疟原虫快速诊断试纸(RDT)检测方法
疟疾的诊断与预防措施
疟疾的诊断与预防措施疟疾是一种由寄生虫引起的传染病，主要通过蚊虫叮咬传播给人类。
这种疾病在全球范围内造成了严重的卫生问题，并且给许多发展中国家带来了巨大的经济和社会负担。
为了控制和预防疟疾的传播，正确的诊断和采取有效的预防措施至关重要。
本文将介绍关于疟疾诊断和预防措施的必备知识。
诊断篇1. 临床表现：对于怀疑患有疟疾的患者，医生需要认真询问其既往史以及目前出现的症状。
典型的临床表现包括周期性高热、寒战、头痛、乏力、肌肉酸痛等。
然而，部分患者可能没有明显的典型表现，尤其是在儿童、孕妇和老年人身上。
2. 实验室检查：为了确诊或排除患者是否感染了寄生虫，请务必进行实验室检查。
目前常用的方法包括厚滴片检查和脱氧核糖核酸（DNA）检测。
厚滴片是一种低成本、易于操作的方法，通过显微镜观察血液样品中的寄生虫形态来进行诊断。
而基于DNA技术的检测方法则更加敏感和特异。
3. 快速诊断试剂：为了加快疟疾的诊断速度，许多国家已经开始使用快速诊断试剂（RDTs）。
这种试剂不需要复杂的设备，通过取少量患者血液，并将其应用于试纸上，可以迅速得出结果。
然而，快速诊断试剂并不适用于所有情况，因此在使用之前必须确认其可靠性和准确性。
预防篇1. 蚊虫控制：作为传播疟疾的主要媒介，控制蚊虫非常重要。
常见的方法包括清除水源、改善卫生环境、覆盖暴露水体以及使用杀虫剂等。
特别是在高发病区域或季节性高发期，居民应该养成勤洗澡、穿长袖衣服和睡在帐篷等防虫习惯。
2. 抗疟药物预防：对于那些在高风险区域生活、工作或前往旅行的人群，抗疟药物预防被认为是非常重要的。
这些药物可以有效地预防感染和控制寄生虫数量，减少病例发生率。
然而，使用抗疟药物需要谨慎，并遵循医生的建议。
3. 疫苗研发：目前，尚无完全保护人类免受疟疾感染的有效疫苗。
然而，科学家一直在积极开展相关的研究，并已有几种候选疫苗正在进行临床试验。
如果能够成功开发出可行且安全的疫苗，将为全球范围内预防疟疾提供重要支持。
疟原虫检验专业技术标准
A typical Plasmodium vivax presentation
A thin film from a 22 year old male holidaying in Lombok (Indonesia) one month previously. Intermittent fevers since returning.
5. 核可能出 现在环状 体边缘
6.
卵形疟（P. ovale）诊断要点
1. 红细胞涨大
2. 常见慧星状 ( 也称齿轮状)
3. 环粗大
4. 薛氏点明显
5. 成熟滋养体类 似三日疟原虫 但更粗大
6. 成熟裂殖体约 含4-12个裂殖 子
7.
种
周 围 血 红细胞形态
疟原虫形态
中发育
阶段
大小
点彩
胞浆
疟色素
恶性疟 P.falciparum
● 分布热带、亚热带，是非洲的重要疾病
● 我国流行区域为云南省和海南省
● 四种疟原虫中致病力最强，无免疫力者 感染后出现急性症状,不及时治疗可危及 生命
间日疟 P.vivax
● 遍布全球温带地区及大片热带地区。在热 带非洲，特别是西非则很少见
● 间日疟原虫分布于我国大部分地区,主要是中部地区 ● 病程良性, 有复发
间日疟（P. vivax ）鉴定要点
红细胞通常涨大
薛氏点明显
成熟环状体粗大
滋养体胞浆有阿米 巴样伪足
血片中可见各期的 原虫形态
成熟裂殖体约含1224个裂殖子
疟原虫镜检技术
疟原虫镜检技术血片制作与染色一、血片制作（一）所需器材1、载玻片：玻片使用前应清洗。
新玻片应先浸入有液态洗涤剂的清水中10~20分钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干，最后用干净、柔软的棉巾将玻片擦亮。
用于特殊的目的时，最后可将玻片浸泡在95％酒精中5~10分钟，再将玻片擦干擦亮。
已用过的玻片应先浸泡于洗涤剂溶液中1~2天，或浸泡于煮沸的5％肥皂水中1~2小时，再移到新配置的洗涤剂溶液中1~2小时，逐个擦去玻片上旧的血膜痕迹，用清水漂洗干净，再将玻片擦干擦亮。
洗净的玻片每10~20张用白纸包好放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。
2、采血针：使用一次性釆血针。
3、玻片盒：为防止污染和苍蝇吸食血膜，新制作的血膜应放在玻片盒中，厚血膜放置时要保持水平，直到充分干燥。
4、75％酒精棉球：用于采血前后的消毒。
5、记号笔或铅笔：用于玻片上书写号码。
（二）采血部位及取血方法采血部位以耳垂较为合适，也可在手指末端采血，婴儿可从拇趾或足跟取血。
先用75％酒精棉球消毒取血部位后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2mm深，然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出血滴。
（三）涂制血膜取玻片2张，1张作载片，1张作推片（具有光滑边缘）。
用右手拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片的左下角刮取血液4~5μl，再用该端中部刮取血液1~1.5μl。
将左下角的血滴涂于载片的中央偏右处，由里向外划圈涂成直径为0.8~1cm的圆形厚血膜（厚度以1个油镜视野内可见到5~10个白细胞为宜）。
用干棉球抹净玻片角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜，制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠。
每张载玻片上分别做1个薄血膜，1个厚血膜。
取干净玻片及推片各一张，用右手大拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片的左下角刮取血液4～5μl（约火柴头大小），再用该端中部刮取血液1～1.5μl。
疟原虫半定量计数方法
疟原虫半定量计数方法引言疟疾是一种由疟原虫引起的传染病，全球范围内仍然存在高发和流行的地区。
因此，准确快速地检测疟原虫的数量对于疟疾的诊断和治疗非常重要。
疟原虫的半定量计数是一种常用的方法，本文将详细介绍该方法的原理、步骤以及优缺点。
二级标题1：疟原虫半定量计数方法的原理三级标题1：荧光显微镜技术在疟原虫半定量计数方法中，荧光显微镜技术是一种常用的方法。
该方法基于荧光显微镜的原理，通过特殊的荧光染料，使疟原虫在显微镜下呈现出特定的荧光信号。
三级标题2：实时荧光定量PCR技术实时荧光定量PCR技术也是疟原虫半定量计数的一种常用方法。
该方法通过PCR扩增疟原虫的DNA，并使用荧光标记探针或SYBR Green等荧光染料进行检测。
三级标题3：流式细胞术流式细胞术是疟原虫半定量计数的另一种常用方法。
该方法通过流式细胞术仪器，将疟原虫样品悬浮于液体中，并通过流式细胞术仪器的检测系统，对疟原虫数量进行快速准确的测定。
二级标题2：疟原虫半定量计数方法的步骤三级标题1：样品处理在进行疟原虫半定量计数之前，首先需要对样品进行处理。
样品处理的步骤包括收集样品、制备样品涂片等。
三级标题2：荧光显微镜技术的步骤荧光显微镜技术的步骤包括染色、显微镜观察、图像分析等。
三级标题3：实时荧光定量PCR技术的步骤实时荧光定量PCR技术的步骤包括DNA提取、PCR扩增、荧光检测等。
三级标题4：流式细胞术的步骤流式细胞术的步骤包括样品制备、细胞染色、流式细胞术仪器的设置和数据分析等。
二级标题3：疟原虫半定量计数方法的优缺点三级标题1：优点•精确性高：疟原虫半定量计数方法可以在很短的时间内准确地测定疟原虫的数量。
•灵敏性好：疟原虫半定量计数方法可以检测低浓度的疟原虫。
•可靠性高：疟原虫半定量计数方法的结果可靠且重复性好。
三级标题2：缺点•依赖设备：疟原虫半定量计数方法需要使用特殊的仪器和设备，增加了成本和操作的复杂性。
•需要专业技术人员：疟原虫半定量计数方法对操作人员的技术要求较高，需要专业培训和经验积累。
疟疾培训试题及答案
疟疾培训试题及答案一、选择题1. 疟疾是由以下哪种寄生虫引起的？A. 疟原虫B. 钩虫C. 丝虫D. 蛔虫答案：A2. 下列哪项不是疟疾的传播途径？A. 蚊子叮咬B. 食物传播C. 血液传播D. 母婴传播答案：B3. 疟疾的主要症状包括以下哪些？A. 发热B. 寒战C. 头痛D. 以上都是答案：D4. 疟疾的预防措施不包括以下哪项？A. 使用驱蚊剂B. 穿长袖长裤C. 吃生鱼片D. 睡觉时使用蚊帐答案：C二、填空题1. 疟疾的传播媒介是________。
答案：蚊子2. 疟疾的典型症状包括________和________。
答案：发热、寒战3. 预防疟疾的措施包括使用________和________。
答案：驱蚊剂、蚊帐三、简答题1. 简述疟疾的诊断方法。
答案：疟疾的诊断通常通过血液涂片检查来确定疟原虫的存在，也可以通过快速诊断测试（RDT）来检测疟原虫抗原。
2. 描述疟疾的治疗原则。
答案：疟疾的治疗原则是及时使用抗疟药物，如氯喹、青蒿素等。
治疗应根据疟疾的类型和患者的具体情况来确定。
四、判断题1. 疟疾仅在热带地区流行。
答案：错误。
疟疾虽然主要流行于热带和亚热带地区，但在温带地区也有传播。
2. 疟疾可以通过疫苗预防。
答案：错误。
目前还没有针对疟疾的疫苗被批准用于大规模使用。
3. 疟疾患者需要隔离治疗。
答案：错误。
疟疾不是通过空气传播的疾病，不需要隔离治疗。
五、论述题1. 论述疟疾对全球公共卫生的影响。
答案：疟疾对全球公共卫生构成了重大威胁，特别是在非洲、亚洲和南美洲的部分地区。
它不仅导致了大量的死亡和疾病，还对经济发展、教育和社会稳定产生了负面影响。
因此，全球范围内的疟疾控制和预防工作至关重要。
疟原虫操作规程
1. 实验原理应用瑞氏染色法对制备好的厚血片进行染色后在显微镜下查找疟原虫。
2. 标本采集2.1标本采集前病人准备：间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10余小时采血；恶性疟患者，应在发作后20h 左右采血。
2.2标本种类：全血或末梢血2.3标本要求：厚血片的溶血要及时。
3. 标本储存：厚血片的放置期限在夏季不超过48h，冬季不超过62h。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染。
6. 操作步骤6.1 在洁净玻片上，滴患者血液2滴。
6.2 用推片角将血液由内向外转涂成直径约1cm、厚薄均匀的血膜，在室温中自然干燥。
6.3 在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血数分钟。
脱去血红蛋白的血膜呈浅灰色，倾去溶血液。
6.4 不必待干，进行瑞氏染色。
6.5 干后镜检。
7. 结果判断与分析：在油镜下观察20个视野或以上才能报告“未检出疟原虫”；发现虫体后还应在薄血片上进行分类鉴别。
8. 临床意义：本实验有利于提高疟原虫的阳性检出率。
9. 操作性能：快速简便、阳性检出率高、利于人群普查初筛10. 方法局限性10.1 易受溶血不完全的影响。
10.2 经验缺乏者易受其他杂物的影响。
10.3 存在主观判断的失误10.4 不易鉴别出疟原虫的种类。
11. 参考文献中国人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程（第二版）.1997,85-8612. 注意事项12.1 染色后，水洗时不要先倒去染液，应让清水流进染液，使沉渣冲走。
12.2 注意区别易与疟原虫混淆的其他杂物。
疟原虫检测依据
疟原虫检测依据
疟原虫检测是一种用于诊断疟疾的关键性检测方法。
疟疾是由疟原虫寄生在人体内引起的传染病，因此检测疟原虫的存在是确诊疟疾的关键步骤之一。
以下是常见的疟原虫检测依据：
临床症状：疟疾患者通常会出现周期性发作的高热、寒战、头痛、肌肉酸痛、恶心、呕吐等症状。
虽然这些症状并不特异，但结合疫情流行地区和病史可以引起对疟疾的怀疑。
实验室检测：
血液涂片检查：这是最常用的疟原虫检测方法之一。
通过显微镜检查患者的血液涂片，观察疟原虫在红细胞内的形态特征，包括形态、大小、数量等。
免疫学检测：包括抗原检测和抗体检测。
抗原检测可以检测血液中的疟原虫特异性抗原，而抗体检测可以检测病人体液中的疟原虫特异性抗体，从而确定疟疾的感染情况。
分子生物学检测：包括聚合酶链反应（PCR）等技术，可以检测疟原虫的遗传物质，具有高度的敏感性和特异性。
流行病学史：确定病人是否曾经旅行到或居住在疟疾流行地区，或者是否接触过疟疾感染者，有助于确定诊断。
疟疾流行地区：考虑患者是否居住在或近期旅行到疟疾流行地区，这也是对疟疾进行诊断和筛查的重要依据之一。
综合以上依据，结合临床症状、实验室检测和流行病学史，可以更准确地诊断疟疾，确定疟疾的感染类型（原发性感染、复发性感染等），并指导相应的治疗措施。
及早诊断和治疗对于预防疟疾的严重并发症和传播具有重要意义。
疟原虫检验技术
正确的推片姿势
标准的疟疾厚薄血膜片位置
各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片
门诊发热病人血片 居民普查血片
厚薄血膜的标准
●厚血膜血量适宜，不宜过多或过少
●薄血膜平整,无皱折和空泡.红细胞单层排列
血片染色
两种染色方法: ●吉氏染色法 ●瑞氏染色法
常用吉氏染色法
吉氏染液(原液)的配置
吉氏染粉 (Azure B typ来自) 5g疟原虫人类四种疟原虫的 基 本特征
感染人的疟原虫有四种:
恶性疟原虫 P. falciparum 间日疟原虫 P. vivax 三日疟原虫 P. malariae 卵形疟原虫 P. ovale
恶性疟 P.falciparum
● 四种疟原虫中致病力最强 ● 无免疫力者感染后出现急性症状,不及时治
疗可危及生命 ● 在我国主要流行云南省和海南省
2. 显微镜下选择红细胞排列整齐密集，无重迭的视 野（ 300-500红细胞/视野）
3. 按一定顺序移动血片记数红细胞的同时，记录疟 原虫数
4. 如果能见到疟原虫，但是记数5000～10000个红细胞 时却没有感染红细胞，那么设定感染率为＜１％
如何确定疟原虫血片为阴性
● 检查全部厚血膜未查见疟原虫 ● 最少检查100个厚血膜油镜视野未查见
感染红细胞边 缘破碎状
薛氏点明显疟 色素棕黄色,类 似间日疟原虫
种
周 围 血 红细胞形态
疟原虫形态
中发育
阶段
大小
点彩
胞浆
疟色素
裂殖子数
恶 性 疟 原 环状体
虫
配子体
正常
常见 茂氏 点
环状体钎细， 常见２个核
粗黑，配子 体中明显
疟疾的检查与诊断
疟疾的检查与诊断病原学检查确诊疟疾最可靠的依据是从受检者的外周血中检出疟原虫。
厚、薄血膜染色镜检是目前最常用的方法。
在高度怀疑疟疾时，如果血液涂片为阴性，应当重复涂片镜检。
血液涂片的染色常使用Giemsa染液、Field染液或其他Romanowsky染色劑。
镜检疟原虫时应当同时对厚血涂片和薄血涂片进行检查。
薄血涂片应迅速风干，用无水甲醇固定后染色，然后在油镜（放大1000倍）下检查膜尾红细胞，以每1000个红细胞的寄生红细胞个数表示。
厚血涂片很可能会不均匀，涂片时应充分干燥和染色，不得固定。
计数寄生虫和白细胞（至少200个），并根据总白细胞数目计算单位体积内的寄生虫数目。
在判断厚血涂片为阴性前，应在油镜下检查100～200个区域。
薄血涂片和厚血涂片有着各自的优点和缺点。
薄血涂片中疟原虫的形态完整而典型，容易识别和鉴别虫种，但疟原虫密度低时，容易漏检;厚血涂片制作过程中多层的红细胞相互重叠并且被溶解，因此可以使疟原虫集中（比薄血涂片集中40～100倍），提高检出灵敏度，但由于染色过程中红细胞溶解，疟原虫形态有所改变，虫种鉴别困难。
因此，最好在一张玻片上同时制作两种血涂片，如果在厚血涂片查到疟原虫而鉴别虫种困难时，可再检查薄血涂片。
恶性疟在发作开始时，间日疟在发作后数小时至10余小时采血能够提高检出率。
免疫学检查目前已经广泛使用的恶性疟原虫抗体诊断棒或诊断卡能够快速、简单、敏感和特异地对恶性疟原虫特异性、富含组氨酸的蛋白2（NHRP2）、乳酸脱氢酶或醛缩酶抗原进行检测，并借此将恶性疟和其他危险性较低的疟疾区分开来。
此外，常用的方法还有间接荧光抗体试验、间接血凝试验和酶联免疫吸附试验等。
由于抗体在患者治愈后仍能存在一段时间，且广泛存在个体差异，因此检测抗体主要用于疟疾的流行病学调查、防治效果评估及输血对象的筛选，在临床上仅作辅助诊断。
分子生物学技术聚合酶链式反应（PCR）和核酸探针已用于疟疾诊断。
分子生物学检测技术的最突出优点是对低疟原虫血症的检出率较高。
Microsoft Word - 疟原虫镜检手册(大32开,改)
目 录第一章 疟原虫生活史 (3)一、在人体内发育 (3)（一）红细胞外期 (3)（二）红细胞内期 (4)二、在蚊体内发育 (5)（一）配子生殖期 (5)（二）孢子增殖期 (5)三、疟原虫的生物学特征 (6)第二章 人体疟原虫形态 (8)一、疟原虫的基本结构 (8)（一）核 (8)（二）细胞浆 (8)（三）色素 (8)（四）被寄生的红细胞 (8)二、疟原虫染色后形态特征 (9)（一）薄血膜中疟原虫形态 (9)（二）厚血膜中疟原虫形态 (9)（三）厚、薄血膜的优缺点及其适用范围 (14)（四）同其他物体的鉴别 (14)（五）四种疟原虫的鉴别要点 (15)第三章 疟原虫镜检技术 (17)一、血膜的制作 (17)（一）所需设备 (17)（二）采血部位及取血方法 (17)（三）涂制血膜 (18)（四）厚、薄血膜的位置 (19)（五）染色前血膜的保存 (19)二、血膜的染色 (20)（一）染色原理 (20)（二）常用染液的配制 (21)（三）染色方法 (22)三、影响染色效果的因素 (24)（一）染料和溶剂的质量 (24)（二）染液的新旧 (24)（三）染液的稀释浓度 (24)（四）染色时间 (24)（五）稀释和冲洗用水 (25)（六）冲洗方法 (25)四、疟原虫镜检 (25)五、血膜质量控制 (26)（一）血膜制作和染色质量判定标准 (26)（二）血膜制作和染色质量规范 (26)六、疟原虫计数 (28)七、镜检站工作的管理 (30)第四章 血清免疫学检测 (31)一、疟原虫抗体的检测 (31)二、疟原虫抗原的检测 (33)第五章 生物显微镜的使用 (36)一、使用方法 (36)二、保养 (36)附件１：全球基金疟疾项目现场血膜制作及显微镜使用考核标准附件２：疟原虫形态图第一章 疟原虫生活史人体疟原虫有4种：间日疟原虫(Plasmodium vivax)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum )、三日疟原虫(Plasmodium malariae )和卵形疟原虫(Plasmodium ovale)。