最新.4.15疟原虫血片制作染色.ppt

疟原虫血片制作及染色

瑞氏染液的染色方法：
先用蜡笔在厚、薄血膜间划一界限，滴几滴蒸馏水在厚血膜上溶血。溶血后倾去水滴。在薄血膜上加瑞氏染液6～7滴，摇动玻片均匀染色30秒。然后再加10～12滴蒸馏水于薄血膜上，摇动玻片将染液与蒸馏水混合均匀后，用吸管把染液引到厚血膜上，使厚血膜再染色5分钟。用清水轻轻冲去染液，晾干镜检。
血膜染色
（二）染色的原理
美兰与伊红都不能使原虫和白细胞的核着色，必须由天青作为媒介（染媒）才能使其着色。天青虽然也是碱性染剂，但又具有染媒作用，使原虫核和白细胞核等原来只能染上极淡蓝色的结构染上显著的酸性染剂伊红，这样，就使白细胞粗大的核染成显著的既蓝又红的紫蓝色，而较小或菲薄的原虫核和淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。
血膜染色（二）染色的原理
主要染料都含有美蓝、伊红和美蓝氧化后的天青。
美蓝的有色基团带阳离子，是一种碱性染料，用的是盐酸美蓝。溶于水后离解为带阴电的氯离子和能着色的美蓝阳离子。
伊红的有色基团带阴离子，是一种酸性染料，染色用的是伊红钠盐。溶于水中时离解为带阳电的钠离子和带阴电的伊红离子。
血膜染色（一）染液的种类
醇溶液类: 有吉氏（Giemsa）染液、瑞氏（Wright）
染液等。是在水溶液染液的基础上改进发展而成。目前我们推荐的是运用醇溶液类中的吉氏（Giemsa）染液
血膜染色（二）染色的原理
染色原理是染料于被染物的阴阳离子互相吸附而结合的一种化学反应。
各种细胞和疟原虫主要是由不同的蛋白质或类氨基酸组成。不同的氨基酸均含有氨基（NH2）和羧基（COOH）。在游离状态时，氨基（NH2）获得一个氢离子成为带阳电的离子（NH3 + ）；而羧基失掉一个氢离子成为带阴电的离子（COO — ）。

2019415疟原虫血片制作染色-PPT课件

血片的染色（一）染液的种类及染色原理
染色原理：伊红是酸性水溶性钠盐，美兰是碱性水溶性盐酸盐，当它们各自溶化水中时，就离解为带阳电和阴电的离子。伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质如血红蛋白、嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶于水的沉淀物染成红色。美兰主要离解为碱性的美兰离子，美兰就与疟原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等酸性蛋白质结合染成兰色。

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影响染色效果的因素

（2）染液的新旧新配制的染液因色素尚未充分溶解，染色力较弱且常呈现偏碱性。染液存放时间越久，染色力越强。通常在染液配制1~2周后才使用，盛装染液的瓶子应加塞盖密。以防吸潮而影响染液质量。
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影响染色效果的因素

（3）染液稀释后使用时间吉氏和瑞氏染液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在酒精溶液中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀。因此，必须在稀释染液当时使用，一般在半小时内染色力最强。

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涂制血膜规则
用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。涂片顺序，先厚后薄；位置分配，血片自左向右：薄厚-标签；推薄片用玻片短边。
制作厚血膜
制作薄血膜
厚血膜血量及涂片法
厚血膜用推片的一角，从取血部位刮取约4~5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4圈，涂成直径 0.8~1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。

血片制作染色课件

血片的染色
第二步：染色用水和冲洗用水配制
常用中性的蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水；用pH7.0～pH7.2的缓冲液。
血片的染色
第三步：染色

薄血膜经甲醇固定干燥后，将血片平放

用PH7.0-7.2的磷酸缓冲液 (PBS)或蒸馏水将吉氏原液稀释；
染色20-30分钟，晾干镜检。

血片的染色
久，颜色偏酸；
染色时间：染色时间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和气温而适当增减。冲洗方法：染色后不要直接将染液倒掉，沿玻片及染缸边缘加水使染液表面益出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒粘污血膜。
染色质量影响因素
染色稀释用水: PH7.0-7.2清洁水。
用水过酸，可致感染的RBC上的点彩染不出来；用水过碱，则使薄血膜上的RBC染成灰蓝色，致使R的胞浆难以辨论。
厚血膜溶血染色放臵多时未染色的血片（2天以上，薄片已用甲醇固定），在染色之前，须在厚血膜上用清水进行溶血，待血膜全部溶解后倒掉，用吉氏染液染色, 清水漂洗干净,晾干。
血片的染色
如果血片偏红,说明
标准
偏碱
血片制作影响因素
载玻片必须清洁无油污，理想的薄血膜是一层血细胞均匀分布不重叠、无裂缝、无皱折和空泡，血膜末端呈舌状；厚血膜厚度以一个油镜视野内可见5-10个白细胞为宜；血片制作场所要保持清洁，以免尘埃沾污血膜，防止苍蝇等舔食血膜；制成的血片在未干前不能倾斜放臵，待其自然干燥，不要加热，加热会使原虫变形，影响镜检结果．
血片制作
第二步：患者信息的核实
首先要核对患者的姓名、年龄和住址。
非常重要
血片制作
第三步：血样的采集部位：指尖、耳垂

2013.4.15疟原虫血片制作染色

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血片编号
血膜制成后，立即将受检者的个人编号写在玻片磨砂面上（血片的编号要与血检登记本上编号一致）以防差错。
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制作血膜的注意事项
1. 玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。
血片制作和染色质量标准
项目
检查内容
好
质量标准
中
差
血量 4～5цl
略多或略少
过多或过少
厚血膜
位置直径
玻片右1/3 0.8～1.0cm
稍偏右
0.7～0.8 或1.0～ 1.2cm
偏右过多 <0.7或>1.2cm
血片制作
外观血量
圆形厚膜均匀，边缘整齐
1～1.5цl
圆形稍不均不整齐厚薄不匀影响着色
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影响染色效果的因素
（4）染液的稀释浓度染液的浓度高其着色就快而深，从而疟原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液浓度过低则染色时间久，颜色偏酸，薛氏点不明显或消失。
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影响染色效果的因素
（5）染色时间染色时间长染色效果好，反之较差。室温高则着色快，染色时间可略缩短，气温低可适当延长。因此染色时间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和气温而适当增减。
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血片的染色（一）染液的种类及染色原理
染色原理：美兰与伊红都不能使原虫和白细胞的核着色，必须由天青作为媒介（染媒）才能使其着色。天青虽然也是碱性染剂，但又具有染媒作用，使原虫核和白细胞核等原来只能染上极淡兰色的结构染上显著的酸性染剂伊红，这样，就使白细胞粗大的核染成显著的既兰又红的紫兰色，而较小或菲薄的原虫核和淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。

疟原虫血片制作染色精讲33页PPT

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26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
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28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
疟原虫血片制作染色精讲
51、没有哪个社会可以制订一部永远适用的宪法，甚至一条永远适用的法律。 ——杰斐逊 52、法律源于人的自卫本能。——英格索尔
53、人们通常会发现，法律就是这样一种的网，触犯法律的人，小的可以穿网而过，大的可以破网而出，只有中等的才会坠入网中。 ——申斯通 54、法律就是法律它是一座雄伟的大夏，庇护着我们大家；它的每一块砖石都垒在另一块砖石上。 ——高尔斯华绥 55、今天的法律未必明天仍是法律。 ——罗·伯顿
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。—