挥发性盐基氮(TVB-N)含量的测定
挥发性盐基氮（VBN）测定方法
每次每组的样品溶液都需要进行测定，并记录数据。
(企业标准)
一、原理：
利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来，用硼酸吸收，再用标准酸滴定，计算出含氮量。
二、仪器与器皿：
1、实验室用样品粉碎机或研钵
2、分析天平：感量0.001g
3、凯氏蒸馏装置：半微量水蒸汽蒸馏式
4、振荡机
5、锥形瓶：150ml、250mL具塞
6、容量瓶：100mL、1000mL
7、滴定管：酸式10mL
三、试剂：
1、0.lmol／L盐酸标准溶液（无水碳酸钠标定）：吸取分析纯盐酸8.3mL，用蒸馏水定容至1000mL。
2、0.01mol/L盐酸标准溶液：用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。
3、2%硼酸溶液：分析纯硼酸2g溶于98mL水配成2%溶液。
4、混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期三个月以内。
5、1%氧化镁溶液；化学纯氧化镁1.0g溶于99mL蒸馏水振接成混悬液。
四、测定：
1、称取1～5g试样(精确到0.001g)于250mL具塞锥形瓶中，加蒸馏水100mL，振荡摇匀30min 后静置，上清液为样液。
2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中，加混合指示剂2滴，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。
3、蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，否则补加硫酸。
4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL%的氧化镁溶液，小心提起玻璃塞使流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏10min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点，同时进行试剂空白测定。
五、测定结果计算：
1、计算见下式：
X1=[(V1-V2)xC1x14 /( M1xV’/V)]x100
式中：X1：样品挥发性盐基氮的含量，mg/100g；
V1：滴定试样时所需盐酸标准溶液体积，mL；
V2：滴定空白时所需盐酸标准溶液体积，mL；
C1：盐酸标准溶液浓度，mol/L；
M1：试样重量，g；
V’：试样分解液蒸馏用体积，mL；
V ：样液总体积，mL；
14：与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的氮的质量，mg。
2、重复性：
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。
允许相对偏差为5%
（滤液按半微量定氮法进行测定，每个处理3 个重复，每个样品重复测3 次，结果以每100g 鱼肉样品中所含N 的毫克数表示）。
挥发性盐基氮
挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮(TVBN):指动物性食品由于酶和细 菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生 氨以及胺类等碱性含氮物质。此类物质呈碱性， 具有挥发性，称为总的挥发性盐基氮。 淡水鱼主要是氨，海水鱼是氨和低级胺。
挥发性盐基氮作为鲜度作为限度的指标研究很多， 资料证明挥发性盐基氮的增加和鲜度感观检验结 果符合，因此被全世界所认可。
中华人民共和国国家标准 农产品安全质量 无公 害水产品安全要求
鲜度要求
项 目 要求
水产品种类
挥发性盐基氮mg ／100 g ≤
海水鱼 碜科鱼类(鲐鱼、 30
蓝圆够等)
鱼类
其他鱼类
30
组胺 mg／100 g ≤
50
30
淡水鱼
20
虾
海虾
30
甲壳
：本表规定指标不包括活体水产品。
反应物质量对应关系： NH3→HCl
微量扩散法
半微量蒸馏法
打开水蒸汽发生器与反应室之间的夹子，蒸汽通 入反应室，徐徐蒸馏，使氨气被蒸发出来，并通 过冷凝管而进入接收瓶内，以第一滴馏液滴下开 始计时，蒸馏5min，停止蒸馏。
结束：取下接收瓶，松开水蒸汽发生器瓶上的夹子， 迅速夹紧水蒸汽发生器和反应室之间的夹子，将 废液排出。用蒸馏水将冷凝管和接收管洗涤，合 并入吸收液。
5. 混合指示剂:
0.1%甲基红乙醇液：称取0.1g甲基红溶于100mL 60%乙醇中。
0.2%次甲基蓝指示剂：称取0.1g次甲基蓝溶于100mL 水中。
甲基红指示剂（0.1％）,次甲基蓝指示剂（0.2％）,临时用将上 述两种指示液等量混合为混合指示液。变色范围：5.2-5.6， 由红紫色变为绿色，变色点5.4，颜色为暗蓝色。
实验二挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮的测定
一、实验原理 挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶与细菌的作用，在腐败过程中使蛋白质
分解而产生碱性含氮物质，如伯胺、仲胺及叔胺等，此类物质具有挥发性，可以 在 37℃碱性条件下以氨的形式释放，挥发后吸收于吸收液中，再用酸滴定以定 量，所得结果为挥发性盐基氮。 二、仪器与试剂 1、恒温箱、电子天平、扩散皿、微量滴定管、三角瓶（250ml）、量筒（100ml）、 漏斗、玻璃棒以及移液管。 2、饱和碳酸钾溶液：称取 50g 碳酸钾家 50ml 去离子水，微热助溶，取上清液。 3、2％硼酸液：称取 20g 硼酸溶解在少量蒸馏水中，再稀释至 1000ml。 4、水溶性胶：称取 10g 阿拉伯胶，加 10ml 水，再加 5ml 甘油与 5g 无水碳酸钠， 研匀。 5、混合指示液：0.2％甲基红乙醇溶液与 0.1％次甲基蓝溶液，临用时等量混合。 6、0.0100mol／L 盐酸标准溶液 7、干燥滤纸 8、市售带鱼 三、操作步骤 1、将样品除去头、内脏、鱼皮及骨头后，切碎搅匀，称取 10g 置于锥形瓶中， 加 100ml 水，不时振摇，浸渍 30min 后过滤，滤液备用。 2、将水溶性胶涂于扩散皿的边缘，在皿中央内室加入 1ml 吸收液与 1 滴混合指 示液，在皿外室一侧加入 1.00ml 样液，另一侧加入 1ml 的饱和碳酸钾溶液，实 验使两液分离而不接触，立即盖好，密封后将皿置于桌面轻轻转动，使样液与碱 液混合，然后于 37℃温箱内放置 2h，揭去盖，用盐酸标液滴定溶液进行滴定， 以溶液变蓝紫为终点。同时进行空白实验。 四、实验记录与结果计算 1、计算公式： X (m g/ g) (V1 V2 )CM 100100
挥发性盐基氮的测定
食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中
，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性
含氮物质。
目前挥发性盐基氮值是国标中用于评
价肉质鲜度的唯一理化指标。
1. 实验原理
食品中的挥发性盐基氮在弱碱性条件
下被蒸馏出来，用硼酸溶液吸收，再用标
准盐酸或硫酸滴定，根据盐酸消耗的量来
计算挥发性盐基氮的含量。
后过滤，滤液置冰箱备用。
（2）测定：将盛有10mL硼酸吸收液及5-6
滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端， 并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸 取5.0mL上述试样滤液于蒸馏器反应室内 ，加5mL氧化镁混悬液，迅速盖塞，并加 水以防漏气，通入蒸汽，进行蒸馏，蒸馏 5min即停止，吸收液用标准盐酸滴定，终
点为蓝紫色。同时做空白试验。
（3）结果计算：
X= （ V1 – V2 ）×C×14 m×5/100 ×100
X ：样品中挥发性盐基氮的含量，mg/100g
V1：测定样品时消耗盐酸的体积，mL V2：测定空白时消耗盐酸的体积，mL
C ：盐酸的浓度，mol/L m ：样品的质量，g
2. 实验试剂 ①氧化镁混悬液(10g/L)：称取1.0g氧化镁，
加100mL水，振摇成混悬液。
②硼酸吸收液(20g/L)：
③盐酸(0.010mol/L) 标准滴定溶液：1%次甲基蓝溶液，临用前等量混合。
3. 实验步骤 （1）样品处理：将试样除去脂肪、骨及腱 后，绞碎搅匀，称取约10.0g，置于锥形瓶 中，加100mL水，不时振摇，浸渍30min
挥发性盐基氮检测作业指导书
挥发性盐基氮检测作业指导书【微量扩散法】1.目的为规范肉类新鲜度检测岗位操作和确保检测结果的准确性和一致性。
2.适用范围本手册适用于化验员对肉类TVB-N的测定。
3.职责检验人员负责对肉类TVB-N的检测，并根据检验结果进行判定。
4.工作程序4.1.原理肉类TVB—N原理：挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。
挥发性含氮物质可在 37 ℃碱性溶液（饱和碳酸钾溶液）中释出，挥发后吸收于吸收液（2%硼酸）中，用标准酸滴定，计算含量。
4.2.使用试剂4.2.1.饱和碳酸钾溶液称取50g碳酸钾，加 50mL 水，搅拌助溶、过滤，使用上清液。
4.2.2.水溶性胶称取 10g 阿拉伯胶，加 10mL 水，再加 5mL 甘油及 5g无水碳酸钠（或无水碳酸钾），研匀。
4.2.3.硼酸吸收液硼酸(20g/L)溶液。
用精确到0.01g的电子天平准确称取1.00g的硼酸,用50 mL的移液管准确移取50 mL的蒸馏水,配制成20g/L的硼酸溶液.4.2.4.盐酸 [c(HCL)=0.001mol/L] 的标准滴定溶液。
参照GB/T601-2002A. 基准试剂（无水Na2CO3）称取在270～300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水Na2CO3: 5.4g加入500 mol的容量瓶中,加入蒸馏水定容,配成0.1 mol/L的Na2CO3溶液;再取10 ml浓度为0.1 mol/L Na2CO3溶液至1000 ml的容量瓶中, 加入蒸馏水定容,配制成0.001 mol/L碳酸钠溶液,待用.B. 0.001 mol/L的盐酸溶液的配制取36%的盐酸8.4mL至100mL的容量瓶中,加入蒸馏水定容,配成约0.1 mol/L的盐酸。
再取10ml 浓度为0.1 mol/L mol的盐酸至1000 ml的容量瓶，加入蒸馏水定容，配制成约0.001 mol/L的盐酸溶液。
饲料中挥发性盐基氮的含量测定
鱼粉 、 肉粉 中挥 发性 盐 基氮 的含量 与 其新 鲜 程度 有 明显 的相 关 性 。Ｔ Ｖ Ｂ — Ｎ值 是 国标 中用 于评 价 肉质 鲜 度 的理 化指 标 之一 ， 饲料 行业 中经 常使 用该 指 标
评估 动 物性 产 品 的质量 。
本文探索并制订了 《 饲料 中挥发性盐基氮 的测定》 的 国家标 准 ， 使饲 料行 业在 生 产 、 经营 过程 中 ， 对 饲 料产品质量的控制有法可依 ， 以保证动物的健康 和 人 类食 品 的质量 安全 。
４ ３・
， 东饲料 第 ２ ４ 卷第 ９ 划
２ ０ １ ５ 年 ９川
２ １常 用蛋 白原 料 与饲 料 中挥 发 性 盐 基 氮测 定
的 回收 率与精 密度
取 饲 料 样 品 用 四 分 法 缩 分 、 粉 碎 并 通 过
满足 我 国饲料 行业 对 挥发 性盐 基 氮 的测定 的需 求 ，
大类碱性含氮物 ， 此类物质有毒 ， 可 以和 组 织 内
的酸 Ｉ 生物 质结 合 ，形 成挥 发 性 的 Ｎ Ｈ ４ ＋ ・ Ｒ 即盐基 态
氮， 故 称挥 发性 盐基 氮 （ Ｔ Ｖ Ｂ — Ｎ １ 。经 长期 检测 发 现 ，
１ ． ３实 验 方 法
・
［ 作者简介】 何 绮霞 ， 女， １ ９ ６ ３年生， 广 东广 州人 ， 主任药师， 主
要从 事农 产品质 量安全监 测与标 准研 究工作 。
【 通讯 作者】 季 天荣 ， 女， １ ９ ８ １年 出 生 ， 山 西人 ， 助理研 究 员 ，
主要从 事饲料质量安全与动物 营养研 究。
生 标 准 的分 析 方 法 》 或 水 产 品行 业 标 准 Ｓ Ｃ ／ Ｔ ３ ０ ３ ２ — ２ ０ ０ ７ ￣ 水 产 品 中挥 发 性盐 基 氮 的测 定 》 ， 尚 没 有对 饲料 中挥发性 盐 基 氮含量 进 行测 定 的方法 。 欧
挥发性盐基氮
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半微量蒸馏法
打开水蒸汽发生器与反应室之间的夹子，蒸汽通 入反应室，徐徐蒸馏，使氨气被蒸发出来，并通 过冷凝管而进入接收瓶内，以第一滴馏液滴下开 始计时，蒸馏5min，停止蒸馏。
结束：取下接收瓶，松开水蒸汽发生器瓶上的夹子， 迅速夹紧水蒸汽发生器和反应室之间的夹子，将 废液排出。用蒸馏水将冷凝管和接收管洗涤，合 并入吸收液。
第三章 原料鱼和肉的鲜度检验
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挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮(TVBN):指动物性食品由于酶和细 菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生 氨以及胺类等碱性含氮物质。此类物质呈碱性， 具有挥发性，称为总的挥发性盐基氮。 淡水鱼主要是氨，海水鱼是氨和低级胺。
挥发性盐基氮作为鲜度作为限度的指标研究很多， 资料证明挥发性盐基氮的增加和鲜度感观检验结 果符合，因此被全世界所认可。
肉毒梭状芽孢杆菌分解蛋白质能力很微弱，但该菌为厌 氧菌，可引起罐头的腐败变质
霉菌:都具有分解蛋白质的能力，霉菌比细菌更能利用天 然蛋白质。常见的有：青霉属、毛霉属、曲霉属、木霉属、 根霉属等。
酵母菌:多数酵母菌对蛋白质的分解能力极弱。
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氧化脱氨基 作用
挥发性盐基氮的产生机理
还原脱氨基 作用
水解脱氨基 作用
2. 蒸馏：向接收瓶内加入2%硼酸10mL 及2滴混合指示 剂，并使冷凝管下端插入液面下。 蒸馏水中加入甲基橙指示剂数滴，再加入稀硫酸， 使溶液保持橙红色。 吸取10.0mL样品液注入凯氏定氮仪的反应室中，用 10mL蒸馏水冲洗进样入口，再加5mL氧化镁悬液(1 ％) 。塞好入口玻璃塞，用少量蒸馏水冲洗进样入口， 且在入口处加水封好，防止漏气。
• 允许差：相对偏差≤10%
实验六、挥发性盐基氮的测定
《鲜（冻）畜肉卫生标准GB2707—2005》
氧化镁混悬液5mL，迅速盖塞，并用水封口，通入蒸 汽蒸馏。在冷凝管出现第一滴冷凝水开始计时，蒸馏 5min即停止，取下锥形瓶，冷却。
4、锥形瓶中吸收液用0.0100mol/L盐酸标准溶液滴定
，刚呈蓝紫色为终点，记录标准酸溶液消耗的体积（ mL）。同时作空白试验。
计算
TVBN（mg/100g）=
动物性食品卫生学实验
实 验 六 挥发性盐基氏定氮法检测
挥发性盐基氮的原理与试剂作用;掌握凯氏定 氮法的操作程序及实验要点。
实验仪器材料与试剂
仪器材料：半微量凯氏定氮蒸馏装置、微量酸式滴
定管等。
仪器试剂： 1%的氧化镁混悬液、2%的硼酸吸收液、
将样品剔除脂肪、筋腱和骨后 ，绞碎搅匀，称取10g置于锥形瓶中，加入100mL蒸馏 水，不时摇动，浸渍30min 后过滤，滤液放入冰箱备 用。 2、预先将盛有10mL吸收液并加入5～6滴混合指示剂 的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入锥形瓶内 吸收液的液面下。
实验方法
3、吸取5mL上述样品肉浸液于蒸馏器反应室内，加1%
实验方法实验方法1制备样品肉浸液将样品剔除脂肪筋腱和骨后绞碎搅匀称取10g置于锥形瓶中加入100ml蒸馏水不时摇动浸渍30min后过滤滤液放入冰箱备2预先将盛有10ml吸收液并加入56滴混合指示剂的锥形瓶置于冷凝管下端并使其下端插入锥形瓶内实验方法实验方法3吸取5ml上述样品肉浸液于蒸馏器反应室内加1氧化镁混悬液5ml迅速盖塞并用水封口通入蒸汽蒸馏
（V1-V2）×Cs×14 ×100
m×5/100
式中:
V1—样品消耗的盐酸标准溶液体积，（mL） V2—空白消耗盐酸标准溶液体积，（mL） Cs—盐酸标准溶液浓度，（mol／L） m—样品质量，（g）
鱼类挥发性盐基氮的测定
鱼类挥发性盐基氮的测定挥发性盐基氮（TVB-N）指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。
挥发性盐基氮多年来被我国和世界上大多数国家作为鉴定水产品腐败程度的标准。
挥发性盐基氮超标意味着什么？挥发性盐基氮具有挥发性，其含量越高，表明氨基酸被破坏的越多，特别是蛋氨酸和酪氨酸，因此营养价值大受影响。
也就是说，挥发性盐基氮越高，营养价值越低，如果挥发性盐基氮超标，则表明产品已经开始腐败，如果继续食用，可能会引起肠胃不适等症状，严重者会导致食物中毒。
检测方法1.半微量定氮法1.1 原理挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。
此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出，利用硼酸溶液吸收后，用标准酸滴定，计算含量。
1.2 试剂1.2.1 1%氧化镁混悬液：称取1.0g氧化镁，加100ml水，振摇成混悬液。
吸收液：20g/L硼酸溶液。
1.2.2三氯乙酸溶液(20g/L)。
1.2.3甲基红乙醇溶液(1g/L):称取0.1g甲基红,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀释至100mL。
1.2.4亚甲基蓝乙醇溶液(1g/L):称取0.1g亚甲基蓝,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀释至100mL。
临用时将上述两种指示液等量混合为混合指示液。
1.2.5 0.0100mol/L盐酸标准溶液或硫酸标准溶液。
1.3 仪器半微量定氮器。
微量滴定管：最小分度0.01ml。
1.4 操作方法将样品除去脂肪、骨及腱后，切碎搅匀，称取10g，置于锥形瓶中，加100ml水，不时振摇，浸渍30min后过滤，滤液置冰箱备用。
对于蛋白质胶质多、粘性大、不容易过滤的特殊样品,可使用三氯乙酸溶液替代水进行实验。
蒸馏过程泡沫较多的样品可滴加1滴—2滴消泡硅油。
预先将盛有10ml吸收液并加有5～6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入锥形瓶内吸收液的液面下，吸收5.0ml上述样品滤液于蒸馏器反应室内，加5ml1%氧化镁混悬液，迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸气，待蒸气充满蒸馏器内时即关闭蒸气出口管，由冷凝管出现第一滴冷凝水开始计时，蒸馏5min即停止，吸收液用0.0100mol/L盐酸标准溶液或硫酸标准溶液滴定，终点至蓝紫色。
挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮的测定：半微量定氮法（参照GB/T5009.44-2003）原理：TVBN 指动物性食品由于酶和细菌的作用，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。
此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出后，用标准酸溶液滴定计算含量。
试剂：1、 氧化镁混悬液（10g/L ）：称取10.0g 氧化镁，加1000mL 水，振摇成混悬液2、 硼酸吸收液（20g/L ）：称取10.0g 硼酸，加500mL 水3、 盐酸（0.01mol/L ）的标准滴定溶液4、 溴甲酚绿-甲基红指示液：溶液I ：溴甲酚绿-乙醇指示剂（1g/L ）：称取0.1g 溴甲酚绿，溶于乙醇（95%），用乙醇（95%）稀释至100 mL溶液II ：甲基红-乙醇指示剂（2g/L ）：称取0.1g 甲基红，溶于乙醇（95%），用乙醉（95%）稀释至100 ml取50mL 溶液I ，10mL 溶液II ，混匀5、蒸馏水仪器：半微量定氮仪绞肉机、摇床消化管、移液管、锥形瓶、烧杯、酸式滴定管等定性滤纸、保鲜膜等分析步骤：1、 试样处理：将试样除去脂肪、骨及腱后，绞碎搅匀。
称取约10.0g 于锥形瓶中，加100mL蒸馏水，使用保鲜膜将锥形瓶瓶口封住，置于摇床上振摇30min 后过滤，取滤液备用。
2、 蒸馏：将盛有10mL 吸收液及5-6滴混合指示剂的锥形瓶置于冷凝管下端并使其下端浸没入吸收液的液面下；依次准确吸取5.0mL 氧化镁混悬液和5.0mL 上述式样滤液于消化管中，迅速置于通入蒸汽进行蒸馏，计时3min 取下锥形瓶，使冷凝管下端离开吸收液液面，再计时30s ，使用蒸馏水稍清洗冷凝管下端。
3、 滴定：吸收液用盐酸标准滴定溶液滴定，观察指示剂变色情况，记录盐酸体积4、 试剂空白试验。
注意要求先做空白试验。
5、 参考标准：一级鲜度≤15mgmg/100g ，二级鲜度≤20mgmg/100g ，变质肉＞20mgmg/100g 结果计算与分析：试样中挥发性盐基氮的含量按下式进行计算：12V -V c X=100m 5/100⨯⨯⨯⨯（）14 式中：X ：试样中挥发性盐基氮的含量，单位为mg/100gV1：测定用样液消耗盐酸标准溶液体积，单位为mLV2：试剂空白消耗盐酸标准溶液体积，单位为mLc ：盐酸标准溶液的实际浓度，单位为mol/L14：与1.00mL 盐酸标准滴定溶液（c （HCl ）=1.000mol/L ）相当的氮的质量，单位为mg m ：试样质量，单位为g计算结果保留三位有效数字。
鲜蛋中TVBN检测方法标准2011.10
鲜蛋中挥发性盐基氮的测定1原理鲜蛋中蛋白质分解后产生碱性含氮物质，如氨、伯胺、仲胺等。
此类物质具有挥发性，在弱碱性溶液中加热蒸馏可随水蒸气蒸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，可以计算出100g鲜蛋中含氮的质量(mg)。
2试剂本标准所用试剂为分析纯，试验用水符合G B/T 6682的规定。
4.1 氧化镁混悬液(10g/L)：称取1.0g氧化镁，加100mL水，振摇成混悬液(临用新配)。
4.2 硼酸吸收液(20g/L)：称取20.0g硼酸，加水溶解，定容至1000mL。
4.3 甲基红-亚甲基蓝混合指示液：A液：甲基红-乙醇溶液(2g/L)。
称取0.2g甲基红用乙醇溶解后定容至100mL。
B液：亚甲基蓝-水溶液(1g/L)。
称取0.1g亚甲基蓝用水溶解后定容至100mL。
临用时取A液、B液等量混和为混合指示液(临用新配)。
4.4 盐酸标准溶液(0.01mol/L)：吸取浓盐酸0.85 mL定容至1000 mL水中，摇匀。
并按GB/T 5009.1-2003附录B的方法进行标定。
3仪器5.1 半微量定氮器蒸馏装置：如图1所示。
图1 半微量定氮器蒸馏装置5.2 自动均质器。
5.3 微量酸式滴定管：最小分度0.02ml。
4分析步骤6.1 试样处理将被检鲜蛋蛋液充分搅拌，置于自动均质器中使之混匀，取其10.00g，用10倍无氨蒸馏水浸抽30min，并不时振摇，然后用滤纸过滤。
滤液放置0～4℃冰箱中备用。
6.2 蒸馏吸取10mL硼酸吸收液置于50mL锥形瓶中，再加入5滴混合指示液。
将锥形瓶置于半微量定氮器冷凝管下端，冷凝管下端插入硼酸吸收液液面下。
准确吸取蛋样滤液2.0mL，加入定氮器反应室中，并以少量水冲洗，立即加入5mL 氧化镁混悬液(10g/L)，迅速盖塞，并加水以防漏气，夹紧废液排出口橡皮管。