落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响分析
供者淋巴细胞输注治疗小鼠H22肝癌的实验研究(一)
供者淋巴细胞输注治疗小鼠H22肝癌的实验研究(一)作者：曾冬香，姜藻，毕延智，张琰〔摘要〕目的:观察供者淋巴细胞输注（DLI）对小鼠H22肝癌的治疗作用。
方法:荷瘤昆明小鼠分荷瘤对照组（A组）、5.氟脲嘧啶（5.FU）化疗组（B组）、DLI组（C组）及5.FU加DLI组（D组）4组。
比较各组小鼠生存期、抑瘤率及瘤体病理检查结果，检测NK细胞及IL.2的活性。
结果:B、C组生存时间长于A组（P0.01），D组长于C组（P0.01）;B、C、D各组抑瘤率依次为61.3%、34.7%、89.5%;C、D两组NK细胞及IL.2活性明显高于A、B组（P0.05）;病理观察见C、D组大量炎性细胞浸润。
结论:DLI对小鼠H22肝癌有治疗作用，是一种潜在可行的实体瘤细胞过继免疫治疗方法。
〔关键词〕肝癌;供者淋巴细胞输注;移植物抗肿瘤效应;免疫治疗;小鼠随着现代生物技术的发展，生物治疗已逐渐成为治疗肿瘤的重要手段之一。
目前LAK细胞、TIL细胞、TAK细胞等过继性细胞免疫疗法都是给患者回输其自身的淋巴细胞。
本研究通过向荷瘤小鼠体内输注正常的供者淋巴细胞，诱导特有的异体抗肿瘤反应来攻击肿瘤，探索一种新的实体瘤过继免疫治疗方法。
1材料与方法1.1动物BALB.C小鼠、KM小鼠，雌性，均为8～10周龄，体重18～22g，由东南大学医学院实验动物中心提供。
1.2试剂环磷酰胺（cyclophosphamide，CP）为江苏恒瑞医药股份有限公司产品;5.氟脲嘧啶（5.FU）为天津金耀氨基酸有限公司产品。
1.3实体型荷瘤鼠模型建立无菌操作取传代8d的H22小鼠腹水，台盼蓝染色，活瘤细胞超过90%，调细胞浓度为1×107ml-1，分别取0.2ml接种于KM小鼠右侧腋下皮下，接种后第3天可触及肿瘤结节。
1.4实验分组共分4组，每组10只（另备3只中途处死）。
A组（荷瘤对照组）:不作任何处理;B组（5.FU化疗组）:接种后第3天开始化疗，5.FU20mg・kg-1腹腔注射，连续用药7d;C组〔供者淋巴细胞输注（donorlymphocytein-fusion，DLI）组〕:接种前11d经脾细胞加CP加供体脾细胞输注的方法〔1〕诱导对BALB.C小鼠的特异性免疫耐受状态，接种后第3、10、17天尾静脉注射供鼠BALB.C脾脏淋巴细胞，细胞数分别为0.5×107、0.5×107及1×107只-1。
鲜芦根水提物对小鼠细胞免疫功能的影响
鲜芦根水提物对小鼠细胞免疫功能的影响张克;牛国顺;邓莉;李寅超【摘要】目的:研究鲜芦根水提物对小鼠细胞免疫功能的影响.方法:将健康昆明种小鼠随机分为溶剂对照组,鲜芦根水提物高剂量组(22.5 g/1kg)、中剂量组(7.5g/kg)、低剂量组(3.75 g/kg)4组,每组12只.灌胃,1d1次,连续14 d.采用绵羊红细胞诱导小鼠迟发型变态反应实验法,观察鲜芦根水提物对小鼠细胞免疫功能状态的影响;计算淋巴母细胞和过渡态细胞百分率,观察鲜芦根水提物对小鼠淋巴细胞转化反应的影响.结果:①与溶剂对照组对比,鲜芦根水提物高、中剂量组小鼠24 h足跖肿胀度均增高,其中高剂量组较之差别有统计学意义(P＜0.01).②与溶剂对照组对比,鲜芦根水提物3个剂量组淋巴母细胞百分率和过渡态细胞百分率均有不同程度的提高,其中鲜芦根水提物高、中剂量组淋巴母细胞百分率和高剂量组过渡态细胞百分率差别有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:鲜芦根水提物对细胞免疫功能有明显的促进作用.【期刊名称】《中医研究》【年(卷),期】2016(029)010【总页数】3页(P68-70)【关键词】鲜芦根水提取液/作用;细胞免疫功能;24 h足跖肿胀度;淋巴母细胞百分率;过渡态细胞百分率;动物;小鼠【作者】张克;牛国顺;邓莉;李寅超【作者单位】河南省中医药研究院附属医院,河南郑州450004;河南省中医药研究院附属医院,河南郑州450004;郑州大学药学院,河南郑州450001;郑州大学药学院,河南郑州450001【正文语种】中文【中图分类】R285.5鲜芦根为禾本科多年生草本植物芦苇Phragmites communis(L.) Trin的新鲜根茎[1]，甘寒质轻，入肺胃经，有清热养阴、除烦、止呕、利尿的作用，且有清热而不伤胃、养阴而不留邪、药性平和的特点。
鲜芦根成分芦根多糖有一定的免疫促进作用，其1 000 g/L水煎剂具有抑制乙型溶血性链球菌作用[2]，而有关鲜芦根水提物的免疫调节作用鲜有报道。
清热解毒中药黄芩诱导小鼠肝癌H22细胞HSP70免疫原性的实验研究
清热解毒中药黄芩诱导小鼠肝癌H22细胞HSP70免疫原性的实验研究成晓燕;张轶;卢洪梅【摘要】目的观察清热解毒中药黄芩诱导HSP70免疫原性对小鼠肝癌H22细的免疫效应。
方法将被中药黄芩处理过的肝癌H22细胞免疫小鼠分成黄芩未封闭组、黄芩封闭组和空白对照组,观察各组荷实体瘤小鼠瘤体质量、肿瘤组织形态学改变及外周血T淋巴细胞亚群的改变情况。
结果黄芩未封闭组瘤体质量有所减轻,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);黄芩未封闭组肿瘤组织坏死明显;黄芩未封闭组外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞均明显升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。
结论清热解毒中药黄芩可诱导小鼠肝癌H22细胞高表达HSP70,在一定程度上能提高小鼠对同种移植瘤的主动免疫作用。
【期刊名称】《广东医科大学学报》【年(卷),期】2018(036)006【总页数】3页(P629-631)【关键词】清热解毒;黄芩;小鼠;肝癌H22;HSP70;诱导【作者】成晓燕;张轶;卢洪梅【作者单位】[1]广东医科大学第二临床医学院中医学教研室,广东东莞523808;[1]广东医科大学第二临床医学院中医学教研室,广东东莞523808;[1]广东医科大学第二临床医学院中医学教研室,广东东莞523808;【正文语种】中文【中图分类】R735.7黄芩属于清热解毒中药，近年研究表明黄芩具有广泛的抗肿瘤活性，对多种肿瘤细胞具有抑制和杀伤作用 [1-4]。
本课题组前期研究发现清热解毒中药可诱导肝癌H22细胞高表达热休克蛋白70(HSP70)[5]，本研究用清热解毒中药黄芩处理后的高表达HSP70的肝癌H22细胞免疫同种移植瘤小鼠，以进一步探讨黄芩的抗肿瘤作用是否为通过诱导肝癌H22 细胞HSP70的免疫原性而实现，结果报道如下。
1 材料和方法1.1 材料1.1.1 实验动物、细胞株和药物 SPF级昆明种小鼠，45只，雌性，周龄6～8周，体质量18～22 g，购于广东医科大学实验动物中心；腹水型肝癌H22细胞株由中山大学中山医学院提供；黄芩购买于本院的药剂科，经过本院中药学教研室鉴定为正品。
二种中药水提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响
二种中药水提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响摘要：目的探讨中药生地及菟丝子水提物对S180荷瘤小鼠肿瘤细胞免疫及体液免疫的影响。
方法选取接种S180肿瘤7d的荷瘤小鼠，抽取乳白色腹水并用无菌生理盐水稀释成1×10个/L细胞悬液（活细胞比率>95%），在小鼠右前肢腋窝皮下注射0.2 mL肿瘤细胞悬液，制成实体瘤动物模型。
设空白对照组，肿瘤对照组，菟丝子低剂量组、高剂量组，生地低剂量组、高剂量组，每组10只，按0.02 mL/g给予灌胃12天后，将小鼠摘除眼球静脉取血1～2 mL，进行C3、C4、IgG、CD4、CD8检测并分析。
结果在C3（1∶5）OD值浓度中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低剂量组P0.05；在C4（1∶10）OD值浓度中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低、高剂量组P值均0.05，无明显差异。
在IgG（1∶5000）中，与肿瘤对照组比较，生地低、高剂量组P<0.01，在CD4（1∶5）中，与肿瘤对照组比较，生地高剂量P<0.05；在CD8（1∶1）中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低剂量组P<0.05。
结论生地及菟丝子水提物可增强小鼠体液免疫及细胞免疫，以增强体液免疫为主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。
关键词：S180荷瘤小鼠；中药影响；细胞免疫；体液免疫中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349（2014）03-0056-02中医理论认为，肿瘤病的特点是“正虚邪实”。
《医宗必读》说：“积之成也，正气不足，而后邪气踞之。
”现代医学证实机体免疫力低下是肿瘤形成的主要原因之一。
[1]研究中药提高机体的功能状况，改善免疫功能而非直接去杀癌细胞。
调节机体免疫功能状态，使机体的抗肿瘤免疫功能得以加强.是中药抗肿瘤重要机制之一。
本实验研究生地及菟丝对S180荷瘤小鼠肿瘤生长对细胞免疫及体液免疫的影响。
1材料与方法1.1主要材料健康km小鼠，雌性（20±2）g。
水蛭素对荷肝癌H22小鼠的抑瘤作用
水蛭素对荷肝癌H22小鼠的抑瘤作用姚娓;张红;鲍发臻;刘勇;贾爱明【摘要】目的:观察水蛭素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用.方法:小鼠右前腋窝下皮下种瘤造成实体瘤模型,将40只小鼠随机抽样分为4组,水蛭素高剂量和水蛭素低剂量组、氟尿嘧啶组及模型对照组,每组10只.治疗期间记录各组小鼠的体重变化并观察小鼠生存状态,用药14 d后取瘤称重,计算抑瘤率,并计算肝/体比、肾/体比、脾脏指数以及用药前后的体重变化等指标.结果:水蛭素高、低剂量组对小鼠H22肝癌细胞均有明显的抑制作用,抑瘤率分别为37.63％、23.71％,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01、P＜0.05),水蛭素高、低剂量组与氟尿嘧啶组比较,肝/体比、肾/体比、脾脏指数均有显著性差异,有统计学意义(P＜0.05),经治疗后水蛭素各组小鼠与模型对照组及治疗前比较体重变化不明显(P＞0.05).结论:水蛭素对小鼠H22肝癌细胞有明显的抑制作用,同时对小鼠重要器官可能具有一定的保护作用.【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2011(011)012【总页数】3页(P1105-1107)【关键词】水蛭素;H22肝癌;氟尿嘧啶;抑瘤【作者】姚娓;张红;鲍发臻;刘勇;贾爱明【作者单位】大连医科大学附属第二医院中医科,大连116023;大连医科大学附属第二医院中医科,大连116023;大连医科大学附属第二医院中医科,大连116023;大连医科大学附属第一医院中医科,大连116011;大连医科大学附属第二医院中医科,大连116023【正文语种】中文【中图分类】R969水蛭(hirudin)为传统中药，有破血、逐淤、消癥、通经的功效，是治疗癥瘕痞块、血淤闭经的良药。
现代药理研究证实，水蛭有抗肿瘤作用，为肿瘤治疗中常用的药物。
水蛭抗肿瘤的主要活性成分是水蛭素[1]，既往对中药水蛭抗肿瘤作用的研究大多采用中药复方制剂，不少实验研究证实复方水蛭素对各种移植瘤的生长及转移均有不同程度的作用[2-4]。
中药落地生根对小鼠血液系统及免疫功能的调节作用
中药落地生根对小鼠血液系统及免疫功能的调节作用徐庆荣;胡营滨【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2006(010)015【摘要】目的:观察中药落地生根对小鼠血液系统及免疫功能的调节作用.方法:实验于2005年在滨州医学院免疫教研室完成.实验用落地生根水溶液由滨州医学院药理教研室制备,内含枸橼酸、苹果酸、琥珀酸、延胡索酸、乙醛酸、丙酮酸、草乙酸等14种氨基酸和槲皮素-3-双阿托伯糖甙及紫云英甙等.实验选用清洁级昆明种小鼠56只,随机分为高剂量落地生根组、低剂量落地生根组、地塞米松组和生理盐水组,每组14只.高剂量落地生根组采用800 mL/L落地生根水溶液(0.01 mL/g)灌胃;低剂量落地生根组用500 mL/L落地生根水溶液(0.01 mL/g)灌胃;地塞米松组给予5 mL/L地塞米松(0.01 mL/g)灌胃;生理盐水组给予等量的生理盐水灌胃.1次/d,灌胃15 d后观察落地生根对小鼠脾淋巴细胞增殖、白细胞介素2、骨髓细胞增殖反应以及血液系统的影响.结果:56只小鼠全部纳入结果分析.①高浓度的落地生根明显促进小鼠淋巴细胞增殖反应,与生理盐水组比较差异有显著性(P＜0.01);低浓度的落地生根对小鼠淋巴细胞增殖反应无明显的影响;地塞米松组与生理盐水组比较差异明显(P＜0.05).②高浓度的落地生根能促进细胞因子白细胞介素2的产生,与生理盐水组比较差异有显著性意义(P＜0.05);低浓度的落地生根对白细胞介素2的产生无明显的影响;地塞米松组与生理盐水组比较差异不显著(P＞0.05).③落地生根对骨髓细胞增殖反应无明显影响;地塞米松组与生理盐水组比较差异有显著性(P＜0.01).④高浓度落地生根组血小板的浓度为(711.33±234.05)×109 L-1,生理盐水组为(684.20±539.53)×109 L-1,两组比较差异有显著性意义(P＜0.01),低浓度落地生根对血小板浓度无明显影响.结论:中药落地生根可以增强小鼠的免疫功能,并有促进血液凝固的作用.【总页数】3页(P138-140)【作者】徐庆荣;胡营滨【作者单位】滨州医学院药理教研室,山东省,滨州市,256603;滨州医学院附属医院内科,山东省,滨州市,256603【正文语种】中文【中图分类】R96【相关文献】1.复方中药功能饼干对小鼠免疫功能调节作用的实验研究 [J], 江振友;杨志忠;邹林;严群超;施珊珊;岳磊;张静;肖元涛;袁汉思;袁伟成2.女贞子复方中药对老年雌性小鼠神经-内分泌-免疫功能调节作用的实验研究 [J], 欧阳;张永萍;徐剑;孔德明3.清热解毒中药对小鼠免疫功能的调节作用 [J], 高素君; 王冠军; 刘大同; 郭京丽; 姜一强; 易永林4.中药复方别敏胶囊对呼吸道变应性小鼠内分泌免疫功能的调节作用(英文) [J], 张素琴;沈自尹;胡国让;刘闰红;张新民5.养阴益气凉血合剂及方中各组中药对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用 [J], 王莒生;李萍;刘欣;梁代英;盛巡;王芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
西洋参水提物对小鼠免疫力的影响
200目筛网过滤，用Hank’s液洗涤3次，用完全1640培养液 配成3×106个/mL细胞悬液。将每份脾细胞悬液加入24孔培 养 板，1mL/孔，2孔/份 样 品， 一 孔 加75μLConA液（相 当 于 7.5μg/mL）,一孔作为对照，置CO2培养箱培养68h后，取出 培养板，每孔轻轻吸取0.7mL上清液，加入0.7mL不含小牛血 清的1640培养液及50μLMTT液（5mg/mL），继续培养4h。取 出培养板，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打使紫色结晶完全 溶解。将溶解液移入2mL比色杯，在570nm波长测定OD值， 以加ConA孔OD值减去未加ConA孔OD值代表淋巴细胞的增殖 能力，受试剂量组的光密度差值显著高于阴性对照组的光密 度差值，判为该项实验结果阳性。
一、材料与方法
（一）样品制备 西洋参饮片加水8倍量，提取3次，每次1.5h，收集提取 液， 滤 过， 浓 缩 至 相 对 密 度 为1.05～1.08（70℃）， 喷 雾 干 燥，得西洋参水提物粉末（每克粉末相当于生药量2.60g）。 （二）受试动物 SPF级 雄 性Ba1b/c小 鼠， 体 重18～22g［北 京 维 通 利 华 实 验 动 物 技 术 有 限 公 司， 许 可 证 号：SCXK（京）20160006］。动物饲料由成都达硕实验动物有限公司提供，饮水为 纯化水，整个实验期间动物自由摄食和饮水，动物房温度 20～26℃，相对湿度40%～70%。 （三）主要试剂与仪器 刀 豆 蛋 白A（ConA）、MTT、 绵 阳 红 细 胞（SRBC）、 YAC-1细胞、LDH基质液、T-1000电子天平、7100全自动生 化分析仪、二氧化碳培养箱、多功能酶标仪等。 （四）方法 1.实验分组及周期 实验动物共分为4个测定组，每个测定组均分别包括阴 性对照组和受试物三个剂量组，每组10只动物。根据人体 推荐西洋参水提物粉末剂量为1.2g（60kg.d）（相当于生药量 3.12g），动物给药剂量分别按人体推荐剂量的5倍、10倍、30 倍 设 计 低 剂 量 组（0.1g/kg.BW）、 中 剂 量 组（0.2g/kg.BW）、 高剂量组（0.6g/kg.BW）。所有测定组经口（灌胃）给予不同 剂量的样品，灌胃量均为20mL/kg.BW，每天一次，连续灌胃 30d；阴性对照组给予同等容积的纯化水。 2.脾淋巴细胞转化实验（MTT法）[2] 实验30d后，颈椎脱臼处死动物，无菌取脾脏，撕碎，
水蛭素对小鼠H22肝癌细胞Histone H1表达的影响
水蛭素对小鼠H22肝癌细胞Histone H1表达的影响贾爱明;张红;鲍发臻;王朝晖;刘耘;姚娓【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2011(011)011【摘要】目的:观察水蛭素对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用,并探讨其作用机制.方法:接种H22肝癌细胞于小鼠右腋下,形成实体瘤模型.将40只小鼠随机抽样分为4组,盐水对照组(A组)、氟尿嘧啶(5-Fu)组(B组)、水蛭素高剂量组(C组)、水蛭素低剂量组(D组),每组10只.连续用药14 d,次日处死取瘤称重,计算抑瘤率,免疫组化技术检测Histone H1的表达.结果:B、C组对小鼠肝癌细胞的生长抑制率分别为52.4％、37.98％.Histone H1在B、C、D组中均呈阳性表达,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:水蛭素对肝癌细胞有抑制作用,其作用机制可能与影响Histone H1参与调控基因表达有关.【总页数】3页(P1008-1010)【作者】贾爱明;张红;鲍发臻;王朝晖;刘耘;姚娓【作者单位】大连医科大学附属第二医院中医科,大连 116023;大连医科大学附属第二医院中医科,大连 116023;大连医科大学中西医结合内科,大连 116044;大连医科大学附属第二医院病理实验室,大连 116023;大连医科大学附属第二医院中医科,大连 116023;大连医科大学附属第二医院中医科,大连 116023【正文语种】中文【中图分类】R932【相关文献】1.H22肝癌细胞与正常小鼠肝细胞胰岛素受体表达的对比 [J], 欧晓红;匡安仁;梁正路;王朝俊2.三奇注射液对小鼠H22肝癌移植瘤突变型P53和增殖细胞核抗原表达的影响[J], 刘赞3.小鼠H22肝癌细胞中高表达膜蛋白的初步分析 [J], 刘秋均;李洪;杨烨;张春燕4.CD69分子在肿瘤抗原体外活化H22肝癌腹水瘤小鼠脾淋巴细胞的表达 [J], 付立奎;刘宁宁;高立生5.芪薏益肝煎对小鼠H22肝癌细胞survivin及caspase-3表达的影响 [J], 郑波;张红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响分析
发表时间：2019-12-12T12:48:00.970Z 来源：《医药前沿》2019年32期作者：杨志杰樊星花梁宇红[导读] 目的：探讨落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响。
（广西医科大学第四附属医院暨柳州市工人医院药学部广西柳州 545005）【摘要】目的：探讨落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响。
方法：建立H22荷瘤小鼠模型，随机分为空白组、阳性组（5-FU）、模型组、水提物低剂量组（4g/kg生药量）、中剂量组（8g/kg生药量）及高剂量组（16g/kg生药量）共6组，每组10只。
阳性组按20mg?kg-1腹腔注射5-FU，模型组、空白组灌服等体积生理盐水，连续给药15天。
进行碳廓清试验，计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数和肝脏指数。
结果：落地生根水提物中、高剂量组可明显抑制H22实体瘤生长（P＜0.05），抑瘤率分别为65.68%和74.56%。
中、高剂量组可显著增高碳廓清指数（P＜0.05）与脾脏指数（P＜0.05），仅中剂量组对胸腺指数有显著增高作用（P＜0.05），落地生根水提物对肝
脏指数无影响。
结论：落地生根水提物对H22荷瘤小鼠的免疫系统有一定的保护作用，能调节巨噬细胞吞噬功能的作用，增强机体的免疫功能，提高抗肿瘤能力。
【关键词】落地生根水提物；H22；免疫功能；小鼠【中图分类号】R964 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2019）32-0206-03 落地生根Bryophyllum pinnatum (L.f.) Oken为景天科(Crassulaceae)落地生根属(BryophllurnSalisb)植物，在广西、广东、云南、福建和台湾等地区广泛分布，别名为花蝴蝶、倒吊莲、土三七、叶生根、番鬼牡丹、叶爆芽、天灯笼、枪刀草、厚面皮、著生药等，全草入药，性酸、寒[1]。
除具有观赏价值外，还具有药用价值，可治创伤出血、疔疮、乳腺炎、跌打损伤吐血、热性胃痛、关节肿痛、急性中耳炎、皮肤溃疡等[2]。
在国外，落地生根广泛分布于非洲、美洲热带以及印度和澳大利亚，作为传统药物用于腹泻、呕吐、镇痛、抗炎、抗病原微生物、利什曼病及抗变态反应等[3]。
本实验就落地生根对H22肝癌小鼠免疫功能影响做研究，尝试对落地生根水提物抗肿瘤的作用进行初步探讨。
1.资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1细胞株及动物小鼠H22肝癌细胞由广西医科大学药理学教研室提供，经本实验室传代保存。
昆明种小鼠60只，体质量18～22g，雌雄不拘，由广西医科大学实验动物中心提供。
试验动物使用许可证 SCXK2009-0002。
1.1.2药品与试剂落地生根采取于广西来宾市忻城县，经河池学院化学与生物工程学院邓晰朝副教授鉴定为鉴定景天科(Crassulaceae)落地生根属(BryophllurnSalisb)植物落地生根Bryophyllum pinnatum (L.f.) Oken。
氟尿嘧啶注射液（5-FU），天津金耀药业有限公司，批号1504261。
一得阁墨汁购于一得阁墨业有限责任公司。
1.2 仪器
多功能提取浓缩机组(上海顺仪实验设备有限公司)；分析天平(日本岛津公司)；DRAGON LAB移液器(20～200μL)( 大龙兴创实验仪器（北京）有限公司)；酶标仪（美国伯乐BIO-RAD公司）。
1.3 药材提取
取6100g落地生根干药材，加10倍量蒸馏水，回流提取3次，每次1小时，过滤，合并3次滤液，浓缩成浸膏，浸膏量为1246.8g，置于4℃冰箱，待用。
1.4 造模、分组及给药
取冻存的H22肝癌细胞，复苏为0.9%氯NaCL溶液混悬，小鼠腹腔注射，连续传两代。
无菌条件下取H22肝癌小鼠腹水，稀释成含量为1×107?mL-1的细胞悬液后于小鼠右侧腋窝皮下接种，小鼠接种肿瘤细胞悬液后称体重，随机分为空白组、阳性组（5-FU）、模型组、水提物低剂量组（4g?kg-1生药量）、中剂量组（8g?kg-1生药量）及高剂量组（16g?kg-1生药量）共6组，每组10只。
空白组为正常小组，阳性组按20mg?kg-1给予5-FU腹腔注射，模型组、空白组灌服等体积生理盐水。
各组均于接种后24小时开始给药，每天1次，连续15天。
1.5 小鼠碳廓清实验
末次给药24小时后,尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁,每10g体质量注射0.1mL，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2（t1）、10min（t2），分别从内眦静脉丛取血20μL，加入到2mL 0.1% Na2CO3溶液中，摇匀。
以0.1% Na2CO3溶液作空白对照，用酶标仪在600nm波长处比色测定光密度值（OD）。
将小鼠处死，取肝、脾，称质量，计算吞噬指数（a)。
吞噬指数计算方法：K=（lgOD1-lgOD2)/(t2-t1).吞噬指数（a)=体质量×K1/3（肝质量+脾质量）。
1.6 瘤重、胸腺指数、脾脏指数、肝脏指数的测定
分别称取小鼠体重，脱颈椎处死小鼠，剥离肿瘤组织，取小鼠脾脏、胸腺和肝脏，精密称定，计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数和肝脏指数：肿瘤抑制率（%）={1-（平均实验组瘤重/平均对照组瘤重）}×100%；胸腺指数=胸腺质量/体重；脾脏指数=脾脏质量/体重；肝脏指数=肝脏质量/体重。
1.7 统计学处理
采用SPSS22.0统计软件进行数据分析，所有数据均以-x±s表示，两组间差异比较采用t检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。
2.结果
2.1 抑瘤作用
研究结果显示，与模型组比较，落地生根水提物中、高剂量组可明显抑制小鼠H22实体瘤生长（P＜0.05)，抑瘤率分别为65.68%和74.56%，与5－氟尿嘧啶作用相当，见表1。
表1 落地生根水提物对小鼠瘤重及免疫脏器指数的影响。