抗氧化活性研究方法 PPT
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性测定方法是通过对样品中的抗氧化物质含量和抗氧化活性进行定量分析，评估其对自由基的清除能力和抗氧化能力。
随着抗氧化研究的不断深入，测定方法也逐渐完善。
以下是对常见的抗氧化物活性测定方法的总结。
1. ORAC法（氧化应激反应活性测定法）：该方法通过测定样品清除自由基的能力来评估其抗氧化活性。
实验中，将样品与荧光试剂（如2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile)）共同作用，观察其清除自由基的能力，并通过建立标准曲线计算样品的ORAC值。
2.DPPH法（1,1-二苯基-2-苦味基-苦味酸磷）：该方法是一种常用的快速测定抗氧化活性的方法。
实验中，将样品与DPPH稳定自由基共同作用，通过比色反应观察DPPH自由基被样品清除的程度，从而评估抗氧化活性。
3.ABTS法（2,2'-联氮双5-苯砜酸）：该方法通过ABTS离子自由基的生成和清除反应来测定样品的抗氧化活性。
实验中，ABTS与过氧化氢反应生成ABTS离子自由基，通过观察样品对其的清除能力来评估抗氧化活性。
4.FRAP法（亚铁离子还原能力）：该方法基于样品对人造抗坏血酸（Fe3+）的还原能力，通过测量还原后的Fe2+离子的生成量来评估抗氧化活性。
实验中，将样品与Fe3+离子反应生成Fe2+离子，通过比色反应来测定Fe2+的含量。
5. 碘标法（Iodine value）：该方法用于测定油脂、脂肪等样品的抗氧化活性。
实验中，将已知量的碘与样品中的不饱和化合物反应，在光反应下观察反应终点的颜色变化，并根据标准曲线计算样品的抗氧化活性。
6. 硝酸盐法（Nitrite method）：该方法用于测定样品中亚硝酸盐的含量，从而评估其抗氧化活性。
实验中，样品经过还原反应生成亚硝酸盐，然后与DANO（N-乙基-N-（2-苯基乙基）-对硝基苯胺）反应生成稳定的偶氮染料，通过比色测定反应终点的吸光度来计算样品中亚硝酸盐的含量。
《NADH氧化酶》课件
NADH氧化酶是生物体内能量代谢的关键酶之一，它参与了 多种能量代谢过程，如糖酵解、三羧酸循环等。此外， NADH氧化酶还参与了细胞信号转导过程，可以通过调节其 活性来影响细胞的生长、分化等生物学过程。
NADH氧化酶的分类
要点一
总结词
NADH氧化酶可以分为两大类，即线粒体NADH氧化酶和 细胞质NADH氧化酶。
新催化机制的发现
01
随着对NADH氧化酶研究的深入，未来可能会发现新的催化机
制和调控方式。
药物设计与发现
02
NADH氧化酶作为生物体内重要的代谢酶，未来可能在药物设
计与发现方面发挥重要作用。
生物工程应用
03
利用NADH氧化酶在生物能源、生物材料等方面的应用，开发
出更加高效、环保的生物工程技术。
THANKS
关重要。
NADH氧化酶在抗氧化应激中的作用
总结词
NADH氧化酶具有抗氧化应激的作用，能够 清除活性氧自由基，保护细胞免受氧化损伤 。
详细描述
NADH氧化酶能够催化NADH的氧化，生成 NAD+，同时产生大量的活性氧自由基。这 些自由基能够清除细胞内的有害物质，如超 氧阴离子和氢氧根离子等，从而保护细胞免 受氧化损伤。
详细描述
NADH氧化酶是一种生物酶，其主要功能是将NADH氧化成NAD+。在生物体 的能量代谢过程中，NADH是重要的中间产物，而NADH氧化酶则负责将 NADH进行氧化，使其参与到其他代谢过程中。
NADH氧化酶的生物学功能
总结词
NADH氧化酶在生物体的能量代谢、细胞信号转导等方面具 有重要作用。
《NADH氧化酶》PPT课件
• NADH氧化酶的概述 • NADH氧化酶的结构与性质 • NADH氧化酶的生物合成与调控 • NADH氧化酶在生物体内的应用 • NADH氧化酶的研究进展与展望
食品成品中抗氧化活性的检测方法研究
食品成品中抗氧化活性的检测方法研究引言食品中的抗氧化活性是食品质量和营养价值的一个重要指标。
抗氧化活性不仅可以延缓食品的衰老和品质变化，还可以对抗自由基的损害，减少慢性疾病的发生风险。
因此，对食品抗氧化活性进行准确的检测具有重要意义。
本文将介绍常用的食品成品中抗氧化活性的检测方法，并对其优缺点进行分析。
一、化学法化学法是一种常见的食品抗氧化活性检测方法，常用的化学法有DPPH法、抗坏血酸法和总酚法等。
这些方法主要通过与氧化剂反应产生颜色变化或电子转移来评估食品中的抗氧化能力。
其中，DPPH法是一种简单易行的方法，通过检测食品成品中抗氧化剂与DPPH自由基发生反应时产生的颜色变化程度来判断样品的抗氧化活性。
抗坏血酸法则是通过检测食品样品中抗坏血酸的含量来评估其抗氧化活性。
总酚法是通过测量食品中的总酚含量来确定其抗氧化能力。
这些方法简便易行，且成本较低，是常用的食品抗氧化活性检测方法。
然而，化学法也存在一些局限性。
首先，这些方法只能评估样品中某一种抗氧化剂的抗氧化活性，不能全面评估样品的整体抗氧化能力。
其次，由于食品中存在多种复杂的化合物，这些方法往往无法准确区分其中的抗氧化剂。
因此，在实际应用中需要结合其他方法进行综合分析。
二、生物法生物法是近年来新兴的食品抗氧化活性检测方法，涉及到生物学方面的研究。
生物法的一种常见方法是细胞实验法，利用细胞对氧化应激的响应来评估食品中的抗氧化活性。
这种方法可以模拟人体内的环境，较好地反映食品对于人体健康的实际影响。
例如，使用人体肝细胞株进行细胞实验，通过测量细胞存活率、ROS产生水平等指标来评估样品的抗氧化能力。
生物法的主要优势在于可以全面评估样品的整体抗氧化能力，且具有较好的生物学意义。
然而，生物法也存在一些限制。
首先，该方法在实验操作上较为繁琐，需要较长的实验时间。
其次，细胞实验法所涉及的细胞株选择和实验条件的控制都会对结果产生影响，需要进行更多的标准化工作。
抗氧化活性检测方法的研究进展
抗氧化活性检测方法的研究进展抗氧化活性是指抵抗自由基或氧化物对生物体细胞的损害能力，具有重要的生物学和医学意义。
因此，研究抗氧化活性的检测方法对于评价抗氧化剂的活性和开发新的抗氧化剂具有重要意义。
随着科技的发展，研究人员不断提出新的抗氧化活性检测方法，以满足不同的需求。
本文将对抗氧化活性检测方法的研究进展进行综述。
目前，常用的抗氧化活性检测方法主要包括化学法、生物学法和电化学法。
化学法是最早发展的抗氧化活性检测方法之一，其原理是通过测定抗氧化剂与氧自由基或氧化物的反应程度来评估其抗氧化活性。
常用的化学法包括DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基法、ABTS（2,2'-联氨基二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸))自由基法和Folin-Ciocalteu法。
DPPH 自由基法是一种简单、快速的测定方法，但其对抗氧化剂的浓度敏感，且不能区分氧化还原反应和酸碱中和反应。
ABTS自由基法是一种灵敏度较高的测定方法，但其对抗氧化剂的浓度也很敏感。
Folin-Ciocalteu法是一种测定总抗氧化能力的方法，但其结果可能受到样品的颜色和浊度的影响。
生物学法是通过测定抗氧化剂对生物体内氧自由基或氧化物的清除能力来评估其抗氧化活性。
常用的生物学法包括超氧化物歧化酶（SOD）活性测定法、还原力测定法和DNA损伤抑制法。
SOD活性测定法是一种常用的测定方法，其原理是通过测定抗氧化剂对超氧阴离子的清除能力来评估其抗氧化活性。
还原力测定法是一种简单、快速的测定方法，其原理是通过测定抗氧化剂对还原剂的还原能力来评估其抗氧化活性。
DNA损伤抑制法是一种测定抗氧化剂对DNA氧化损伤的抑制能力的方法，但其结果受到DNA浓度和pH值的影响。
电化学法是一种新兴的抗氧化活性检测方法，其原理是通过测定抗氧化剂在电化学系统中的电化学反应来评估其抗氧化活性。
常用的电化学法包括循环伏安法、方波伏安法和差分脉冲伏安法。
循环伏安法是一种常用的测定方法，其原理是通过测定抗氧化剂在电极上的氧化还原过程来评估其抗氧化活性。
抗氧活性的测定
园艺科学研究方法——园艺植物育种研究Ⅱ抗氧活性的测定 一、实验目的：1、掌握FRAP 法测抗氧化活力的方法；2、常见水果、蔬菜的抗氧化能力比较。
二、实验原理：Ferric-tripyridyltriazine(Fe3+-TPTZ)三、仪器、耗材：离心机、离心管、离心管，移液器、分光光度计、水浴锅、塑料比色杯、试剂瓶，吸水纸，枪头、量筒、大研钵； 苹果、青椒、葡萄、胡萝卜、番茄、芒果。
四、实验内容：1.不同果、蔬抗氧化物质的提取用自来水、蒸馏水反复冲洗干净后，分离果肉称取1～5 g ，在研钵内按1：9比例加入蒸馏水，研磨成匀浆液，10 000 r ／min 离心10 min ，取上清按下述FRAP 法测定抗氧化活性，每份样品重复测定5次。
2.FRAP 测定方法操作Fe2+-TPTZ 样品中总抗氧化能力抗氧化剂antioxidant 593nm 测定取适量样品上清(必要时稀释)，加入FRAP试剂，混匀后37℃反应10 min，593 nm 测定吸光度，以1.0 mM FeSO4为标准．样品抗氧化活性以达到同样吸光度所需的FeSO4的毫摩尔数表示。
（1）FRAP试剂准备100 ml醋酸缓冲液+ 10 ml TPTZ溶液+ 10 ml三氯化铁溶液+ 12 ml双蒸水，混匀，37℃保温。
（1）2 ml FRAP试剂+双蒸水1 ml，4 min后593 nm调零。
（2）2 ml FRAP试剂+100 ul 提取液+双蒸水900 ul，4 min后593nm 测量。
五、数据整理：三次重复的不同浓度Fe2+对应的吸光度Fe2+浓度（mM）吸光度(A) 平均值（A）第一次第二次第三次1.0 1.181 1.182 1.177 1.180 0.8 1.198 1.196 1.185 1.193 0.6 1.195 1.192 1.185 1.191 0.4 1.167 1.168 1.163 1.166 0.2 1.006 1.021 1.009 1.012 0.1 0.631 0.620 0.623 0.625 各种材料FRAP法抗氧化活性的测定重测量值一测量值二测量值三平均值（A) 抗氧化活性种类青椒 1.170 1.294 1.257 1.240 ＞1.00胡萝卜0.266 0.366 0.456 0.363 0.04苹果0.912 1.039 1.011 0.987 0.16葡萄0.739 0.703 0.729 0.724 0.12番茄 1.021 1.012 1.034 1.022 0.21芒果 1.071 1.069 1.067 1.069 0.23六、结果分析由表格得，胡萝卜的抗氧化活性最低，青椒的抗氧化活性最高。
抗氧化活性测定方法
抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定方法在食品、药物、化妆品以及生物学研究中具有重要的应用价值。
抗氧化活性是指物质对自由基的清除能力，其测定方法可以评估物质的抗氧化性能和保护细胞免受氧化损伤的能力。
本文将介绍一些常用的抗氧化活性测定方法。
一、DPPH自由基清除法DPPH自由基清除法是目前应用最广泛的抗氧化活性测定方法之一、该方法基于DPPH自由基的紫色溶液，在受到氧化损伤时会褪色。
通过测定样品对DPPH自由基的清除能力，可以评估其抗氧化活性。
实验步骤：1.准备0.1mM的DPPH溶液。
2.取一定量的样品，加入适量的溶剂溶解。
3.取不同浓度的样品溶液，加入相同量的DPPH溶液。
4.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出样品的抗氧化活性。
二、还原能力测定法还原能力测定法是一种常用的抗氧化活性测定方法。
该方法基于物质对氧化剂的还原能力，通过测定还原剂浓度与吸光度之间的关系，评估样品的抗氧化活性。
实验步骤：1.准备一系列不同浓度的还原剂溶液。
2.取一定量的还原剂溶液，加入适量的氧化剂溶液。
3.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出还原剂的浓度与吸光度之间的关系。
4.根据吸光度与还原剂浓度的关系，评估样品的抗氧化活性。
三、总抗氧化能力测定法总抗氧化能力测定法是一种综合评估样品抗氧化活性的方法。
该方法基于样品的抗氧化剂含量和抗氧化活性，通过测定样品对氧自由基的清除能力，评估其总抗氧化能力。
实验步骤：1.准备一定浓度的氧自由基溶液。
2.取一定量的样品，加入适量的溶剂溶解。
3.取不同浓度的样品溶液，加入相同量的氧自由基溶液。
4.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出样品的抗氧化活性。
以上是常用的抗氧化活性测定方法，还有其他一些方法如ORAC法、TEAC法等也被广泛应用。
不同的方法适用于不同的样品和测定目的，选择适合的方法进行测定可以更准确地评估样品的抗氧化活性。
3种抗氧化活性测定方法
3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定方法是评估化合物或材料抗氧化性能的一种重要手段。
随着抗氧化活性的研究日益深入，目前已经发展出很多种测定方法。
以下将介绍三种常用的抗氧化活性测定方法：DPPH自由基清除法、Fe2+/Fe3+还原能力法和ABTS自由基清除法。
1.DPPH自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色的自由基，常用于评估化合物或材料的抗氧化活性。
该方法基于DPPH自由基与抗氧化物质发生反应后，颜色由紫色变为淡黄色或无色。
测定方法简单，操作方便。
其原理是待测样品与DPPH混合后，通过电子或氢的转移反应，DPPH自由基将被清除，溶液颜色由紫色转变为淡黄色。
根据吸光度变化可以计算出自由基清除率，进而评估抗氧化活性。
2.Fe2+/Fe3+还原能力法：该方法基于还原能力测定抗氧化物质对Fe3+离子的还原能力。
常用的试剂是FeCl3溶液和TPTZ（2,4,6-三聚吡啶甲酸）、酸性pH缓冲液。
其原理是待测样品能够还原Fe3+离子为Fe2+离子，Fe2+离子与TPTZ反应生成有颜色的络合物，通过分光光度计测定络合物的吸光度变化，进而计算出还原能力。
较高的吸光度变化表示较高的抗氧化活性。
3.ABTS自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基双(3-乙基苯并噻唑啉-6磺酸)）自由基是一种蓝绿色自由基，其浓度在紫外可见光区域有最大吸收。
该方法基于ABTS自由基清除率来评估抗氧化物质的抗氧化活性。
该方法较DPPH法和还原能力法更为灵敏。
其原理是待测样品与ABTS自由基反应后，ABTS自由基将被清除，溶液颜色由蓝绿色变为无色或浅黄色。
通过测定吸光度的变化，可以计算出自由基清除率，进而评估抗氧化活性。
除了上述常用的抗氧化活性测定方法外，还有很多其它方法也被广泛应用于抗氧化活性的评估，如氧化还原测定法、Fenton反应法、还原剂抑制能力法等。
每一种测定方法都有其独特的原理和适用范围，研究人员可以根据具体的研究目的和样品性质选择合适的测定方法。
多糖抗氧化活性研究
多糖抗氧化活性研究引言：近年来，抗氧化活性成为了食品、保健品和医药领域研究关注的焦点之一、氧化过程会导致细胞膜的损伤、DNA的断裂及功能性蛋白质的氧化，进而导致各种疾病的发生。
因此，发现和开发具有抗氧化活性的天然产物成为了研究者们的目标之一多糖作为一种具有广泛生物活性的天然产物，在抗氧化活性方面表现出了巨大的潜力。
多糖具有特殊的结构和化学性质，因此被认为是一种重要的天然抗氧化剂。
材料与方法：在本次研究中，我们从植物中提取了多糖，并对其抗氧化活性进行了评估。
提取多糖的方法是首先将植物切碎，然后使用特定溶剂进行提取。
提取得到的多糖溶液经过浓缩和干燥，最终得到多糖粉末。
抗氧化活性的评估主要采用了自由基清除能力和铁离子螯合能力这两种方法。
自由基清除能力的测定使用了DPPH（2,2-二苯基-1-苦基肼）自由基清除实验，原理是通过测定多糖对自由基DPPH的清除能力来评估其抗氧化活性。
铁离子螯合能力的测定使用了FER（铁离子还原力）方法，通过观察多糖对Fe3+的还原能力来评估其抗氧化活性。
结果与讨论：我们发现，提取得到的多糖具有较强的抗氧化活性。
在DPPH自由基清除实验中，多糖对DPPH的清除率在100μg/mL浓度下达到了80%以上。
在铁离子还原力实验中，多糖对Fe3+的还原能力也较强，对不同浓度的Fe3+产生了不同程度的还原作用。
多糖的抗氧化活性可能与其特殊的结构和化学性质有关。
多糖中富含的羟基、羟乙基和酚羟基等官能团可以与自由基发生反应，抑制自由基的活性。
此外，多糖还具有一定的金属螯合能力，可以与金属离子发生配位反应，从而减少金属离子对氧自由基的促进作用。
结论：本研究表明，从植物中提取得到的多糖具有较强的抗氧化活性。
多糖可能通过清除自由基和螯合金属离子等机制发挥其抗氧化活性。
多糖的抗氧化活性为其在食品、保健品和医药领域的应用提供了新的理论基础。
然而，还有许多方面需要进一步研究。
首先，需要进一步探究多糖的抗氧化活性与其结构和化学性质之间的关系。
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酶标法优势
3、酶标法优势
抗氧化微孔板实验方法的优势:①耗材量少,试剂量以微升 计;②试剂种类少,部分试剂配制可交互使用;③方法简便, 耗时短;④可重复性强,能够广泛应用于药物筛选,特不是 高通量药物筛选研究。
五、ABTS法
实验步骤
2、实验步骤
❖ 将样品用甲醇配制成一系列浓度,取0、15mL样品加入2、 85mLABTS自由基工作液,混合,放置10min后,在734nm处测 定吸光度。每份样品平行操作3次。
❖ 计％算公式为:清除率(％)=[A(溶剂)- A(样品)] /A(溶剂)× 100 ❖ A度度(溶,。A剂()样为品2)、为825、8m5LmALBATBST溶S液溶与液与0、01、51m5Lm甲L醇样混品合混后合的后吸的吸光
映被测物的抗氧化活性;(DPPH自由基的清除) ❖ (3)在特定条件下,测定样品的还原能力反映被测物的抗氧
化活性。(还原Fe3+)
四、DPPH法
1、原理
DPPH(二苯代苦味酰基自由基) 是一种以氮为中心的稳 定自由基。 特点:醇溶液呈紫色,波长为517nm下具有最大吸收。 具有单一电子,故能接受一个电子或氢离子,有自由基清 除剂存在时,DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅,在最 大光吸收波长处的吸光值下降,吸光度水平的降低表明 抗氧化性的增加,从而以评价试验样品的抗氧化能力。 此抗氧化能力用抑制率来表示,抑制率越大,抗氧化性越 强。
七、铁离子还原能力(FRAP)
原理
FRAP的原理是基于氧化还原反应的比色法。在酸性条件下 ,Fe3+一TPTA(Fe3+—三吡啶三嗪)被抗氧化剂还原成Fe2+一 TPTZF,溶液变成深蓝色,同时在593nm处有强吸收。FRAP法 具有快速、简便、重复性好等优点。该法不仅用于检测食 物及饮料的抗氧化活性。也可用于检测纯天然抗氧化剂的 活性。
VitE清除DPPH自由基抗氧化量效曲线
(相关系数)
反应时间t为30min的量效曲线
实验步骤
(2)一般方法——紫外分光光度计法 将样品用甲醇配制成一系列浓度,取0、1mL样品加入3、5 mL DPPH甲醇溶液(0、06 mmol/L),混合30min后测定515 nm处吸光度。每份样品平行操作3次。
抗氧化活性研究方法
目录
❖ 一、检测抗氧化活性的缘故
❖ 二、自由基的产生及抗氧化的重要性
❖ 三、检测方法 ❖ 四、DPPH法(原理,一般方法,酶标法) ❖ 五、ABTS法 ❖ 六、TBARS法 ❖ 七、铁离子还原能力(FRAP)
一、检测抗氧化活性的缘故
1、天然植物中许多化学物质具有抗氧化活性 2、抗氧化剂有延缓衰老等功效,越来越受到人们关注 3、据文献记齐墩果酸型三萜有较好的抗氧化活性 4、抗氧化活性测试简单,快捷,经济
❖ 计算公式为:清除率(％)=[A(溶剂)- A(样品)]/A(溶剂)x100％
VitE清除DPPH自由基 作用时间的延长 VitE抗DPPH作用增 强,但在3、9- 31、 2μmol·L- 1范围内 ,各时间点的药效变 化不明显,62、5500μmol·L-1浓度 范围,随着浓度增加, 各时间点的药物作 用曲线逐渐分离,并 在500μmol·L-1,各 时间点量效趋于平 稳。从图中能够看 出,在这些时间点中 ,30min的量效曲线 基本呈斜线上升。
实验步骤
2、实验步骤
(1)酶标法检测——酶标仪 ❖ 取96孔细胞培养板,各孔分不加入150μmol·L- 1的DPPH溶
液180μL,各浓度梯度样品溶液20μL,终浓度分不为3、9 ~500μmol·L- 1,反应总体积200μL,以溶剂作对比。加样 后,振荡混匀。封板胶封板后,室温下避光静置。分不在 10~120min时间范围内于517nm处测定各孔吸光度值。观察 样品抗DPPH的时效量效变化过程,确定实验的稳定性与最 佳实验反应时间。
1、原理
以水溶性的ABTS+自由基引发剂为显色剂。 特点:ABTS与过硫酸钾反应生成稳定的蓝/绿色阳离子自由 基ABTS+,最大吸光波长为734nm。 向ABTS+其中加入被测物质,假如该物质中存在抗氧化成分, 则该物质会与ABTS+发生反应而使反应体系褪色,然后在 ABTS+这种自由基的734nm吸光波长下检测吸光度的变化来 反映物质的抗氧化能力。
二、自由基的产生及抗氧化的重要性
自由基对人体造成的伤害 抗氧化剂
天然植物
三、检测方法
❖ 目前常用的抗氧化活性检测方法主要基于以下机理: ❖ (1)在特定条件下,样品对检测体系中脂类物质的氧化抑制
能力反映被测物的抗氧化活性;(TBARS法) ❖ (2)在特定条件下,样品对检测体系中自由基的清除能力反
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ABTS法优缺点
3、优缺点
简便,快速,适合于大量样品的检测。 ABTS在与氢原子供体的反应中选择性差是此法的一个不足 ,它可与任何羟基化的芳香族化合物反应,这与它们的实际 抗氧化能力关,因此,TEAC值也包括对抗氧化不起作用的羟 基。
六、TBARS法
简介
脂质体系中氧化反应抑制或中止的判断主要通过测量被氧 化物的浓度,氧的去除或氧化产物的形成。因此,反应物( 不饱与脂肪酸,自由基等)的消失,氧化产物的定量估计是 判断氧化时期的最合适方法。通过直截了当或者间接检测 氧的消失与自由基的电子自旋光谱,适用于氧化过程的初 始时期。通常采纳TBARS法来评价脂质的过氧化、