触有害物质，如农药、染发剂、放射性物质等，可增加淋巴瘤的发病风险。
3.免疫因素：免疫系统异常是淋巴瘤发病的关键因素。
例如，HIV感染、器官移植后免疫抑制剂的使用等，均会增加淋巴瘤的发病风险。
4.感染因素：某些病原体感染，如EB病毒、幽门螺杆菌等，与特定类型的淋巴瘤发病有关。
三、淋巴瘤的病理分类1.霍奇金淋巴瘤：以Reed-Sternberg细胞为特征，约占所有淋巴瘤的10%。
可分为结节性淋巴细胞为主型和经典型两大类。
四、淋巴瘤的临床表现淋巴瘤的临床表现多样，主要表现为无痛性淋巴结肿大、发热、盗汗、体重下降等。
根据受累部位的不同，还可出现相应的症状和体征。
1.淋巴结肿大：无痛性、质地较硬，活动度差，可触及或不可触及。
2.肝脾肿大：部分患者伴有肝脾肿大，可导致腹胀、腹痛等症状。
3.结外侵犯：淋巴瘤可侵犯结外器官，如胃肠道、皮肤、骨骼等，出现相应症状。
4.全身症状：发热、盗汗、体重下降等。
五、淋巴瘤的诊断与鉴别诊断1.影像学检查：如CT、MRI等，可了解淋巴瘤受累范围及侵犯程度。
2.淋巴结活检：是确诊淋巴瘤的关键，包括细针穿刺活检和手术切除活检。
3.免疫组化：有助于明确淋巴瘤的病理类型和细胞来源。
4.骨髓穿刺：了解骨髓是否受累，评估病情严重程度。
5.鉴别诊断：需与淋巴结炎、淋巴结结核、恶性组织细胞病等疾病相鉴别。
六、淋巴瘤的治疗淋巴瘤的治疗原则为个体化、综合治疗。
淋巴瘤基因克隆性重排检测
专注分子诊断 | 引领精准医学
谢谢大家！
专注分子诊断 | 引领精准医学
IGH, IGK, TRB , TRG IGHV
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IGHV SHM的检测
结合 Leader 和 FR1 区域的引物在 5’端连接有通用的测序片段，这种设计，配合 JH 反向测序引物，能 够实现 PCR 扩增产物的双向测序。目前，欧洲慢性淋巴细胞性白血病研究机构（European Research Initiative on CLL，ERIC）的指南即使用双向测序判断 IGH V区体细胞超突变（Somatic Hypermutation， SHM）状态。
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基于不同方法的产品系列-Invivoscribe公司
基于PCR检测技术，简便、快 速、成本较低，所需DNA量少， 对DNA质量要求不高。灵敏度 高于10%，需配制胶，安全清 洁性较差。
基于PCR-毛细管电泳检测技术， 敏感性高，检测周期较长，结 果更加直观可靠
目前市场最被接受的检测方法。 灵敏度无法满足MRD要求，难 以定量和得到序列。
目前市场最被接受的检测方法。 灵敏度无法满足MRD要求，难 以定量和得到序列。
IGH, IGK, IGL, TRB ,TRD, TRG（BIOMED-2方案，唯一授权） IGHV（依据ERIC指南）
新兴技术，更高灵敏度（10-6），更 高分辨率，更高的通量，更广泛的 应用。但成本高，仪器贵，操作复 杂，时间长。
1-5年
9.2-18.9年
OS
3.2-10年
17.9-25.8年
预后
不良
良好
PFS：无进展生存期（Progression free survival） OS：总生存期（Overall survival）
IgH基因克隆重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤中的的诊断价值
IgH基因克隆重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤中的的诊断价值目的：探讨IgH基因克隆重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤的中的诊断价值。
方法：用PCR凝胶电泳检测B细胞非霍奇金淋巴瘤中IgH基因克隆性重排。
结果：43例B细胞非霍奇金淋巴瘤中，39例用FR3A引物检测阳性，阳性率90.7%；22例用FR2A引物检测阳性，阳性率55.2%；FR3A或者FR2A引物联合检测的总阳性率为90.7%。
结论：PCR凝胶电泳技术检测IgH基因克隆重排对B细胞非霍奇金淋巴瘤的诊断有重要的辅助价值。
标签：B细胞非霍奇金淋巴瘤IgH基因克隆重排淋巴瘤作为我国常见恶性肿瘤之一，从分子病理学和分子遗传学水平来探讨相关基因的特征和发病机制，以期建立相应的分子标记，进一步协助诊断、判断预后[1-2]。
淋巴瘤组织学形态多样，免疫组化染色可鉴定淋巴瘤的类型，但无法解决良恶性鉴别难题。
近年来，国外用分子生物学技术证实，细胞增殖的单克隆性可协助肿瘤的诊断。
本研究应用PC R方法检测B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）中免疫球蛋白重链（IgH）基因重排情况，探讨其在淋巴瘤诊断中的价值。
胚系状态下，IgH基因由可变区（V）、多变区（D）、连接区（J ）、恒定区（C）构成。
这些区域在染色体上分布是不连续，片断之间可有长度不等的插入序列将其分开，当淋巴细胞发育到一定阶段，在重组酶的作用下，重新排列组合构成一个有结构的基因，即所谓的基因重排。
正常B淋巴细胞免疫球蛋白重链（IgH ）基因重排为多克隆性，而恶性B细胞肿瘤表现为单克隆性。
因此，这种单克隆IgH 基因重排可用于B细胞淋巴瘤的诊断，对鉴别良、恶性淋巴细胞增生有重要的参考价值[3-5]。
1. 材料与方法1.1. 标本来源收集浙江大学附属医院，温州医学院2010-2013年间诊断的B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）石蜡标本43例，男性24例，女性19例，年龄17-75岁，平均年龄为52岁。
其中弥漫大B淋巴瘤（DLBCL ）30例，滤泡性淋巴瘤（FL）4例，粘膜相关淋巴组织淋巴瘤（MALT）4例，套细胞淋巴瘤（MCL）3例，小细胞淋巴瘤（SLL/CLL）2例。
白血病 淋巴瘤 骨髓瘤ppt课件
髓系、淋系、系列非特异性抗原
细胞遗传学 （Cytogenetics）
M2 t(8;21) t(6;9) M3 t(15;17) M4 inv(16)
分子生物学 （Molecular biology）
AML1/ETO、PML/RAR、 CBF/MYH11、MLL abnormalites
维甲酸+亚砷酸+化疗可根治APL
中国血液学家的贡献
学习交流PPT
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3.细胞遗传学 (cytogenetics)
主要检测白血病细胞染色体数目和结构异常。约70 ～90%ALL有克隆性染色体异常核型的检测指导治疗 方案的选择和预后的判断。
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成人AML细胞遗传学异常与预后
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根据核型ALL的预后分级
学习交流PPT
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Clinical findings
ØInfection Infection is due to neutropenia.
gram-negative bacteria or fungi.
Common presentations include cellulitis, pneumonia, and perirectal infections. Septicemia in severely neutropenic patients can cause death within a few hours if treatment with appropriate antibiotics is delayed.
原幼单细胞占NEC≥30%，原始单核细胞≥80%为 M5a,<80%为M5b。